CN103484509B - 一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基及发酵方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基及发酵方法，其一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有玉米油、麦芽糖、啤酒酵母干渣和蚯蚓粉。本发明通过采用麦芽糖替代葡萄糖；啤酒酵母干渣和蚯蚓粉代替鱼粉、蛋白胨、黄豆饼粉和玉米浆，优化其培养基配方，从而解决了原辅料的成本问题，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现大观霉素稳定、高效的生产。同时利用该培养基可提高发酵单位、缩短发酵周期。

Description

一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基及发酵方法

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域，特别是涉及一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基及发酵方法。

背景技术

大观霉素是由壮观链霉菌经有氧发酵后生成的次级代谢产物，具有杀菌谱广，无过敏现象，副作用小，安全性好等特点。它不仅是治疗淋病的首选药物，也可用于动物治疗，并能促进动物生长，是良好的动物饲料添加剂。

目前，国内大观霉素的生产方法主要是发酵法，即采用壮观链霉菌作为菌种，培养基中的碳源主要是淀粉、葡萄糖；有机氮源主要是玉米浆、酵母粉、黄豆饼粉和蛋白胨。以上述常规原辅料发酵生产大观霉素存在的主要问题：

1大观霉素种子、发酵培养基中有机氮源的组成成分至少在3种以上，增加了企业的采购成本。

2一级种子接种量较多。常规的一级种子培养的接种量为5～10L/M³，增加了菌种研究人员的工作强度。

3常规配方的大观霉素的种子培养周期较长，两次种子培养的周期超过了50h。

4生产大观霉素的培养基中含有鱼粉，其质量影响发酵液质量和发酵效果。目前，国内生产的鱼粉都是混合鱼粉，鱼粉中含有动物骨粉、羽毛粉等，影响了发酵液的质量和发酵效果。采用配方鱼粉，发酵液颜色较深，其发酵单位一般为4000～5000u/ml，发酵单位较低。另外，购买纯鱼粉的价格较高，而且容易受到休渔期的影响，增加采购成本和生产成本。

5常规培养基在灭菌过程中，部分葡萄糖在高温状态容易碳化，使种子液和发酵液的颜色变深，降低培养基中的总糖含量，影响种子培养和发酵培养的效果。

6采用常规的种子和发酵培养基，其发酵单位一般在5000～7000u/ml，发酵单位不高。

发明内容

本发明目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，缩短发酵周期，同时最大限度的降低原辅料用量，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现大观霉素稳定、高效地生产的壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产大观霉素的发酵方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有玉米油、麦芽糖、啤酒酵母干渣和蚯蚓粉。

所述一级种子培养基组成为：玉米油18～20ml/L、麦芽糖3～5g/L、啤酒酵母干渣12～14g/L、蚯蚓粉17～19g/L、硫酸铵0.03～0.05g/L、麦芽糖酶0.04～0.06g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L。

所述二级种子培养基组成为：玉米油20～22ml/L、麦芽糖5～7g/L、啤酒酵母干渣17～19g/L、蚯蚓粉18～20g/L、硫酸铵0.04～0.06g/L、麦芽糖酶0.05～0.07g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L。

所述发酵培养基组成为：玉米油23～25ml/L、麦芽糖21～23g/L、啤酒酵母干渣22～24g/L、蚯蚓粉21～23g/L、硫酸铵0.07～0.08g/L、磷酸二氢钾0.02～0.04g/L、氯化钾0.02～0.04g/L、轻质碳酸钙0.3～0.5g/L、巴比妥0.6～0.8g/L、麦芽糖酶0.07～0.09g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L。

所述啤酒酵母干渣的质量要求为：

蛋白质含量≥45%；磷含量≥60ug/ml；水分≤5%；灰分≤5%；碳水化合物≥12%；干渣颗粒通过60目筛的数量≥80%。

所述蚯蚓粉质量要求为：

蛋白质含量≥60%；水分≤10%；粒度以能通过80目筛为准。

壮观链霉菌利用上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基发酵生产壮观霉素的发酵方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将壮观链霉菌母瓶发酵液按照1～2L/m³的接种量接入到一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度40～45%、pH值＞7、培养周期为18～21h时转入到二级种子培养基进行二级种子培养，至菌体浓度40～45%、pH值＞7、培养周期为18～20h时再转入发酵培养基中进行发酵培养，至菌体浓度30～35%，发酵单位超过8000u/ml且每6～8h检测的发酵单位相差在300u/ml以内，发酵周期为90～100h，pH值5.8～7，氨基氮5～10mg/100ml，总糖为0～10g/100ml时终止发酵。

