CN103554306A - 一种油肠中肝素钠的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及肝素钠的提取方法，具体涉及一种油肠中肝素钠的提取工艺。一种油肠中肝素钠的提取工艺，将刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，对肠粘膜进行水解后吸附，将吸附后的树脂脱附，收集脱附液进行醇沉、脱水后置于真空干燥箱中烘干即得纯品肝素钠。优点是采用本发明工艺从油肠中制得的粗品肝素钠与其他同类产品相比，具有效价高、杂质少、安全性好等特点；所述的纯品肝素钠效价在100USPU/mg以上，提取效率可达1600-1700根小肠产1亿效价；本工艺具有产率高、制备工艺简单且对设备和材料损害污染小的特点，能够满足其在食品、医药等领域中应用的需求，具有重要的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及肝素钠的提取方法，具体涉及一种油肠中肝素钠的提取工艺。
背景技术
肝素钠存在于动物的心、肝、脾、肺、胸腺、肌肉、血管等，但主要来源于动物富含肥大细胞的组织，如肝、肺、内肠等，以O-连接形式与核心蛋白（core protein，CP）形成肝素蛋白聚糖（heparin proteoglycan, Hep-PG）。肝素可以和百余种蛋白如LDL、VLDL、LPL、SOD、AT Ш、IgG等相互作用，呈现出降血脂、抗动脉粥样硬化、免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗单纯孢疹病毒、抗凝血等生物活性。肝素于1920年就开始其大规模制备研究，并于1935年应用于临床，是目前世界上产量和销售量最大的来自天然的糖类药物，目前还没有任何一种药物可以替代它，且尚不能人工合成。
我国是肝素钠生产和肠衣加工大国，国内致力于从肠粘膜中提取肝素的厂家主要用盐解法和酶解法，随着肝素厂家的规模不断扩大和生产效率的逐渐提高，国内屠宰场的小肠显示出供不应求的趋势，很多肝素钠生产厂家需要进口小肠原料，但是国内屠宰场提供的小肠人工处理过，几乎不含油脂，而从国外进口的小肠，由于屠宰场没有进行有效处理，小肠外面含有大量的油脂，业界称为“油肠”，这种油肠如果用相同的生产工艺，其产率只能达到国产小肠的80%，并且损害设备、污染树脂。
发明内容
为了解决上述发明问题，本发明提出一种油肠中肝素钠的提取工艺，其产率高、效价高、成本低并且减少设备损害和树脂污染。
为了达到上述发明目的，本发明提出了以下技术方案：
一种油肠中肝素钠的提取工艺，将刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，对肠粘膜进行水解后吸附，将吸附后的树脂脱附，收集脱附液进行醇沉、脱水后置于真空干燥箱中烘干即得纯品肝素钠；具体工艺步骤如下：
（1）油肠粘膜的水解：将100份刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，加入带有搅拌装置、温度和pH显示、进出料装置以及观察器的反应釜中，加肝素钠专用NaCL 4-7份，调碱度至pH为8.0-9.0，加酶制剂0.001-0.005份，升温至40-50 ℃，保温1-2 h后调pH至9.5-10，升温至55-65 ℃，保温1-2 h，升温至95 ℃，离心，将水解液泵入吸附罐中吸附；
（2）吸附：在带有搅拌装置、温度显示、进出料装置的反应釜中加入100 份由（1）得的水解液，加入罗门哈斯AMBERLITE FPA 98 CL树脂2-4 份，调至温度65-70 ℃，pH为7.5-8.0，搅拌吸附7-10 h，将树脂滤出，清水洗净；
（3）脱附：将步骤（2）回收的树脂，用60-65 ℃的清水冲洗1-2 遍，然后用60-65 ℃，pH为8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL水溶液浸泡0.5-1 h后，排净浸泡液，加入质量为0.8-1.3倍树脂质量的2.5-4 mol/L的NaCL溶液，55- 60 ℃搅拌2-4 h，过滤收集脱附液；再添加质量为1.0-1.4 倍树脂质量的2.5-4 mol/L的 NaCL溶液，55-60 ℃搅拌 1-3 h，过滤收集脱附液；用质量为1.1-1.4 倍树脂质量的3.0-4.0 mol/L的NaCL溶液搅拌清洗后收集洗液，用于下批树脂的脱附；
（4）醇沉：将步骤（3）中第一次和第二次的脱附液合并，加入酒精度在80-95°的乙醇搅拌，使洗脱液的乙醇终浓度到40-50°，搅拌30-70 min后，静置8-10 h，将酒沉的上清液回收，并收集肝素钠沉淀；用酒精度在90-95°的乙醇脱水2-3次，收集脱水后肝素钠；
（5）干燥：将步骤（4）中脱水后的肝素钠置于真空干燥箱，60-70 ℃下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到纯品肝素钠。
