CN108484630B - 一种盐霉素提纯方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种盐霉素的提纯方法，本发明公开的盐霉素提纯方法为直接从盐霉素发酵液中通过絮凝工艺，得到盐霉素滤饼，省去皂化工艺，使盐霉素的收率和纯度提高。在实施过程中优选使用本发明提供的絮凝剂，将有机絮凝剂和无机絮凝剂混合使用并调节其比例，大大提高了盐霉素的收率。本发明在加入助滤剂后，对混合液进行了超声处理，使盐霉素可以更好的析出，在后续步骤中对盐霉素进行了浓缩结晶从而使盐霉素的纯度大大提高，在实际生产过程中节约能源降低成本，从而保护了环境。
Description
技术领域
本发明涉及一种盐霉素的提纯工艺，具体涉及发酵后盐霉素的提纯工艺，属于抗生素生产技术领域。
背景技术
盐霉素(salinomycin)属于聚醚类一元羧酸，由白色链霉菌(Streptomycesalbus)发酵产生，具有特殊的环状结构，是典型的离子载体抗生素，它对细胞中的阳离子，尤其对钾、钠、铷离子的亲和力特别强，使生物所必需的阳离子通过膜上脂质屏障的浸透性增强，妨碍细胞内外阳离子的传递，使细胞内外离子浓度发生变化，从而影响渗透压，最终使细胞崩解，起到杀菌作用。盐霉素主要对革兰氏阳性菌、真菌、病毒及疟原虫有很高的感受性，预防球虫病效果为100％，保护率为100％，能完全杀死球虫，控制住病情。本品是被美国FDA批准的抗球虫剂，被世界各国广泛承认，用于鸡球虫病和促进畜禽生长。其作用原理为它能够和病原微生物及球虫细胞外的阳离子，尤其是钾离子和钠离子形成络合物，然后再通过细菌或细胞膜上的“膜转运蛋白”不断将阳离子送入细胞内，破坏细胞膜内外的离子平衡，使细胞失活，达到抗球虫的目的。
盐霉素为一元羧酸聚醚类动物专用抗生素，对大多数革兰氏阳性菌和各种球虫有较强的抑制和杀灭作用，不易产生耐药性和交叉抗药性，排泄迅速，残留量极低，用于猪可防治腹泻、促生长、提高成活率，主要用于家禽防球虫美国研究人员发现一种可以“瞄准”并杀死癌症干细胞的化合物，在实验室研究期间，其杀死小鼠身上乳腺癌干细胞的效力比普通抗癌药物泰克索(Taxol)高100倍。盐霉素不仅能杀死小鼠身上的乳腺癌干细胞，还能抑制它们生出新的肿瘤细胞，同时还能减缓已经存在的肿瘤的生长速度。
随着经济全球化步伐加快，畜牧业也得到了迅猛发展。加快畜禽产品出口贸易，对促进三农问题的解决，促进经济全面发展具有主要意义。然而，越来越多的抗生素类药物被广泛应用于治疗和预防禽畜的各类疾病，药物残留是影响动物产品国际贸易的重要因素。一些西方工业发达国家对动物产品中的抗生素要求越来越严，动物源性食品中抗生素残留量的检测，已成为世界肉类贸易中重要的技术指标和技术性壁垒之一。因此，在养殖业选择低毒、低残留、广谱抗菌素，是解决这一瓶颈的关键。盐霉素生产过程比较简单，技术容易掌握，所用原料全是普通农副产品和简单无机原料，无毒无害；因此，盐霉素品种发展，有利于国计民生，是兽药界目前不可替代的兽药品种。
但是，国内外直接生产精品盐霉素的较不多见，有报道有生产盐霉素钠精品，主要原因是盐霉素发酵完成之后，传统的工艺不得不采取烧碱皂化的工艺对残留油脂进行反应，达到能够板框过滤的目的，皂化过程中，盐霉素转化为盐霉素的钠盐。盐霉素钠滤饼烘干之后，用有机溶剂进行浸提，浸提液进行浓缩、结晶、重结晶得到精品盐霉素钠，之后再用盐霉素钠制备精品盐霉素。传统方式较为繁琐，由先制作为盐霉素钠，然后在盐霉素钠的基础上加酸反应生成盐霉素的精品，盐霉素的精品质量差、收率低。
例如中国专利申请2015107590127中公开了一种基于提高盐霉素颗粒制剂收率的制备工艺，该发明对盐霉素的发酵工艺采用酸性发酵，后采调节pH成碱性后进行皂化反应，提高了发酵液分层的速度，缩短了分层的时间，提高了盐霉素的收率，但是皂化过程中，盐霉素转化为盐霉素的钠盐。后向皂化后的发酵液中加入一定量的轻质碳酸钙制成盐霉素料液，后采用喷雾干燥法制粒。此方法制备的盐霉素虽然收率有一定程度的提高，但是质量差、纯度低。
又如中国专利公布CN1078263A中公开了盐霉素及其钠盐结晶品的制备方法，其制备方法为将发酵液酸化后加助滤剂过滤，滤渣用酒精萃取，过滤，滤液用活性炭脱色、过滤、取滤液浓缩，在加水即得产品，使用该发明的制备方法工艺简单，成本低，但是制备的盐霉素产率仅有70％左右，产率较低不能满足市场对盐霉素的需求。
又如中国专利申请201510026181X中公开了一种盐霉素的提取工艺，本发明采用的方案为向发酵液中加入一定量的絮凝剂，后进行板框过滤，直接将滤饼进行挤压制粒、干燥、混合辅料，得到盐霉素药物成品，虽然本发明在生产过程中可以缩短反应时间，提高生产效率，减少耗能，降低成本，但是该发明生产的盐霉素的收率和纯度都比较低。
综上所述，目前的盐霉素提取纯化方法要么在用于实际工业化生产时成本很高，要么收率和纯度等不能满足需求，因此在简化生产步骤的同时提高盐霉素的纯度和收率，达到降低生产成本和提高生产质量是十分必要的。
发明内容
本发明为了克服现有技术的不足，所解决的技术问题是提高盐霉素的纯度和收率，并在一定程度上缩短反应时间，降低生产成本。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种盐霉素的提纯方法，其具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液酸化，调节pH为4.5-6，后向酸化的发酵液中加入絮凝剂，在20-40℃下保温15-30分钟后得到絮凝后的混合物A；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入助滤剂搅拌均匀后在2℃下进行超声处理得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥，得到菌粉D；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用乙醇溶液浸提两次，合并两次浸提得
