CN103601822B - 粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肝素钠生产技术领域，具体涉及一种粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法。粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法，它包括溶解-酶解-吸附-脱附-沉淀-脱水烘干。本发明的优点是工艺成熟，操作简单，效果明显，有效提高粗品肝素钠的回收率，提高了生产者的经济效益；吸附工艺中，吸附之后所生成的吸附液直接通过喷雾干燥，得到肠蛋白肽粉，可用于幼小动物饲料的制备；这样肠渣中残留的肝素回收后，肠渣中的蛋白也能有效利用，避免了环境污染也增加了效益。

Description

粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法

技术领域：

本发明涉及肝素钠生产技术领域，具体涉及一种粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法。

背景技术：

肝素存在于所有动物的心、肝、脾、肺、胸腺、肌肉、血管等中，但主要来源于动物富含肥大细胞的组织，如肝、肺、内肠等，以O-链接方式与核心蛋白（coreprotein,CP）形成肝素蛋白聚糖（heprainproteoglycan,Hep-PG）。肝素是一类结构异常复杂的糖胺聚糖，有糖醛酸和葡糖胺以1→4键连接起来的重复二糖单位组成的多糖链的混合物。含10-30个二糖单位不等，2-O-硫酸-α-L艾杜糖醛酸及6-O-硫酸-N-硫酸-α-D葡糖胺是其中的主要单糖，由它们组成了三硫酸二糖的重复单位是肝素的所谓的“规则区”，是肝素结构的主要部分。

肝素的大规模制备研究始于1920年。在美国巴尔的摩（Baltimore），Dunning博士首次从狗肝中制备了商用肝素，之后CharlesBest利用牛肺分离提取商用肝素，肝素应用于临床最早始于1935年，距今已有78年的临床应用历史。肝素是目前世界上产量和销售量最大的来自于天然的糖类物质，10mg肝素能在4h内抑制500mL血液凝固，目前还没有任何一种药物可以代替它。肝素钠在生产中，盐解法不可避免的会使肝素-蛋白复合体中的肝素解离不完全，高温时蛋白包裹未解离的肝素，变性形成肠渣，造成了粗品肝素钠回收率降低的现象。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出了一种粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法，弥补现有生产技术的不足，通过对肠渣进行酶解，提高粗品肝素钠的回收率。

为了达到上述目的，本发明提出了以下技术方案：

粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法，其特征是它包括溶解--酶解--吸附--脱附--沉淀--脱水烘干；具体在于以下步骤：

1）溶解：将盐解工艺生产产生的料渣中加入水，料渣与水的重量比为1:2-3，搅拌并升温至55-60℃；

2）酶解：向反应液中加入NaOH调节pH至9.0-10.0，再向反应液中加入2709碱性蛋白酶，酶与料渣的重量比为1:10-20，反应温度为55-60℃，反应2-3h后，得裂解液，向裂解液中加HCl调pH7.0，升温至80-100℃，保温10min后离心后得到离心液；

3）吸附：调离心液的盐度，在60℃时离心液的盐度为1.9-2.2，加入肝素专用树脂进行吸附，树脂与离心液的重量比为1:250-300，树脂吸附8-10h；吸附之后所生成的吸附液直接通过喷雾干燥，得到肠蛋白肽粉，用于幼小动物饲料的制备；

4）脱附：收集树脂，加入23℃盐水脱附3-4次，收集脱附液；

5）沉淀：向脱附液中加入体积分数为90%-95%的乙醇进行沉淀，静置24-36h，去掉上层液，收集下层沉淀；

6）脱水烘干：将得到的沉淀，用95%-100%的乙醇进行脱水，静置12-16h，脱水后的沉淀在75-85℃进行烘干处理，得到肝素钠粗品。

所述的酶解工艺中，选择一种碱性蛋白酶---2709酶，2709碱性蛋白酶是一种内切酶，具有较强的分解蛋白质的能力，能将大分子的蛋白质水解成多肽或游离的氨基酸。

所述的酶解工艺中，所述的2709碱性蛋白酶的裂解工艺中，其工艺条件之一是使酶与肠渣混合液的pH值保持在9.0-10.0的范围内。

所述的酶解工艺中，所述的2709碱性蛋白酶的裂解工艺中，其工艺条件之一是使酶与肠渣混合液加温，至温度为55-60℃。

所述的酶解工艺中，所述的2709碱性蛋白酶的裂解工艺中，其工艺条件之一是使酶与肠渣混合液共同反应2-3h。

本发明的优点是工艺成熟，操作简单，效果明显，有效提高粗品肝素钠的回收率，提高了生产者的经济效益；吸附工艺中，吸附之后所生成的吸附液直接通过喷雾干燥，得到肠蛋白肽粉，可用于幼小动物饲料的制备；这样肠渣中残留的肝素回收后，肠渣中的蛋白也能有效利用，避免了环境污染也增加了效益。

