WO2011070948A1 - 精製ヒアルロン酸類の製造方法 - Google Patents

精製ヒアルロン酸類の製造方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2011070948A1
WO2011070948A1 PCT/JP2010/071437 JP2010071437W WO2011070948A1 WO 2011070948 A1 WO2011070948 A1 WO 2011070948A1 JP 2010071437 W JP2010071437 W JP 2010071437W WO 2011070948 A1 WO2011070948 A1 WO 2011070948A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hyaluronic acid
purified
molecular weight
suspension
solution
Prior art date
Application number
PCT/JP2010/071437
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
拓史 吉田
Original Assignee
キユーピー株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by キユーピー株式会社 filed Critical キユーピー株式会社
Priority to JP2011514955A priority Critical patent/JP4810628B2/ja
Priority to CN201080055315.6A priority patent/CN102648214B/zh
Priority to KR1020127017493A priority patent/KR101450983B1/ko
Priority to US13/388,010 priority patent/US8829180B2/en
Priority to EP10835870.6A priority patent/EP2511302B1/en
Publication of WO2011070948A1 publication Critical patent/WO2011070948A1/ja

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
    • C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
    • A61K31/728—Hyaluronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing purified hyaluronic acid.
  • Hyaluronic acid is widely distributed in living tissues such as chicken crown, umbilical cord, skin, cartilage, vitreous body, and joint fluid, and is widely used as a component of cosmetics, pharmaceuticals, and foods, for example.
  • attempts have been made to use chemically modified hyaluronic acid and low molecular weight hyaluronic acid as components of cosmetics, pharmaceuticals, and foods.
  • International Publication No. WO / 2008/133267 describes cationized hyaluronic acid and a method for producing the same.
  • Japanese Patent Publication No. 5-77681 discloses a method for reducing the molecular weight of hyaluronic acid.
  • Japanese Patent Publication No. 5-77681 discloses a method in which hyaluronic acid is decomposed in an acidic aqueous solution, ethanol is added to precipitate hyaluronic acid, and each filtered precipitate is purified by washing with ethanol. ing.
  • this method since the recovery rate of hyaluronic acid is low, a more efficient production method is demanded for low molecular weight hyaluronic acid.
  • the present invention provides a method for producing purified hyaluronic acid having a high recovery rate and capable of obtaining low-molecular purified hyaluronic acid.
  • a method for producing purified hyaluronic acids includes: Adding a water-soluble organic solvent to a solution containing hyaluronic acid having an average molecular weight of 400 to 100,000 and having a pH of 3 or lower to obtain a suspension; Adjusting the suspension to pH 3.5-8 to precipitate purified hyaluronic acids; including.
  • the solution before adding the water-soluble organic solvent may have a pH of 2 or less.
  • a step of precipitating purified hyaluronic acid by adjusting the pH to 3.5 to 8 low-molecular purified hyaluronic acid can be obtained at a high recovery rate.
  • % means “mass%” and “part” means “part by mass”.
  • a method for producing purified hyaluronic acids according to the present embodiment comprises adding a water-soluble organic solvent to a solution containing hyaluronic acids having an average molecular weight of 400 to 100,000 and having a pH of 3 or less, and And obtaining the purified hyaluronic acid by adjusting the suspension to pH 3.5-8.
  • the method for producing purified hyaluronic acid according to this embodiment can be performed after the step of treating the hyaluronic acid solution. Thereby, purified hyaluronic acids can be separated from other components in the treatment liquid by precipitation.
  • the process of treating the hyaluronic acid solution includes, for example, an extraction process of hyaluronic acid and / or a salt thereof (for example, extraction from a natural product), a production process of hyaluronic acid and / or a salt thereof (for example, culture, chemical synthesis, enzyme) Synthesis), low molecular weight process of hyaluronic acid and / or salt thereof (eg, acid treatment, basic treatment, enzyme (eg, hyaluronidase) treatment, high pressure treatment, high temperature treatment, mechanical shearing treatment, electron beam irradiation treatment), hyaluron Examples thereof include a chemical modification step of an acid and / or a salt thereof (for example, chemical modification of a functional group contained in hyaluronic acid and / or a salt thereof).
  • an extraction process of hyaluronic acid and / or a salt thereof for example, extraction from a natural product
  • the step of treating hyaluronic acid with acid is 3 or less, considering the workability, the step of treating hyaluronic acid with acid Is preferred.
  • the method for producing purified hyaluronic acid according to the present embodiment may be performed for the purpose of reducing impurities mixed in hyaluronic acid and / or a salt thereof.
  • purified hyaluronic acids refers to those having a hyaluronic acid content of 90% or more (preferably 93% or more, more preferably 95% or more).
  • content of hyaluronic acid is a value calculated from a glucuronic acid quantitative value measured by a carbazole sulfate method described later.
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid is preferably 400 to 100,000, more preferably 400 to 50,000, and still more preferably 400 to 10,000.
  • the recovery rate of purified hyaluronic acid is high, and the purity of the purified hyaluronic acid can be increased by a simple method.
  • the raw material in the method for producing purified hyaluronic acid according to the present embodiment is hyaluronic acid having an average molecular weight of preferably 400 to 100,000 (more preferably 400 to 50,000, more preferably 400 to 10,000).
  • the “raw material” means hyaluronic acids that are targets of the method for producing purified hyaluronic acids according to the present embodiment. Therefore, after carrying out the step of treating the hyaluronic acid solution, when carrying out the method for producing purified hyaluronic acid according to the present embodiment, the average molecular weight of the raw material is, for example, after the step of treating the hyaluronic acid solution It means the average molecular weight of hyaluronic acids.
  • the average molecular weight of the hyaluronic acid before the lowering of the molecular weight may be larger than 100,000 (for example, 4 to 3 million).
  • the average molecular weight of hyaluronic acid as a raw material exceeds 100,000, it may gel when a water-soluble organic solvent is added to a solution adjusted to pH 3 or lower, and may not be separated into a suspension phase and a supernatant phase.
  • hyaluronic acid refers to a polysaccharide having one or more repeating structural units composed of disaccharides of glucuronic acid and N-acetylglucosamine.
  • hyaluronic acids is a concept including hyaluronic acid and hyaluronic acid derivatives and salts thereof.
