CN103619864A - 5-氮杂胞苷的合成 - Google Patents

Abstract

本文提供用于制备5-氮杂胞苷的方法，所述5-氮杂胞苷可用于治疗、预防和/或控制疾病或病况，包括癌症、细胞增殖异常相关病症、血液学病症和骨髓增生异常综合征(MDS)，其中5-氮杂胞苷用以下结构表示：

Description

5-氮杂胞苷的合成

本申请要求2011年3月31日提交的美国临时专利申请号61/470,392的优先权，所述申请的内容通过引用以其整体结合到本文中。

I.领域

本文提供用于制备5-氮杂胞苷(亦称为阿扎胞苷)的方法。5-氮杂胞苷可用于治疗、预防和/或控制疾病或病况，尤其包括癌症、细胞增殖异常相关病症、血液学病症和骨髓增生异常综合征(MDS)。

II.背景

癌症是全球主要的公共健康问题。仅在美国，2006年大约560,000人死于癌症。参见例如U.S.Mortality Data2006，National Center for HealthStatistics，Centers for Disease Control and Prevention(2009)。医学文献中已描述了许多癌症类型。实例包括血癌、骨癌、皮肤癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌和肝癌。癌症的发生率随着总体人口老化并随新的癌症形式的发生而持续攀升。存在对治疗癌症受试者的有效疗法的持续需要。

骨髓增生异常综合征(MDS)是一类各种各样的造血细胞病症。在美国，MDS影响约40,000-50,000人，在欧洲影响75,000-85,000人。MDS的特征可在于伴有形态和成熟受损的蜂窝状骨髓(骨髓组织生成异常)、外周血血细胞减少和因血细胞生成失效所致发展成急性白血病的可变风险。参见例如The Merck Manual953(第17版，1999)；List等,J.Clin.Oncol.8:1424(1990)。

MDS因一个或多个造血细胞谱系发育异常改变(包括髓样细胞系、类红细胞系和巨核细胞系的发育异常改变)的存在而被归类在一起。这些改变导致3个谱系的一个或多个中的血细胞减少。患有MDS的患者可发展成与贫血、中性粒细胞减少(感染)和/或血小板减少(出血)相关的并发症。约10%-约70%的MDS患者可发展成急性白血病。在MDS的早期，血细胞减少的主要原因是程序性细胞死亡(细胞凋亡)增加。随着疾病发展并转化成白血病，白血病细胞的增殖压倒健康骨髓。疾病进程有所不同，其中一些病例表现为无痛疾病，其它则表现激烈，具有转变成白血病急性形式的极短临床进程。有较高风险MDS的大部分人最终经历骨髓衰竭。多达50%的MDS患者在发展成AML前死于并发症，例如感染或出血。

通过考虑患者的既往病史来确定原发和继发MDS：用化学疗法、放射疗法的既往治疗或职业性暴露于有毒物质是根据原发MDS描述继发MDS(sMDS)的因素。在细胞遗传学上，两组间的一个差别是异常核型的复杂性；单一染色体畸变是原发MDS所特有的，而多个改变更常见于继发病症。一些药物可能具有特异性靶标，例如用于17p的羟基脲及用于11q23和21q22的拓扑异构酶抑制剂。MDS恶性细胞的遗传改变主要引起遗传物质(包括可能的肿瘤抑制基因)丢失。

血液学家国际小组French-American-British(FAB)Cooperative Group，将MDS分成5个亚组，将其与急性髓细胞白血病区分开来。参见例如The Merck Manual954(第17版，1999)；Bennett J.M.等,Ann.Intern.Med.,103(4):620-25(1985)；以及Besa E.C.,Med.Clin.North Am.76(3):599-617(1992)。在全部亚型中均发现患者骨髓细胞中的基础性三谱系发育异常改变。可获得有关MDS的病理学、某些MDS分类系统和治疗和控制MDS的具体方法的信息。参见例如美国专利号7,189,740(2007年3月13日授权)，所述专利通过引用以其整体结合到本文中。

临床上已使用核苷类似物治疗病毒感染和癌症。大多数核苷类似物被归类为抗代谢药。在其进入细胞后，核苷类似物成功地使核苷5'-一磷酸、二磷酸和三磷酸磷酸化。

5-氮杂胞苷(National Service Center命名NSC-102816；CAS登记号320-67-2)，亦称为阿扎胞苷、AZA、4-氨基-1-(3,4-二羟基-5-羟甲基-四氢呋喃-2-基)-1H-[1,3,5]三嗪-2-酮、4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1H)-酮或4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-S-三嗪-2(1H)-酮，目前作为药物产品销售。5-氮杂胞苷是核苷类似物，更具体地说是胞苷类似物。5-氮杂胞苷是其相关天然核苷即胞苷的拮抗剂。5-氮杂胞苷也是脱氧胞苷的拮抗剂。5-氮杂胞苷和胞苷间的结构差异是在胞嘧啶环中5位上存在替换碳的氮。5-氮杂胞苷可定义为具有分子式C₈H₁₂N₄O₅、约244.2克/摩尔的分子量和下列结构：

在其掺入复制的DNA中后，5-氮杂胞苷与DNA甲基转移酶形成共价配合物。DNA甲基转移酶负责从头的DNA甲基化，并在复制DNA的子代DNA链中重现已确立的甲基化模式。通过5-氮杂胞苷抑制DNA甲基转移酶导致DNA甲基化不足，从而通过参与正常细胞周期调节、分化和死亡的基因的重新表达，来恢复形态上发育异常的未成熟造血细胞和癌细胞的正常功能。5-氮杂胞苷的细胞毒性作用引起不再对正常细胞生长控制机制起反应的快速分裂细胞(包括癌细胞)死亡。5-氮杂胞苷还掺入RNA中。5-氮杂胞苷的细胞毒性作用可由多种机制引起，包括抑制DNA、RNA和蛋白质合成；掺入RNA和DNA中和激活DNA损伤途径。