具体实施方式

粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法，包括溶解--酶解--吸附--脱附--沉淀--脱水烘干。其特征在于对肠渣再次酶解释放被蛋白包裹的肝素。本工艺中所述的裂解酶为2709碱性蛋白酶，为保证裂解酶处于最大反应活性状态，使得酶解工艺迅速进行，必须使肠渣与酶的混合物的pH值保持9.0-10.0的范围内，保持加热状态，55-60℃反应2-3h。

采用该方法对肠渣进行处理的原理是：肝素属于糖胺聚糖，多是以肝素-蛋白结合的方式存在于动物肥大组织细胞中，在传统的生产工艺中，难以完全将蛋白与肝素彻底分离，随着温度的升高，蛋白易包裹未解离的肝素形成肠渣，2709碱性蛋白酶是一种内切酶，具有较强的分解蛋白质的能力，能将大分子的蛋白质水解成多肽或游离的氨基酸等产物，从而通过2709酶降解肠渣中的蛋白，释放被蛋白包裹的未解离的肝素。

实施例1

（1）溶解：取车间肠渣400g，加入800mL水溶解，搅拌加热至60℃；

（2）酶解：向反应液中加入NaOH溶液调节pH至9.5，再向反应液中加入2709碱性蛋白酶40g，反应2.5h后，加HCl调pH为中性，升温至80℃，保温10min后离心得到离心液

（3）吸附：加水调节离心液在60℃时盐度2.0°，加肝素专用吸附树脂3.2g，吸附8h；

（4）脱附：收集吸附的树脂，23°盐水脱附3次，收集脱附液；

（5）沉淀：向脱附液中加入体积分数为90%的乙醇沉淀，静置24h，收集下层沉淀；

（6）脱水烘干：用95%的乙醇对得到的沉淀进行脱水，静置16h后沉淀于75℃下进行烘干处理，得到效价为35的粗品肝素钠。

实施例2

（7）溶解：取车间肠渣800g，加入1600mL水溶解，搅拌加热至60℃；

（8）酶解：向反应液中加入NaOH溶液调节pH至9.5，再向反应液中加入2709碱性蛋白酶80g，反应2.5h后，加HCl调pH为中性，升温至80℃，保温10min后离心得到离心液

（9）吸附：加水调节离心液在60℃时盐度2.0°，加肝素专用吸附树脂6.4g，吸附8h；

（10）脱附：收集吸附的树脂，23°盐水脱附3次，收集脱附液；

（11）沉淀：向脱附液中加入体积分数为90%的乙醇沉淀，静置24h，收集下层沉淀；

（12）脱水烘干：用95%的乙醇对得到的沉淀进行脱水，静置16h后沉淀于75℃下进行烘干处理，得到效价为40的粗品肝素钠。

实施例3

（13）溶解：取车间肠渣1200g，加入2400mL水溶解，搅拌加热至60℃；

（14）酶解：向反应液中加入NaOH溶液调节pH至9.5，再向反应液中加入2709碱性蛋白酶120g，反应2.5h后，加HCl调pH为中性，升温至80℃，保温10min后离心得到离心液

（15）吸附：加水调节离心液在60℃时盐度2.0°，加肝素专用吸附树脂9.6g，吸附8h；

（16）脱附：收集吸附的树脂，23°盐水脱附3次，收集脱附液；

（17）沉淀：向脱附液中加入体积分数为90%的乙醇沉淀，静置24h，收集下层沉淀；

（18）脱水烘干：用95%的乙醇对得到的沉淀进行脱水，静置16h后沉淀于75℃下进行烘干处理，得到效价为41的粗品肝素钠。

Claims (1)

1.粗品肝素钠生产过程中肠渣的处理方法，其特征是它包括溶解--酶解--吸附--脱附--沉淀--脱水烘干；具体在于以下步骤：

1)溶解：将盐解工艺生产产生的料渣中加入水，料渣与水的重量比为1:3，搅拌并升温至60℃；

2)酶解：向反应液中加入NaOH调节pH至10.0，再向反应液中加入2709碱性蛋白酶，酶与料渣的重量比为1:10-20，反应温度为60℃，反应2h后，得裂解液，向裂解液中加HCl调pH7.0，升温至100℃，保温10min后离心后得到离心液；

3)吸附：调离心液的盐度，在60℃时离心液的盐度为1.9-2.2，加入肝素专用树脂进行吸附，树脂与离心液的重量比为1:250-300，树脂吸附10h；吸附之后所生成的吸附液直接通过喷雾干燥，得到肠蛋白肽粉，用于幼小动物饲料的制备；

4)脱附：收集树脂，加入23℃盐水脱附3-4次，收集脱附液；

5)沉淀：向脱附液中加入体积分数为90％-95％的乙醇进行沉淀，静置24-36h，去掉上层液，收集下层沉淀；

6)脱水烘干：将得到的沉淀，用95％-100％的乙醇进行脱水，静置12-16h，脱水后的沉淀在85℃进行烘干处理，得到肝素钠粗品；

所述的酶解工艺中，选择一种碱性蛋白酶---2709酶，2709碱性蛋白酶是一种内切酶，具有较强的分解蛋白质的能力，能将大分子的蛋白质水解成多肽或游离的氨基酸。