CN106749758A - 稀碱—酶解—树脂吸附提取法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素 - Google Patents
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Abstract
一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法,它采用稀碱—酶解—树脂吸附提取法,经过碱解、酶解、树脂吸附、沉淀、纯化、脱水六个步骤从猪鼻骨中提取硫酸软骨素。结果稀碱—酶解—树脂吸附提取法与传统提取方法相比较,乙醇用量减少88%左右,纯度提高19%左右,产率提高37%左右。其中,碱解时的保温温度为49℃,酶解时加4mol/L盐酸调节pH到6.9,产率提高46%左右。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,属于从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法。
背景技术
硫酸软骨素(Chondroitin sulfate)是一种酸性粘多糖,广泛存在于哺乳动物的软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚合物,它含有50~70 个双糖基本结构,分子量为10000~50000。按其化学组成和结构,可分为CSA、C、D、E、F、H 等多种同分异构体,药用硫酸软骨素是从动物软骨中提取的,主要是A、C及各种硫酸软骨素的混合物。CSA 和CSC 均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2氨基半乳糖组成,只是硫酸基团位置不同。
硫酸软骨素通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在,当其水解时发生消去反应,连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂,可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸软骨素为白色或微黄色粉末,具有吸湿性,易溶于水而成粘度较大的溶液,难溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂,并且遇热不稳定,乙酰基易发生水解脱落,在酸性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿瘤等生理活性,临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病,与硝酸铋或氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡,与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂,硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素,可调节皮肤的细胞代谢,促进营养的吸收,保持皮肤的水分和改善发质。
随着硫酸软骨素生物活性不断被揭示和其应用领域的不断扩展,有关硫酸软骨素的提取、纯化和分离技术已取得了一定的研究成果,但应用于生产实际还有许多需要改进和完善之处。目前,硫酸软骨素生产厂家主要采用的方法成本高,产率和纯度低。所以,本公司开发了稀碱——酶解——树脂吸附提取法从猪鼻骨中提取硫酸软骨素,以降低成本,提高效益。
发明内容
本发明提供了一种全新的方法(稀碱—酶解—树脂吸附提取法)从猪鼻骨中提取硫酸软骨素,能够有效地降低成本,并提高产品的产率和纯度。
为此,本发明通过以下技术方案予以实现:
1、碱解
将猪鼻骨粉碎,放入1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡,42~53℃下保温碱解3小时。
2、酶解
加4mol/L盐酸调节pH到6.5~7.5,按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶(1~8)的质量比加入胰蛋白酶,于40~50℃酶解12小时后,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶(1~8)的质量比加入胃蛋白酶,40~50℃酶解12小时。
3、树脂吸附
将溶液通过离子交换树脂柱吸附完毕,用0.5 mol/L的NaCl 液洗涤,再用1.8mol/L 的氯化钠液洗脱,流速2L/h。
4、沉淀
调节洗脱液pH至6.8~7.2,再加入2.5倍体积的95%以上乙醇,充分搅拌后,静置12小时以上,虹吸上层乙醇,即得硫酸软骨素。
5、纯化
将硫酸软骨素溶于浓度为2%~5%(m/v)的氯化钠溶液中,加入少量乙醇,于低温下静置后离心,将其上清液中再加入少量乙醇,重复以上步骤,可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。
6、脱水
最后,用95%以上的丙酮对产品进行脱水,再真空干燥,即可。
本发明的有益效果是:用碱解、酶解、树脂吸附三者相结合的方法分离猪鼻骨中的硫酸软骨素,并且增加了纯化过程,有效地降低了生产成本,并且提高了产品的产率和纯度。
四、具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例一:
1、碱解
称取100千克猪鼻骨粉碎,放入1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡,45℃下保温碱解3小时。
2、酶解
加4mol/L盐酸调节pH到6.6,按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶3的质量比加入胰蛋白酶,于49℃酶解12小时后,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶3的质量比加入胃蛋白酶,42℃酶解12小时。
3、树脂吸附
将溶液通过离子交换树脂柱吸附完毕,用0.5 mol/L的NaCl 液洗涤,再用1.8mol/L 的氯化钠液洗脱,流速2L/h。
4、沉淀
调节洗脱液pH至6.9,再加入2.5倍体积的95%以上乙醇,充分搅拌后,静置12小时以上,虹吸上层乙醇,即得硫酸软骨素。
5、纯化
将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中,加入少量乙醇,于低温下静置后离心,将其上清液中再加入少量乙醇,重复以上步骤,可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。
6、脱水
最后,用95%以上的丙酮对产品进行脱水,再真空干燥,即可。
7、对比
称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量24726L,产出硫酸软骨素20.27kg,纯度78.26%,产率49.20%。称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用稀碱—酶解—树脂吸附提取法工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量2993L,产出硫酸软骨素28.36kg,纯度97.24%,产率85.54%。通过对比发现:传统工艺明显地成本高,效益低。