所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在使用前进行灭菌，其中

灭菌后的一级种子培养基的质量要求为：氨基氮：40～50mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：30～40g/100ml、pH：7～8；

灭菌后的二级种子培养基的质量要求为：氨基氮：50～60mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：30～40g/100ml、pH：7～8；

灭菌后的发酵培养基的质量要求：氨基氮：50～60mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：40～50g/100ml、pH：6～7。

所述一级种子培养条件为：

1）罐压：控制在0.04～0.06MPa；

2）罐温：发酵前5h，罐温控制在30～31℃；6h至一级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；

3）空气流量：0～5h，10～20m³/h；6h至一级种子培养结束：20～30m³/h；

4）pH：控制在7～8；

5）搅拌转速：0～5h，采用气流搅拌；56h至一级种子培养结束：采用机械搅拌，转速控制在60r/min。

所述二级种子培养条件为：

1）罐压：控制在0.04～0.06MPa；

2）罐温：发酵前5h，罐温控制在30～31℃；6h至二级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；

3）空气流量：0～5h，40～50m³/h；5h至二级种子培养结束：60～70m³/h；

4）pH：控制在7～8；

5）搅拌转速：0～5h，采用气流搅拌；6h至一级种子培养结束：采用机械搅拌，转速控制在80r/min。

所述发酵培养条件为：

1)pH控制：控制在5.8～7；

2)无菌检查：发酵过程中进行菌检，要求无其它杂菌；

3)空气流量：0～15h：1000m³/h；16h～发酵结束：800m³/h；

4)溶氧控制：0～15h：溶氧浓度不得低于30%；16h～发酵结束：溶氧浓度控制在30～90%；

5)搅拌转速：0～5h：60r/min；6～15h：90r/min；16～80h：75r/min；81h～发酵结束：50r/min；

6)培养温度：31～32℃；

7)罐压：控制在0.03～0.04MPa。

在所述发酵过程中进行补料，包括补糖、补水和补酸或碱，其中

1）补糖控制：

发酵前10h不用进行补糖，

发酵时间11～85h，当发酵液总糖含量＜15g/100ml时，采用流加法进行补麦芽糖，控制发酵液总糖含量在20～25g/100ml；

2）补水：按照工艺要求必须定时补入一定量的已灭菌的饮用水，其目的是控制菌体浓度，有利于代谢产物的生成。采用流加法进行补水，

发酵前15h，不用补水，

发酵时间16～80h，当菌体浓度超过45%，补入饮用水，控制其菌体浓度在38～45%，

81h至发酵结束：当菌体浓度超过35%，补入饮用水，控制其菌体浓度在30～35%；

3）补酸或碱：

发酵前15h，pH不进行控制，

发酵时间15h～发酵结束，每隔4～6h检测发酵液pH，当pH＜5.8，补入20%的氢氧化钠溶液；当pH＞7，补入20～30%的硫酸铵溶液，发酵液pH控制在5.8～7。

本发明的技术优势为：

1使用啤酒酵母干渣、蚯蚓粉代替了种子培养基、发酵培养基中的蛋白胨、鱼粉、黄豆饼粉和玉米浆，减少有机氮源的用量和种类。降低了采购和生产成本，减少因原料质量影响种子液和发酵液的不利因素。

