CN103804517A - 提高硫酸软骨素收率的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，该产品主要经过酶解，除蛋白、沉淀干燥等工序制得。该方法主要解决目前该类产品生产工艺流程复杂、碱酸或盐用量较大、制备周期长、收率低等问题；该方法仅需一步酶解即可把硫酸软骨素重软骨中提取出来，不需要碱解或用盐浸泡，制备后的产品色泽洁白、质地疏松、收率可高达43％及以上，且纯度较高，符合国内外口服标准，生产工序简单，周期较短，反应时间仅需3-8小时，碱用量比稀碱酶解法节约80％以上，同时减少了下游提纯的难度，减轻对环境的污染，有利于环保。
Description
技术领域
本发明涉及生化制药领域，特别是直接从动物软骨中提取的对心脑血管病等有良好的效果的硫酸软骨素钠的生产工艺的改进。
背景技术
硫酸软骨素钠，英文名Chondroitin su1fate sodium，是动物软骨中提取的酸性粘多糖，多存在于动物的软骨、喉骨、鼻骨(41％)、牛、马中膈和气管中，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通过β1→3糖苷键形成的重复二糖单位所组成的多糖链。
硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物，还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用，可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。在国外，对硫酸软骨素钠药理的研究已经达到分子水平。
目前国内提取硫酸软骨素钠的方法主要有三种：盐解法、碱解法和酶解法。主要采用的分离纯化技术有：乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、季铵盐配合法、吸附法、区带电泳分离法等。在以上的集中提取方法中，收率虽然可以达到很高的水平，但生产方法都存在很大问题，如盐解法工艺中存在除酸性蛋白调节PH值1-2在产品量大时耗时很长，硫酸软骨素中的氨基易被解离下来，从而影响了硫酸软骨素的收率。
发明内容
本发明的目的是：提供一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，此方法主要从节能、节约试剂、缩短生产时间、简化生产工艺等角度出发，提供一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，该方法利于工业化生产。
由于硫酸软骨素和软骨中的蛋白质是以糖肽共价键结合在一起的，在碱性条件下，以胰蛋白酶为催化剂，糖胺聚糖可以从软骨组织中的胶原蛋白中分离出来。根据这个原理，本工艺直接白胰蛋白酶加入，调节反应的PH，温度条件，直接生产硫酸软骨素。这样以来，缩短了工艺流程，反应时间只需要4-8小时，用碱量比稀碱酶解法节省80％以上，收率不但没有下降，反而比原来要高3-5个百分点。
本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤：
1、将洁白干净的动物软骨放入反应罐内，加入适量的水浸泡，并加入软骨重量的0.1-1.6％的胰蛋白酶，调节PH在8.5-9.5之间，控制温度在40-55℃之间，搅拌2-9小时；
2、当动物软骨反应完全后，用盐酸调节酶解液使其PH在5.5-7.5之间，加热至65-80℃，保温10-40分钟；
3、待酶解液冷却后，过滤或离心除渣，过滤后得较清澈的滤液酶解液，加入酶解液重量0.2-2.0％的氯化钠，使PH在3.5-5.5之间，搅拌20-50分钟，过滤或离心除渣。
4、将上步所得酶解液加入其体积2-4倍的浓度为90％的乙醇，使乙醇浓度达到50-80％，沉淀；
5、将上步沉淀物用浓度为95％的乙醇复沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸软骨素成品。
本发明的优点为：本制备方法通过对目前工艺的改进创新，采用进一步酶解法生产硫酸软骨素，通过正交实验，找到生产工艺的优化生产工艺条件为：水解时间为6小时，水解温度为48℃，胰蛋白酶用量为0.8％软骨重，三种因素中对水解影响程度主要为水解温度，其次为酶用量和水解时间。整个反应过程PH值控制在8.5-9.5之间。此最佳组合可使硫酸软骨素收率达到43％及以上。采用新工艺后，可简化生产流程，大大缩短生产时间，减少碱用量，同时减少下游提纯的难度，减轻对环境的污染。
具体实施方式
实施例1
(1)将洁白干净的动物软骨100kg放入反应罐内，加入适量的水浸泡，并加入软骨重量的0.8kg的胰蛋白酶，调节PH在9.0时，控制温度在48℃，搅拌6小时；
(2)当动物软骨反应完全后，用盐酸调节酶解液使其PH在6，加热至75，保温30分钟；
(3)待酶解液冷却后，过滤或离心除渣，过滤后得较清澈的滤液酶解液，加入酶解液重量1.5kg的氯化钠，使PH在4，搅拌40分钟，过滤或离心除渣。
(4)将上步所得酶解液加入浓度为90％的乙醇300L，使乙醇浓度达到65％，沉淀；
(5)将上步沉淀物用浓度为95％的乙醇复沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸软骨素成品42.1kg，收率为42.1％。
Claims (4)
1.一种提高硫酸软骨素收率的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将洁白干净的动物软骨放入反应罐内，加入适量的水浸泡，并加入软骨重量的0.1％-1.6％的胰蛋白酶，调节PH在8.5-9.5之间，控制温度在40-55℃之间，搅拌2-9小时；
(2)当动物软骨反应完全后，用盐酸调节酶解液使其PH在5.5-7.5之间，加热至65-80℃，保温10-40分钟；
(3)待酶解液冷却后，过滤或离心除渣，过滤后得较清澈的滤液酶解液，加入酶解液重量0.2％-2.0％的氯化钠，使PH在3.5-5.5之间，搅拌20-50分钟，过滤或离心除渣。
(4)将上步所得酶解液加入其体积2-4倍的浓度为90％的乙醇，使乙醇浓度达到50％-80％，沉淀；
(5)将上步沉淀物用浓度为95％的乙醇复沉2到3遍，干燥后即得所述的硫酸软骨素成品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：(3)步中加入的酶解液重0.2％-2.0％的氯化钠盐析，以增强硫酸软骨素的沉淀效果。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：最佳水解温度为48℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：最佳水解时间为6h，最佳胰酶用量为0.8％倍软骨重。
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