CN103740790A - 一种提高新霉素产量的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高新霉素产量的生产方法，用花生饼粉、玉米淀粉、大米粉、酵母粉、葡萄糖、蛋白胨、硫酸铵、氯化钠、轻质碳酸钙、KH2PO4的弗氏链霉菌常规发酵培养基中，加入选自下述的一种或多种添加剂：赖氨酸、乳酸亚铁、酪氨酸、蛋氨酸、水解酪素、维生素B12、果糖、氨基葡萄糖、叶酸、核黄素、色氨酸。本发明的优点是提高新霉素产量5-20％以上，降低成本，发酵效率增高。本发明产品用于治疗人类疾病和畜牧业，作抗生素用。
Description
技术领域
本发明提供一种新霉素的生产方法，具体地说，提供一种提高新霉素产量的生产方法。是涉及用微生物发酵并提高新霉素产量的制备方法。
背景技术
新霉素是一种氨基糖苷类抗生素。新霉素是首个被发现的2—DOS(2—脱氧链霉胺)氨基糖苷类抗生素,它是1949年Waksman等从弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)代谢产物中分离得到的一种氨基环多醇复合抗生素，主要与细菌核糖体30S亚基结合,抑制细菌合成蛋白质。弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)菌株可以商业购买，也是国内新霉素微生物发酵生产工艺中所用的菌株。临床常用硫酸新霉素(Neomycin Salfate)，分子式：C23H46N6O13.3(H2SO4)。该产品为白色或微黄色结晶，无臭，对热稳定，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于有机溶剂，吸湿性强，易潮解。由于其抗菌谱广,对革兰氏阴、阳性菌、结核杆菌等均有抑制作用。口服给药在体内难以吸收,在肠道中保持较高浓度,确保其杀菌效果,适用于胃肠道感染、呼吸道感染、皮肤感染五官科疾病的治疗和腹部手术前的消毒等;同时因其能提高饲料利用率,促进禽畜生长,因此被广泛应用于畜牧业。如今国际上在硫酸新霉素的应用研究上有了新的进展，欧美、西德等国家和地区广泛应用于畜牧业。
中国于上世纪六、七十年代开始生产新霉素，该药品已成为医药工业中的一种老药品。长期以来，由于生产过程复杂,周期长,产率低。工艺自身发展的局限，生产得率及生产周期似已达到极限。目前该药品的生产发酵周期在130-170小时，提炼收率85％，发酵单位为16000-19000单位/毫升，因此，如何提高新霉素的产菌率，降低生产成本仍是各研究单位的重要课题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的问题，而提供一种提高新霉素发酵效率的制备方法，显著地提高了新霉素的产量。
本发明目的是可以通过如下措施来实现：
本发明提供了一种提高新霉素产量的生产方法，所述方法是采用微生物发酵法，并且使用弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)，其特征在于在常规发酵培养基中加入添加剂，所述添加剂选自如下的一种或者多种：赖氨酸、乳酸亚铁、蛋氨酸、酪氨酸、水解酪素、维生素B12、果糖、氨基葡萄糖、叶酸、核黄素、色氨酸。
上述所述的生产方法，其中添加剂的加入量，优选为：赖氨酸0.05-0.5克/升、乳酸亚铁0.05-0.5克/升、蛋氨酸0.3-1.0克/升、酪氨酸0.01-0.3克/升、水解酪素0.5-50克/升、维生素B120.02-0.45毫克/升、果糖0.5-25克/升、氨基葡萄糖0.5-25克/升、叶酸0.01-0.2毫克/升、核黄素0.02-0.45毫克/升或者色氨酸0.1-0.3克/升。。
上述所述的生产方法，其中所述的常规发酵培养基，是指已有的新霉素微生物发酵工艺中所用的发酵培养基，例如，发酵培养基的组成，按培养基体积g/100ml计为：黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05。
作为本发明一具体实施方式，上述所述的生产方法，其具体包括如下步骤：