已在临床试验中对和5-氮杂胞苷进行了测试，结果显示例如在骨髓增生异常综合征(MDS)治疗中的显著抗肿瘤活性。参见例如Aparicio等,Curr.Opin.Invest.Drugs3(4)：627-33(2002)。5-氮杂胞苷已通过了NCI赞助的用于治疗MDS的试验，并且获准用于治疗MDS的所有FAB亚型。参见例如Kornblith等,J.Clin.Oncol.20(10):2441-52(2002)；Silverman等,J.Clin.Oncol.20(10):2429-40(2002)。5-氮杂胞苷可通过经由其细胞毒活性及其对DNA甲基转移酶的抑制减少转化成AML，以改变MDS的天然进程。在III期研究中，皮下给予的5-氮杂胞苷显著延长有较高风险MDS受试者的生存期和AML转化或死亡的时间。参见例如P.Fenaux等,Lancet Oncol.,2009,10(3):223-32；Silverman等,Blood106(11):摘要2526(2005)。

5-氮杂胞苷难以合成，特别对于大规模的工业制造，部分是因为其在水中的不稳定性所致。例如，5-氮杂胞苷的s-三嗪环在水中易降解。在中性pH的水溶液中，5,6-亚胺双键的水合作用快速发生，接着键裂产生甲酰基衍生物N-(甲酰基脒基)-N’-β-D-呋喃核糖基脲，其脱甲酰基化，不可逆地得到1-β-D-呋喃核糖基-3-脒基脲。参见例如J.A.Beisler,J.Med.Chem.,1978,21(2):204-08；K.K.Chan等,J.Pharm.Sci.1979,68(7):807-12。另外，研究了随pH、温度和缓冲液浓度而变化的5-氮杂胞苷的水解降解。参见例如R.E.Notari等,Pharm.Sci.1975,64(7):1148-57。在pH1时，主要的降解产物为来自5-氮杂胞苷水解的5-氮杂胞嘧啶和5-氮杂尿嘧啶。5-氮杂胞苷在水中的不稳定性对从含有水的溶剂系统(例如反应的后处理阶段所用的溶剂系统)中分离和纯化5-氮杂胞苷提出挑战。

5-氮杂胞苷首先通过始于过乙酰化1-糖基异氰酸酯的多步合成来制备。参见Piskala等,Collect.Czech.Chem.Commun.,1964,29:2060-76。该方法包括具有受控立体化学(1-β构型)的反应性起始原料(异氰酸酯)，其不适于产生大批量的5-氮杂胞苷。用于制备5-氮杂胞苷的许多其它现有方法包括难以按比例扩大的步骤，或包括使用昂贵的试剂。其它方法无法描述产生符合人用纯度标准的活性药物成分(Active PharmaceuticalIngredient,API)所必需的纯化步骤，或者得到差的纯化5-氮杂胞苷产物的总收率。

2006年5月2日授权的美国专利号7,038,038(其通过引用以其整体结合到本文中)，描述了用于制备5-氮杂胞苷的方法，所述方法尤其包括，在非金属路易斯酸(例如三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMS-三氟甲磺酸酯))存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与受保护的β-D-呋喃核糖偶联，并使产物脱保护得到5-氮杂胞苷的步骤。

金属路易斯酸(例如氯化锡)通常不太昂贵，并且比非金属路易斯酸(例如TMS-三氟甲磺酸酯)更易获得。然而，在预定人用的API的合成中使用基于金属的试剂一般需要适当的纯化步骤以除去基于金属的杂质以持续控制最终API中残留金属的水平。为了产生预定用于人的药物物质，现代药品生产管理规范(current Good Manufacturing Practices，cGMP)是适用的。需要适当的可控制杂质水平并确保产生始终符合其预定规格的API批次的程序。例如，在GMP环境中，一个批次具有落入所需规格的重金属含量，而在类似环境下的成批运行具有溢出所需规格的重金属杂质是不可接受的。

对制备尤其是安全的、可扩大规模的、有效的、经济上切实可行的和/或具有其它潜在优势的适于人用的纯的5-氮杂胞苷(特别是工业规模)的方法的巨大需求依然存在。

在本申请的这个部分中任何参考文献的引用都不得解释为承认这类参考文献是本申请的优先技术。

III.概述

本文尤其提供可用于产生5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的安全的、有效的、有成本效益的和/或易于扩大规模的方法。在一个实施方案中，本文提供可用于产生是基本纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供可用于产生是基本化学纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供可用于产生是基本物理纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供可用于产生适用于人的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。

在一个实施方案中，本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤：在金属路易斯酸的存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与受保护的β-D-呋喃核糖反应，得到受保护的5-氮杂胞苷，使受保护的5-氮杂胞苷脱保护，得到5-氮杂胞苷后，对5-氮杂胞苷进行纯化，得到基本上不含一种或多种杂质的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物，所述杂质包括但不限于基于金属的杂质。

在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的盐，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐和甲磺酸盐。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷盐酸盐。在一个实施方案中，本文提供基本上不含一种或多种杂质(例如基于金属的杂质)的5-氮杂胞苷的盐。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的药学上可接受的盐，包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐和甲磺酸盐。在一个实施方案中，本文提供药学上可接受的基本上不含一种或多种杂质(例如基于金属的杂质)的5-氮杂胞苷的盐。

在具体的实施方案中，本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤的任意1、2、3、4、5或6个：

(a)使5-氮杂胞嘧啶与甲硅烷基化试剂反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶；

(b)在金属路易斯酸存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与酰基受保护的β-D-呋喃核糖反应；用水和至少一种中和试剂猝灭反应，得到受保护的5-氮杂胞苷；

(c)在醇中，使受保护的5-氮杂胞苷与选自醇盐、氨和四取代的氢氧化铵的碱反应，得到5-氮杂胞苷；

(d)在有机溶剂中，使得自步骤(c)的5-氮杂胞苷与酸接触，得到5-氮杂胞苷的盐；

(e)在有机溶剂中，使得自步骤(d)的5-氮杂胞苷与碱接触，得到作为游离碱的5-氮杂胞苷；和

(f)使得自步骤(e)的5-氮杂胞苷重结晶。

在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶是下式(A)的化合物：

其中每个R₁独立地为任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₁为直链烷基、支链烷基、环烷基或芳基，包括但不限于甲基、乙基、异丙基、叔丁基、苯基、二甲苯基和苄基。在一些实施方案中，R₁为甲基。

在一个实施方案中，用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂为三甲基甲硅烷基(TMS)试剂，包括但不限于六甲基二硅氮烷(HMDS)和三甲基氯硅烷(TMSCl)。

