CN103665147A - 一种生长激素释放因子衍生物的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种生长激素释放因子衍生物的合成方法涉及CJC-1295的固相合成法，所述方法以氨基树脂为载体，由Fmoc-Lys(Tfa)-树脂开始，逐一偶联氨基酸，并采用较便宜的试剂来脱除三氟乙酰基保护基，本发明的方法更适宜工业大规模操作，为CJC-1295的大规模生产提供了一种全新的思路。
Description
技术领域
本发明涉及一种多肽的合成方法，特别涉及一种生长激素释放因子类似物的合成方法，更具体而言，涉及CJC-1295的合成方法。
背景技术
生长激素释放因子（GRF）（也称为生长激素释放激素（GHRH））是由下丘脑的弓状核产生的一种含有44个氨基酸的肽激素，GRF刺激生长激素从脑垂体分泌。已发现GRF的活性部分为含有29个氨基酸的长肽，并将其命名为GRF(1-29)。
CJC-1295是由加拿大ConjuChem公司发明的一种长效GRF类似物，
与原GRF(1-29)肽序相比，CJC-1295分别用D-Ala、Gln、Ala和Leu替换第2、8、15和27位的氨基酸。通过如此修饰可得到更稳定的肽：第2位氨基酸的替换可防止DPP-IV酶的降解，第8位氨基酸替换可减少天冬酰胺的重排或氨基水解形成天冬氨酸，第15位氨基酸的替换可增强生物活性，第27位氨基酸的替换可防止Met的氧化。此外，通过在GRF上修饰药物亲和复合物(DAC)，可延长其半衰期。与传统GRF相比，CJC-1295的半衰期可延长到7天以上。
CJC-1295具有与人类生长激素（HGH）相同的功效。它可以提高肌肉质量、增加骨密度、改善蛋白质合成、增加IGF-1水平、增强免疫系统等等。另外，CJC-1295还可以促进慢波睡眠（深度睡眠），慢波睡眠有利于肌肉生长维持最佳水平，同时有利于记忆的保存。由于CJC-1295具有较长的半衰期及较好的稳定性，因此成为目前研究的热点。
关于合成CJC-1295的一般方法，参见Bioorg.Med.Chem.Lett.14(2004)841–845；Endocrinology,July2005,146(7):3052–3058。其中，在Fmoc/tBu固相多肽合成法中由Fmoc-Lys(Alloc)-OH为初始分子逐一偶联氨基酸，然后通过Pd(0)/冰醋酸/N-甲基吗啉/氯仿去除烯丙氧羰基保护基（Alloc），再偶联3-马来酰亚胺基丙酸(MPA)，该方法采用的脱保护试剂Pd(0)/冰醋酸/N-甲基吗啉/氯仿较昂贵，不利于大规模生产。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供CJC-1295的固相合成方法，该方法的原料易得、成本较低而且脱保护基的方式与现有技术相比较更易于工作操作。本发明的合成CJC-1295的方法包括下述步骤：
（1）以氨基树脂为载体与Fmoc-Lys(Tfa)-OH合成Fmoc-Lys(Tfa)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上待偶联的氨基酸，得到肽树脂A:
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Tfa)-树脂；
（2）用氨水和DMF的混合物将步骤（1）中得到的肽树脂A上的Lys的保护基团去除，得到肽树脂B：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys-树脂；
（3）通过缩合剂将3-马来酰亚胺基丙酸与所述肽树脂B偶联，得到肽树脂C：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(MPA)-树脂；
（4）将肽树脂C裂解、脱除保护基得到CJC-1295：
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys(MPA)-NH2。
本发明合成CJC-1295的固相合成法与现有技术常用的固相合成法相比，脱除保护基的试剂更便宜且脱除方式更简易；并且反应条件温和、收率较高，更适宜工业大规模操作，为CJC-1295的大规模生产提供了一种全新的思路。
具体实施方式
术语解释
本文通篇的术语“固相多肽合成方法”是指多肽合成领域已知的Fmoc固相合成方法，例如记载于Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach,W.C.Chan,Peter D.White著，March2,2000（ISBN-10:0199637245）,英国Oxford University Press。
