CN105418796A

CN105418796A - 浓碱法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素

Info

Publication number: CN105418796A
Application number: CN201510905193.XA
Authority: CN
Inventors: 刘冠男; 姜德志; 迟培升
Original assignee: QINGDAO JIULONG BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: QINGDAO JIULONG BIO-PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2015-12-10
Filing date: 2015-12-10
Publication date: 2016-03-23

Abstract

一种能够从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法，它采用浓碱法，经过碱解、酶解、脱色、沉淀、纯化、脱水六个步骤从猪鼻骨中提取硫酸软骨素。结果浓碱法与传统提取方法相比较，乙醇用量减少89%左右，纯度提高18％左右，产率提高30%左右。

Description

浓碱法提取猪鼻骨中的硫酸软骨素

技术领域

本发明属于生物技术领域，属于从猪鼻骨中提取硫酸软骨素的方法。

背景技术

硫酸软骨素(Chondroitinsulfate)是一种酸性粘多糖，广泛存在于哺乳动物的软骨、喉骨、鼻骨和气管中。硫酸软骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替连结而成的双糖聚合物，它含有50～70个双糖基本结构,分子量为10000～50000。按其化学组成和结构,可分为CSA、C、D、E、F、H等多种同分异构体,药用硫酸软骨素是从动物软骨中提取的,主要是A、C及各种硫酸软骨素的混合物。CSA和CSC均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2氨基半乳糖组成,只是硫酸基团位置不同。

硫酸软骨素通常与蛋白质结合成糖蛋白的形式存在，当其水解时发生消去反应，连接硫酸软骨素与蛋白质中丝氨酸羟基的苷键断裂，可以得到游离态的硫酸软骨素。硫酸软骨素为白色或微黄色粉末,具有吸湿性，易溶于水而成粘度较大的溶液，难溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有机溶剂，并且遇热不稳定，乙酰基易发生水解脱落，在酸性条件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸软骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎症及抗肿瘤等生理活性，临床上可用于预防动脉粥状硬化、提高机体免疫力、治疗风湿病和肾炎及由链霉素引起的听觉障碍。硫酸软骨素与铜等金属离子结合可用于治疗皮肤病，与硝酸铋或氢氧化铝反应得到的络合物可用于治疗消化性溃疡，与苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作用生成的衍生物可用作麻醉剂。作为食品添加剂，硫酸软骨素可用于食品的乳化、保湿和祛除异味。在化妆品中添加硫酸软骨素，可调节皮肤的细胞代谢，促进营养的吸收，保持皮肤的水分和改善发质。

随着硫酸软骨素生物活性不断被揭示和其应用领域的不断扩展,有关硫酸软骨素的提取、纯化和分离技术已取得了一定的研究成果,但应用于生产实际还有许多需要改进和完善之处。目前，硫酸软骨素生产厂家主要采用的方法成本高，产率和纯度低。所以，本公司开发了浓碱法从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，以降低成本，提高效益。

发明内容

本发明提供了一种全新的方法（浓碱法）从猪鼻骨中提取硫酸软骨素，能够有效地降低成本，并提高产品的产率和纯度。

为此，本发明通过以下技术方案予以实现：

1.碱解

将猪鼻骨粉碎，放入80℃水中煮4～6小时，然后按原料（干质量）与15%的氢氧化钠溶液的比例为1∶1.75的量加入氢氧化钠溶液，于39℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到2.6～3.0，双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1∶1.75的质量比加入15%的氢氧化钠溶液，于39℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液，并测量体积待用。

2.酶解

将滤液调节pH到8.5～9.0，按滤液与胰蛋白酶25∶1的质量比加入胰蛋白酶，于50～60℃酶解6小时。

3.脱色

用盐酸调节液体pH到5～7，升高温度到80～90℃，加入0.5%活性炭进行脱色反应，然后过滤。

4.沉淀

调节滤液pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。

5.纯化

将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素。

6.脱水

最后，用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。

本发明的有益效果是：用浓碱法分离猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且增加了纯化过程，有效地降低了生产成本，并且提高了产品的产率和纯度。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

1.碱解

称取100千克猪鼻骨粉碎，放入80℃水中煮4～6小时，然后加入15%的氢氧化钠溶液175升，于39℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到2.6～3.0，双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1∶1.75的质量比加入15%的氢氧化钠溶液，于39℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液。合并2次滤液，并测量体积待用。

2.酶解

3.脱色

4.沉淀

调节水层pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索。

5.纯化

6.脱水

7.对照

称取100千克同一批次的猪鼻骨，采用传统工艺提取其中的硫酸软骨素。通过对照发现：传统工艺明显地成本高，效益低。

表1两种工艺产出效果对照表

方法	投料量(kg)	乙醇用量(l)	硫酸软骨素(kg)	纯度(%)	产率(%)
						原料	100	0	100	31.24	100
传统提取法	100	23326	20.27	76.26	49.48
						稀碱——酶解结合法	100	2663	26.36	94.24	79.52

Claims

1.一种新的提取猪鼻骨中的硫酸软骨素的方法,其特征在于：采用浓碱法将猪鼻骨中的硫酸软骨素提取出来。

2.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：提取猪鼻骨中的硫酸软骨素采用如下步骤：

（1）碱解：将猪鼻骨粉碎，放入80℃水中煮4～6小时，然后按原料（干质量）与15%的氢氧化钠溶液的比例为1∶1.75的量加入氢氧化钠溶液，于39℃下提取3小时，然后用盐酸调pH到2.6～3.0，双层纱布过滤；留下滤液，滤渣再以1∶1.75的质量比加入15%的氢氧化钠溶液，于39℃下提取2小时，再用双层滤布过滤；弃滤渣，取滤液；合并2次滤液，并测量体积待用；

（2）酶解：将滤液调节pH到8.5～9.0，按滤液与胰蛋白酶25∶1的质量比加入胰蛋白酶，于50～60℃酶解6小时；

（3）脱色：用盐酸调节液体pH到5～7，升高温度到80～90℃，加入0.5%活性炭进行脱色反应，然后过滤；

（4）沉淀：调节滤液pH至6.8～7.2，再加入2.5倍体积的95%以上乙醇，充分搅拌后，静置12小时以上，虹吸上层乙醇，即得硫酸软骨索；

（5）纯化：将硫酸软骨素溶于浓度为2%(m/v)的氯化钠溶液中，加入少量乙醇，于低温下静置后离心，将其上清液中再加入少量乙醇，重复以上步骤，可依次得到较高纯度的硫酸软骨素；

（6）脱水：用95%以上的丙酮对产品进行脱水，再真空干燥，即可。

3.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在乙醇沉淀之前，先用胰蛋白酶酶解，再用活性碳脱色。

4.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在碱解过程中，按原料（干质量）与15%的氢氧化钠溶液的比例为1∶1.75的量加入氢氧化钠溶液以提取猪鼻骨中的硫酸软骨素，并且提取温度为39℃。

5.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在酶解过程中，按滤液与胰蛋白酶25∶1的质量比加入胰蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于：在纯化过程中，用于溶解硫酸软骨素的氯化钠溶液浓度为2%(m/v)。