（1）斜面培养制得斜面孢子：将弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)接种至斜面培养基内，接后于28℃的恒温室培养10～12天，得斜面孢子，其中，所述的斜面培养基为(g/100ml)：葡萄糖1.0、牛肉膏0.2、琼脂1.8～2.2、磷酸氢二钾0.05和DL-天冬素0.05；
（2）制备斜面孢子悬浮液：选步骤（1）中生长正常且符合质量要求的斜面孢子，在无菌条件下，加无菌水制成孢子悬液，置0-4℃条件下保存，保存时间为8hr内，得待接种用斜面孢子悬浮液；
（3）繁殖罐培养制备新霉素繁殖培养物：将步骤（2）制得的斜面孢子悬浮液置于繁殖罐中进行扩大培养，种子接入量为扩大培养基体积的2%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到新霉素繁殖培养物，其中，繁殖罐培养所用的培养基为：按g/100ml计，花生饼粉1.0、玉米淀粉1.0、酵母粉2.25、葡萄糖2.5、蛋白胨0.5、硫酸铵0.1、轻质碳酸钙1.4、Na2HPO40.1、豆油0.28；
（4）发酵罐发酵培养制备新霉素发酵产物：将步骤（3）所制得的新霉素繁殖培养物置于发酵罐中进行发酵培养，种子接入量为发酵培养基体积的15～20%，发酵温度为35℃，发酵时间为130小时，得到新霉素发酵产物，其中，发酵罐培养所用的培养基为：按g/100ml计，黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45、轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05，并加入添加剂，按培养基的体积计，所述添加剂选自如下的一种或者一种以上：赖氨酸0.05-0.5克/升，乳酸亚铁0.05-0.5克/升，蛋氨酸0.3-1.0克/升，酪氨酸0.01-0.3克/升，维生素B12，0.02-0.45毫克/升，水解酪素0.5-50克/升，果糖0.5-25克/升，氨基葡萄糖0.5-25克/升，叶酸0.01-0.2毫克/升，核黄素0.02-0.45毫克/升，色氨酸0.1-0.3克/升；
（5）将步骤（4）所得到的新霉素发酵产物经分离和纯化处理制得新霉素。
其中，上述所述的生产方法，其中优选在步骤（2）中，通过种子培养考察斜面孢子质量，每只种瓶接种量为3-4cm2斜面孢子，每只种瓶中培养基为80ml，于转速为220-240rpm的摇瓶机上，在温度为35℃的条件下培养6天，得种子发酵液考察斜面孢子质量，其中种子培养所用的培养基为(g/100ml)：葡萄糖2.0、DL-天冬素0.06、蛋白胨0.5、花生饼粉2.8、酵母粉0.5、大米粉8.0、玉米浆0.25、淀粉酶0.0025、硫酸铵0.6、轻质碳酸钙0.45。
作为实施方式之一，上述所述的生产方法，其中所述的分离和纯化处理制得新霉素的过程包括如下步骤：（1）将得到的新霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为6-7，得到新霉素酸化液；（2）将得到的新霉素酸化液以732型树脂进行吸附和解吸处理，得到新霉素解析液；（3）将得到的新霉素解析液以711型树脂进行脱色，得到新霉素脱色液；（4）将得到的新霉素脱色液进行薄膜浓缩，制得新霉素浓缩液。
优选地，上述所述的生产方法，其中还包括如下步骤：（1）将制得的新霉素浓缩液加入硫酸成盐后制得硫酸新霉素成品液；（2）将制得的硫酸新霉素成品液通过喷雾干燥制得硫酸新霉素成品。
作为本发明一个具体实施方式，提供了一种提高新霉素产量的生产方法，其为：
斜面培养基(g/100ml)配方：葡萄糖1.0、牛肉膏0.2、琼脂1.8～2.2、磷酸氢二钾0.05、DL-天冬素0.05。
种瓶培养基(g/100ml)配方：葡萄糖2.0、DL-天冬素0.06、蛋白胨0.5、花生饼粉2.8、酵母粉0.5、大米粉8.0、玉米浆0.25、淀粉酶0.0025、硫酸铵0.6、轻质碳酸钙0.45。
繁殖罐种子培养基(g/100ml)配方：花生饼粉1.0、玉米淀粉1.0、酵母粉2.25、葡萄糖2.5、蛋白胨0.5、硫酸铵0.1、轻质碳酸钙1.4、Na2HPO40.1、豆油0.28。