  • the “hyaluronic acid derivative” is a compound in which a functional group (for example, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amide group) contained in hyaluronic acid is modified, such as cationized hyaluronic acid, acylated hyaluronic acid, Examples include acetylated hyaluronic acid.
  • the “hyaluronic acid salt or hyaluronic acid derivative salt” is not particularly limited, but is preferably a food or pharmaceutically acceptable salt, for example, sodium salt, potassium salt, calcium salt, zinc salt, A magnesium salt, an ammonium salt, etc. are mentioned.
  • Hyaluronic acid is basically a disaccharide or more containing at least one disaccharide unit in which the 1-position of ⁇ -D-glucuronic acid and the 3-position of ⁇ -DN-acetyl-glucosamine are bonded, and ⁇ It is basically composed of -D-glucuronic acid and ⁇ -DN-acetyl-glucosamine, and is a combination of a plurality of disaccharide units.
  • the sugar may be an unsaturated sugar, and examples of the unsaturated sugar include non-reducing terminal sugars, usually those having unsaturated carbon atoms between positions 4 and 5 of glucuronic acid.
  • the raw material hyaluronic acid and / or salt thereof may be extracted from natural products such as animals (for example, biological tissues such as chicken crown, umbilical cord, skin, joint fluid, etc.), or microorganisms or animal cells are cultured. (Eg, a fermentation method using Streptococcus bacteria), a chemically or enzymatically synthesized product, and the like can be used.
  • animals for example, biological tissues such as chicken crown, umbilical cord, skin, joint fluid, etc.
  • microorganisms or animal cells are cultured.
  • a fermentation method using Streptococcus bacteria a chemically or enzymatically synthesized product, and the like can be used.
  • the average molecular weight of (purified) hyaluronic acid is a value measured by the following method.
  • the specific viscosity is measured by (Equation (1)), and the reduced viscosity at each concentration is calculated (Equation (2)).
  • a graph is drawn with the reduced viscosity on the vertical axis and the concentration (g / 100 mL) of the product converted to dry matter on the horizontal axis, and the intrinsic viscosity is determined from the intersection of the straight line connecting the points and the vertical axis.
  • the intrinsic viscosity determined here is substituted into Laurent's formula (formula (3)) to calculate the average molecular weight (Torvard C Laurent, Marion Ryan, and Adolph Pietruszkiewicz, “Fractionation of hyaluronic Acid”, Biochemina et Biophysica Acta.
  • Hyaluronic acid content (Purified) In hyaluronic acid, the hyaluronic acid content is an indicator of the purity of (purified) hyaluronic acid. The higher the hyaluronic acid content, I can say that.
  • the content of hyaluronic acid in (purified) hyaluronic acid is a value calculated from a glucuronic acid quantitative value measured by a carbazole sulfate method (for example, Japanese Pharmacopoeia).
  • an aqueous solution of hyaluronic acid is added and mixed in a sodium borate / sulfuric acid solution, the hyaluronic acid is decomposed by heating, cooled, mixed with a carbazole / ethanol solution, heated and left to cool.
  • This is a method for measuring absorbance (530 nm).
  • a calibration curve is prepared using D-glucuronolactone treated in the same manner, and a D-glucuronolactone conversion value is calculated, and then multiplied by 1.102 to obtain a glucuronic acid quantitative value.
  • the obtained glucuronic acid quantitative value is multiplied by (molecular weight of hyaluronic acid / molecular weight of glucuronic acid) to calculate the content of hyaluronic acid.
  • Step of Obtaining Suspension In the method for producing purified hyaluronic acid according to this embodiment, a water-soluble organic solvent is added to a solution having a pH of 3 or less containing hyaluronic acid having an average molecular weight of 100,000 or less as a raw material. A turbid liquid is obtained.
  • the “suspension” is a mixture in which solid fine particles are dispersed in a liquid.
  • the suspension may be in a state where the solid is dispersed in the liquid and the liquid is cloudy, or may be separated into a suspension phase and a supernatant phase.
  • the suspension is preferably separated into a suspension phase and a supernatant phase in that purified hyaluronic acids are likely to precipitate in a later step.
  • the solvent of the solution containing hyaluronic acid as a raw material is water.
  • the solution containing hyaluronic acid as a raw material may contain 2% or less (preferably 1% or less) of an inorganic salt such as sodium chloride, more preferably the concentration of the inorganic salt in the solution is less than 1%. is there.
  • the concentration of hyaluronic acid is not particularly limited, but is preferably 0.1 to 30% and more preferably 1 to 10% from the viewpoint of increasing the recovery efficiency.
  • the water-soluble organic solvent is added at least in an amount necessary for the solution to change into the suspension.
  • the water-soluble organic solvent include alcohol solvents such as methanol, ethanol, 1-propanol, and 2-propanol, ketone solvents such as acetone and methyl ethyl ketone, tetrahydrofuran, acetonitrile, and the like. Can be used in combination. Of these, ethanol is preferred.
  • the amount of the water-soluble organic solvent added is 1 part or more, preferably 1.5 to 50 parts, more preferably 1.5 to 20 parts with respect to 1 part of the solution containing hyaluronic acids. In this case, when the addition amount of the water-soluble organic solvent is less than 1 part with respect to 1 part of the solution containing hyaluronic acid, suspension is hardly generated.
  • the solution before adding the water-soluble organic solvent is pH 3 or less, preferably pH 0.1 to 2.5, more preferably pH 0.1 to 2. If the pH of the solution before the addition of the water-soluble organic solvent exceeds 3, suspension is unlikely to occur even if the water-soluble organic solvent is added, and even if the pH of the solution is adjusted to 3.5 to 8 in the subsequent step. Purified hyaluronic acids are difficult to precipitate. In addition, if the pH of the solution before the addition of the water-soluble organic solvent is too low, a large amount of salt is produced when the pH of the solution is adjusted to 3.5 to 8 in the subsequent step, which may not be preferable. .
  • the suspension is adjusted to pH 3.5 to 8 to precipitate purified hyaluronic acids.
  • the pH of the suspension is out of the range of 3.5 to 8, it becomes difficult for the purified hyaluronic acid to precipitate.
  • the suspension is preferably adjusted to pH 4 to 7 and more preferably adjusted to pH 4 to 6 in that a higher recovery rate can be achieved.
  • test Method the average molecular weight of (purified) hyaluronic acid was measured by the method described in the above embodiment.
