CN104844551A - 一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法 - Google Patents

一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，采用碱性水溶液浸提荷叶后，得到提取液，通过DA-201、D101和DM-301的大孔树脂组合物对提取液中的荷叶黄酮和多糖进行吸附，先采用水冲洗大孔树脂柱，将多糖分离，然后采用乙醇溶液冲洗大孔树脂柱得到荷叶黄酮；本发明利用荷叶黄酮和多糖的性质差异，充分考虑了各种成分提取过程中的相互影响、活性和提取率，采用DA-201、D101和DM-301的大孔树脂组合物对荷叶黄酮和多糖同时进行提取，具有提取率高、纯度高的优点；采用大孔树脂组合物对其进行分离提纯，具有工艺简单、生产成本低、产品质量高、生产周期短的优点，适合规模化生产。

Description

一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法
技术领域
 本发明涉及一种荷叶提取物的提取方法，具体涉及一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法。
背景技术
荷叶为睡莲科植物莲的叶子，具有药食两用的植物叶，荷叶中含有荷叶黄酮和多糖等多种活性物质，有清热解毒、升发清阳、凉血止血的作用，荷叶色青绿，气芬芳，还有很好的降血脂、降胆固醇和减肥的功效；其中荷叶黄酮是荷叶具有生物抗氧化性、抗衰老的主要生理活性物质，具有降低胆固醇水平、治疗心脑血管疾病的作用；多糖具有降血糖、降血脂、保护免疫器官、增强免疫作用、抗病毒、抗癌等多种生物活性。
由于荷叶的成分复杂，目前对荷叶中功能成分的应用主要集中于单一地提取其中的一种有效成分，舍弃其他成分，只是采取简单的进行直接浸提或回流浸提，生产简单的醇提物或水提取，技术含量不高，难以实现附加值的产业升级，最大限度的开发荷叶中有效成分的利用价值。目前的单一成分的提取主要是由于在提取单一组分时，提取条件会破坏其他组分或者导致其他组分的提取率低，并且纯度低，后续处理复杂。因此，在充分考虑各种成分的相互影响、活性和提取率，亟待开发一种能同时提取荷叶黄酮和多糖的方法，使得荷叶黄酮和多糖的提取率高、纯度高，提高荷叶的利用率。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，包括以下步骤：
①将pH为9~12的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于70~100℃浸提20~25小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：8~15ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或氨水的水溶液；
②将步骤①所得提取液调节pH至3~5后加入大孔树脂柱上，用pH为3~5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为4~10：1~6：1~6；
③用体积浓度为20%~95%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮。  为进一步实现本发明的目的，还可以采用以下技术方案：
优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1。
优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，干燥方法为喷雾干燥或减压干燥。
进一步优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，包括以下步骤：
①将pH为11的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于80℃浸提24小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：10ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠水溶液；
②将步骤①所得提取液调节pH至4后加入大孔树脂柱上，用pH为4的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1；
③用体积浓度为30%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经减压干燥后得到荷叶黄酮。
本发明的优点在于：本发明采用碱性水溶液浸提荷叶后，得到提取液，通过DA-201、D101和DM-301的大孔树脂组合物对提取液中的荷叶黄酮和多糖进行吸附，先采用水冲洗大孔树脂柱，将多糖分离，然后采用乙醇溶液冲洗大孔树脂柱得到荷叶黄酮；本发明充分考虑了荷叶黄酮和多糖的化学性质，充分考虑了各种成分提取过程中的相互影响、活性和提取率，采用DA-201、D101和DM-301的大孔树脂组合物对荷叶黄酮和多糖同时进行提取，并且保证所提取的两种成分均具有提取率高、纯度高的优点，采用本发明的方法提取的荷叶黄酮和多糖不用后续提纯处理，可直接使用；本发明利用荷叶黄酮和多糖的性质差异，采用大孔树脂组合物对其进行分离提纯，并且同时得到高纯度、高收率的荷叶黄酮和多糖，能有效降低生产成本，并且本发明的工艺易于操作，工艺流程短，适合工业化生产。
具体实施方式
一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，包括以下步骤：
①将pH为9~12的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于70~100℃浸提20~25小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：8~15ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或氨水的水溶液；
②将步骤①所得提取液调节pH至3~5后加入大孔树脂柱上，用pH为3~5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为4~10：1~6：1~6；
③用体积浓度为20%~95%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮。  为进一步实现本发明的目的，还可以采用以下技术方案：
优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1，优选的不同型号大孔树脂的配比能有效提高荷叶黄酮和多糖的纯度和收率。
优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，干燥方法为喷雾干燥或减压干燥，优选的干燥方法能有效降低荷叶黄酮的污染和氧化变质。
进一步优选的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，包括以下步骤：
①将pH为11的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于80℃浸提24小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：10ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠水溶液；
②将步骤①所得提取液调节pH至4后加入大孔树脂柱上，用pH为4的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1；
③用体积浓度为30%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经减压干燥后得到荷叶黄酮。优选的同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法能有效提高荷叶黄酮和多糖的纯度和收率，并且以上实验条件的选择能使大孔树脂吸附的荷叶黄酮和多糖易于冲洗，为最优制备工艺。
本发明的荷叶为水分小于13%的干荷叶，也可使用鲜荷叶，可先将水分烘干至水分小于13%。
本发明的大孔树脂组合物在进行荷叶黄酮和多糖的分离前，需要进行预处理，具体为：在装柱之前先将按照比例混合的大孔树脂用乙醇浸泡24小时，湿法装柱后用纯净水洗至无醇味。
本发明除去多糖中蛋白，采用北京正天成澄清技术有限公司生产的ZTC1+1天然澄清剂-Ⅱ型，该试剂由A剂和B剂组成。使用时根据说明书，配制方法如下：A组分：称取澄清剂A组分1g，用10mL蒸馏水溶解，并搅拌成糊状，再加入剩余90mL蒸馏水，不断搅拌，使其充分溶解，溶胀24h，配成1%黏胶液（用前摇匀）100mL，即得。B组分：先配制1%醋酸（v/v），称取澄清剂B组分1g，用10mL 1%醋酸溶解，并搅拌成糊状，加入余下的90mL 1%醋酸，充分搅拌使其溶解，溶胀24h，配成1%黏胶液（用前摇匀）100mL。使用时按照澄清剂用量B剂/A剂为8%/4%使用，在50℃保温2h每隔半小时搅匀一次，过滤，滤液浓缩，干燥得多糖。
本发明的实施例在用水冲洗大孔树脂柱时，使用Molish反应判断多糖冲洗完全，若洗脱液a的Molish反应呈阴性则多糖冲洗干净，可进行下步操作；用乙醇溶液冲洗时至大孔树脂柱成近白色时，荷叶黄酮冲洗干净。
实施例1
①取100g干荷叶和800mlpH为9的氢氧化钠水溶液加入容器中，于70℃浸提20小时，压滤后得到提取液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至3后加入大孔树脂柱上，用pH为3的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖9.12g，纯度85%；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为4：1：1；
③用体积浓度为20%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b在真空度为0.06MPa，温度为60℃下减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮3.68g，收率为3.68%，纯度85.3%。
实施例2
①取100g干荷叶和1500mlpH为12的氢氧化钾水溶液加入容器中，于100℃浸提25小时，压滤后得到提取液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至5后加入大孔树脂柱上，用pH为5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖8.14g，纯度92%；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为4：6：6；
③用体积浓度为95%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b在真空度为0.09MPa，温度为90℃下减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮3.58g，收率为3.58%，纯度85.2%。
实施例3
①取100g干荷叶和1000mlpH为10的氢氧化钙水溶液加入容器中，于80℃浸提22小时，压滤后得到提取液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至4后加入大孔树脂柱上，用pH为5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖10.02g，纯度73%；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为10：1：1；
③用体积浓度为50%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b在真空度为0.07MPa，温度为80℃下减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮3.49g，收率为3.49%，纯度85.5%。
实施例4
①取100g干荷叶和1200mlpH为11的氨水溶液加入容器中，于90℃浸提24小时，压滤后得到提取液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至5后加入大孔树脂柱上，用pH为5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖9.17g，纯度87%；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为1：1：1；
③用体积浓度为60%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b在真空度为0.08MPa，温度为60℃下减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮3.49g，收率为3.49%，纯度85.5%。
实施例5
①取100g干荷叶和1000mlpH为11的氢氧化钠水溶液加入容器中，于80℃浸提24小时，压滤后得到提取液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至4后加入大孔树脂柱上，用pH为4的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖9.45g，纯度95%；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1；
③用体积浓度为30%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经减压干燥后得到荷叶黄酮3.75g，收率为3.75%，纯度86.5%。