到的浸提液，得到浸提液E；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩并进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃下进行搅拌溶解1小时，搅拌速度为70-80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为8-10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G；
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
本发明提供的盐霉素提纯方法中步骤(1)酸化过程中所述的酸可选自硫酸、草酸、盐酸、氨基磺酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
所述絮凝剂可选自硫酸铝钾、氯化铝、硫酸铁、氯化铁、壳聚糖、海藻胶聚丙烯酰胺、聚丙烯酸钠和羧甲基纤维素钠的一种或几种。
壳聚糖，是由自然界广泛存在的几丁质(chitin)经过脱乙酰作用得到的，化学名称为聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖，其用途为在医药、保健、食品领域，壳寡糖具有提高免疫、活化细胞、预防癌症、降血脂、降血压、抗衰老，调节机体环境等作用；在环保领域壳聚糖可用于污水处理，蛋白回收，水净化等。功能材料领域，壳聚糖可用于膜材料、载体、吸附剂、纤维、医用材料等；在轻纺领域，壳聚糖可用于织物整理、保健内衣、造纸助剂等；在农业领域，可应用于饲料添加、种子处理、土壤改良、水果保鲜等；在烟草领域，壳聚糖是性能良好的烟草薄片胶，而且具有改善口感，燃烧无毒无异味等特点；工业中用作黏结剂、增稠剂、稳定剂、胶凝剂，在废水处理中，可用作高分子絮凝剂而有效地捕集重金属离子及处理食品加工厂废水。
海藻胶，又称海藻酸钠、藻朊酸钠、藻蛋白酸钠，是β-无水右旋甘露蜜醛酸钠的聚合物，可溶于水，不溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂。海藻胶，可单独用于配制胶粘剂，尤其适宜作为食品胶粉剂，也可纺织印染行业中作上浆剂、整理剂，又可作悬浮剂、乳化剂、增稠剂等；海藻胶在增稠性、稳定性、胶凝性、保形性、薄膜成形性等方面具有显著的优点。
羧甲基纤维素钠，又称:羧甲基纤维素钠盐，羧甲基纤维素，是葡萄糖聚合度为100～2000的纤维素衍生物，相对分子质量242.16。白色纤维状或颗粒状粉末。无臭，无味，无味，有吸湿性，不溶于有机溶剂。食品工业中用作增稠剂，医药工业中用作药物载体，日用化学工业中用作黏结剂、抗再沉凝剂。印染工业中用作上浆剂和印花糊料的保护胶体等。在石油化工中可作为采油压裂液成分。
优选地，所述絮凝剂可选硫酸铝钾、氯化铁、壳聚糖、海藻胶和羧甲基纤维素钠的一种或几种；
进一步优选地，所述絮凝剂可选硫酸铝钾、壳聚糖、海藻胶和羧甲基纤维素钠的一种或几种；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，硫酸铝钾的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-0.8％，优选为0.2-0.7％，进一步优选为0.3-0.6％，更进一步优选为0.4-0.5％；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，氯化铝的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-0.8％，优选为0.2-0.7％，进一步优选为0.3-0.6％，更进一步优选为0.4-0.5％；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，硫酸铁的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-0.8％，优选为0.2-0.7％，进一步优选为0.3-0.6％，更进一步优选为0.4-0.5％；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，氯化铁的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-0.8％，优选为0.2-0.7％，进一步优选为0.3-0.6％，更进一步优选为0.4-0.5％；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，壳聚糖的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-1％，优选为0.2-0.9％，再优选为0.3-0.8％，进一步优选为0.4-0.7％，更进一步优选为0.5-0.6％；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，海藻胶的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-1％，优选为0.2-0.9％，再优选为0.3-0.8％，进一步优选为0.4-0.7％，更进一步优选为0.5-0.6％；；
在本发明提供的盐霉素提纯方法中，羧甲基纤维素钠的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-1％，优选为0.2-0.9％，再优选为0.3-0.8％，进一步优选为0.4-0.7％，更进一步优选为0.5-0.6％；；
上述步骤(2)中所述的助滤剂可选自硅藻土、珍珠岩、纤维素、石棉、石墨粉和氧化镁中的一种或几种；
优选地，所述的助滤剂可选自硅藻土、珍珠岩、和纤维素中的一种或几种；
所述助滤剂的用量按质量体积百分比(g/mL)为盐霉素发酵液的0.1-0.5％，优选为0.2-0.4％，进一步优选为0.2-0.3％。
上述步骤(2)所述超声处理的时间为15-30min。
上述步骤(2)所述超声处理的强度为30KHz-50KHz。
上述步骤(3)中闪蒸干燥后得到的菌粉D水分不超过5％；
上述步骤(4)中每次浸提所用乙醇和菌粉的质量比为3-6：1，所用乙醇浓度为95％；
上述步骤(4)所述活性炭脱色时间为每1千克盐霉素发酵液5-15min，优选为6-12min，进一步优选为8-10min；脱色温度为20-40℃，优选为25-35℃；