发酵罐发酵培养基(g/100ml)配方:黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05，加入选自如下的一种或多种添加剂及其加入量：
斜面培养基制备：按处方量称取所用物料，溶解均匀，加饮用水至配制全量，然后用氢氧化钠溶液调节pH，使消后pH至6.0左右，分装至250ml茄瓶中，装量为50ml，于压力0.1MPa，进行121℃、30min湿热灭菌，取出待稍冷后制成斜面，斜面长占茄瓶的2/3，冷却备用。
斜面接种培养：无菌挖块取生产新霉素用弗氏链霉菌菌种孢子约10mm×6mm，用划线法涂布在斜面培养基上，用棉塞塞紧，接后于28℃的恒温室培养10～12天，得斜面孢子。
斜面孢子悬浮液制备：选2-3瓶生长正常且符合质量要求的孢子斜面，在无菌条件下，各加50ml无菌水制成孢子悬液，然后合并于750ml的三角瓶中，置0-4℃条件下保存，保存时间为8hr内，得待接种用斜面孢子悬浮液。
种子培养基制备：按处方量称取配料，溶解均匀，加纯化水至配制全量，然后用氢氧化钠溶液调节pH，使消后pH至6.5左右，分装至750ml三角瓶中，装量为80ml，于压力0.1MPa，进行121℃、30min湿热灭菌，取出冷却备用。
种子培养：每只种瓶接种量为3-4cm2斜面孢子，每只种子瓶培养基为80ml，于转速为220-240rpm的摇瓶机上，在温度为35℃的条件下培养6天，得种子发酵液考察斜面种子质量。
繁殖罐种子培养基制备：按繁殖罐种子培养基配比称量所需的原材料，加饮用水加至实际配制量，进行121℃、30min灭菌，备用。
繁殖罐种子接种及培养：将新霉素斜面孢子悬浮液置于繁殖罐中进行扩大培养，种子接入量为扩大培养基体积的2%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到新霉素繁殖培养物。
发酵培养基制备：按发酵培养基配比称量所需的原材料，加饮用水加至实际配制量，进行121℃、30min灭菌，备用。
发酵培养：将上述繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵培养，种子接入量为发酵培养基体积的15-20%，发酵温度为35℃，发酵时间为130小时，得到新霉素发酵产物；
将上步得到的新霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为6-7，得到新霉素酸化液；
将上步得到的新霉素溶液以732树脂进行吸附解吸处理，得到新霉素解析液；
将上步得到的新霉素解析液以711树脂进行脱色，得到新霉素脱色液；
将上步得到的新霉素脱色液以薄膜进行浓缩，得到新霉素浓缩液；
将上步得到的新霉素浓缩液加入硫酸成盐后制得硫酸新霉素成品液；
将上步得到硫酸新霉素通过喷雾干燥制得硫酸新霉素成品。
本发明令人意外地发现，在常规的新霉素微生物发酵生产工艺中，在其常规发酵培养基中加入特定的添加剂，能显著提高发酵液中新霉素的产量。且生产工艺相对易于控制，生产工艺改变小，且生产成本更低，能够更好地应用于规模化生产中。改进前生产的硫酸新霉素产品发酵液含量为18000u/ml,本发明生产的硫酸新霉素产品发酵液含量达22000u/ml。本发明相比传统发酵方法具有如下优点：提高新霉素产量5-20％以上，降低成本，增加发酵效率。
附图说明
图1：新霉素发酵配方增加添加剂发酵效率增幅百分比图表
具体实施方法
下面列举实施例，对本发明加以进一步说明，但本发明不只限于这些实施例。
实施例1：在黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉
0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05的弗氏链霉菌常规发酵培养基中，添加赖氨酸，浓度0.3克/升，按常规方法接种弗氏链霉菌（Streptomycesfradiae-H菌株）（SY060112），在pH7.0，培养温度35℃，体积50升的条件下发酵130小时。
实施方法：