2种子培养基中使用了啤酒酵母干渣和蚯蚓粉，其磷、氨基氮的含量明显高于常规种子培养基配方，有利于改善壮观链霉菌菌丝形态；提高种子培养的质量。

3常规种子培养周期为26～30h。使用本发明种子培养基，其种子培养周期为18～20h，用时减少了32%以上，提高种子培养的工作效率。

4使用本发明一级种子培养基，其接种量为1～2L/m³，一级种子培养的接种量减少了40%，减轻了菌种研究人员的工作强度。

5培养基中使用麦芽糖代替葡萄糖，避免高温灭菌过程中出现的碳化现象。

6采用本发明培养基，大观霉素的发酵单位达到8000u/ml以上。

7本发明培养基中的总生物素、甘氨酸、亮氨酸、谷氨酸和天门冬氨酸的含量高于常规培养基配方，为提高发酵单位提供了有利保证，具体内容见下表：

本发明培养基与常规培养基中总生物素含量对比表

本发明培养基与常规培养基中氨基氮含量对比表

具体实施方式

下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。

实施例1

啤酒酵母干渣质量：蛋白质52.3%；磷96ug/ml；水分4.1%；灰分3.9%；碳水化合物14.8%；通过60目筛的数量为84.7%。

蚯蚓粉质量：蛋白质64.2%；水分8.4%；全部通过80目筛。

配置一级种子培养基1m³。一级种子培养基的组成为：玉米油18L、麦芽糖5kg、啤酒酵母干渣13kg、蚯蚓粉17kg、硫酸铵0.05kg、麦芽糖酶0.04kg、聚醚消泡剂0.03kg。

配置二级种子培养基10m³。二级种子培养基的组成为：玉米油200L、麦芽糖70kg、啤酒酵母干渣180kg、蚯蚓粉180kg、硫酸铵0.4kg、麦芽糖酶0.6kg、聚醚消泡剂0.1kg。

配置发酵培养基100m³。发酵培养基的组成为：玉米油2300L、麦芽糖2300kg、啤酒酵母干渣2300kg、蚯蚓粉2100kg、硫酸铵7kg、磷酸二氢钾4kg、氯化钾4kg、轻质碳酸钙30kg、巴比妥80kg、麦芽糖酶7kg、聚醚消泡剂1kg。

一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至30℃，并用无菌空气保压，灭菌后的一级种子培养基的质量：氨基氮43.7mg/100ml、溶磷97.5ug/ml、总糖38.4g/100ml、pH7.6。在火焰保护下，将已经培养好的壮观链霉素母瓶发酵液接入一级种子罐进行培养，接种量是1L。一级种子培养过程中，罐压控制在0.04MP；0～5h，罐温控制在30～31℃；6h至一级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；0～5h，空气流量是10m³/h；6h至一级种子培养结束：20m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌，6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在60r/min。一级种子培养过程中，pH控制在7～8。一级种子培养结束，菌体浓度41.2%；pH7.3；无其它杂菌污染；培养周期为18h。

二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却至30℃，并用无菌空气保压，灭菌后的二级种子培养基的质量：氨基氮54.9mg/100ml、溶磷101.3ug/ml、总糖39.4g/100ml、pH7.5。然后将一级种子液全部移入二级种子罐进行培养。二级种子培养过程中，罐压控制在0.04MPa；0～5h，罐温控制在30～31℃；6h至二级种子培养结束，罐温控制在32～33℃。0～5h，空气流量40m³/h；6h至二级种子培养结束：空气流量60m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌；6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在80r/min；pH控制在7～8。二级种子培养结束，菌体浓度40.8%；pH7.2；无其它杂菌污染；培养周期为18h。

发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，灭菌后的发酵培养基的质量：氨基氮：57.1mg/100ml、溶磷92.1ug/ml、总糖：48.2g/100ml、pH：6.3。然后将二级种子液全部移入发酵罐进行培养。发酵过程中，pH控制在5.8～7；发酵过程中进行菌检，无其它杂菌污染；空气流量：0～15h：1000m³/h；16h～发酵结束：800m³/h；0～15h：溶氧浓度不低于30%；16h～发酵结束：溶氧浓度控制在30～90%；0～5h：搅拌转速60r/min；6～15h：搅拌转速90r/min；16～80h：搅拌转速75r/min；81h～发酵结束：搅拌转速50r/min。发酵培养温度控制在31～32℃；罐压控制在0.03MPa。发酵培养结束，菌体浓度31.1%；发酵单位8104u/ml；发酵周期为92h；pH5.9、氨基氮5.3mg/100ml；总糖4.2g/100ml。

上述发酵过程中需要根据发酵情况进行补料。

实施例2

啤酒酵母干渣质量：蛋白质53.7%；磷89.7ug/ml；水分3.8%；灰分3.7%；碳水化合物13.5%；通过60目筛的数量为86.1%。

蚯蚓粉质量：蛋白质65.9%；水分7.8%；全部通过80目筛。

配置一级种子培养基1m³。一级种子培养基的组成为：玉米油19L、麦芽糖4kg、啤酒酵母干渣12kg、蚯蚓粉19kg、硫酸铵0.03kg、麦芽糖酶0.05kg、聚醚消泡剂0.01kg。

配置二级种子培养基10m³。二级种子培养基的组成为：玉米油210L、麦芽糖60kg、啤酒酵母干渣170kg、蚯蚓粉200kg、硫酸铵0.5kg、麦芽糖酶0.7kg、聚醚消泡剂0.2kg。