上述步骤(5)中活性炭的用量按质量体积百分比为浸提液E的0.3-0.5％，其浓缩倍数为6-8倍；
本发明在实施过程中意外地发现在使用絮凝剂的时候将无机絮凝剂和有机絮凝剂混合使用并控制其比例可以使盐霉素更好的析出，从而使盐霉素的收率大大增加，本发明所使用的絮凝剂重量比为硫酸铝钾：壳聚糖：海藻胶：羧甲基纤维素钠＝1：2：2：1，本发明通过调节絮凝剂的种类和用量使盐霉素的收率达到85％以上，大大提高了其收率，在一定程度上节约了能源，减少了环境污染。
本发明在实施过程中优选使用本发明提供的絮凝剂和助滤剂并控制其用量，得到盐霉素粗品，然后对得到的盐霉素粗品进行了浸提，结晶和重结晶等步骤大大提高了盐霉素的纯度，最终得到了本发明所公开的精品盐霉素。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明直接从盐霉素发酵液中通过絮凝工艺，得到盐霉素滤饼，省去皂化工艺，使盐霉素的收率和纯度提高。
(2)本发明在实施过程中优选使用本发明提供的絮凝剂，将有机絮凝剂和无机絮凝剂混合使用，大大提高了盐霉素的收率。
(3)本发明在加入助滤剂后，对混合液进行了超声处理，使盐霉素可以更好的析出，在后续步骤中对盐霉素进行了浓缩结晶从而使盐霉素的产率和纯度大大提高，在生产过程中节约能源降低成本，从而保护了环境。
具体实施方案
实施例1一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用盐酸酸化，调节pH为4.5，后向酸化的发酵液中加入硫酸铝钾100g，在20℃下保温15min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入硅藻土200g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理,超声强度为30KHz，时间为15min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为3％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍的95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入300g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至8倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为70r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1550g，得率为79.5％，纯度为98％。
实施例2一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用醋酸酸化，调节pH为5，后向酸化的发酵液中加入壳聚糖800g，在25℃下保温20min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入珍珠岩400g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为35KHz，时间为16min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为4％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入500g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至6倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为8r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1650g，得率为79.8％，纯度为98.5％。
实施例3一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用磷酸酸化，调节pH为5.5，后向酸化的发酵液中加入海藻胶300g，在30℃下保温25min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入纤维素400g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为36KHz，超声时间为18min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为5％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入400g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至7倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为70r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1680g，得率为82.4％，纯度为98.8％。
实施例4一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用盐酸酸化，调节pH为6，后向酸化的发酵液中加入硫酸铝钾42g和壳聚糖83g，在25℃下保温20min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入硅藻土300g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为40KHz，超声时间为20min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为4％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入350g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至7倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为70r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为8r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为2000g，得率为80％，纯度为99.1％。