在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应在硫酸铵的存在下进行。在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应在升高的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应在惰性气氛下进行。在一些实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶作为固体被分离。在其它实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶无需分离而直接用于步骤(b)。

在一个实施方案中，酰基受保护的β-D-呋喃核糖是下式(B)的化合物：

其中每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₂为任选取代的甲基或任选取代的苯基。在一些实施方案中，R₂为甲基。在一些实施方案中，R₂为苯基。在一些实施方案中，酰基受保护的β-D-呋喃核糖是：

在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡或氯化铁。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化铁。

在一个实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷是下式(C)的化合物：

其中每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₂为任选取代的甲基或任选取代的苯基。在一些实施方案中，R₂为甲基。在一些实施方案中，R₂为苯基。在一些实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷是：

在一个实施方案中，步骤(b)的反应在具有低水溶性的溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤(b)的反应在二氯甲烷中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约10℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约5℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约-20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约-10℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约0℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在介于约0℃和约5℃之间的温度下进行。

在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机试剂。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机碱。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机盐。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸盐或碳酸氢盐或其混合物。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸氢钠。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸钠。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应用水和一种或多种中和试剂猝灭，得到猝灭的组成物。在一个实施方案中，在低于约10℃的温度下猝灭步骤(b)的反应。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物过滤。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物在低于约10℃的温度下过滤。在一个实施方案中，步骤(b)的反应的猝灭组成物的滤液用EDTA(乙二胺四乙酸)盐水溶液洗涤。在一个实施方案中，步骤(b)的反应的猝灭组成物的滤液用EDTA二钠盐水溶液洗涤。

在一个实施方案中，步骤(c)中的碱是醇盐。在一个实施方案中，步骤(c)的碱是醇钠。在一个实施方案中，步骤(c)的碱是甲醇钠。在一个实施方案中，步骤(c)的醇是甲醇。在一个实施方案中，得自步骤(c)的5-氮杂胞苷经过滤收集。在一个实施方案中，得自步骤(c)的5-氮杂胞苷用非水溶剂洗涤，非水溶剂包括但不限于醇，例如甲醇。

在一个实施方案中，步骤(d)中的酸是有机酸或无机酸，包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸和甲磺酸。在一些实施方案中，步骤(d)中所使用的酸是盐酸。在一个实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是醇。在一些实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是甲醇。在一些实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是异丙醇。

在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐经过滤收集。在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐用有机溶剂洗涤，包括但不限于醇，例如甲醇。

在一个实施方案中，步骤(e)中的碱是有机碱，包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、二异丙胺、2,6-卢剔啶、N-甲基吗啉和N,N-二环己基甲胺。在一些实施方案中，步骤(e)中的碱是三乙胺。在一个实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是醇。在一些实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是甲醇。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱经过滤收集。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱用有机溶剂洗涤，有机溶剂包括但不限于醇，例如甲醇。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱基本上不含一种或多种杂质，包括但不限于基于金属的杂质和酸式盐抗衡离子，例如氯化物。

在一个实施方案中，步骤(f)包括以下步骤：

(1)在足以允许5-氮杂胞苷溶解的温度下，将得自步骤(e)的5-氮杂胞苷游离碱溶于二甲亚砜(DMSO)中；任选将溶液过滤以除去不溶性颗粒；

(2)将抗溶剂加入步骤(1)的溶液中；和

(3)使步骤(2)的混合物冷却，其中5-氮杂胞苷重结晶。

在一个实施方案中，步骤(f)(1)中的任选过滤在升高的温度(例如高于约85℃的温度)下进行。在一个实施方案中，步骤(f)(2)的抗溶剂是醇。在一个实施方案中，步骤(f)(2)的抗溶剂是甲醇。

在一个实施方案中，步骤(f)还包括以下步骤：

(4)经过滤收集得自步骤(3)的重结晶的5-氮杂胞苷；和

(5)将得自步骤(4)的5-氮杂胞苷真空干燥。

在一个实施方案中，本文提供用于制备用于治疗、预防和/或控制疾病或病况的5-氮杂胞苷或其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述疾病或病况尤其包括癌症、细胞增殖异常相关病症、血液学病症和骨髓增生异常综合征(MDS)。

IV.附图简述

图1表示5-氮杂胞苷的红外(IR)光谱。

图2表示5-氮杂胞苷的示差扫描量热法(DSC)曲线。

图3表示5-氮杂胞苷的X射线粉末衍射(XRPD)图案。

图4表示5-氮杂胞苷的IR光谱。

图5表示5-氮杂胞苷的DSC曲线。

图6表示5-氮杂胞苷的XRPD图案。

图7表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的IR光谱。

图8表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的DSC曲线。

图9表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的XRPD图案。

图10表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的XRPD图案。

图11表示5-氮杂胞苷半硫酸盐的甲醇溶剂合物的IR光谱。

图12表示5-氮杂胞苷半硫酸盐的甲醇溶剂合物的DSC曲线。

图13表示5-氮杂胞苷半硫酸盐的甲醇溶剂合物的XRPD图案。

图14表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐的IR光谱甲醇溶剂合物。

图15表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐的甲醇溶剂合物的DSC曲线。

图16表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐的甲醇溶剂合物的XRPD图案。

图17表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的IR光谱。

图18表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的DSC曲线。

图19表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的XRPD图案。

图20表示2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷的IR光谱。

V.详细说明

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常理解的相同含义。本文提及的所有出版物和专利均通过引用以其整体结合到到本文中。