本文通篇的术语“肽树脂”是指多肽的C端连有树脂的多肽。
本文通篇的术语“待偶联的氨基酸”是指固相多肽合成方法中，按照肽序从C端到N端，依次偶联的氨基酸。
说明书和权利要求书中所使用英文缩写的含义列于下表中：
本发明提供一种CJC-1295的固相合成方法，包括下述步骤：
（1）以氨基树脂为载体与Fmoc-Lys(Tfa)-OH合成Fmoc-Lys(Tfa)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上待偶联的氨基酸，得到肽树脂A:
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Tfa)-树脂；
（2）用氨水和DMF的混合物将步骤（1）中得到的肽树脂A上的Lys的保护基团去除，得到肽树脂B：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys-树脂；
（3）通过缩合剂将3-马来酰亚胺基丙酸与所述肽树脂B偶联，得到肽树脂C：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(MPA)-树脂；
（4）将肽树脂C裂解得到CJC-1295。
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys(MPA)-NH2。
其中，步骤（1）中的氨基树脂选自现有技术常用的氨基树脂，例如Rink-Amide-MBHA树脂、Rink-Amide树脂、Rink-Amide-AM树脂或Sieber酰胺树脂；所述氨基树脂的替代度为0.2mmol/g～0.5mmol/g。
步骤（1）中所述的固相多肽合成方法包括：1）脱除Fmoc，接着用溶剂洗涤树脂，直至用检测方法检测到完全脱除Fmoc为止；2）将合适量的待偶联氨基酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固体反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；3）重复1）和2）。
其中脱除Fmoc的试剂可为本领域已知的可实现该目的的任何试剂，优选20%的哌啶/DMF溶液（DBLK），即哌啶：DMF（体积比）为1:4的混合溶液。
步骤（1）中Fmoc-Lys(Tfa)-树脂与待偶联的氨基酸的摩尔比为1:(2～5)，优选为1:3。
步骤（1）中的固相多肽合成方法在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂选自DIPCDI/HOBt、PyBOP/HOBt/DIPEA、TBTU/HOBt/DIPEA或HBTU/HOBt/DIPEA，优选HBTU、HOBt和DIPEA的组合物，其中各成分的比例以摩尔比计为HOBt:HBTU:DIPEA=1:1:1～1.5，优选为HOBt:HBTU:DIPEA=1:1:1.5；且待偶联的氨基酸:HOBt=1:(1～2)(摩尔比)。
上文提及的固相多肽合成方法在固相反应柱中进行。对固相反应柱无特别限制，可为可实现此目的的任意固相反应柱。此外，每种氨基酸进行偶联反应的时间通常为1.5-4小时，优选2-3小时；压力优选为常压，也可在适当提高或降低的压力下进行；温度优选为室温（即20±5℃），也可在适当提高或降低的温度下进行。
上文提及的固相多肽合成方法优选将树脂在偶联之前进行溶胀，所述洗涤和溶胀的步骤可采用本领域已知可实现该目的的任何试剂进行，优选DMF。所述反应中应用的检测方法是本领域已知的可实现此目的的任意方法，例如色谱法或化学标定法，优选使用可判定反应终点的试剂，优选茚三酮，当使用茚三酮时，若树脂显色则说明多肽中有游离的酰胺，即酰胺氮上无保护基。
步骤（2）中对氨水的浓度无具体限定，可为本领域常用的氨水浓度，例如25%-30%，优选25%-28%（重量比，20±5℃），且所述混合物中氨水和DMF的体积比为1:5～20，优选为1:10；脱保护反应的时间为1～12小时，优选6小时；
步骤（2）中脱除Lys的保护基团使用的氨水的工业成本远远低于现有技术中所使用的Pd(0)/冰醋酸/N-甲基吗啉/氯仿（其中Pd(0)的工业成本为30000元/公斤）。
步骤（3）中3-马来酰亚胺基丙酸(MPA)与肽树脂B的摩尔比为1:(2～5)，优选1:3；在该步反应中，称取摩尔比为1:(1～2):(1～2):(1～3)的3-马来酰亚胺基丙酸、HOBt、HBTU和DIPEA的混合物。将3-马来酰亚胺基丙酸、HOBt、HBTU和DIPEA溶于DMF中预活化，然后加入到肽树脂中，反应1～3小时。