实施例5一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用盐酸酸化，调节pH为6，后向酸化的发酵液中加入硫酸铝钾40g和海藻胶80g，在25℃下保温20min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入纤维素450g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为42KHz，超声时间为20min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为3％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入300g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至7倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1980g，得率为82.5％，纯度为99.0％。
实施例6一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用盐酸酸化，调节pH为6，后向酸化的发酵液中加入硫酸铝钾50g和羧甲基纤维素钠50g，在30℃下保温25min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入硅藻土200g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为45KHz，超声时间为22min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为4％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入400g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至8倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1680g，得率为84％，纯度为99.4％。
实施例7一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用磷酸酸化，调节pH为5，后向酸化的发酵液中加入硫酸铝钾40g，壳聚糖80g，海藻胶80g和羧甲基纤维素钠40g，在25℃下保温15min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入硅藻土800g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为48KHz，超声时间为25min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为5％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入300g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至7倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为70r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为8r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1800g，得率为90％，纯度为99.6％。
实施例8一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：
(1)将盐霉素发酵液100升，用磷酸酸化，调节pH为4.5，后向酸化的发酵液中加入壳聚糖40g，海藻胶40g和羧甲基纤维素钠20g，在25℃下保温20min后得到絮凝后的混合物A，备用；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入纤维素450g搅拌均匀后在2℃下进行超声处理，超声强度为50KHz，超声时间为30min得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C，备用；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥至水分为4％，得到菌粉D，备用；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用3倍95％的乙醇溶液浸提两次，得到浸提液E，备用；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入400g活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩至8倍后进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃进行搅拌充分溶解1小时，搅拌速度为80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G。
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1700g，得率为85％，纯度为99.2％。
对比例1一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：将步骤(2)中的超声处理去除，其他步骤与实施例7相同。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1450g，得率为82.3％，纯度为98.4％。
