CN105399859A - 一种纯化硫酸软骨素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种纯化硫酸软骨素钠的方法。硫酸软骨素钠是自猪鼻骨等动物软骨中提取制得的一种粘多糖类物质。将动物软骨经碱解-酶解提取后,加入还原剂进行还原,得到解离液,再经两次乙醇沉淀,即可得含量在95%以上的硫酸软骨素钠产品。该方法工艺简单,条件温和,生产较安全,且成本较其他吸附、柱层析等方法低。是一种可以进行大规模工业生产的工艺。
Description
技术领域
本发明所属领域为生物制药领域,涉及一种纯化硫酸软骨素钠的方法。
背景技术
硫酸软骨素钠是从动物软骨组织中提取制备的一种酸性粘多糖类物质,属糖胺聚糖。硫酸软骨素钠主要用于治疗风湿和类风湿疾病的药物,还具有抗凝、抗癌、抗血栓、降血脂等作用,可用于治疗头痛、偏头痛、冠心病、心绞痛等症状。
目前国内分离纯化取硫酸软骨素钠的技术有:乙醇沉淀法、离子交换色谱法、纤维素分离法、吸附法等。有些方法成本较高,有些方法很难应用于工业大生产中。乙醇沉淀的方法工艺简单,条件温和,生产较安全,且成本较其他吸附、柱层析等方法低,是一种可以进行大规模工业生产的工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种硫酸软骨素钠的提取方法,采用该提取方法不仅能克服上述现有技术的不足,而且可以降低成本,提高产品质量,提高生产效率。
本发明的目的通过以下技术方案来达到,依次通过以下几个步骤来实现。
(1)还原:经碱解或酶解等工序操作获得硫酸软骨素钠提取液,调节pH5.0-7.0后,升温至55-70℃,加入还原剂,搅拌25-35分钟,静置25-35分钟后,过滤;
(2)乙醇沉淀:将步骤(1)所得滤液降温至30℃以下,保持PH在5.0-7.0,边搅边加乙醇,使乙醇浓度为55-70度,静置6-8小时。离心分离沉淀。
(3)乙醇复沉淀:将步骤(2)沉淀物按湿重1:(1-2)比例加纯化水溶解,按溶液体积的1%-2%加氯化钠,边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀度数达55-70度,静置6-8小时。
(4)灭菌:将步骤(3)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀读数达80-85度,静置10-12小时。
(5)脱水:将步骤(4)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入无水乙醇,使乙醇沉淀读数达90-95度,静置24小时以上。除去上清液,沉淀离心干燥。
本方法的有点及效果:本方法通过对目前工艺的改进创新,采用碱解结合酶解的方法初步提取硫酸软骨素钠,经还原,乙醇沉淀,灭菌,脱水等操作进一步纯化硫酸软骨素钠。提高了产品质量和外观,在保持硫酸软骨素钠质量稳定条件下,含量提高到90%以上,收率提高到30%以上,创造了新的水平。而且具有较低成本及较小的环境污染。
具体实施例
(1)还原:将经过碱解及酶解后的解离液液500L,调节pH5.0-7.0后,升温至55-70℃,加入焦硫酸钠4kg,搅拌25-35分钟,静置25-35分钟后,过滤;
(2)乙醇沉淀:将步骤(1)所得滤液降温至30℃以下,保持PH在5.0-7.0,边搅边加乙醇,使乙醇浓度为55-70度,静置6-8小时。离心分离沉淀。
(3)乙醇复沉淀:将步骤(2)沉淀物加670L纯化水溶解,加7kg氯化钠,边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀度数达55-70度,静置6-8小时。
(4)灭菌:将步骤(3)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀读数达80-85度,静置10-12小时。
(5)脱水:将步骤(4)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入无水乙醇,使乙醇沉淀读数达90-95度,静置24小时以上。除去上清液,沉淀离心干燥。
(6)干燥的样品通过cpc法测定硫酸软骨素钠含量为93.7%。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明作其它形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (7)
1.一种纯化硫酸软骨素钠的方法,其特征主要体现在以下步骤:
(1)还原:经碱解或酶解等工序操作获得硫酸软骨素钠提取液,调节pH5.0-7.0后,升温至55-70℃,加入还原剂,搅拌25-35分钟,静置25-35分钟后,过滤;
(2)乙醇沉淀:将步骤(1)所得滤液降温至30℃以下,保持PH在5.0-7.0,边搅边加乙醇,使乙醇浓度为55-70度,静置6-8小时;离心分离沉淀;
(3)乙醇复沉淀:将步骤(2)沉淀物按湿重1:(1-2)比例加纯化水溶解,按溶液体积的1%-2%加氯化钠,边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀度数达55-70度,静置6-8小时;
(4)灭菌:将步骤(3)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入乙醇,使乙醇沉淀读数达80-85度,静置10-12小时;
(5)脱水:将步骤(4)中上清液吸出,沉淀物边搅拌边加入无水乙醇,使乙醇沉淀读数达90-95度,静置24小时以上;除去上清液,沉淀离心干燥。
2.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(1)用盐酸调节pH至5.0-7.0,升温至55-70℃;搅拌、静置均为25-35分钟。
3.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(1)中所用还原剂为焦亚硫酸钠;还原剂的重量跟溶液体积比为1.5%-3.5%。
4.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(2)、(3)中在30℃以下时,乙醇沉淀浓度为55-70度;静置时间为6-8小时。
5.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(3)中按沉淀物湿重1:(1-2)比例加纯化水溶解;按溶液体积的1%-2%加氯化钠。
6.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(4)中乙醇沉淀度数为80-85度;静置时间为10-12小时。
7.按照权利要求1所述的方法,其特征为:步骤(tfg5)中乙醇为无水乙醇,乙醇沉淀度数为90-95度,静置时间为24小时以上。
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