A.定义

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“烷基”是指直链或支链的饱和一价烃基，其中烷基可被一个或多个取代基任选取代。术语“烷基”还包括直链和支链烷基两者，除非另有说明。在某些实施方案中，烷基是具有1-20(C_1-20)、1-15(C_1-15)、1-12(C_1-12)、1-10(C_1-10)或1-6(C_1-6)个碳原子的直链饱和一价烃基，或3-20(C_3-20)、3-15(C_3-15)、3-12(C_3-12)、3-10(C_3-10)或3-6(C_3-6)个碳原子的支链饱和一价烃基。本文所用的直链C_1-6和支链C_3-6烷基亦称为“低级烷基”。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基(包括所有异构形式)、正丙基、异丙基、丁基(包括所有异构形式)、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基(包括所有异构形式)和己基(包括所有异构形式)。例如，C_1-6烷基是指1-6个碳原子的直链饱和一价烃基或3-6个碳原子的支链饱和一价烃基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“环烷基”是指环状饱和的桥接和/或非桥接的一价烃基，其可被本文所述的一个或多个取代基任选取代。在某些实施方案中，环烷基具有3-20(C_3-20)、3-15(C_3-15)、3-12(C_3-12)、3-10(C_3-10)或3-7(C_3-7)个碳原子。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、十氢萘基和金刚烷基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“芳基”是指单环芳基和/或含有至少一个芳族烃环的多环一价芳基。在某些实施方案中，芳基具有6-20(C_6-20)、6-15(C_6-15)或6-10(C_6-10)个环原子。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、芴基、薁基、蒽基、菲基、芘基、联苯基和三联苯基。芳基亦指二环或三环碳环，其中环之一是芳族的，其它可以是饱和的，其它可以是饱和、部分不饱和芳族的，例如二氢萘基、茚基、茚满基或四氢萘基(萘满基)。在某些实施方案中，芳基亦可被一个或多个取代基任选取代。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“卤代”、“卤素”或“卤化物”是指氟、氯、溴和/或碘。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“氢”包括质子(¹H)、氘(²H)、氚(³H)和/或其混合物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“任选取代的”意指例如烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂环基等基团，可被独立选自以下的一个或多个取代基取代：例如(a)各自被一个或多个(在具体的实施方案中，为1、2、3或4个)取代基Q¹任选取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、C_6-14芳基、C_7-15芳烷基、杂芳基和杂环基；和(b)卤素、氰基(-CN)、硝基(-NO₂)、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)NR^bR^c、-C(NR^a)NR^bR^c、-OR^a、-OC(O)R^a、-OC(O)OR^a、-OC(O)NR^bR^c、-OC(=NR^a)NR^bR^c、-OS(O)R^a、-OS(O)₂R^a、-OS(O)NR^bR^c、-OS(O)₂NR^bR^c、-NR^bR^c、-NR^aC(O)R^d、-NR^aC(O)OR^d、-NR^aC(O)NR^bR^c、-NR^aC(=NR^d)NR^bR^c、-NR^aS(O)R^d、-NR^aS(O)₂R^d、-NR^aS(O)NR^bR^c、-NR^aS(O)₂NR^bR^c、-SR^a、-S(O)R^a、-S(O)₂R^a、-S(O)NR^bR^c和-S(O)₂NR^bR^c，其中每个R^a、R^b、R^c和R^d独立地为(i)氢；(ii)各自被一个或多个(在具体的实施方案中，为1、2、3或4个)取代基Q¹任选取代的C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、C_6-14芳基、C_7-15芳烷基、杂芳基或杂环基；或(iii)R^b和R^c与它们与之连接的N原子一起形成杂芳基或杂环基，其被一个或多个(在具体的实施方案中，为1、2、3或4个)取代基Q¹任选取代。本文所用的可被取代的所有基团是“任选取代的”，除非另有说明。

在具体的实施方案中，各个Q¹独立选自(a)氰基、卤素和硝基；和(b)C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、C_6-14芳基、C_7-15芳烷基、杂芳基和杂环基；和(c)-C(O)R^e、-C(O)OR^e、-C(O)NR^fR^g、-C(NR^e)NR^fR^g、-OR^e、-OC(O)R^e、-OC(O)OR^e、-OC(O)NR^fR^g、-OC(=NR^e)NR^fR^g、-OS(O)R^e、-OS(O)₂R^e、-OS(O)NR^fR^g、-OS(O)₂NR^fR^g、-NR^fR^g、-NR^eC(O)R^h、-NR^eC(O)OR^h、-NR^eC(O)NR^fR^g、-NR^eC(=NR^h)NR^fR^g、-NR^eS(O)R^h、-NR^eS(O)₂R^h、-NR^eS(O)NR^fR^g、-NR^eS(O)₂NR^fR^g、-SR^e、-S(O)R^e、-S(O)₂R^e、-S(O)NR^fR^g和-S(O)₂NR^fR^g；其中每个R^e、R^f、R^g和R^h独立地为(i)氢；(ii)C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、C_6-14芳基、C_7-15芳烷基、杂芳基或杂环基；或(iii)R^f和R^g与它们与之连接的N原子一起形成杂芳基或杂环基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“烯基”是指含有一个或多个(在具体的实施方案中，为1-5个)碳-碳双键的直链或支链一价烃基。烯基可被一个或多个取代基任选取代。术语“烯基”还包括具有如本领域普通技术人员了解的“顺式”和“反式”构型或者“E”和“Z”构型的基团。本文所用术语“烯基”包括直链和支链烯基两种，除非另有说明。例如，C_2-6烯基是指2-6个碳原子的直链不饱和一价烃基或3-6个碳原子的支链不饱和一价烃基。在某些实施方案中，烯基为2-20(C_2-20)、2-15(C_2-15)、2-12(C_2-12)、2-10(C_2-10)或2-6(C_2-6)个碳原子的直链一价烃基或者3-20(C_3-20)、3-15(C_3-15)、3-12(C_3-12)、3-10(C_3-10)或3-6(C_3-6)个碳原子的支链一价烃基。烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯-1-基、丙烯-2-基、烯丙基、丁烯基和4-甲基丁烯基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“炔基”是指含有一个或多个(在具体的实施方案中，为1-5个)碳-碳三键的直链或支链一价烃基。炔基可被一个或多个取代基任选取代。术语“炔基”还包括直链和支链炔基两种，除非另有说明。在某些实施方案中，炔基为2-20(C_2-20)、2-15(C_2-15)、2-12(C_2-12)、2-10(C_2-10)或2-6(C_2-6)个碳原子的直链一价烃基或者3-20(C_3-20)、3-15(C_3-15)、3-12(C_3-12)、3-10(C_3-10)或3-6(C_3-6)个碳原子的支链一价烃基。炔基的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)和炔丙基(-CH₂C≡CH)。例如，C_2-6炔基是指2-6个碳原子的直链不饱和一价烃基或3-6个碳原子的支链不饱和一价烃基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指被芳基取代的一价烷基。在某些实施方案中，烷基和芳基两者可被一个或多个取代基任选取代。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“杂芳基”是指单环芳基和/或含有至少一个芳环的多环芳基，其中至少一个芳环含有一个或多个独立选自O、S和N的杂原子。杂芳基的每个环可含有一个或两个O原子、一个或两个S原子和/或1-4个N原子，条件是每个环中杂原子的总数为4个或更少，且每个环含有至少一个碳原子。在某些实施方案中，杂芳基具有5-20、5-15或5-10个环原子。单环杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基和三唑基。二环杂芳基的实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呲喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噁唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、萘啶基、噁唑并吡啶基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶比吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基和噻吩并吡啶基。三环杂芳基的实例包括但不限于吖啶基、苯并吲哚基、咔唑基、二苯并呋喃基、