对比例2一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：将步骤(5)中的重结晶去除，其他步骤与实施例7相同。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1780g，得率为89％，纯度为82％。
对比例3一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：改变步骤(1)中的絮凝剂的质量比，使硫酸铝钾：壳聚糖：海藻胶：羧甲基纤维素钠＝1：1：1：1，其他步骤与实施例7相同。
所得高纯度盐霉素晶体的质量为1520g，得率为80.2％，纯度为96.3％。
对比例4一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：中国申请专利921031521中公开的步骤，所得盐霉素晶体的质量为1470g，得率为73.5％，纯度为80％。
对比例5一种盐霉素的提纯方法
具体步骤为：中国申请专利201510026181X中公开的步骤，所得盐霉素晶体的质量为1420g，得率为71％，纯度为82％。
实验结果如下表所示：
| 实例 | 产率％ | 纯度％ |
| 实施例1 | 79.5 | 98 |
| 实施例2 | 79.8 | 98.5 |
| 实施例3 | 82.4 | 98.8 |
| 实施例4 | 80 | 99.1 |
| 实施例5 | 82.5 | 99 |
| 实施例6 | 84 | 99.4 |
| 实施例7 | 90 | 99.6 |
| 实施例8 | 85 | 99.2 |
| 对比例1 | 82.3 | 98.4 |
| 对比例2 | 89 | 82 |
| 对比例3 | 80.2 | 96.3 |
| 对比例4 | 73.5 | 80 |
| 对比例5 | 71 | 82 |
由上表数据可以看出，本发明公开的盐霉素提纯方法可以得到高产率、高纯度的精品盐霉素，本发明在提纯过程中优选各种絮凝剂与助滤剂，并控制其含量和比例，在提取过程中用到了超声步骤，意外地发现可以提高盐霉素的产率，本发明中通过优选絮凝剂，并控制絮凝剂的比例可以使盐霉素的产率达到90％以上，纯度达到99.6％(实施例7记载)，而将其比例改变会使其产率降低到80.2％(对比例3记载)。
惟以上所述者，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能以此限定本发明实施之范围，即大凡依本发明权利要求及发明说明书所记载的内容所作出简单的等效变化与修饰，皆仍属本发明权利要求所涵盖范围之内。此外，摘要部分和标题仅是用来辅助专利文件搜寻之用，并非用来限制本发明之权利范围。
Claims (8)
1.一种盐霉素的提纯方法，其特征在于：包括以下具体步骤： (1)将盐霉素发酵液酸化，调节pH为4 .5-6，后向酸化的发酵液中加入絮凝剂，在20-40℃下保温15-30分钟后得到絮凝后的混合物A；
(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入助滤剂搅拌均匀后在2℃进行超声处理得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C；
(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥，得到菌粉D；
(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用乙醇溶液浸提两次，合并两次浸提得到的浸提液，得到浸提液E；
(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩并进行降温结晶得到晶体F，后将晶体F进行重结晶，得到盐霉素湿晶体G；
上述重结晶的步骤为：将晶体F，用95％乙醇溶液进行溶解，晶体F与乙醇溶液的质量比为1:3，在80℃下进行搅拌溶解1小时，搅拌速度为70-80r/min，之后进行过滤，将滤液转入结晶瓶中，控制结晶瓶转速为8-10r/min，进行降温结晶，降温速度为10分钟每摄氏度，降温至28℃时，进行离心分离，后过滤，即得到重结晶的盐霉素湿晶体G；
(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体G转入双锥干燥机减压烘干；
上述步骤(1)中所述絮凝剂为硫酸铝钾、壳聚糖、海藻胶和羧甲基纤维素钠；其重量比为1：2：2：1；
步骤(4)中每次浸提所用乙醇和菌粉的质量比为3-6：1，所用乙醇浓度为95％。
2.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(1)酸化过程中所述的酸为硫酸、草酸、盐酸、氨基磺酸、柠檬酸或磷酸中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(2)中所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石棉、石墨粉和氧化镁中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(2)所述助滤剂的用量按质量体积百分比为盐霉素发酵液的0.1-0.5％。
5.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(2)所述超声处理的时间为15-30min；超声处理的强度为30KHz-50KHz。
6.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(3)中闪蒸干燥后得到的菌粉D水分不超过5％。
7.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(5)所述活性炭脱色时间为每1千克盐霉素发酵液5-15min；脱色温度为20-40℃。
8.根据权利要求1所述的一种盐霉素提纯方法，其特征在于：步骤(5)中活性炭的用量按质量体积百分比为浸提液E的0.3-0.5％，其浓缩倍数为6-8倍。
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