配置发酵培养基100m³。发酵培养基的组成为：玉米油2400L、麦芽糖2200kg、啤酒酵母干渣2200kg、蚯蚓粉2300kg、硫酸铵8kg、磷酸二氢钾4kg、氯化钾3kg、轻质碳酸钙40kg、巴比妥60kg、麦芽糖酶8kg、聚醚消泡剂2kg。

一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至31℃，并用无菌空气保压,灭菌后的一级种子培养基的质量：氨基氮44.9mg/100ml、溶磷95.2ug/ml、总糖38.1g/100ml、pH7.5。在火焰保护下，将已经培养好的壮观链霉菌母瓶发酵液接入一级种子罐进行培养，接种量是1.5L。一级种子培养过程中，罐压控制在0.05MP；0～5h，罐温控制在30～31℃；6h至一级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；0～5h，空气流量是10m³/h；6h至一级种子培养结束：20m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌，6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在60r/min。一级种子培养过程中，pH控制在7～8。一级种子培养结束，菌体浓度42.4%；pH7.4；无其它杂菌污染；培养周期为19h。

二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却至31℃，并用无菌空气保压，灭菌后的二级种子培养基的质量：氨基氮54.2mg/100ml、溶磷91.4ug/ml、总糖38.2g/100ml、pH7.3。然后将一级种子液全部移入二级种子罐进行培养。二级种子培养过程中，罐压控制在0.05MPa；0～5h,罐温控制在30～31℃；6h至二级种子培养结束，罐温控制在32～33℃。0～5h，空气流量40m³/h；6h至二级种子培养结束：空气流量60m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌；6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在80r/min；pH控制在7～8。二级种子培养结束，菌体浓度42.1%；pH7.3；无其它杂菌污染；培养周期为19h。

发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，灭菌后的发酵培养基的质量：氨基氮：58.6mg/100ml、溶磷95.7ug/ml、总糖：47.1g/100ml、pH：6.5。然后将二级种子液全部移入发酵罐进行培养。发酵过程中，pH控制在5.8～7；发酵过程中进行菌检，无其它杂菌污染；空气流量：0～15h：1000m³/h；16h～发酵结束：800m³/h；0～15h：溶氧浓度不低于30%；16h～发酵结束：溶氧浓度控制在30～90%；0～5h：搅拌转速60r/min；6～15h：搅拌转速90r/min；16～80h：搅拌转速75r/min；81h～发酵结束：搅拌转速50r/min。发酵培养温度控制在31～32℃；罐压控制在0.035MPa。发酵培养结束，菌体浓度32.3%；发酵单位8236u/ml；发酵周期为95h；pH6.2、氨基氮6.9mg/100ml；总糖6.8g/100ml。

上述发酵过程中需要根据发酵情况进行补料。

实施例3

啤酒酵母干渣质量：蛋白质56.6%；磷92.3ug/ml；水分3.9%；灰分4.5%；碳水化合物15.1%；通过60目筛的数量为82.2%。

蚯蚓粉质量：蛋白质62.9%；水分8.8%；全部通过80目筛。

配置一级种子培养基1m³。一级种子培养基的组成为：玉米油20L、麦芽糖3kg、啤酒酵母干渣14kg、蚯蚓粉18kg、硫酸铵0.04kg、麦芽糖酶0.06kg、聚醚消泡剂0.02kg。

配置二级种子培养基10m³。二级种子培养基的组成为：玉米油220L、麦芽糖5kg、啤酒酵母干渣190kg、蚯蚓粉190kg、硫酸铵0.6kg、麦芽糖酶0.5kg、聚醚消泡剂0.3kg。

配置发酵培养基100m³。发酵培养基的组成为：玉米油2500L、麦芽糖2100kg、啤酒酵母干渣2400kg、蚯蚓粉2200kg、硫酸铵8kg、磷酸二氢钾3kg、氯化钾2kg、轻质碳酸钙50kg、巴比妥70kg、麦芽糖酶9kg、聚醚消泡剂3kg。