啶基、菲咯啉基、菲啶基、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基和呫吨基。在某些实施方案中，杂芳基可被一个或多个取代基任选取代。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“杂环烷基”、“杂环基”或“杂环的”是指单环非芳族环系和/或含有至少一个非芳环的多环环系，其中一个或多个非芳族环原子为独立选自O、S或N的杂原子；其余环原子为碳原子。在某些实施方案中，杂环基或杂环基团具有3-20、3-15、3-10、3-8、4-7或5-6个环原子。在某些实施方案中，杂环基为单环、二环、三环或四环环系，其可包括稠环系统或桥环系统，且其中氮或硫原子可任选被氧化，氮原子可任选被季铵化，一些环可以是部分或完全饱和的或芳族的。杂环基可在任何杂原子或碳原子上与主要结构连接，这导致稳定化合物的产生。这类杂环基团的实例包括但不限于氮杂

基、苯并二氧杂环己烷基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃酮基、苯并吡喃酮基、苯并呲喃基、苯并四氢呋喃基、苯并四氢噻吩基、苯并噻喃基、苯并噁嗪基、β-咔啉基、苯并二氢吡喃基、色酮基、噌啉基、香豆素基(coumarinyl)、十氢异喹啉基(decahydroisoquinolinyl)、二氢苯并异噻嗪基、二氢苯并异噁嗪基、二氢呋喃基、二氢异吲哚基、二氢吡喃基、二氢吡唑基、二氢吡嗪基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氧杂环戊烷基、1,4-二噻烷基、呋喃酮基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氢吲哚基、异苯并四氢呋喃基、异苯并四氢噻吩基、异苯并二氢吡喃基、异香豆素基、异二氢吲哚基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、噁唑烷酮基、噁唑烷基、氧杂环丙烷基、哌嗪基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、硫吗啉基、噻唑烷基、四氢喹啉基和1,3,5-三硫杂环己烷基。在某些实施方案中，杂环可被一个或多个取代基任选取代。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“亚甲基”是指二价-CH₂-基团。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“羰基”是指二价-C(=O)-基团。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“杂烷基”或“杂烷基团”是指衍生于烷基的一价基团，其中至少一个亚甲基被杂原子或杂基团例如O、S或NR(其中R为H或有机基团)取代。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“有机基团”是指含有至少一个碳原子的基团。有机基团的实例包括但不限于烷基、烯基、炔基、羧基、酰基、环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基和杂环烷基。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“烷氧基”或“烷氧基团”是指通过氧原子与另一个基团连接的烷基(即-O-烷基)。烷氧基可不被或被一个或多个合适的取代基取代。烷氧基的实例包括但不限于(C₁-C₆)烷氧基，例如-O-甲基、-O-乙基、-O-丙基、-O-异丙基、-O-2-甲基-1-丙基、-O-2-甲基-2-丙基、-O-2-甲基-1-丁基、-O-3-甲基-1-丁基、-O-2-甲基-3-丁基、-O-2,2-二甲基-1-丙基、-O-2-甲基-1-戊基、-O-3-甲基-1-戊基、-O-4-甲基-1-戊基、-O-2-甲基-2-戊基、-O-3-甲基-2-戊基、-O-4-甲基-2-戊基、-O-2,2-二甲基-1-丁基、-O-3,3-二甲基-1-丁基、-O-2-乙基-1-丁基、-O-丁基、-O-异丁基、-O-叔丁基、-O-戊基、-O-异戊基、-O-新戊基和-O-己基。烷氧基可不被或被一个或两个合适的取代基取代。在一些实施方案中，烷氧基的烷基链是直链或支链，并具有1-8个碳原子，本文亦称为“(C₁-C₈)烷氧基”。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“芳氧基”或“芳氧基团”是指O-芳基，其中芳基如本文其它部分的定义。芳氧基可不被或被一个或两个合适的取代基取代。在一些实施方案中，芳氧基的芳环是单环，其中该环包含6个碳原子，本文亦称为“(C₆)芳氧基”。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“烷氧基羰基”或“烷氧基羰基团”是指式-C(=O)-烷氧基的一价基团。在一些实施方案中，烷氧基羰基的烃链是直链或支链，并具有1-8个碳原子，本文亦称为“低级烷氧基羰基”。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“烷硫基”或“烷硫基团”是指式-S-烷基的一价基团。在一些实施方案中，烷硫基的烃链是直链或支链，并具有1-8个碳原子，本文亦称为“低级烷硫基”。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“酰氧基”或“酰氧基团”是指式-O-C(=O)-烷基或-O-C(=O)-芳基的一价基团，其中烷基和芳基如本文其它部分的定义。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“酰基”或“酰基基团”是指式-C(=O)H、-C(=O)-烷基或-C(=O)-芳基的一价基团，其中烷基和芳基如本文其它部分的定义。

当本文提供的化合物含有一个或多个酸性或碱性部分时，化合物可作为盐存在。如本文所用，并且除非另有说明，否则术语化合物的“盐”或“多种盐”是指具有碱性基或酸性基的化合物的盐，并且所述盐由化合物和一种或多种酸(包括无机酸和有机酸)或者一种或多种碱(包括无机碱和有机碱)制备。在某些实施方案中，本文提供的化合物在性质上是碱性的，并且能够与各种无机或有机酸形成各种各样的盐。本文其它部分描述了可用来制备这类碱性化合物的盐的酸。在某些实施方案中，本文提供的化合物在性质上是酸性的，并且能够与各种无机或有机碱形成各种各样的盐。这类与无机碱的盐的非限制性实例包括碱金属或碱土金属盐。在某些实施方案中，本文提供的化合物的盐包含一种或多种酸性或碱性抗衡离子，包括但不限于：乙酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、酒石酸氢盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、碘化物、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰氨苯胂酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴胺(hydrabamine)、羟萘酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲烷磺酸盐、muscate、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、panthothenate、磷酸盐、二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、亚硫酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)和/或双羟萘酸盐等；或锂、钠、钾、镁、钙、锌、铁和/或铵离子等；或N,N-二环己基甲胺、二异丙胺、二异丙基乙胺、乙醇胺、2,6-卢剔啶、N-甲基吗啉、吡啶和/或三乙胺等；或氨基酸和/或受保护的氨基酸等。

