CN107522794A - 一种白芨多糖胶提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药化工领域，具体是一种白芨多糖胶提取方法。本发明先用乙醇对白芨进行提取，除去其中的醇溶性杂质，再用纤维素酶及果胶酶破坏白芨的细胞壁，使白芨细胞中的白芨多糖最大限度的溶出，最后使用醇沉法获得白芨多糖胶固体，得到了一种白芨多糖提取效率高，且对白芨多糖破坏性小的白芨多糖胶提取方法。通过本发明的方法得到的白芨多糖胶纯度高，白芨多糖损失少。
Description
技术领域
本发明涉及医药化工领域，具体是一种白芨多糖胶提取方法。
背景技术
白芨是兰科白芨属植物，又称小白芨、莲及草、雪如末等，千百年来一直作为传统中药使用，其主要功能是敛疮止血、补肺、消肿生肌等。白芨鳞茎中含有大量水溶液性多糖，其化学成分主要是葡萄甘露聚糖，其是白芨胶的主要功能性成分。白芨多糖胶是一种优良的天然增稠剂，是安全性较高的医药原料、性能卓越的药用辅料和有相当发展前景的生物医学材料。此外，白芨多糖胶还可应用于日化产品中，替代化学增稠剂，并具有减少刺激性、保护皮肤、延缓衰老等功能。
由于目前白芨的市场需求日渐扩大，近年来我国大部分地区的野生白芨遭到过度采挖，野生白芨急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。
通过提升白芨的提取效率，可以使在不增加白芨消耗量的情况下增加白芨提取产物，以满足日渐增多的白芨提取物需求量。
目前，常规的白芨胶提取方法，效率不够高，因此常使用高温、超声、加酸等辅助手段来增加提取效率，但是这些手段会对多糖等有益成分造成一定的破坏，导致所得成品白芨胶品质下降。因此，寻找一种提取效率较高，又不会大量破坏其中多糖等有益成分的白芨多糖胶提取方法是重中之重。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种白芨多糖胶提取方法，本发明所述的白芨多糖胶提取方法包括如下步骤：
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入3-5倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95-98％乙醇进行加热回流提取，使其中醇溶性杂质溶解在乙醇中；
(3)将提取后的白芨浆过滤，除去醇溶性杂质，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5-6倍量的水、2.5-3.5％的纤维素酶、0.7-0.9％的果胶酶，45-60℃加热回流提取65-75min，破坏白芨细胞壁，使白芨多糖逸出并溶于水中，升温至95℃并保持2-3min将酶灭活，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3-4倍量的水，90-98℃加热回流提取45-50min，使沉淀中未溶出的白芨多糖溶出，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的1/3-1/2；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.5-3倍体积的95-98％乙醇溶液，6-12℃静置待多糖沉淀，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4-5次，洗去醇溶性杂质；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
所述步骤(2)，其中的加热回流提取，是用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.3-1.8h。使用高浓度的乙醇可以充分洗去醇溶性杂质，并且避免白芨多糖溶解造成损失。
所述步骤(2)，是先用0.2-0.7％的蛋白酶对白芨浆进行处理，使白芨浆中蛋白质分解，以便于洗去。
所述加热回流提取，在提取过程中，使用240W的超声波对溶液进行超声，以增加提取效率，但会破坏小部分白芨多糖。
所述收集沉淀，是将静置后的混悬液进行抽滤，取滤渣。
所述收集沉淀，是将静置后的混悬液在2600r/min离心7-8min，弃去清液。
所述步骤(9)，是先脱去沉淀中的残留蛋白质，再进行冷冻干燥，以提高白芨多糖胶的纯度。
所述脱去沉淀中的残留蛋白质，是将沉淀用去离子水完全溶解，加入20％Sevage试剂(将氯仿、正丁醇按照5：1的体积比混合而成)，振荡，离心至有机、无机液面交界处无白色混悬，除去有机层。
所述脱去沉淀中的残留蛋白质，是将沉淀用去离子水完全溶解，在-26.5℃冻结3h，然后在47.2℃解冻，反复6次，离心除去沉淀，收集清液。
与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：
本发明先用乙醇对白芨进行提取，除去其中的醇溶性杂质，再用纤维素酶及果胶酶破坏白芨的细胞壁，使白芨细胞中的白芨多糖最大限度的溶出，最后使用醇沉法获得白芨多糖胶固体，得到了一种白芨多糖提取效率高，且对白芨多糖破坏性小的白芨多糖胶提取方法。通过本发明的方法得到的白芨多糖胶纯度高，白芨多糖损失少。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
实施例2
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入3倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用90％的乙醇在60℃下加热回流提取1.3h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5倍量的水、2.5％的纤维素酶、0.7％的果胶酶，45℃加热回流提取65min，升温至95℃并保持2min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3倍量的水，90℃加热回流提取45min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的1/3；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.5倍体积的95％乙醇溶液，6℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
实施例3
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入5倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.8h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入6倍量的水、3.5％的纤维素酶、0.9％的果胶酶，60℃加热回流提取75min，升温至95℃并保持3min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入4倍量的水，98℃加热回流提取50min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的1/2；
(7)向浓缩后的溶液中加入3倍体积的98％乙醇溶液，12℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗5次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
