CN105440158A - 一种稀碱浓盐法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法 - Google Patents

Abstract

一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法，它采用稀碱浓盐法，经过盐解、吸附、沉淀、纯化、脱水五个步骤从猪鼻骨中提取硫酸软骨素。结果稀碱浓盐法与传统提取方法相比较，乙醇用量减少86%左右，纯度提高19％左右，产率提高32%左右。

Description

一种稀碱浓盐法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的属于从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法。

背景技术

硫酸软骨素(Chondroitinsulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚合物，它含有50～70个双糖基本结构,分子量为10000～50000。按其化学组成和结构,可分为CSA、C、D、E、F、H等多种同分异构体,药用硫酸软骨素是从动物软骨中提取的,主要是A、C及各种硫酸软骨素的混合物。CSA和CSC均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2氨基半乳糖组成,只是硫酸基团位置不同。

硫酸软骨素通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应，连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸软骨素为白色或微黄色粉末,具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落，在酸性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤的细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤的水分和改善发质。

随着硫酸软骨素生物活性不断被揭示和其应用领域的不断扩展,有关硫酸软骨素的提取、纯化和分离技术已取得了一定的研究成果,但应用于生产实际还有许多需要改进和完善之处。目前，硫酸软骨素生产厂家主要采用的方法成本高，产率和纯度低。所以，本公司开发了稀碱浓盐法从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，以降低成本，提高效益。

发明内容

本发明提供了一种全新的方法（稀碱浓盐法）从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，能够有效地降低成本，并提高产品的产率和纯度。

为此，本发明通过以下技术方案予以实现：

1.盐解

将猪鼻骨粉碎，放入80℃水中浸泡4～6小时，然后加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到6.5～7.5，双层纱布过滤；留下滤液，再向滤渣中加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液。用0.4%的氢氧化钠溶液将滤液调节pH到8.0～9.0，升温到80～90℃，加入少量滑石粉，用盐酸将盐解液调节pH到2～3，再用双层滤布过滤，向滤液中加入1.5倍体积的水进行稀释，同时用0.4%的氢氧化钠溶液调节pH到6.5。

2.吸附

过滤后加入高岭土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层。

3.沉淀

调节水层pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。

4.纯化

将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。

5.脱水

最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。

本发明的有益效果是：用稀碱浓盐法分离猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且增加了纯化过程，有效地降低了生产成本，并且提高了产品的产率和纯度。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

1盐解

称取100千克猪鼻骨粉碎，放入80℃水中浸泡5小时，然后加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到7.3，双层纱布过滤；留下滤液，再向滤渣中加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液。用0.4%的氢氧化钠溶液将滤液调节pH到8.6，升温到84℃，加入少量滑石粉，用盐酸将盐解液调节pH到2.7，再用双层滤布过滤，向滤液中加入953升水进行稀释，同时用0.4%的氢氧化钠溶液调节pH到6.5。

2.吸附

过滤后加入高岭土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层。

3.沉淀

调节水层pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。

4.纯化

将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。

5.脱水

最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。

6.对照

称取100千克同一批次的猪鼻骨，采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素。通过对照发现：传统工艺明显地成本高，效益低。

表1两种工艺产出效果对照表

方法	投料量(kg)	乙醇用量(l)	硫酸软骨素(kg)	纯度(%)	产率(%)
						原料	100	0	100	33.24	100
传统提取法	100	25634	22.35	78.34	52.67
						稀碱浓盐法	100	3542	28.97	97.52	84.99

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (1)

1.一种稀碱浓盐法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法,其特征在于步骤如下：

（1）盐解

将猪鼻骨粉碎，放入80℃水中浸泡4～6小时，然后加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到6.5～7.5，双层纱布过滤；留下滤液，再向滤渣中加入骨质量5倍的0.4%氢氧化钠和20%的氯化钠混合溶液（pH为13），于40℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液;合并2次滤液;用0.4%的氢氧化钠溶液将滤液调节pH到8.0～9.0，升温到80～90℃，加入少量滑石粉，用盐酸将盐解液调节pH到2～3，再用双层滤布过滤，向滤液中加入1.5倍体积的水进行稀释，同时用0.4%的氢氧化钠溶液调节pH到6.5；

（2）吸附

过滤后加入高岭土和活性炭吸附,用氯仿反萃取法萃取滤液，留水层;

（3）沉淀

调节水层pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索;

（4）纯化

将硫酸软骨素溶于浓度为3%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素;

（5）脱水

最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。