当本文提供的化合物含有酸性或碱性部分时，它还可作为药学上可接受的盐提供(参见例如“Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,andUse,”Stahl和Wermuth主编；Wiley-VCH and VHCA,Zurich,2002)。如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸(包括无机酸和有机酸)或药学上可接受的无毒碱(包括无机碱和有机碱)制备的盐。

用于制备“盐”或“药学上可接受的盐”的合适酸包括但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、酰化氨基酸、己二酸、藻酸、邻氨基苯甲酸、抗坏血酸、天冬氨酸、L-天冬氨酸、D-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、硼酸、樟脑酸、(+)-樟脑酸、(-)-樟脑酸、樟脑磺酸、(1R)-(-)-10-樟脑磺酸、(1S)-(+)-10-樟脑磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、环己烷氨基磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸(ethene磺酸)、2-羟基-乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸、龙胆酸(gentistic)、glucarenic、葡庚糖酸、葡萄糖酸、D-葡萄糖酸、L-葡萄糖酸、葡糖醛酸、D-葡糖醛酸、L-葡糖醛酸、谷氨酸、D-谷氨酸、L-谷氨酸、戊二酸、氧化戊二酸、α-氧化戊二酸、β-氧化戊二酸、乙醇酸、缩水甘油酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟乙磺酸、乳酸、D-乳酸、L-乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、D-苹果酸、L-苹果酸、丙二酸、扁桃酸、(+)-扁桃酸、(-)-扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛酸、高氯酸、苯基乙酸、磷酸、丙酸、焦谷氨酸、L-焦谷氨酸、D-焦谷氨酸、糖酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、D-酒石酸、L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、十一烯酸和戊酸。在一个实施方案中，盐或药学上可接受的盐由盐酸形成。在一个实施方案中，盐或药学上可接受的盐由硫酸形成。在一个实施方案中，盐或药学上可接受的盐由甲磺酸形成。在一个实施方案中，盐或药学上可接受的盐由氢溴酸形成。在一个实施方案中，盐或药学上可接受的盐由乙酸形成。

用于制备“盐”或“药学上可接受的盐”的合适碱包括但不限于无机碱，例如氢氧化镁、氢氧化钙、氢氧化钾、氢氧化锌、氢氧化锂、或氢氧化钠；和有机碱，例如伯胺、仲胺、叔胺和季铵、脂族胺和芳族胺，包括L-精氨酸、苯乙苄胺、苄星、胆碱、丹醇、N,N-二环己基甲胺、二乙醇胺、二乙胺、二甲胺、二丙胺、二异丙胺、二异丙基乙胺、2-(二乙基氨基)-乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、异丙胺、N-甲基-葡糖胺、海巴胺、1H-咪唑、L-赖氨酸、2,6-卢剔啶、吗啉、N-甲基-吗啉、4-(2-羟基乙基)-吗啉、甲胺、哌啶、哌嗪、丙胺、吡咯烷、1-(2-羟基乙基)-吡咯烷、吡啶、奎宁环、喹啉、异喹啉、三乙醇胺、三甲胺、三乙胺、N-甲基-D-葡糖胺、2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇和氨丁三醇。

在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的“盐”、“多种盐”或“药学上可接受的盐”是指衍生于本文其它部分描述的无机酸和/或有机酸的5-氮杂胞苷的酸加成盐。在一些实施方案中，盐由盐酸、氢溴酸、硼酸、磷酸或硫酸形成。在一个实施方案中，盐由盐酸形成。在一个实施方案中，盐由硫酸形成。在一个实施方案中，盐由甲磺酸形成。在一些实施方案中，盐由乙酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、草酸、琥珀酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三氟甲磺酸或三氟乙酸形成。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“溶剂合物”是指本文提供的化合物或其盐，其还包括通过非共价分子间力结合的化学计算量或非化学计算量的溶剂。当溶剂是水时，溶剂合物是水合物(例如一水合物、二水合物、三水合物、四水合物等)。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“多晶型物”是指本文提供的化合物或其盐或复合物的固体晶型。相同化合物的不同的多晶型物尤其可显示不同的物理、化学、生物学和/或光谱性质。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“立体异构体”包括本文提供的所有对映异构体/立体异构体纯的和对映异构体/立体异构体富集的化合物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“立体异构体纯的”意指包含化合物的一种立体异构体且基本不含该化合物的其它立体异构体的组成物。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构体纯的组成物将基本上不含该化合物的相对的对映体。具有两个手性中心的化合物的立体异构体纯的组成物将基本不含该化合物的其它非对映体。典型的立体异构体纯的化合物包含大于约80%(重量)的化合物的一种立体异构体和小于约20%(重量)的化合物的其它立体异构体、大于约90%(重量)的化合物的一种立体异构体和小于约10%(重量)的化合物的其它立体异构体、大于约95%(重量)的化合物的一种立体异构体和小于约5%(重量)的化合物的其它立体异构体、大于约97%(重量)的化合物的一种立体异构体和小于约3%(重量)的化合物的其它立体异构体或大于约99%(重量)的化合物的一种立体异构体和小于约1%(重量)的化合物的其它立体异构体。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“立体异构体富集的”意指包含大于约55%(重量)的化合物的一种立体异构体、大于约60%(重量)的化合物的一种立体异构体、大于约70%(重量)或大于约80%(重量)的化合物的一种立体异构体的组成物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“对映异构体纯的”意指具有一个手性中心的化合物的立体异构体纯的组成物。同样的，术语“对映异构体富集的”意指具有一个手性中心的化合物的立体异构体富集的组成物。