步骤（4）中的裂解过程在裂解液的存在下进行。所述裂解液为三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇和苯甲醚按(80～90):(5～10):(3～5):(2～5)的体积比混合的混合物，所述混合体积比优选为90:5:3:2。具体而言，将步骤（3）得到肽树脂B加入上述混合液中，用量为每1g肽树脂使用10～20mL混合物。
本发明优选还包括CJC-1295的纯化步骤。所述纯化步骤可采用本领域已知的任意多肽纯化技术进行，优选采用反相高压液相色谱法。进一步地，所述反相高压液相色谱法包括：以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1%三氟乙酸/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。
实施例
为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，应理解，下述实施例意在说明，不对本发明构成限制。
在本说明书中使用的氨基树脂购自天津南开合成科技有限公司，各种带保护基的氨基酸购自成都凯泰新技术有限公司，3-马来酰亚胺基丙酸购自梯希爱(上海)化成工业发展有限公司，偶联试剂购自苏州天马有限公司，其它溶剂和试剂为普通市售品。
实施例1：肽树脂A的制备
称取替代度为0.20mmol/g的Rink-Amide树脂25.00克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF（V/V）溶液5+10分钟（加入两次20%哌啶/DMF，各反应5分钟和10分钟，下同）脱除Fmoc，脱除完毕用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取12.15克Fmoc-Lys(Tfa)-OH，4.05克HOBt，9.51克HBTU，用75ml DMF和75ml DCM溶解，冰水浴下加入6.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点（如树脂无色透明则终止反应；如树脂显色则延长反应1小时，下同）。
反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF（V/V）溶液5+10分钟脱除Fmoc，脱除完毕用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-Arg(Pbf)-OH16.30克，4.05克HOBt，9.51克HBTU，用75ml DMF和75ml DCM溶解，冰水浴下加入6.5mlDIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点。
按照同样的方法依次偶联后续的氨基酸，偶联结束，树脂收缩抽干，得到53.50克肽树脂A：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Tfa)-树脂，树脂增重率97.8%。
实施例2：肽树脂A的制备
称取替代度为0.45mmol/g的Rink-Amide树脂11.10克，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟，加入20%哌啶/DMF（V/V）溶液5+10分钟脱除Fmoc，脱除完毕用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取12.15克Fmoc-Lys(Tfa)-OH，4.05克HOBt，9.51克HBTU，用75ml DMF和75ml DCM溶解，冰水浴下加入6.5ml DIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点。
反应结束，用DMF洗涤树脂3次，加入20%哌啶/DMF（V/V）溶液5+10分钟脱除Fmoc，脱除完毕用DMF洗涤树脂6次，茚三酮检测树脂有颜色。称取Fmoc-Arg(Pbf)-OH16.30克，4.05克HOBt，9.51克HBTU，用75ml DMF和75ml DCM溶解，冰水浴下加入6.5mlDIPEA活化5分钟，将混合液加入到反应柱中，室温反应2小时，以茚三酮检测反应终点。
按照同样的方法依次偶联后续的氨基酸，偶联结束，树脂收缩抽干，得到38.60克肽树脂A，树脂增重率94.7%。