  • the content of (purified) hyaluronic acid was calculated from the glucuronic acid quantitative value measured by the carbazole sulfate method.
  • Example 1 Hydrochloric acid was added to 2 L of water to adjust the pH to 0.3 and warmed to 70 ° C. After reaching 70 ° C., 100 g of hyaluronic acid (average molecular weight 300,000, manufactured by QP Corporation) was added, and acid decomposition was performed at 70 ° C. for 2 hours. Thereafter, the reaction solution was cooled to room temperature, and 5 L of ethanol was added little by little to separate hyaluronic acid into a suspension phase and a supernatant phase.
  • hyaluronic acid average molecular weight 300,000, manufactured by QP Corporation
  • the pH was adjusted to 5.0 with sodium hydroxide to precipitate hyaluronic acid, and the precipitate was collected by filtration and washed with 500 mL of 80% (v / v) ethanol three times.
  • the obtained precipitate was vacuum-dried at 60 ° C. to obtain purified hyaluronic acid.
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid obtained in Example 1 was 8,000, and the hyaluronic acid content was 95.4%. Note that the pH of the treatment solution before addition of ethanol was 0.3.
  • Example 2 5.0 g of hyaluronic acid (average molecular weight 3,000, manufactured by QP Corporation) having a hyaluronic acid content of 91.1% was dissolved in 500 mL of water and adjusted to pH 1.0 with hydrochloric acid. Subsequently, 10 L of ethanol was slowly added with stirring to separate the hyaluronic acid into a suspension phase and a supernatant phase. Subsequently, the pH was adjusted to 5.0 with sodium hydroxide to precipitate hyaluronic acid, and the precipitate was collected by filtration and washed with 100 mL of 80% (v / v) ethanol three times. The obtained precipitate was vacuum-dried at 60 ° C. to obtain purified hyaluronic acid.
  • hyaluronic acid average molecular weight 3,000, manufactured by QP Corporation
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid obtained in Example 2 was 3,000, and the hyaluronic acid content was 97.1%.
  • Example 2 purification was performed in the same manner as in Example 2 except that the average molecular weight of hyaluronic acid used as a raw material, the pH of the treatment liquid before addition of ethanol, and the pH of the treatment liquid before precipitation were changed to those shown in Table 1.
  • Hyaluronic acid No. 1-18, purified hyaluronic acid of Example 2 was No. 3 was produced.
  • pH adjustment of the process liquid was performed using hydrochloric acid or sodium hydroxide.
  • the hyaluronic acid content of purified hyaluronic acids 15 to 17 was 95% or more, and the average molecular weight was the same as that of the raw material hyaluronic acid.
  • A After adding a water-soluble organic solvent, it was separated into a suspension phase and a supernatant phase, and precipitated after pH adjustment.
  • B1 After the addition of the water-soluble organic solvent, it was separated into a suspension phase and a supernatant phase, and although it was slightly difficult to precipitate after pH adjustment, it was not problematic.
  • C1 After addition of the water-soluble organic solvent, it was not separated into a suspension phase and a supernatant phase, and did not precipitate even after pH adjustment.
  • B2 After the addition of the water-soluble organic solvent, the suspension phase and the supernatant phase were separated, but the solution was slightly gelled and slightly precipitated after pH adjustment, but was not problematic.
  • C2 After addition of the water-soluble organic solvent, the suspension phase and the supernatant phase were not separated, and the solution was gelled and did not precipitate even after pH adjustment.
  • C3 The suspension phase and the supernatant phase were separated immediately after addition of the water-soluble organic solvent, but did not precipitate after pH adjustment.
  • Example 3 In the method for producing purified hyaluronic acid of Example 1, purified hyaluronic acid was produced in the same manner as in Example 1 except that ethanol added after cooling the reaction solution was changed to acetone.
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid obtained in Example 3 was 8,000, and the hyaluronic acid content was 96.0%.
  • Example 4 In the method for producing purified hyaluronic acid of Example 2, purified hyaluronic acid was produced in the same manner as in Example 2 except that the water for dissolving hyaluronic acid used as a raw material was changed to 1% saline.
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid obtained in Example 4 was 3,000, and the hyaluronic acid content was 94.0%.
  • Example 5 In the method for producing purified hyaluronic acid of Example 2, purified hyaluronic acid was produced in the same manner as in Example 2 except that the water for dissolving hyaluronic acid used as a raw material was changed to 2% saline. In Examples 1 to 3, the salt concentration of the treatment solution before the addition of ethanol is less than 1%.
  • the average molecular weight of the purified hyaluronic acid obtained in Example 5 was 3,000, and the hyaluronic acid content was 91.9%.
  • Example 6 In a 1 L beaker, 20 g of sodium hyaluronate (manufactured by QP Corporation, average molecular weight 8000), 20 mL of 5% sodium hydroxide, 180 mL of water, and glycidyltrimethylammonium chloride (GTA (active ingredient about 80%, moisture about 20%)) 30 mL was added, and the mixture was reacted at 40 ° C. for 1 hour while stirring with a stir bar.
  • GTA active ingredient about 80%, moisture about 20%
  • the pH was adjusted to 1.0 with hydrochloric acid. Subsequently, 800 mL of ethanol was slowly added with stirring to separate the hyaluronic acid into a suspension phase and a supernatant phase. Subsequently, the pH was adjusted to 4.0 with sodium hydroxide to precipitate hyaluronic acid, and the precipitate was collected by filtration and washed with 500 mL of 80% ethanol three times. The resulting precipitate was vacuum dried at 60 ° C. to obtain purified cationized hyaluronic acid.
  • the average molecular weight of the purified cationized hyaluronic acid obtained in Example 6 was 6,000, and the content of cationized hyaluronic acid was 95.6%.
  • the present invention includes configurations that are substantially the same as the configurations described in the embodiments (for example, configurations that have the same functions, methods, and results, or configurations that have the same purposes and results).
  • the invention includes a configuration in which a non-essential part of the configuration described in the embodiment is replaced.
  • the present invention includes a configuration that achieves the same effect as the configuration described in the embodiment or a configuration that can achieve the same object.
  • the invention includes a configuration in which a known technique is added to the configuration described in the embodiment.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