在某些实施方案中，如本文所用，并且除非另有说明，否则“旋光性”和“对映异构体活性的”是指这样一批分子，其具有不小于约50%、不小于约70%、不小于约80%、不小于约90%、不小于约91%、不小于约92%、不小于约93%、不小于约94%、不小于约95%、不小于约96%、不小于约97%、不小于约98%、不小于约99%、不小于约99.5%或不小于约99.8%的对映体过量。在某些实施方案中，以所述外消旋体的总重量计，化合物包含约95%或更多的所需对映异构体和约5%或更少的不大优选的对映异构体。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“外消旋的”或“外消旋体”是指约50%的一种对映异构体和约50%的相应对映异构体(相对于分子中的所有手性中心)。

在描述旋光性化合物时，使用前缀R和S表示在其手性中心周围的分子的绝对构型。使用(+)和(-)表示化合物的旋光度，也就是说被旋光性化合物旋转的偏振光的平面的方向。(-)前缀表示化合物是左旋的，即，化合物使偏振光的平面旋转至左边或逆时针方向旋转。(+)前缀表示化合物是右旋的，即，化合物偏振光的平面旋转至右边或顺时针方向旋转。然而，旋光度的符号(+)和(-)与分子R和S的绝对构型无关。

除非另有说明，否则本文提供的化合物可以是对映异构体纯的，例如单一对映异构体或单一非对映体，或者可以是立体异构体的混合物，例如对映异构体的混合物，例如两种对映异构体的外消旋混合物；或两种或更多种非对映体的混合物。用于制备/分离各个对映异构体的常规技术包括自合适的旋光纯的前体合成、自非手性起始原料不对称合成或拆分对映异构体的混合物，例如手性色谱法、重结晶、拆分、非对映体的盐形成或衍生化成非对映体的加合物接着分离。

应注意的是，如果结构异构体可互相转化，则本文提供的化合物可作为单一互变异构体或互变异构体的混合物存在。这可呈含有例如亚氨基、酮基或肟基的化合物的质子互变异构形式；或含有芳族部分的化合物中的所谓的价互变异构。因而得出，单一化合物可显示一种以上的异构类型。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“约”或“大约”意指本领域普通技术人员测定的特定值的可接受的误差，这部分取决于该值是如何测量或测定的。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在1、2、3或4标准差的范围内。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在指定值或范围的50%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%以内。

如本文所用，并且除非另有说明，否则“基本不含”化合物的组成物意指组成物含有小于约20%(重量)、小于约10%(重量)、小于约5%(重量)、小于约3%(重量)、小于约1%(重量)、小于约0.1%(重量)、小于约0.01%(重量)、小于约0.001%(重量)或小于约0.0001%(重量)的所述化合物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则的是“基本纯的”的组成物意指组成物具有大于约80%(重量)、大于约90%(重量)、大于约95%(重量)、大于约97%(重量)、大于约99%(重量)、大于约99.5%(重量)、大于约99.9%(重量)、大于约99.95%(重量)、大于约99.99%(重量)、大于约99.995%(重量)、大于约99.999%(重量)、大于约99.9995%(重量)或大于约99.9999%(重量)的纯度水平。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“药学上可接受的载体”、“药学上可接受的赋形剂”、“生理学上可接受的载体”或“生理学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的物质、组成物或溶媒，例如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或包装材料。在一个实施方案中，在与药物制剂的其它成分相容并适用于与人和动物的组织或器官接触而又无过度毒性、刺激性、变态反应、免疫原性或其它问题或并发症；与合理的利益/风险比相当的意义下，各组分是“药学上可接受的”。参见Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,第21版,Lippincott Williams&Wilkins(2005)；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第5版,Rowe等主编,ThePharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association(2005)；以及Handbook of Pharmaceutical Additives,第3版,Ash&Ash主编,Gower Publishing Company(2007)；Pharmaceutical Preformulation andFormulation,第2版,Gibson主编,CRC Press(2009)。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“活性成分”、“活性物质”或“活性药物成分”是指这样化合物或物质，将其单独或与其它有药学活性的化合物和/或一种或多种药学上可接受的赋形剂组合给予受试者以治疗、预防和/或改善病况、病症或疾病的一个或多个症状。本文所用的“活性成分”、“活性物质”和“活性药物成分”可以是本文所述化合物的药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物、多晶型物或旋光异构体。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“药物”和“治疗剂”是指给予受试者以治疗、预防、控制和/或改善病况、病症或疾病的一个或多个症状的化合物或其药物组合物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“治疗”、“医治”是指疾病或病症或者与所述疾病或病症有关的一个或多个症状的根除或改善。在某些实施方案中，该术语是指因将一种或多种预防药或治疗药给予患有这类疾病或病症的受试者所致使疾病或病症的传播或恶化最小化。在一些实施方案中，该术语是指在具体疾病的症状开始后，在有或没有其它额外活性剂的情况下，给予本文提供的化合物。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“预防”、“防治”和“防止”是指防止疾病或病症或其一个或多个症状的发作、复发或传播。在某些实施方案中，该术语是指在症状开始前，在有或没有其它额外活性剂的情况下，用本文提供的化合物治疗或将其特别给予有本文给出的疾病或病症的风险的患者。该术语包括抑制或减轻具体疾病的症状。在某些实施方案中，有疾病家族史的患者特别是预防方案的候选人。另外，有复发症状史的患者也是预防的潜在候选人。在这一方面，术语“预防”可与术语“预防性治疗”互换作用。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“控制”、“管控”是指预防或减缓疾病或病症或其一个或多个症状的进程、传播或恶化。受试者源于预防药和/或治疗药的有益作用常常不会导致疾病或病症的治愈。在这一方面，术语“控制”包括治疗患有具体疾病、试图预防该疾病复发或使该疾病复发减至最低程度的患者。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“受试者”在本文限定为包括动物，例如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。在具体的实施方案中，受试者是人。