实施例3：Tfa保护基的脱除
对该保护基脱除步骤的一般说明：
首先，用25%氨水/DMF溶液脱除Tfa保护基，然后用茚三酮检测树脂，如果树脂变成蓝色，则证明赖氨酸侧链的Tfa保护基已经脱除；
然后，取少量产物将其裂解（所用的裂解液无法脱除Tfa保护基，但可脱除其他常用的保护基，例如tBu、OtBu、Trt、Pbf、Boc等），检测质谱数据，将其色谱数据与作为参照物的没有脱除Tfa保护基的多肽的色谱数据进行比较，如果在产物的色谱图上没有参照物的峰，则证明Tfa保护基已脱除完全。
以下是该脱除Tfa保护基步骤的非限制性的实施例：
将5g实施例1中得到的肽树脂A加入到圆底烧瓶中，加入50ml25%氨水/DMF溶液（1:10，体积比）在室温下反应2小时，树脂用DMF/水（1:1，体积比）洗3遍，再用DMF洗5遍，二氯甲烷洗两遍，用茚三酮检测树脂为蓝紫色。树脂收缩抽干，得到4.93克肽树脂B。
取少量树脂用三氟乙酸：甲硫醚：二硫醇：甲醚（90:5:3:2），室温振荡2小时，过滤，裂解液加入无水乙醚中，得到黄色固体。用乙醚洗三遍，得到粗产品
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys-NH252.3mg。
分子量：3497.13ESI:3497.50(M+)；HPLC:30.5%
参照物：
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys(Tfa)-NH2的分子量为3593.15；ESI:3593.50(M+)。
实施例4：Tfa保护基的脱除
以与实施例3相似的方法进行保护基的脱除，不同在于氨水浓度为28%（重量比），得到4.95克肽树脂B。
实施例5：Tfa保护基的脱除
以与实施例3相似的方法进行保护基的脱除，不同在于反应时间为12小时，得到4.93克肽树脂B。
实施例6：Tfa保护基的脱除
以与实施例3相似的方法进行保护基的脱除，不同在于脱除保护基的试剂为25%氨水/DMF溶液（1:5，体积比）且反应时间为12小时，得到4.96克肽树脂B。
实施例7：Tfa保护基的脱除
以与实施例3相似的方法进行保护基的脱除，不同在于脱除保护基的试剂为25%氨水/DMF溶液（1:20，体积比）且反应时间为12小时，得到4.90克肽树脂B。
实施例8：Tfa保护基的脱除
将实施例2中得到的38.6g（5mmol）肽树脂A加入到圆底烧瓶中，加入50ml25%氨水/DMF溶液（1:10，体积比）在室温下反应6小时，树脂用DMF/水（1:1，体积比）洗3遍，再用DMF洗5遍，二氯甲烷洗两遍，用茚三酮检测树脂为蓝紫色。树脂收缩抽干，得到38.0克肽树脂B。
实施例9：制备肽树脂C
将7.7g实施例8得到的肽树脂B（1mmol）加入到固相反应柱中，加入DMF溶胀30分钟。加入0.338g3-马来酰亚胺基丙酸(MPA)，0.324g HOBt，0.761g HBTU，0.51ml DIPEA室温反应3小时，用茚三酮检测树脂为无色透明。偶联结束，树脂收缩抽干，得到7.8克肽树脂C。
实施例10：制备肽树脂C
以与实施例9相似的方法制备肽树脂C，不同在于加入的3-马来酰亚胺基丙酸和偶联剂的量分别为0.507g3-马来酰亚胺基丙酸，0.486gHOBt，1.141g HBTU，0.77ml DIPEA，得到7.7克肽树脂C。
实施例11：制备肽树脂C
以与实施例9相似的方法制备肽树脂C，不同在于加入的3-马来酰亚胺基丙酸和偶联剂的量分别为0.845g3-马来酰亚胺基丙酸，0.811gHOBt，1.902g HBTU，1.28ml DIPEA，得到7.8克肽树脂C。
实施例12：粗产品裂解
将实施例10得到的7.7g肽树脂加入到圆底烧瓶中，用77ml三氟乙酸：甲硫醚：二硫醇：甲醚（体积比为90:5:3:2），室温振荡2小时，过滤，裂解液加入无水乙醚中，得到3.82g呈黄色固体的CJC-1295，粗肽收率为104.6%。
分子量：3647.26；ESI:3647.50(M+)；HPLC纯度:35.2%。
实施例13：粗产品裂解
将实施例11得到的7.8g肽树脂加入到圆底烧瓶中，用156ml三氟乙酸：甲硫醚：二硫醇：甲醚（体积比为90:5:3:2），室温振荡2小时，过滤，裂解液加入无水乙醚中，得到3.72g呈黄色固体的CJC-1295，粗肽收率为102.0%。
分子量：3647.26；ESI:3647.65(M+)；HPLC纯度:36.1%。
实施例14：CJC-1295粗肽的纯化