Claims (4)

1.一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：
①将pH为9~12的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于70~100℃浸提20~25小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：8~15ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙或氨水的水溶液；
②将步骤①所得提取液用盐酸调节pH至3~5后加入大孔树脂柱上，用pH为3~5的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为4~10：1~6：1~6；
③用体积浓度为20%~95%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经干燥后得到荷叶黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，其特征在于：DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1。
3.根据权利要求1或2所述的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，其特征在于：干燥方法为喷雾干燥或减压干燥。
4.根据权利要求3所述的一种同时分离、提纯荷叶黄酮和多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：
①将pH为11的碱性水溶液和荷叶混合加入容器中，于80℃浸提24小时，压滤后得到提取液；所述的荷叶与碱性水溶液的重量体积比为1g：10ml；所述的碱性水溶液为氢氧化钠水溶液；
②将步骤①所得提取液用1mol/L的盐酸调节pH至4后加入大孔树脂柱上，用pH为4的盐酸水溶液冲洗，收集洗脱液a，将洗脱液a浓缩后除蛋白得到多糖；所述的大孔树脂柱装有DA-201、D101和DM-301组成的大孔树脂组合物，DA-201、D101和DM-301的质量比为7：2：1；
③用体积浓度为30%的乙醇冲洗步骤②处理后的大孔树脂柱，收集洗脱液b，将洗脱液b经减压蒸发浓缩，回收乙醇，得到浓缩液，将浓缩液经减压干燥后得到荷叶黄酮。
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