实施例二:
1、碱解
称取100千克猪鼻骨粉碎,放入1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡,51℃下保温碱解3小时。
2、酶解
加4mol/L盐酸调节pH到7.3,按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶3的质量比加入胰蛋白酶,于43℃酶解12小时后,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶3的质量比加入胃蛋白酶,48℃酶解12小时。
3、树脂吸附
将溶液通过离子交换树脂柱吸附完毕,用0.5 mol/L的NaCl 液洗涤,再用1.8mol/L 的氯化钠液洗脱,流速2L/h。
4、沉淀
调节洗脱液pH至7.1,再加入2.5倍体积的95%以上乙醇,充分搅拌后,静置12小时以上,虹吸上层乙醇,即得硫酸软骨素。
5、纯化
将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中,加入少量乙醇,于低温下静置后离心,将其上清液中再加入少量乙醇,重复以上步骤,可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。
6、脱水
最后,用95%以上的丙酮对产品进行脱水,再真空干燥,即可。
7、对比
称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量24726L,产出硫酸软骨素20.27kg,纯度78.26%,产率49.20%。称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用稀碱—酶解—树脂吸附提取法工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量2983L,产出硫酸软骨素28.91kg,纯度97.13%,产率86.20%。通过对比发现:传统工艺明显地成本高,效益低。
实施例三:
1、碱解
称取100千克猪鼻骨粉碎,放入1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡,49℃下保温碱解3小时。
2、酶解
加4mol/L盐酸调节pH到6.9,按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶3的质量比加入胰蛋白酶,于44℃酶解12小时后,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶3的质量比加入胃蛋白酶,47℃酶解12小时。
3、树脂吸附
将溶液通过离子交换树脂柱吸附完毕,用0.5 mol/L的NaCl 液洗涤,再用1.8mol/L 的氯化钠液洗脱,流速2L/h。
4、沉淀
调节洗脱液pH至7.1,再加入2.5倍体积的95%以上乙醇,充分搅拌后,静置12小时以上,虹吸上层乙醇,即得硫酸软骨素。
5、纯化
将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中,加入少量乙醇,于低温下静置后离心,将其上清液中再加入少量乙醇,重复以上步骤,可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。
6、脱水
最后,用95%以上的丙酮对产品进行脱水,再真空干燥,即可。
7、对比
称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量24726L,产出硫酸软骨素20.27kg,纯度78.26%,产率49.20%。称取100千克同一批次的猪鼻骨,采用稀碱—酶解—树脂吸附提取法工艺提取其中的硫酸软骨素,乙醇用量2988L,产出硫酸软骨素31.26kg,纯度98.97%,产率95.96%。通过对比发现:传统工艺明显地成本高,效益低。
Claims (7)
1.一种新的提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法,其特征在于:采用碱解、酶解、树脂吸附三者相结合的方法将猪鼻骨中的硫酸软骨素提取出来。
2.根据权利要求1所述的的方法,其特征在于:提取猪鼻骨中的硫酸软骨素采用如下步骤:(1)碱解:将猪鼻骨粉碎,放入1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡,42~53℃下保温碱解3小时;(2)酶解:加4mol/L盐酸调节pH到6.5~7.5,按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶(1~8)的质量比加入胰蛋白酶,于40~50℃酶解12小时后,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶(1~8)的质量比加入胃蛋白酶,40~50℃酶解12小时;(3)树脂吸附:将溶液通过离子交换树脂柱吸附完毕,用0.5 mol/L的NaCl 液洗涤,再用1.8mol/L 的氯化钠液洗脱,流速2L/h;(4)沉淀:调节洗脱液pH至6.8~7.2,再加入2.5倍体积的95%以上乙醇,充分搅拌后,静置12小时以上,虹吸上层乙醇,即得硫酸软骨素;(5)纯化:将硫酸软骨素溶于浓度为2%~5%(m/v)的氯化钠溶液中,加入少量乙醇,于低温下静置后离心,将其上清液中再加入少量乙醇,重复以上步骤,可依次得到较高纯度的硫酸软骨素;(6)脱水:最后,用95%以上的丙酮对产品进行脱水,再真空干燥,即可。
3.根据权利要求1所述的的方法;其特征在于:在乙醇沉淀之前,先用胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解,再用树脂吸附。
4.根据权利要求2所述的的方法;其特征在于:碱解时的保温温度为49℃。
5.根据权利要求2所述的的方法;其特征在于:酶解时加4mol/L盐酸调节pH到6.9。
6.根据权利要求2所述的的方法;其特征在于:在酶解过程中,先按猪鼻骨与胰蛋白酶1000∶3的质量比加入胰蛋白酶,再按猪鼻骨与胃蛋白酶1000∶3的质量比加入胃蛋白酶。
7.根据权利要求2所述的的方法;其特征在于:在纯化过程中,用于溶解硫酸软骨素的氯化钠溶液浓度为2%(m/v)。
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CN111269334A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-06-12 | 无棣县兴亚生物科技有限公司 | 一种软骨素及骨浆的生产工艺 |
CN113429494A (zh) * | 2021-08-15 | 2021-09-24 | 四川农业大学 | 一种从猪气管中提取硫酸软骨素的方法 |
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