（1）斜面培养基%(g/100ml)配方：葡萄糖1.0、牛肉膏0.2、琼脂1.8～2.2、磷酸氢二钾0.05、DL-天冬素0.05
（2）种瓶培养基%(g/100ml)配方：葡萄糖2.0、DL-天冬素0.06、蛋白胨0.5、花生饼粉2.8、酵母粉0.5、大米粉8.0、玉米浆0.25、淀粉酶0.0025、硫酸铵0.6、轻质碳酸钙0.45
（3）繁殖罐种子培养基%(g/100ml)配方：花生饼粉1.0、玉米淀粉1.0、酵母粉2.25、葡萄糖2.5、蛋白胨0.5、硫酸铵0.1、轻质碳酸钙1.4、Na2HPO40.1、豆油0.28
（4）发酵罐发酵培养基%(g/100ml)配方:黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05、赖氨酸浓度0.03
（5）斜面培养基制备：按处方量称取所用物料，溶解均匀，加饮用水至配制全量，然后用氢氧化钠溶液调节pH，使消后pH至6.0左右，分装至250ml茄瓶中，装量为50ml，于压力0.1MPa，进行121℃、30min湿热灭菌，取出待稍冷后制成斜面，斜面长占茄瓶的2/3，冷却备用。
（6）斜面接种培养：无菌挖块取生产新霉素用弗氏链霉菌菌种孢子约10mm6mm，用划线法涂布在斜面培养基上，用棉塞塞紧，接后于28℃的恒温室培养10～12天，得斜面孢子。
（7）斜面孢子悬浮液制备：选2-3瓶生长正常且符合质量要求的孢子斜面，在无菌条件下，各加50ml无菌水制成孢子悬液，然后合并于750ml的三角瓶中，置0-4℃条件下保存，保存时间为8hr内，得待接种用斜面孢子悬浮液。（8）种子培养基制备：按处方量称取配料，溶解均匀，加纯化水至配制全量，然后用氢氧化钠溶液调节pH，使消后pH至6.5左右，分装至750ml三角瓶中，装量为80ml，于压力0.1MPa，进行121℃、30min湿热灭菌，取出冷却备用。
（9）种子培养：每只种瓶接种量为3-4cm2斜面孢子，每只种子瓶培养基为80ml，于转速为220-240rpm的摇瓶机上，在温度为35℃的条件下培养6天，得种子发酵液考察斜面种子质量。
（10）繁殖罐种子培养基制备：按繁殖罐种子培养基配比称量所需的原材料，加饮用水加至实际配制量，进行121℃、30min灭菌，备用。
（11）繁殖罐种子接种及培养：将新霉素斜面孢子悬浮液置于繁殖罐中进行扩大培养，种子接入量为扩大培养基体积的2%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到新霉素繁殖培养物。
（12）发酵培养基制备：按发酵培养基配比称量所需的原材料，加饮用水加至实际配制量，进行121℃、30min灭菌，备用。
（13）发酵培养：将上述繁殖培养物置于发酵培养基上进行发酵培养，种
子接入量为发酵培养基体积的15-20%，发酵温度为35℃，发酵
时间为130小时，得到新霉素发酵产物；
实施例2：添加剂是乳酸亚铁，浓度0.6克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例3：添加剂是蛋氨酸，浓度0.6克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例4：添加剂是酪氨酸，浓度0.3克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例5：添加剂是水解酪素，浓度5克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例6：添加剂是维生素Ｂ12，浓度0.05毫克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例7：添加剂是果糖，浓度2.0克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例8：添加剂是氨基葡萄糖，浓度1.5克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例9：添加剂是叶酸，浓度0.05毫克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例10：添加剂是核黄素，浓度0.05毫克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