一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至32℃，并用无菌空气保压,灭菌后的一级种子培养基的质量：氨基氮44.1mg/100ml、溶磷87.9ug/ml、总糖37.9g/100ml、pH7.4。在火焰保护下，将已经培养好的壮观链霉菌母瓶发酵液接入一级种子罐进行培养，接种量是1.8L。一级种子培养过程中，罐压控制在0.06MP；0～5h，罐温控制在30～31℃；6h至一级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；0～5h，空气流量是10m³/h；6h至一级种子培养结束：20m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌，6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在60r/min。一级种子培养过程中，pH控制在7～8。一级种子培养结束，菌体浓度44.3%；pH7.6；无其它杂菌污染；培养周期为20h。

二级种子培养：先将二级种子培养基灭菌，冷却至32℃，并用无菌空气保压，灭菌后的二级种子培养基的质量：氨基氮57.6mg/100ml、溶磷98.7ug/ml、总糖38.9g/100ml、pH7.1。然后将一级种子液全部移入二级种子罐进行培养。二级种子培养过程中，罐压控制在0.06MPa；0～5h,罐温控制在30～31℃；6h至二级种子培养结束，罐温控制在32～33℃。0～5h，空气流量40m³/h；6h至二级种子培养结束：空气流量60m³/h；0～5h，采用气流搅拌代替机械搅拌；6h至一级种子培养结束：启动机械搅拌，转速控制在80r/min；pH控制在7～8。二级种子培养结束，菌体浓度44.5%；pH7.6；无其它杂菌污染；培养周期为20h。

发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却，并用无菌空气保压，灭菌后的发酵培养基的质量：氨基氮54.2mg/100ml、溶磷96.3ug/ml、总糖：48.3g/100ml、pH：6.1。然后将二级种子液全部移入发酵罐进行培养。发酵过程中，pH控制在5.8～7；发酵过程中进行菌检，无其它杂菌污染；空气流量：0～15h：1000m³/h；16h～发酵结束：800m³/h；0～15h：溶氧浓度不低于30%；16h～发酵结束：溶氧浓度控制在30～90%；0～5h：搅拌转速60r/min；6～15h：搅拌转速90r/min；16～80h：搅拌转速75r/min；81h～发酵结束：搅拌转速50r/min。发酵培养温度控制在31～32℃；罐压控制在0.04MPa。发酵培养结束，菌体浓度32.3%；发酵单位8184u/ml；发酵周期为99h；pH6.6、氨基氮5.3mg/100ml；总糖3.7g/100ml。

上述发酵过程中需要根据发酵情况进行补料。

上述实施例1-3中补料控制按照下述方式实现：

1补糖控制：

发酵前10h不用进行补糖。

当发酵时间在11～85h时，采用流加法进行补糖。每隔4～6h检测发酵液总糖含量，发酵液总糖含量＜15g/100ml，进行补麦芽糖。发酵液总糖含量控制在20～25g/100ml，停止补麦芽糖。

2补水：发酵过程中，按照工艺要求必须定时补入一定量的已灭菌的饮用水，其目的是控制菌体浓度，有利于代谢产物的生成。采用流加法进行补水。

发酵前15h，不用补水。

16～80h：当菌体浓度超过45%，补入饮用水，控制其菌体浓度在38～45%；

81h至发酵结束：当菌体浓度超过35%，补入饮用水，控制其菌体浓度在30～35%；

3补酸或碱：

发酵前15h，pH不进行控制。

15h～发酵结束：每隔4～6h检测发酵液pH，当pH＜5.8，补入20%的氢氧化钠溶液；当pH＞7，补入20～30%的硫酸铵溶液。发酵液pH控制在5.8～7。

Claims (9)

1.一种壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有玉米油、麦芽糖、啤酒酵母干渣和蚯蚓粉；

所述一级种子培养基组成为：玉米油18～20ml/L、麦芽糖3～5g/L、啤酒酵母干渣12～14g/L、蚯蚓粉17～19g/L、硫酸铵0.03～0.05g/L、麦芽糖酶0.04～0.06g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L；

所述二级种子培养基组成为：玉米油20～22ml/L、麦芽糖5～7g/L、啤酒酵母干渣17～19g/L、蚯蚓粉18～20g/L、硫酸铵0.04～0.06g/L、麦芽糖酶0.05～0.07g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L；

所述发酵培养基组成为：玉米油23～25ml/L、麦芽糖21～23g/L、啤酒酵母干渣22～24g/L、蚯蚓粉21～23g/L、硫酸铵0.07～0.08g/L、磷酸二氢钾0.02～0.04g/L、氯化钾0.02～0.04g/L、轻质碳酸钙0.3～0.5g/L、巴比妥0.6～0.8g/L、麦芽糖酶0.07～0.09g/L、聚醚消泡剂0.01～0.03g/L。

