CN104448049A - 一种从肠衣中提取肝素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从肠衣中提取肝素钠的方法：技术方案是，先将猪小肠的肠衣洗净，用搅碎机绞碎，混合均匀，投入反应锅中，采用盐解加酶解，以及二次酶解法，控制溶液的盐度，PH，温度等重要条件，从酶解液中运用新型树脂吸附法，运用正向反相吸附法，只吸附溶液中分子量适用段的肝素钠，采用分步洗脱法，洗脱树脂，得到不同分子量分步的肝素钠。得到符合药用安全的原料药，增加了肝素钠来源的途径，创造了巨大的社会经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的说涉及从猪肠衣中在加工提取肝素钠的新工艺。
背景技术
肝素钠是一种抗凝血类原料药，是一种高度硫酸化的黏多糖硫酸酯钠盐，最早是由Mclean等人在狗的肝脏组织里分离出的一种天然产物，经过活性研究发现，此天然产物具有凝血作用。后来肝素具有的最优的作用抗凝血性被科学家Brinkhous等人进一步确认和证实了。随着科学技术的进步和发展，越来越多的科学家对肝素钠表现出了极大的兴趣，也推动肝素钠的研究，Charles等人最早作为抗凝血剂应用到临床上的研究，在此之后肝素钠作为商业产品大量应用，肝素钠在抗凝血方面表现出的优越性在全世界产生了广泛的影响，受到了各个国家的广泛重视。
发明内容
本发明提供一种从肠衣中提取肝素钠的新工艺，丰富了肝素钠的制备来源，创造了巨大的社会经济效益。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一、新树脂的处理方法
（1）、将树脂置于较大的容器内，用清水且最好用纯水漂洗干净，抽干，用80~90%工业酒精（或无水乙醇）浸泡24小时左右，洗去树脂中的有机杂质，抽干。（酒精可回收）
（2）、用40-50℃热水反复清洗至无酒精味，抽干。
（3）、用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡2~3小时，并不断地翻动，用纯水洗至近中性。
（4）、用2倍于树脂量的4%(1mol/L)NaOH溶液浸泡2小时，用纯水洗至近中性，抽干。
（5）、最后再用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡3~4小时，并不断搅拌，用纯水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小时，用水洗净盐水，抽干，备用。
二、肠衣提取肝素钠
（1）将肠衣投入反应锅中，按肠衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液调pH为8~9之间，同时搅拌升温达40℃时左右，维持2.5h后，升温达60℃时，按肠衣重的2%加入NaCl固体，然后升温到90℃，调pH为6~7之间，保持10min后直接加热到沸腾，然后趁热用200目尼龙筛子过滤。
三、吸附
待滤液冷却至60℃左右时，用3mol/L的NaOH溶液调pH8～9之间，然后加入已处理好的树脂，加量为滤液量的5%，搅拌吸附6h后，静置1h，用200目尼龙筛子过滤。整个吸附过程的pH保持8～9。
四、脱附
在树脂中加入等体积自来水漂洗数次，再用3mol/LNaCl溶液搅拌洗脱树脂2h，NaCl溶液的用量与树脂量相等；脱附后以200目尼龙筛子过滤，收集滤液。重复脱附两次，合并几次滤液。
五、沉淀
在滤液中加入等体积乙醇，搅拌10min，然后静置12h以上。
六、脱水干燥
收集下层沉淀物，乙醇脱水3次。将沉淀置于60℃烘箱中烘干得肝素钠粗品。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：
一、新树脂的处理方法
（1）、将20KG树脂置于较大的容器内，用清水且最好用纯水漂洗干净，抽干，用90%工业酒精（或无水乙醇）浸泡24小时，洗去树脂中的有机杂质，抽干。（酒精可回收）
（2）、用50℃热水反复清洗至无酒精味，抽干。