对于步骤（1）中酶制剂为脂肪酶，温度在40-50 ℃，pH为8.0-9.0。
对于步骤（1）中分解保温的pH调至9.5-10，温度调至55-65 ℃。
对于步骤（2）中控制温度在65-70 ℃，pH在7.5-8.0之间，吸附7-10 h。
对于步骤（3）中首先用60-65 ℃的清水和60-65 ℃、pH为8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL溶液冲洗浸泡。
对于步骤（3）中脱附液的温度是55-60 ℃，第一次脱附液的质量为0.8-1.3倍树脂质量，第二次脱附液的质量为1.0-1.4倍树脂质量，第三次脱附液的质量为1.1-1.4倍树脂质量。
本发明的技术特点为：
1）本发明采取盐解和酶解解结合的方法，先用脂肪酶将油肠中的油脂分解，盐解部分采取高碱分解，强碱性条件下将脂肪酶没有完全分解的油脂分解，利于肝素的释放，而油脂的分解消耗了一部分碱，这样就既保证了油脂分解利于肝素的释放游离，又不会因着碱性过高而使肝素降解，提高了产量。
2）本发明在吸附工艺中采取弱碱性高温吸附，油脂会包裹树脂，在树脂的表面形成一层油膜，使得树脂的交换能力大大降低，而本发明的吸附方法在弱碱性温度在65-70 ℃下，树脂表面不能形成油膜，树脂的吸附能力得以恢复，而此碱性和温度下对树脂造不成伤害。
3）本发明在脱附工艺中首先采取盐碱混合除去油及蛋白等杂质之后再进行脱附，这样既提高了肝素的纯度，又保护了树脂不被污染。
本发明的有益效果为：
1）采用本发明工艺从油肠中制得的粗品肝素钠与其他同类产品相比，具有效价高、杂质少、安全性好等特点；
2）采用本发明工艺，所述的纯品肝素钠效价在100 USPU/ mg以上，提取效率可达1600-1700 根小肠产1 亿效价；
3）本发明从油肠中提取高纯度高效价的肝素钠的工艺方法具有产率高、制备工艺简单且对设备和材料损害污染小的特点，能够满足其在食品、医药等领域中应用的需求，具有重要的市场应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件中所述的条件进行。除非另行定义，所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中，所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施实例1
（1）将100份刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，加入带有搅拌装置、温度和pH显示、进出料装置以及观察器的反应釜中，加肝素钠专用NaCL 7份，调碱度至pH为8.5，加酶制剂0.004份，升温至40 ℃，保温2 h后调pH至9.5，升温至55 ℃，保温2 h，升温至95 ℃，离心，将水解液泵入吸附罐中吸附。
（2）在带有搅拌装置、温度显示、进出料装置的反应釜中加入100 份由（1）得的水解液，加入罗门哈斯AMBERLITE FPA 98 CL树脂4 份，调至温度为70 ℃，pH为7.5-8.0，搅拌吸附7 h，将树脂滤出，清水洗净。
（3）将步骤（2）回收的树脂，用60 ℃的清水冲洗2 遍，然后用60 ℃，pH为8.5的0.4 mol/L的NaCL水溶液浸泡1 h后，排净浸泡液，加入质量为1.3倍树脂质量的4 mol/L的NaCL溶液，60 ℃搅拌4 h，过滤收集脱附液；再添加质量为1.3 倍树脂质量的4 mol/L的 NaCL溶液，60 ℃搅拌 3 h，过滤收集脱附液；用质量为1.4 倍树脂质量的4.0 mol/L的NaCL溶液搅拌清洗后收集洗液，用于下批树脂的脱附。
（4）将步骤（3）中第一次和第二次的脱附液合并，加入酒精度在80°的乙醇搅拌，使洗脱液的乙醇终浓度到40°，搅拌30-70 min后，静置8 h，将酒沉的上清液回收，并收集肝素钠沉淀；用酒精度在95°的乙醇脱水3次，收集脱水后肝素钠。
（5）将步骤（4）中脱水后的肝素钠置于真空干燥箱，70 ℃下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到纯品肝素钠其效价为104 USPU/mg。
实施实例2
（1）将100份刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，加入带有搅拌装置、温度和pH显示、进出料装置以及观察器的反应釜中，加肝素钠专用NaCL 7份，调碱度至pH为8.5，加酶制剂0.004份，升温至40 ℃，保温1.5 h后调pH至10，升温至60 ℃，保温2 h，升温至95 ℃，离心，将水解液泵入吸附罐中吸附。
（2）在带有搅拌装置、温度显示、进出料装置的反应釜中加入100 份由（1）得的水解液，加入罗门哈斯AMBERLITE FPA 98 CL树脂3 份，调至温度70 ℃，pH为8.0，搅拌吸附10 h，将树脂滤出，清水洗净。