　精製ヒアルロン酸類の製造方法は、平均分子量が４００～１０万であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加して、懸濁液を得る工程と、前記懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる工程と、を含む。

Description

精製ヒアルロン酸類の製造方法
　本発明は、精製ヒアルロン酸類の製造方法に関する。
　ヒアルロン酸は、鶏冠、さい帯、皮膚、軟骨、硝子体、関節液などの生体組織中に広く分布しており、例えば、化粧品、医薬品、食品の成分として広く利用されている。また、近年、化学修飾されたヒアルロン酸や低分子化されたヒアルロン酸を、化粧品、医薬品、食品の成分として利用する試みがなされている。例えば、国際公開第ＷＯ／２００８／１３３２６７号公報には、カチオン化ヒアルロン酸およびその製造方法が記載されている。また、特公平５－７７６８１号公報には、ヒアルロン酸を低分子化する方法が記載されている。
　国際公開第ＷＯ／２００８／１３３２６７号公報には、ヒアルロン酸（平均分子量２００万）を塩基性含水媒体中でカチオン化剤と反応させ、デカンテーションにより液を除去して得られた固形物を食塩水に溶解させた後、アルコールを添加して沈殿物を得、次いでろ別した沈殿物をエタノールで洗浄して精製し、乾燥させるカチオン化ヒアルロン酸の製造方法が記載されている。このように、処理液からヒアルロン酸や化学修飾されたヒアルロン酸を回収する際には、処理液にエタノールを添加してヒアルロン酸を沈殿させる方法が通常用いられている。しかしながら、低分子化されたヒアルロン酸（例えば平均分子量が１０万以下）の場合、処理液にエタノールを添加するだけでは沈殿しにくく、回収率が低いという問題があった。
　また、特公平５－７７６８１号公報には、ヒアルロン酸を酸性水溶液中で分解した後にエタノールを加えてヒアルロン酸を沈殿させ、次いで濾過した各沈殿物をエタノールで洗浄して精製する方法が記載されている。しかしながら、この方法では、ヒアルロン酸の回収率が低いため、低分子のヒアルロン酸に関して、より効率の良い製造方法が求められている。
　本発明は、低分子の精製ヒアルロン酸類を得ることができ、かつ、回収率が高い精製ヒアルロン酸類の製造方法を提供する。
　本発明の一態様に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法は、
　平均分子量が４００～１０万であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加して、懸濁液を得る工程と、
　前記懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる工程と、
を含む。
　上記精製ヒアルロン酸類の製造方法において、前記水溶性有機溶媒を添加する前の前記溶液がｐＨ２以下であることができる。
　上記精製ヒアルロン酸類の製造方法によれば、平均分子量が４００～１０万であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加して、懸濁液を得る工程と、前記懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる工程と、を含むことにより、低分子の精製ヒアルロン酸類を高い回収率にて得ることができる。
　以下、本発明の一実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法について詳細に説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」、「部」は「質量部」を意味する。
　１．精製ヒアルロン酸類の製造方法
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法は、平均分子量が４００～１０万であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加して、懸濁液を得る工程と、懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる工程と、を含む。
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法は、ヒアルロン酸溶液を処理する工程の後に行うことができる。これにより、精製ヒアルロン酸類を沈殿によって、処理液中の他の成分と分離することができる。
　ヒアルロン酸溶液を処理する工程としては、例えば、ヒアルロン酸および／またはその塩の抽出工程（例えば天然物からの抽出）、ヒアルロン酸および／またはその塩の生産工程（例えば、培養、化学合成、酵素合成）、ヒアルロン酸および／またはその塩の低分子化工程（例えば、酸性処理、塩基性処理、酵素（例えばヒアルロニダーゼ）処理、高圧処理、高温処理、機械的剪断処理、電子線照射処理）、ヒアルロン酸および／またはその塩の化学修飾工程（例えばヒアルロン酸および／またはその塩に含まれる官能基の化学修飾）が挙げられる。このうち、低分子化工程としては、本発明の懸濁液を得る工程における、ヒアルロン酸類を含む溶液のｐＨが３以下であることから、作業性を考慮して、ヒアルロン酸を酸性処理する工程であるのが好ましい。
　あるいは、本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法は、ヒアルロン酸および／またはその塩に混在する不純物を低減することを目的として行ってもよい。
　本発明において「精製ヒアルロン酸類」は、ヒアルロン酸類の含有量が９０％以上（好ましくは９３％以上、より好ましくは９５％以上）であるものをいう。なお、本発明において「ヒアルロン酸類の含有量」は、後述のカルバゾール硫酸法によって測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。
　精製ヒアルロン酸類の平均分子量は４００～１０万であることが好ましく、４００～５万であることがより好ましく、４００～１万であることがさらに好ましい。
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法によれば、精製ヒアルロン酸類の回収率が高く、かつ、精製ヒアルロン酸類の純度を簡便な方法にて高めることができる。
　１．１．原料
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法における原料は、平均分子量が好ましくは４００～１０万（より好ましくは４００～５万、さらに好ましくは４００～１万）であるヒアルロン酸類である。ここで、「原料」とは、本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法の対象となるヒアルロン酸類を意味する。したがって、ヒアルロン酸溶液を処理する工程を行った後に、本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法を実施する場合、原料の平均分子量は、例えば、ヒアルロン酸溶液を処理する工程を行った後のヒアルロン酸類の平均分子量を意味する。よって、例えば、ヒアルロン酸溶液を処理する工程が低分子化である場合、低分子化する前のヒアルロン酸類の平均分子量は１０万より大きくてもよい（例えば４００～３００万）。