2.按照权利要求1所述的壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基，其特征在于所述啤酒酵母干渣的质量要求为：

蛋白质含量≥45%；磷含量≥60ug/ml；水分≤5%；灰分≤5%；碳水化合物≥12%；干渣颗粒通过60目筛的数量≥80%。

3.按照权利要求1所述的壮观链霉菌发酵生产大观霉素的培养基，其特征在于所述蚯蚓粉质量要求为：

蛋白质含量≥60%；水分≤10%；粒度以能通过80目筛为准。

4.一种壮观链霉菌利用权利要求1所述的培养基发酵生产大观霉素的发酵方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将壮观链霉菌母瓶发酵液按照1～2L/m³的接种量接入到一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度40～45%、pH值＞7、培养周期为18～21h时转入到二级种子培养基进行二级种子培养，至菌体浓度40～45%、pH值＞7、培养周期为18～20h时再转入发酵培养基中进行发酵培养，至菌体浓度30～35%，发酵单位超过8000u/ml且每6～8h检测的发酵单位相差在300u/ml以内，发酵周期为90～100h，pH值5.8～7时终止发酵。

5.按照权利要求4所述的发酵方法，其特征在于所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在使用前进行灭菌，其中

灭菌后的一级种子培养基的质量要求为：氨基氮：40～50mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：30～40g/100ml、pH：7～8；

灭菌后的二级种子培养基的质量要求为：氨基氮：50～60mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：30～40g/100ml、pH：7～8；

灭菌后的发酵培养基的质量要求：氨基氮：50～60mg/100ml、溶磷：＞80ug/ml、总糖：40～50g/100ml、pH：6～7。

6.按照权利要求4所述的发酵方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：

1） 罐压：控制在0.04～0.06MPa；

2） 罐温：发酵前5h，罐温控制在30～31℃；6h至一级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；

3） 空气流量：0～5h，10～20m³/h；6h至一级种子培养结束：20～30m³/h；

4） pH：控制在7～8；

5） 搅拌转速：0～5h，采用气流搅拌；6h至一级种子培养结束：采用机械搅拌，转速控制在60r/min。

7.按照权利要求4所述的发酵方法，其特征在于所述二级种子培养条件为：

1） 罐压：控制在0.04～0.06MPa；

    2） 罐温：发酵前5h，罐温控制在30～31℃；6h至二级种子培养结束，罐温控制在32～33℃；

3） 空气流量：0～5h，40～50m³/h；6h至二级种子培养结束：60～70m³/h；

4） pH：控制在7～8；

5） 搅拌转速：0～5h，采用气流搅拌；6h至一级种子培养结束：采用机械搅拌，转速控制在80r/min。

8.按照权利要求4所述的发酵方法，其特征在于所述发酵培养条件为：

1) pH控制：控制在5.8～7；

2) 无菌检查：发酵过程中进行菌检，要求无其它杂菌；

3) 空气流量：0～15h：1000m³/h；16h～发酵结束：800m³/h；

4) 溶氧控制：0～15h：溶氧浓度不得低于30%；16h～发酵结束：溶氧浓度控制在30～90%；

5) 搅拌转速：0～5h：60r/min；6～15h：90r/min；16～80h：75r/min；81h～发酵结束：50r/min；

6) 培养温度：31～32℃；

7) 罐压：控制在0.03～0.04MPa。

9.按照权利要求4所述的发酵方法，其特征在于在所述发酵过程中进行补料，包括补糖、补水和补酸或碱，其中

1）补糖控制：

发酵前10h不用进行补糖，

发酵时间11～85h，当发酵液总糖含量＜15g/100ml时，采用流加法进行补麦芽糖，控制发酵液总糖含量在20～25g/100ml；

2）补水：

发酵前15h，不用补水，

发酵时间16～80h，当菌体浓度超过45%，补入饮用水，控制其菌体浓度在38～45%，

81h至发酵结束：当菌体浓度超过35%，补入饮用水，控制其菌体浓度在30～35%；

3）补酸或碱：

发酵前15h，pH不进行控制，

   发酵时间15h～发酵结束，每隔4～6h检测发酵液pH，当pH＜5.8，补入20%的氢氧化钠溶液；当pH＞7，补入20～30%的硫酸铵溶液，发酵液pH控制在5.8～7。