实施例11：添加剂是色氨酸，浓度0.3克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
对照例1：添加剂是氯化镁，浓度0.3克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
对照例2：添加剂是葡萄糖酸钠，浓度2.0克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
对照例3：添加剂是氯化锌，浓度0.4克/升，代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
对照例：按实施1的方法，但发酵培养基中不添加任何添加剂。黄豆饼粉0.5克/升、花生饼粉2.8克/升、大米粉5.0克/升、酵母粉0.9克/升、葡萄糖1.5克/升、蛋白胨1.0克/升、硫酸铵0.5克/升、氯化钠0.45克/升、轻质碳酸钙0.45克/升、KH2PO40.06克/升、α-淀粉酶0.02克/升、豆油0.12克/升、硅油0.05克/升的弗氏链霉菌常规发酵培养基中，按常规方法接种弗氏链霉菌（Streptomycesfradiae-H菌株）（代号SY060112），在pH7.0，培养温度35℃，体积50升的条件下发酵130小时。除不添加添加剂外，其他培养基组成和用量，以及发酵条件均与实施例1相同。
新霉素生物效价测定：
测量新霉素的生物效价的标准菌种为金黄色葡萄球菌。将已知效价的标准溶液和被检品溶液，滴加在金黄色葡萄球菌的培养基上进行对照培养，产生透明的抑菌圈。比较标准品和被检品抑菌圈的大小，计算新霉素抗菌效价和发酵效率，
对照例、实施例1－11以及对照例1－3的新霉素生物效价测定结果见表1和图1。
表1：添加剂对新霉素发酵单位和发酵效率的影响
从表1和图1可以看出：新霉素的发酵单位和发酵效率在培养基的基础上，加入某一种添加剂后，有的显著增加了发酵单位和发酵效率。使产量增长幅度在5％以下的添加剂有赖氨酸、乳酸亚铁、核黄素、葡萄糖酸钠；增长5-10％左右的有水解酪素、蛋氨酸、酪氨酸；增长10-20％左右的有维生素B12、氨基葡萄糖、色氨酸；使产量增长了20％以上有果糖、叶酸。而同时添加上述添加剂中的多种，也可达到增产的目的。如果加入其它物质，例如氯化镁、氯化锌，作为添加剂，结果对新霉素产量，不仅无增长，反而还有一定幅度的下降。
实施例15：添加剂是赖氨酸0.3克/升、乳酸亚铁0.5克/升；水解酪素0.5克/升；代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量以及发酵条件均与实施例1相同。产量提高8％。
实施例16：添加剂是水解酪素0.5克/升；果糖0.5克/升；氨基葡萄糖0.5克/升；叶酸0.01毫克/升；核黄素0.02毫克/升；代替实施例1中的赖氨酸浓度0.3克/升，培养基组成和用量以及发酵条件均与实施例1相同。产量提高30％，但生产成本较高。
由此可见，本发明提高新霉素产量的方法中，所述添加剂，可以根据需要进行组合使用，可以加入其中一种或者以上，以提高新霉素的产量。
Claims (7)
1.一种提高新霉素产量的生产方法，所述方法是采用微生物发酵法，并且使用弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)，其特征在于在常规发酵培养基中加入添加剂，所述添加剂选自如下的一种或者多种：赖氨酸、乳酸亚铁、蛋氨酸、酪氨酸、水解酪素、维生素B12、果糖、氨基葡萄糖、叶酸、核黄素、色氨酸。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其中添加剂的加入量优选为：赖氨酸0.05-0.5克/升、乳酸亚铁0.05-0.5克/升、蛋氨酸0.3-1.0克/升、酪氨酸0.01-0.3克/升、水解酪素0.5-50克/升、维生素B120.02-0.45毫克/升、果糖0.5-25克/升、氨基葡萄糖0.5-25克/升、叶酸0.01-0.2毫克/升、核黄素0.02-0.45毫克/升或者色氨酸0.1-0.3克/升。