（3）将步骤（2）回收的树脂，用65 ℃的清水冲洗1-2 遍，然后用65 ℃，pH为9.0的0.7 mol/L的NaCL水溶液浸泡1 h后，排净浸泡液，加入质量为0.8倍树脂质量的4 mol/L的NaCL溶液，55 ℃搅拌4 h，过滤收集脱附液；再添加质量为1.0 倍树脂质量的4 mol/L的 NaCL溶液，55 ℃搅拌3 h，过滤收集脱附液；用质量为1.1 倍树脂质量的4.0 mol/L的NaCL溶液搅拌清洗后收集洗液，用于下批树脂的脱附。
（4）将步骤（3）中第一次和第二次的脱附液合并，加入酒精度在85°的乙醇搅拌，使洗脱液的乙醇终浓度到45°，搅拌30 min后，静置10 h，将酒沉的上清液回收，并收集肝素钠沉淀；用酒精度在95°的乙醇脱水2次，收集脱水后肝素钠。
（5）将步骤（4）中脱水后的肝素钠置于真空干燥箱，65 ℃下干燥，10 h，使含水量在5 %以下，得到纯品肝素钠其效价为114 USPU/mg。
Claims (6)
1.一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于将刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，对肠粘膜进行水解后吸附，将吸附后的树脂脱附，收集脱附液进行醇沉、脱水后置于真空干燥箱中烘干即得纯品肝素钠；具体工艺步骤如下：
（1）油肠粘膜的水解：将100份刮制的带有肠皮和油脂的肠粘膜用匀浆机匀碎后，加入带有搅拌装置、温度和pH显示、进出料装置以及观察器的反应釜中，加肝素钠专用NaCL 4-7份，调碱度至pH为8.0-9.0，加酶制剂0.001-0.005份，升温至40-50 ℃，保温1-2 h后调pH至9.5-10，升温至55-65 ℃，保温1-2 h，升温至95 ℃，离心，将水解液泵入吸附罐中吸附；
（2）吸附：在带有搅拌装置、温度显示、进出料装置的反应釜中加入100 份由（1）得的水解液，加入罗门哈斯AMBERLITE FPA 98 CL树脂2-4 份，调至温度65-70 ℃，pH为7.5-8.0，搅拌吸附7-10 h，将树脂滤出，清水洗净；
（3）脱附：将步骤（2）回收的树脂，用60-65 ℃的清水冲洗1-2 遍，然后用60-65 ℃，pH为8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL水溶液浸泡0.5-1 h后，排净浸泡液，加入质量为0.8-1.3倍树脂质量的2.5-4 mol/L的NaCL溶液，55- 60 ℃搅拌2-4 h，过滤收集脱附液；再添加质量为1.0-1.4 倍树脂质量的2.5-4 mol/L的 NaCL溶液，55-60 ℃搅拌 1-3 h，过滤收集脱附液；用质量为1.1-1.4 倍树脂质量的3.0-4.0 mol/L的NaCL溶液搅拌清洗后收集洗液，用于下批树脂的脱附；
（4）醇沉：将步骤（3）中第一次和第二次的脱附液合并，加入酒精度在80-95°的乙醇搅拌，使洗脱液的乙醇终浓度到40-50°，搅拌30-70 min后，静置8-10 h，将酒沉的上清液回收，并收集肝素钠沉淀；用酒精度在90-95°的乙醇脱水2-3次，收集脱水后肝素钠；
（5）干燥：将步骤（4）中脱水后的肝素钠置于真空干燥箱，60-70 ℃下干燥，10-12 h，使含水量在5 %以下，得到纯品肝素钠。
2.根据权利要求1 所述的一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于步骤（1）中酶制剂为脂肪酶，温度在40-50 ℃，pH为8.0-9.0。
3.根据权利要求1 所述的一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于步骤（1）中分解保温的pH调至9.5-10，温度调至55-65 ℃。
4.根据权利要求1 所述的一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于步骤（2）中控制温度在65-70 ℃，pH在7.5-8.0之间，吸附7-10 h。
5.根据权利要求1 所述的一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于步骤（3）中首先用60-65 ℃的清水和60-65 ℃、pH为8.5-9.0的0.4-0.7 mol/L的NaCL溶液冲洗浸泡。
6.根据权利要求1 所述的一种油肠中肝素钠的提取工艺，其特征在于步骤（3）中脱附液的温度是55-60 ℃，第一次脱附液的质量为0.8-1.3倍树脂质量，第二次脱附液的质量为1.0-1.4倍树脂质量，第三次脱附液的质量为1.1-1.4倍树脂质量。
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