取实施例12制备得到的CJC-1295粗肽，采用NOVASEPRP-HPLC系统，波长220nm，色谱柱为反相C18柱，常规0.1%TFA/乙腈为流动相纯化，除盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到类白色精肽固体1.10g，收率为30.15%，质谱信号为3647.65。HPLC纯度>95.0%。
虽然已参照特定实施方案对本发明进行了说明，但本领域技术人员应认识到的是，在不偏离本发明主旨和范围的情况下，可对所述实施方案进行改变或改进，本发明范围通过所附权利要求书限定。
Claims (10)
1.一种合成CJC-1295的方法，包括下述步骤：
（1）以氨基树脂为载体与Fmoc-Lys(Tfa)-OH合成Fmoc-Lys(Tfa)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上待偶联的氨基酸，得到肽树脂A:
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Tfa)-树脂；
（2）用氨水和DMF的混合物将步骤（1）中得到的肽树脂A上的Lys的保护基团去除，得到肽树脂B：
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys-树脂；
（3）通过缩合剂将3-马来酰亚胺基丙酸与所述肽树脂B偶联，得到肽树脂C；
Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-Leu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(MPA)-树脂；
（4）将肽树脂C裂解得到CJC-1295:
H-Tyr-dAla-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Gln-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Ala-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Leu-Ser-Arg-Lys(MPA)-NH2。
2.权利要求1的方法，其中，步骤（1）中的氨基树脂为Rink-Amide-MBHA树脂、Rink-Amide树脂、Rink-Amide-AM树脂或Sieber酰胺树脂；所述氨基树脂的替代度为0.2mmol/g～0.5mmol/g。
3.权利要求1的方法，其中，步骤（1）中Fmoc-Lys(Tfa)-树脂与待偶联的氨基酸的摩尔比为1:(2～5)，优选为1:3。
4.权利要求1的方法，其中，步骤（1）中的固相多肽合成方法在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为DIPCDI/HOBt、PyBOP/HOBt/DIPEA、TBTU/HOBt/DIPEA或HBTU/HOBt/DIPEA，优选HBTU、HOBt和DIPEA的组合物，其中各成分的比例以摩尔比计为HOBt:HBTU:DIPEA=1:1:1～1.5，优选为HOBt:HBTU:DIPEA=1:1:1.5；且待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比为1:(1～2)。
5.权利要求1的方法，其中，在步骤（1）中待偶联的氨基酸与HOBt的摩尔比为1:(1～2)。
6.权利要求1的方法，其中，步骤（2）中所述混合物中氨水和DMF的体积比为1:5～20，优选为1:10。
7.权利要求1的方法，其中，步骤（3）中3-马来酰亚胺基丙酸与肽树脂B的摩尔比为1:(2～5)，优选1:3。
8.权利要求1的方法，其中，步骤（3）在偶联剂的存在下进行，所用的偶联剂为HBTU、HOBt和DIPEA的组合物，且3-马来酰亚胺基丙酸、HOBt、HBTU和DIPEA的摩尔比为1:(1～2):(1～2):(1～3)。
9.权利要求1的方法，其中，步骤（4）中所用的裂解液为三氟乙酸、苯甲硫醚、乙二硫醇和苯甲醚按(80～90):(5～10):(3～5):(2～5)的体积比混合的混合物，所述混合体积比优选为90:5:3:2。
10.权利要求1-9中任一项的方法，还包括CJC-1295的纯化步骤其中纯化步骤采用反相高压液相色谱法，包括：以反相十八烷基硅烷为固定相，以0.1%三氟乙酸/乙腈为流动相，收集目的峰馏分，浓缩冻干。
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