　原料であるヒアルロン酸類の平均分子量が１０万を超える場合、ｐＨ３以下に調整された溶液に水溶性有機溶媒を添加した際にゲル化し、懸濁相と上澄み相に分離しない場合がある。
　本発明において、「ヒアルロン酸」とは、グルクロン酸とＮ－アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類をいう。また、「ヒアルロン酸類」は、ヒアルロン酸およびヒアルロン酸誘導体ならびにそれらの塩を含む概念である。本発明において、「ヒアルロン酸誘導体」とは、ヒアルロン酸に含まれる官能基（例えば、水酸基、カルボキシル基、アミド基）が修飾された化合物であり、例えば、カチオン化ヒアルロン酸、アシル化ヒアルロン酸、アセチル化ヒアルロン酸などが挙げられる。また、「ヒアルロン酸の塩またはヒアルロン酸誘導体の塩」としては、特に限定されないが、食品または薬学上許容しうる塩であることが好ましく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
　ヒアルロン酸は、基本的にはβ－Ｄ－グルクロン酸の１位とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものでかつβ－Ｄ－グルクロン酸とβ－Ｄ－Ｎ－アセチル－グルコサミンとから基本的に構成され、２糖単位が複数個結合したものである。該糖は不飽和糖であってもよく、不飽和糖としては、非還元末端糖、通常、グルクロン酸の４，５位炭素間が不飽和のもの等が挙げられる。
　原料であるヒアルロン酸および／またはその塩は、動物等の天然物（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液などの生体組織など）から抽出されたものでもよく、または、微生物もしくは動物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的または酵素的に合成されたものなどを使用することができる。
　１．１．１．平均分子量
　本発明において、（精製）ヒアルロン酸類の平均分子量は、以下の方法にて測定された値である。
　即ち、約０．０５ｇの（精製）ヒアルロン酸類（本品）を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液及びこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液および０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１法毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３））に代入し、平均分子量を算出する（Torvard C Laurent,Marion Ryan,and Adolph Pietruszkiewicz,”Fractionation of hyaluronic Acid”, Biochemina et Biophysica Acta.,42,476-485(1960)、四方田千佳子、「ヒアルロン酸ナトリウム製剤のＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量評価」、国立衛研報、第121号，030-033(2003) ）。
　（式１）
比粘度 ＝ {試料溶液の所要流下秒数)/(０．２ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数)}－１
　（式２）
還元粘度（ｄＬ／ｇ）＝ 比粘度/(本品の換算した乾燥物に対する濃度ｇ／１００ｍＬ))
　（式３）
極限粘度（ｄＬ／ｇ）＝３．６×１０－４Ｍ０．７８
Ｍ：平均分子量
　１．１．２．ヒアルロン酸類の含有量
　（精製）ヒアルロン酸類において、ヒアルロン酸類の含有量は、（精製）ヒアルロン酸類の純度の指標であり、ヒアルロン酸類の含有量が多いほど、（精製）ヒアルロン酸類の純度が高いといえる。
　本発明において、（精製）ヒアルロン酸類におけるヒアルロン酸類の含有量は、カルバゾール硫酸法（例えば日本薬局方）にて測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。
　カルバゾール硫酸法は、ホウ酸ナトリウム・硫酸溶液中にヒアルロン酸水溶液を加えて混和し、ヒアルロン酸を加熱分解した後冷却し、カルバゾール・エタノール溶液を加えて混和し、加熱後放冷した試料液の吸光度（５３０ｎｍ）を測定する方法である。同様に処理したＤ－グルクロノラクトンを用いて検量線を作成し、Ｄ－グルクロノラクトン換算値を算出した後、１．１０２を乗じてグルクロン酸定量値を求める。得られたグルクロン酸定量値に（ヒアルロン酸類の分子量／グルクロン酸の分子量）を乗じてヒアルロン酸類の含有量を算出する。
　１．２．懸濁液を得る工程
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法では、原料である平均分子量が１０万以下であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加することにより、懸濁液を得る。
　本発明において、「懸濁液」とは、固体の微粒子が液体中に分散している混合物である。例えば、懸濁液では、液中に固体が分散していて液が濁っている状態であってもよいし、懸濁相と上澄み相とに分離していてもよい。後の工程において精製ヒアルロン酸類が沈殿しやすい点で、懸濁液は懸濁相と上澄み相とに分離していることが好ましい。
　原料であるヒアルロン酸類を含む溶液の溶媒は水であることが好ましい。また、原料であるヒアルロン酸類を含む溶液は食塩等の無機塩を２％以下（好ましくは１％以下）含むものであってもよく、より好ましくは前記溶液の無機塩の濃度は１％未満である。
　原料であるヒアルロン酸類を含む溶液において、ヒアルロン酸類の濃度は特に限定するものではないが、回収の効率を高める観点から、０．１～３０％が好ましく、１～１０％がより好ましい。
　懸濁液を得る工程において、水溶性有機溶媒は、溶液が懸濁液へと変化するのに少なくとも必要な量が添加されればよい。水溶性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールなどのアルコール系溶媒、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン系溶媒、テトラヒドロフラン、アセトニトリル等を挙げることができ、これらを単独でまたは組み合わせて使用することができる。このうち、エタノールが好ましい。
　水溶性有機溶媒の添加量は、ヒアルロン酸類を含む溶液１部に対して、１部以上、好ましくは１．５～５０部、より好ましくは１．５～２０部である。この場合、水溶性有機溶媒の添加量がヒアルロン酸類を含む溶液１部に対して１部未満であると、懸濁が生じ難くなる。