3.根据权利要求1-2所述的生产方法，其中所述的常规发酵培养基的组成，按g/100ml计为：黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45、轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05。
4.根据权利要求1-3所述的生产方法，其包括如下步骤：
（1）斜面培养制得斜面孢子：将弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)接种至斜面培养基内，接后于28℃的恒温室培养10～12天，得斜面孢子，其中，所述的斜面培养基为(g/100ml)：葡萄糖1.0、牛肉膏0.2、琼脂1.8～2.2、磷酸氢二钾0.05和DL-天冬素0.05；
（2）制备斜面孢子悬浮液：选步骤（1）中生长正常且符合质量要求的斜面孢子，在无菌条件下，加无菌水制成孢子悬液，置0-4℃条件下保存，保存时间为8hr内，得待接种用斜面孢子悬浮液；
（3）繁殖罐培养制备新霉素繁殖培养物：将步骤（2）制得的斜面孢子悬浮液置于繁殖罐中进行扩大培养，种子接入量为扩大培养基体积的2%，培养温度为36℃，培养时间为42小时，得到新霉素繁殖培养物，其中，繁殖罐培养所用的培养基为：按g/100ml计，花生饼粉1.0、玉米淀粉1.0、酵母粉2.25、葡萄糖2.5、蛋白胨0.5、硫酸铵0.1、轻质碳酸钙1.4、Na2HPO40.1、豆油0.28；
（4）发酵罐发酵培养制备新霉素发酵产物：将步骤（3）所制得的新霉素繁殖培养物置于发酵罐中进行发酵培养，种子接入量为发酵培养基体积的15～20%，发酵温度为35℃，发酵时间为130小时，得到新霉素发酵产物，其中，发酵罐培养所用的培养基为：按g/100ml计，黄豆饼粉0.5、花生饼粉2.8、大米粉5.0、酵母粉0.9、葡萄糖1.5、蛋白胨1.0、硫酸铵0.5、氯化钠0.45、轻质碳酸钙0.45、KH2PO40.06、α-淀粉酶0.02、豆油0.12、硅油0.05，并加入添加剂，按培养基的体积计，所述添加剂选自如下的一种或者一种以上：赖氨酸0.05-0.5克/升，乳酸亚铁0.05-0.5克/升，蛋氨酸0.3-1.0克/升，酪氨酸0.01-0.3克/升，维生素B12，0.02-0.45毫克/升，水解酪素0.5-50克/升，果糖0.5-25克/升，氨基葡萄糖0.5-25克/升，叶酸0.01-0.2毫克/升，核黄素0.02-0.45毫克/升，色氨酸0.1-0.3克/升；
（5）将步骤（4）所得到的新霉素发酵产物经分离和纯化处理制得新霉素。
5.根据权利要求4所述的生产方法，其中在步骤（2）中，通过种子培养考察斜面孢子质量，每只种瓶接种量为3-4cm2斜面孢子，每只种瓶中培养基为80ml，于转速为220-240rpm的摇瓶机上，在温度为35℃的条件下培养6天，得种子发酵液考察斜面孢子质量，其中种子培养所用的培养基为(g/100ml)：葡萄糖2.0、DL-天冬素0.06、蛋白胨0.5、花生饼粉2.8、酵母粉0.5、大米粉8.0、玉米浆0.25、淀粉酶0.0025、硫酸铵0.6、轻质碳酸钙0.45。
6.根据权利要求1－5所述的生产方法，其中所述的分离和纯化处理制得新霉素的过程包括如下步骤：（1）将得到的新霉素发酵产物进行酸化处理至pH值为6-7，得到新霉素酸化液；（2）将得到的新霉素酸化液以732型树脂进行吸附和解吸处理，得到新霉素解析液；（3）将得到的新霉素解析液以711型树脂进行脱色，得到新霉素脱色液；（4）将得到的新霉素脱色液进行薄膜浓缩，制得新霉素浓缩液。
7.根据权利要求1－6所述的生产方法，其中还包括如下步骤：（1）将制得的新霉素浓缩液加入硫酸成盐后制得硫酸新霉素成品液；（2）将制得的硫酸新霉素成品液通过喷雾干燥制得硫酸新霉素成品。
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