（3）、用40L的4%HCl溶液浸泡3小时，并不断地翻动，用纯水洗至中性。
（4）、用40L的4%(1mol/L)NaOH溶液浸泡2小时，用纯水洗至中性，抽干。
（5）、最后再用40L的4%HCl溶液浸泡4小时，并不断搅拌，用纯水洗至中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小时，用水洗净盐水，抽干，备用。
二、肠衣提取肝素钠
（1）将50KG肠衣投入反应锅中，加水50KG，加 2.5KG胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液调pH为9，同时搅拌升温达40℃时，维持2.5h后，升温达60℃时，加入NaCl固体1KG，然后升温到90℃，调pH为7之间，保持10min后直接加热到沸腾，然后趁热用200目尼龙筛子过滤。
三、吸附
待滤液冷却至60℃时，用3mol/L的NaOH溶液调pH9之间，然后加入已处理好的树脂25KG，搅拌吸附6h后，静置1h，用200目尼龙筛子过滤。整个吸附过程的pH保持9。
四、脱附
在树脂中加入50L自来水漂洗数次，再用3mol/LNaCl溶液搅拌洗脱树脂2h，NaCl溶液的用量为25L；脱附后以200目尼龙筛子过滤，收集滤液。重复脱附两次，合并几次滤液。
五、沉淀
在滤液中加入50L乙醇，搅拌10min，然后静置12h以上。
六、脱水干燥
收集下层沉淀物，乙醇脱水3次。将沉淀置于60℃烘箱中烘干得肝素钠粗品。
以上所述，仅是本发明的较佳实施案例而已，并非是对本发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述解释的技术内容加以变更或改型为同等变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (2)
1.一种从肠衣中提取肝素钠的方法，其特征在于，采用盐解加酶解，以及二次酶解法酶解绞碎后的肠衣，用新型树脂采用正向反相两种吸附方法，吸附肝素钠，结合分级洗脱树脂法，得到不同分子量片段的肝素钠。
2.根据权利要求1所述的一种从肠衣中提取肝素钠的方法，其特征包括如下步骤：
一、新树脂的处理方法
（1）、将树脂置于较大的容器内，用清水且最好用纯水漂洗干净，抽干，用80~90%工业酒精（或无水乙醇）浸泡24小时左右，洗去树脂中的有机杂质，抽干；（酒精可回收）
（2）、用40-50℃热水反复清洗至无酒精味，抽干；
（3）、用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡2~3小时，并不断地翻动，用纯水洗至近中性；
（4）、用2倍于树脂量的4%(1mol/L)NaOH溶液浸泡2小时，用纯水洗至近中性，抽干；
（5）、最后再用2倍于树脂量的4%HCl溶液浸泡3~4小时，并不断搅拌，用纯水洗至近中性，用23%(4mol/L)NaCl溶液浸泡2小时，用水洗净盐水，抽干，备用；
二、肠衣提取肝素钠
（1）将肠衣投入反应锅中，按肠衣重的5%加入胰蛋白酶，用3mol/L的NaOH溶液调pH为8~9之间，同时搅拌升温达40℃时左右，维持2.5h后，升温达60℃时，按肠衣重的2%加入NaCl固体，然后升温到90℃，调pH为6~7之间，保持10min后直接加热到沸腾，然后趁热用200目尼龙筛子过滤；
三、吸附
待滤液冷却至60℃左右时，用3mol/L的NaOH溶液调pH8～9之间，然后加入已处理好的树脂，加量为滤液量的5%，搅拌吸附6h后，静置1h，用200目尼龙筛子过滤；
整个吸附过程的pH保持8～9；
四、脱附
在树脂中加入等体积自来水漂洗数次，再用3mol/LNaCl溶液搅拌洗脱树脂2h，NaCl溶液的用量与树脂量相等；脱附后以200目尼龙筛子过滤，收集滤液；
重复脱附两次，合并几次滤液；
五、沉淀
在滤液中加入等体积乙醇，搅拌10min，然后静置12h以上；
六、脱水干燥
收集下层沉淀物，乙醇脱水3次；
将沉淀置于60℃烘箱中烘干得肝素钠粗品。
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