　また、懸濁液を得る工程において、水溶性有機溶媒を添加する前の溶液はｐＨ３以下であり、好ましくはｐＨ０．１～２．５、より好ましくはｐＨ０．１～２である。水溶性有機溶媒を添加する前の溶液のｐＨが３を超えると、水溶性有機溶媒を加えても懸濁が生じにくく、後の工程で溶液のｐＨを３．５～８に調整しても、精製ヒアルロン酸類が沈殿しにくい。また、水溶性有機溶媒を添加する前の溶液のｐＨが低すぎると、後の工程で溶液のｐＨを３．５～８に調整する際に多量の塩が生成するため、好ましくない場合がある。
　１．３．ヒアルロン酸類を沈殿させる工程
　本実施形態に係る精製ヒアルロン酸類の製造方法において、懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる。この場合、懸濁液のｐＨが３．５～８の範囲を外れると、精製ヒアルロン酸類が沈殿するのが困難になる。また、より高い回収率を達成できる点で、懸濁液をｐＨ４～７に調整するのが好ましく、ｐＨ４～６に調整するのがより好ましい。
　２．実施例
　以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
　２．１．試験方法
　本実施例において、（精製）ヒアルロン酸類の平均分子量は、上述の実施形態で説明された方法で測定された。また、（精製）ヒアルロン酸類の含有量は、カルバゾール硫酸法によって測定されたグルクロン酸定量値から算出された。
　２．２．実施例１
　水２Ｌに塩酸を加えて、ｐＨを０．３に調整し、７０℃まで加温した。７０℃達温後、ヒアルロン酸（平均分子量３０万、キユーピー株式会社製）１００ｇを投入し、７０℃で２時間酸分解させた。その後、反応液を常温まで冷却し、エタノール５Ｌを少しずつ加えてヒアルロン酸を懸濁相と上澄み相に分離させた。次いで、水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整し、ヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物をろ過にて回収し、８０％（ｖ/ｖ）エタノール５００ｍＬで３回洗浄した。得られた沈殿物を６０℃で真空乾燥させて、精製ヒアルロン酸を得た。
　実施例１で得られた精製ヒアルロン酸の平均分子量は８，０００であり、ヒアルロン酸含有量は９５．４％であった。なお、エタノール添加前の処理液のｐＨは０．３であった。
　２．３．実施例２
　ヒアルロン酸含有量が９１．１％であるヒアルロン酸（平均分子量３，０００、キユーピー株式会社製）５．０ｇを水５００ｍＬに溶解させ、塩酸にてｐＨ１．０に調整した。次いで、エタノール１０Ｌを撹拌しながらゆっくり添加し、ヒアルロン酸を懸濁相と上澄み相に分離させた。次いで、水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整し、ヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物をろ過にて回収し、８０％（ｖ/ｖ）エタノール１００ｍＬで３回洗浄した。得られた沈殿物を６０℃で真空乾燥させて、精製ヒアルロン酸を得た。
　実施例２で得られた精製ヒアルロン酸の平均分子量は３，０００であり、ヒアルロン酸含有量は９７．１％であった。
　２．４．試験例１
　実施例２において、原料として用いるヒアルロン酸の平均分子量およびエタノール添加前の処理液のｐＨ、沈殿前の処理液のｐＨを表１に示すものにした以外は、実施例２と同様の方法で精製ヒアルロン酸（Ｎｏ．１～１８、実施例２の精製ヒアルロン酸はＮｏ．３）を製した。なお、処理液のｐＨ調整は、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて行った。また、沈殿が生じたＮｏ．１～５、Ｎｏ．８～１２、Ｎｏ．１５～１７の精製ヒアルロン酸のヒアルロン酸含有量はいずれも９５％以上であり、平均分子量は原料ヒアルロン酸のそれと変わらないものであった。
　Ｎｏ．１～１８の精製ヒアルロン酸の水溶性有機溶媒添加後およびｐＨ調整後それぞれにおける処理液の状態を以下の指標にて評価した。
　Ａ　：水溶性有機溶媒添加後に懸濁相と上澄み相に分離し、ｐＨ調整後に沈殿した。
　Ｂ１：水溶性有機溶媒添加後に懸濁相と上澄み相に分離し、ｐＨ調整後にやや沈殿し難かったが問題とならない程度であった。
　Ｃ１：水溶性有機溶媒添加後に懸濁相と上澄み相に分離せず、ｐＨ調整後も沈殿しなかった。
　Ｂ２：水溶性有機溶媒添加後に懸濁相と上澄み相に分離したが、溶液がややゲル化し、ｐＨ調整後にやや沈殿し難かったが問題とならない程度であった。
　Ｃ２：水溶性有機溶媒添加後に懸濁相と上澄み相に分離せず、溶液がゲル化し、ｐＨ調整後も沈殿しなかった。
　Ｃ３：水溶性有機溶媒添加直後に懸濁相と上澄み相に分離したが、ｐＨ調整後に沈殿しなかった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　２．５．実施例３
　実施例１の精製ヒアルロン酸の製造方法において、反応液を冷却した後に加えたエタノールをアセトンに変更した以外は実施例１と同様の方法で精製ヒアルロン酸を製した。
　実施例３で得られた精製ヒアルロン酸の平均分子量は８，０００であり、ヒアルロン酸含有量は９６．０％であった。
　２．６．実施例４
　実施例２の精製ヒアルロン酸の製造方法において、原料として用いるヒアルロン酸を溶解する水を１％食塩水に変更した以外は、実施例２と同様の方法で精製ヒアルロン酸を製した。
　実施例４で得られた精製ヒアルロン酸の平均分子量は３，０００であり、ヒアルロン酸含有量は９４．０％であった。
　２．７．実施例５
　実施例２の精製ヒアルロン酸の製造方法において、原料として用いるヒアルロン酸を溶解する水を２％食塩水に変更した以外は、実施例２と同様の方法で精製ヒアルロン酸を製した。なお、実施例１～３でエタノール添加前の処理液の食塩濃度は１％未満である。
　実施例５で得られた精製ヒアルロン酸の平均分子量は３，０００であり、ヒアルロン酸含有量は９１．９％であった。
　２．８．実施例６
　１Ｌ容ビーカーに、ヒアルロン酸ナトリウム（キユーピー株式会社製、平均分子量８０００）２０ｇ、５％水酸化ナトリウム２０ｍＬ、水１８０ｍＬ、およびグリシジルトリメチルアンモニウムクロリド（ＧＴＡ（有効成分約８０％、水分約２０％））３０ｍＬを添加し、撹拌子を用いて撹拌しながら、４０℃で１時間反応させた。
　反応終了後、塩酸にてｐＨ１．０に調整した。次いで、エタノール８００ｍＬを撹拌しながらゆっくり添加し、ヒアルロン酸を懸濁相と上澄み相に分離させた。次いで、水酸化ナトリウムでｐＨを４．０に調整し、ヒアルロン酸を沈殿させ、沈殿物をろ過にて回収し、８０％エタノール５００ｍＬで３回洗浄した。得られた沈殿物を６０℃で真空乾燥させて、精製カチオン化ヒアルロン酸を得た。
　実施例６で得られた精製カチオン化ヒアルロン酸の平均分子量は６，０００であり、カチオン化ヒアルロン酸の含有量は９５．６％であった。
　本発明に係る実施の形態の説明は以上である。本発明は、実施の形態で説明した構成と実質的に同一の構成（例えば、機能、方法及び結果が同一の構成、あるいは目的及び結果が同一の構成）を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成又は同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。