实施例4
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)向白芨浆中加入0.45％的蛋白酶，静置2h，再用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
实施例5
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
所有加热回流提取，在提取过程中，使用240W的超声波对溶液进行超声。
实施例6
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液在2600r/min离心7.5min，弃去清液，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
实施例7
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将沉淀用去离子水完全溶解后，加入20％Sevage试剂(将氯仿、正丁醇按照5：1的体积比混合而成)，振荡，离心至有机、无机液面交界处无白色混悬，除去有机层，将水层进行冷冻干燥，即得。
实施例8
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入4倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.5h；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5.5倍量的水、3％的纤维素酶、0.8％的果胶酶，47.5℃加热回流提取70min，升温至95℃并保持2.5min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3.5倍量的水，94℃加热回流提取47.5min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的5/12；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.75倍体积的96.5％乙醇溶液，9℃静置待多糖沉淀，将静置后的混悬液进行抽滤，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4次；
(9)将沉淀用去离子水完全溶解后，在-26.5℃冻结3h，然后在47.2℃解冻，反复6次，离心除去沉淀，将清液进行冷冻干燥，即得。
对比例1
(1)取干白芨用40℃温热水进行浸泡，水料质量比为4:1，浸泡5小时后进行切片，切片厚度为2mm，备用；
(2)按照质量比为1:12的比例，在白芨片中加入纯化水，先用200w超声波处理22min，再进行加热回流提取，回流提取时间50min，回流提取温度85℃，回流结束后分离渣液，渣料重复回流提取3次；
(3)合并回流提取液，浓缩至比重为1.03止；
(4)待浓缩液温度冷却到45℃时，加入浓缩物质量1.0％酶制剂(胰蛋白酶+羧肽酶，质量比1:1)进行水解，水解时间50min，然后加入浓缩物质量0.3％的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间25min，最后离心分离收集上清液；
(5)按体积比1:6的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉18h，离心收取沉淀，对沉淀用无水乙醇洗涤3次；
(6)洗涤后的沉淀加入蒸馏水进行溶解，依次经过大孔吸附树脂(NKA-9)和离子交换树脂(CL-6B)，过柱后收集滤液；
(7)滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
本对比例是采用超声加热回流提取与酶解相结合的方法。
将实施例1-8、对比例1所得的白芨多糖胶的提取率及多糖含量进行对比。
对比可知，本发明的提取方法在白芨多糖胶的提取率及所得白芨多糖胶的多糖含量方面都优于采用超声加热回流提取与酶解相结合的方法，说明本发明的方法在提升白芨多糖胶提取率的同时，还很好的保护了白芨多糖胶不被破坏。
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种白芨多糖胶提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将鲜白芨切碎成0.5-1.5cm的小块，加入3-5倍量的水，研磨成浆；
(2)将白芨浆用95-98％乙醇进行加热回流提取；
(3)将提取后的白芨浆过滤，取滤渣，得到滤渣a；
(4)向滤渣a中加入5-6倍量的水、2.5-3.5％的纤维素酶、0.7-0.9％的果胶酶，45-60℃加热回流提取65-75min，升温至95℃并保持2-3min，趁热过滤，得到滤液a与滤渣b；
(5)向滤渣b中加入3-4倍量的水，90-98℃加热回流提取45-50min，进行过滤，取滤液，得到滤液b；
(6)将滤液a与滤液b合并，浓缩至体积为合并滤液的1/3-1/2；
(7)向浓缩后的溶液中加入2.5-3倍体积的95-98％乙醇溶液，6-12℃静置待多糖沉淀，收集沉淀；
(8)将沉淀用无水乙醇冲洗4-5次；
(9)将冲洗后的沉淀进行冷冻干燥，即得。
2.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述步骤(2)，其中的加热回流提取，是用95％的乙醇在60℃下加热回流提取1.3-1.8h。
3.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述步骤(2)，是先用0.2-0.7％的蛋白酶对白芨浆进行处理。
4.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述加热回流提取，在提取过程中，使用240W的超声波对溶液进行超声。
5.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述收集沉淀，是将静置后的混悬液进行抽滤，取滤渣。
6.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述收集沉淀，是将静置后的混悬液在2600r/min离心7-8min，弃去清液。
7.根据权利要求1所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述步骤(9)，是先脱去沉淀中的残留蛋白质，再进行冷冻干燥。
8.根据权利要求7所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述脱去沉淀中的残留蛋白质，是将沉淀用去离子水完全溶解，加入20％Sevage试剂(将氯仿、正丁醇按照5：1的体积比混合而成)，振荡，离心至有机、无机液面交界处无白色混悬，除去有机层。
9.根据权利要求7所述的白芨多糖胶提取方法，其特征在于，所述脱去沉淀中的残留蛋白质，是将沉淀用去离子水完全溶解，在-26.5℃冻结3h，然后在47.2℃解冻，反复6次，离心除去沉淀，收集清液。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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