Claims (2)

  1. 　平均分子量が４００～１０万であるヒアルロン酸類を含むｐＨ３以下の溶液に水溶性有機溶媒を添加して、懸濁液を得る工程と、
    　前記懸濁液をｐＨ３．５～８に調整して、精製ヒアルロン酸類を沈殿させる工程と、
    を含む、精製ヒアルロン酸類の製造方法。
  2. 　前記水溶性有機溶媒を添加する前の前記溶液がｐＨ２以下である、請求項１記載の精製ヒアルロン酸類の製造方法。
PCT/JP2010/071437 2009-12-08 2010-12-01 精製ヒアルロン酸類の製造方法 WO2011070948A1 (ja)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011514955A JP4810628B2 (ja) 2009-12-08 2010-12-01 精製ヒアルロン酸類の製造方法
CN201080055315.6A CN102648214B (zh) 2009-12-08 2010-12-01 纯化透明质酸类的制造方法
KR1020127017493A KR101450983B1 (ko) 2009-12-08 2010-12-01 정제 히알루론산류의 제조 방법
US13/388,010 US8829180B2 (en) 2009-12-08 2010-12-01 Method of purifying a low molecular weight hyaluronic acid or cationized hyaluronic acid via precipitation from aqueous solution by addition of alcohol or acetone followed by ph adjustment
EP10835870.6A EP2511302B1 (en) 2009-12-08 2010-12-01 Method for manufacturing purified hyaluronic acids

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2009278259 2009-12-08
JP2009-278259 2009-12-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2011070948A1 true WO2011070948A1 (ja) 2011-06-16

Family

ID=44145493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2010/071437 WO2011070948A1 (ja) 2009-12-08 2010-12-01 精製ヒアルロン酸類の製造方法

Country Status (7)

Country Link
US (2) US8829180B2 (ja)
EP (1) EP2511302B1 (ja)
JP (1) JP4810628B2 (ja)
KR (1) KR101450983B1 (ja)
CN (1) CN102648214B (ja)
TW (1) TWI510501B (ja)
WO (1) WO2011070948A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015108029A1 (ja) * 2014-01-14 2015-07-23 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸および／またはその塩およびその製造方法、ならびに、該ヒアルロン酸および／またはその塩を含む食品、化粧料、および医薬品
JP2016108344A (ja) * 2014-12-08 2016-06-20 ワミレスコスメティックス株式会社 低分子量カチオン化ヒアルロン酸を含有する化粧料
JP2017025157A (ja) * 2015-07-17 2017-02-02 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびに、該ヒアルロン酸および／またはその塩を含む食品、化粧料、および医薬品

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011129370A1 (ja) * 2010-04-14 2011-10-20 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸金属塩の製造方法、ヒアルロン酸金属塩を含む化粧品の製造方法、ならびにヒアルロン酸亜鉛およびその製造方法
JP6865980B2 (ja) * 2017-04-07 2021-04-28 ユーレー カンパニー リミテッドＹｏｕｒｅｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 低分子量ヒアルロン酸の製造方法
CN109206537B (zh) * 2018-10-10 2021-04-09 华熙生物科技股份有限公司 一种乙酰化透明质酸钠的制备方法及其应用
CN114133465B (zh) * 2020-09-03 2023-03-21 山东华熙海御生物医药有限公司 一种透明质酸钾的制备方法及所得产品和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6357602A (ja) * 1986-08-29 1988-03-12 Q P Corp 低分子ヒアルロン酸の製法
JPH05255045A (ja) * 1992-03-13 1993-10-05 Kanebo Ltd 養毛料
JP2006036666A (ja) * 2004-07-26 2006-02-09 Japan Science & Technology Agency ケモカイン受容体ｃｃｒ１０の発現誘導剤
JP2006265287A (ja) * 2005-03-22 2006-10-05 Q P Corp 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物
JP2007186689A (ja) * 2005-12-13 2007-07-26 Shiseido Co Ltd 低分子量ヒアルロン酸の製造方法
JP2008179710A (ja) * 2007-01-25 2008-08-07 Shiseido Co Ltd 低分子量ヒアルロン酸の製造方法
WO2008133267A1 (ja) 2007-04-24 2008-11-06 Q.P. Corporation カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを用いた毛髪改質剤、キューティクル修復剤、皮膚改質剤および化粧料
JP2009155486A (ja) * 2007-12-27 2009-07-16 Kikkoman Corp 低分子化ヒアルロン酸とその製造法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2587268B2 (ja) 1988-04-18 1997-03-05 チッソ株式会社 低粘度ヒアルロン酸又はその塩の製造方法
US6630457B1 (en) * 1998-09-18 2003-10-07 Orthogene Llc Functionalized derivatives of hyaluronic acid, formation of hydrogels in situ using same, and methods for making and using same
TW200643033A (en) * 2005-03-08 2006-12-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Conjugate of water-soluble modified hyaluronic acid and glp-1 analogue
US7879818B2 (en) * 2005-12-23 2011-02-01 Janos Borbely Hyaluronic acid-based cross-linked nanoparticles
JP5077681B2 (ja) 2008-03-21 2012-11-21 マツダ株式会社 車両のステアリングロック装置

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6357602A (ja) * 1986-08-29 1988-03-12 Q P Corp 低分子ヒアルロン酸の製法
JPH0577681B2 (ja) 1986-08-29 1993-10-27 Q P Corp
JPH05255045A (ja) * 1992-03-13 1993-10-05 Kanebo Ltd 養毛料
JP2006036666A (ja) * 2004-07-26 2006-02-09 Japan Science & Technology Agency ケモカイン受容体ｃｃｒ１０の発現誘導剤
JP2006265287A (ja) * 2005-03-22 2006-10-05 Q P Corp 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物
JP2007186689A (ja) * 2005-12-13 2007-07-26 Shiseido Co Ltd 低分子量ヒアルロン酸の製造方法
JP2008179710A (ja) * 2007-01-25 2008-08-07 Shiseido Co Ltd 低分子量ヒアルロン酸の製造方法
WO2008133267A1 (ja) 2007-04-24 2008-11-06 Q.P. Corporation カチオン化ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを用いた毛髪改質剤、キューティクル修復剤、皮膚改質剤および化粧料
JP2009155486A (ja) * 2007-12-27 2009-07-16 Kikkoman Corp 低分子化ヒアルロン酸とその製造法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Japanese Pharmacopoeia"
CHIKAKO YOMOTA: "Evaluation of Molecular Weights of Hyaluronate Preparations by Multi-Angle Laser Light Scattering", BULL.NATL.INST.HEALTH SCI., vol. 121, 2003, pages 030 - 033
See also references of EP2511302A4
TORVARD C LAURENT; MARION RYAN; ADOLPH PIETRUSZKIEWICZ: "Fractionation of hyaluronic Acid", BIOCHEMINA ET BIOPHYSICA ACTA., vol. 42, 1960, pages 476 - 485, XP023382851, DOI: doi:10.1016/0006-3002(60)90826-X

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015108029A1 (ja) * 2014-01-14 2015-07-23 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸および／またはその塩およびその製造方法、ならびに、該ヒアルロン酸および／またはその塩を含む食品、化粧料、および医薬品
JP5824599B1 (ja) * 2014-01-14 2015-11-25 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸および／またはその塩の製造方法
JP2016108344A (ja) * 2014-12-08 2016-06-20 ワミレスコスメティックス株式会社 低分子量カチオン化ヒアルロン酸を含有する化粧料
JP2017025157A (ja) * 2015-07-17 2017-02-02 キユーピー株式会社 ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびに、該ヒアルロン酸および／またはその塩を含む食品、化粧料、および医薬品

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2011070948A1 (ja) 2013-04-22
KR20120089772A (ko) 2012-08-13
KR101450983B1 (ko) 2014-10-15
TWI510501B (zh) 2015-12-01
EP2511302B1 (en) 2014-11-12
US20120130063A1 (en) 2012-05-24
EP2511302A1 (en) 2012-10-17
US20140343269A1 (en) 2014-11-20
EP2511302A4 (en) 2013-10-02
US8829180B2 (en) 2014-09-09
JP4810628B2 (ja) 2011-11-09
CN102648214B (zh) 2015-02-18
TW201136947A (en) 2011-11-01
CN102648214A (zh) 2012-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4810628B2 (ja) 精製ヒアルロン酸類の製造方法
EP1270599B1 (en) Salmon-origin chondroitin sulfate
JP4613008B2 (ja) キト−オリゴマーを含む医薬組成物
CN114133419B (zh) 一种低分子量乙酰化透明质酸盐及其制备方法和应用
JP2587268B2 (ja) 低粘度ヒアルロン酸又はその塩の製造方法
CN106188341B (zh) 肝素钠下脚料制备高纯度硫酸皮肤素工艺
JP2005501930A (ja) 哺乳動物の外科的若しくは治療的な処置方法、又は診断方法に使用、特に血漿増量剤に使用をする高度分枝アミロペクチン
JP5053512B2 (ja) 非常に大きい硫酸化度を持つｋ５多糖体のエピマー化誘導体
KR101788536B1 (ko) 상어­유사 콘드로이틴 설페이트 및 이의 제조방법
KR101858733B1 (ko) 초저분자량 히알루론산의 제조방법
JP2011084588A (ja) ヒアルロン酸および／またはその塩からなる粉末
JP4719878B2 (ja) アオヤギ由来のコンドロイチン硫酸
Ibram Studies on chitosan, chitin and chitooligosaccharides and their biomedical properties
US9718947B2 (en) Biotechnological sulphated chondroitin sulphate at position 4 or 6 on the same polysaccharide chain, and process for the preparation thereof
JP5758878B2 (ja) ヒアルロン酸の精製方法
JP2011079748A (ja) ヒアルロン酸および／またはその塩を含有するハードカプセルおよび錠剤
JP2011063526A (ja) 経口用肌改善剤および肌改善用食品組成物
CN110698522A (zh) 一种软骨素奇数寡糖单体及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201080055315.6

Country of ref document: CN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011514955

Country of ref document: JP

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 10835870

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13388010

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010835870

Country of ref document: EP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20127017493

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A