除非另有说明，否则本文提供的化合物可作为前药提供，前药是化合物的官能衍生物(例如5-氮杂胞苷)，体内容易转变成母体化合物。前药常常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体化合物更容易给予。例如它们可以是通过口服给药可生物利用的，而母体化合物则不是。相对于母体化合物，在药物组合物中前药还可具有高的溶解度。前药可通过各种机制转化成母体药物，包括酶法和代谢水解。参见Prodrugs:Challenges and Rewards,Valentino J.Stella等主编,Springer Press,2007；Harper,Progress in Drug Research,1962,4,221-294；Morozowich等,载于“Design of Biopharmaceutical Properties through Prodrugs and Analogs,”Roche主编,APHA Acad.Pharm.Sci.,1977；“Bioreversible Carriers inDrug in Drug Design,Theory and Application,”Roche主编,APHA Acad.Pharm.Sci.,1987；“Design of Prodrugs,”Bundgaard,Elsevier,1985；Wang等,Curr.Pharm.Design,1999,5,265-287；Pauletti等,Adv.Drug.Delivery Rev.,1997,27,235-256；Mizen等,Pharm.Biotech.,1998,11,345-365；Gaignault等,Pract.Med.Chem.,1996,671-696；Asgharnejad in“Transport Processes in Pharmaceutical Systems,”Amidon等主编,MarcellDekker,185-218,2000；Balant等,Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet.,1990,15,143-53；Balimane和Sinko,Adv.Drug Delivery Rev.,1999,39,183-209；Browne,Clin.Neuropharmacol.,1997,20,1-12；Bundgaard,Arch.Pharm.Chem.,1979,86,1-39；Bundgaard,Controlled Drug Delivery,1987,17,179-96；Bundgaard,Adv.Drug Delivery Rev.,1992,8,1-38；Fleisher等,Adv.Drug Delivery Rev.,1996,19,115-130；Fleisher等,Methods Enzymol.,1985,112,360-381；Farquhar等,J.Pharm.Sci.,1983,72,324-325；Freeman等,J.Chem.Soc.,Chem.Commun.,1991,875-877；Friis和Bundgaard,Eur.J.Pharm.Sci.,1996,4,49-59；Gangwar等,Des.Biopharm.Prop.Prodrugs Analogs,1977,409-421；Nathwani和Wood,Drugs,1993,45,866-94；Sinhababu和Thakker,Adv.Drug Delivery Rev.,1996,19,241-273；Stella等,Drugs,1985,29,455-73；Tan等,Adv.DrugDelivery Rev.,1999,39,117-151；Taylor,Adv.Drug Delivery Rev.,1996,19,131-148；Valentino和Borchardt,Drug Discovery Today,1997,2,148-155；Wiebe和Knaus,Adv.Drug Delivery Rev.,1999,39,63-80；以及Waller等,Br.J.Clin.Pharmac.,1989,28,497-507。

除非另有说明，否则本文所述含有反应性官能团(例如而不限于羧基、羟基和氨基部分)的化合物(包括可用于制备化合物的中间体)，还包括其合适的受保护的衍生物。“受保护的衍生物”是其中一个或多个反应部位被一个或多个保护基(亦称为封闭基团)封闭的那些化合物。羧基部分的合适保护基包括苄基、叔丁基等。氨基和酰氨基的合适保护基包括乙酰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基、甲硅烷基等。羟基的合适保护基包括苄基、乙酰基、甲硅烷基等。其它合适的保护基为本领域普通技术人员所熟知。保护基的选择和使用以及加入和脱去保护基的反应条件描述于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in OrganicSynthesis”,第3版,John Wiley&Sons,Inc.1999。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“方法”是指本文公开的用于制备本文提供的化合物的方法。为本领域普通技术人员所熟知的对本文公开的方法(例如起始原料、试剂、保护基、溶剂、温度、反应时间、纯化)的修改也包括在本公开内容中。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“加入”、“使……反应”、“混合”等意指使一种反应物、试剂、溶剂、催化剂、反应基等与另一种反应物、试剂、溶剂、催化剂、反应基等接触。除非另有说明，否则反应物、试剂、溶剂、催化剂、反应基等可分别、同时或个别加入，或者可以任何顺序加入。它们可在加热存在或不存在时加入，并且可任选在惰性气氛下加入。“使……反应”可指原位形成或其中反应基位于同一分子中的分子内反应。

如本文所用，并且除非另有说明，否则“基本上完成”或被驱动以“基本完成”的反应意指反应物含有大于约50%(收率百分比)、大于约60%(收率百分比)、大于约70%(收率百分比)、大于约80%(收率百分比)、大于约90%(收率百分比)、大于约95%(收率百分比)或大于约97%(收率百分比)的所需产物。或者，术语“基本上完成”或“基本完成”意指反应物含有小于约50%的起始原料(与其起始量相比)、小于约40%、小于约30%、小于约20%、小于约10%、小于约5%、小于约3%、小于约1%、小于约0.5%、小于约0.1%、小于约0.05%或小于约0.01%的起始原料(与其起始量相比)。

如果所示结构和给予该结构的名称之间有差异，则应侧重所示结构。此外，如果结构或其部分的立体化学用例如粗体字或短划线标明，则该结构或其部分要解释为包括其全部立体异构体。

B.方法

本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。本文所提供的方法总的来说包括可用于5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的大规模或大批生产的安全的、有效的、有成本效益的和/或易于扩大规模的方法。

在一个实施方案中，本文提供用于产生基本纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供用于产生基本化学纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供用于产生基本物理纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法。在一个实施方案中，本文提供用于产生适用于人的、例如尤其用于治疗、预防和/或控制尤其包括以下疾病或病况的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法：癌症、细胞增殖异常相关病症、血液学病症和骨髓增生异常综合征(MDS)。

在一个实施方案中，本文所提供的方法包括用于大规模或大批生产5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的安全的、有成本效益的和/或有效的方法。在一个实施方案中，本文所提供的方法产生以下规模的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物：大于1克、大于10克、大于25克、大于50克、大于100克、大于250克、大于500克、大于1,000克、大于5,000克、大于10,000克、大于50,000克或大于100,000克。

在一个实施方案中，本文所提供的方法以下列总收率产生5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物：大于约10%、大于约15%、大于约20%、大于约25%、大于约30%、大于约35%、大于约40%、大于约45%、大于约50%、大于约55%、大于约60%、大于约65%、大于约70%、大于约75%、大于约80%、大于约85%、大于约90%或大于约95%，其中收率根据起始原料计算，起始原料例如5-氮杂胞嘧啶或受保护的β-D-呋喃核糖(例如式B的化合物)。

在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的纯度大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的总杂质小于约5%w/w、小于约4%w/w、小于约3%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.02%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w或小于约0.001%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的各个杂质组分小于约5%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.9%w/w、小于约0.8%w/w、小于约0.7%w/w、小于约0.6%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.4%w/w、小于约0.3%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w、小于约0.001%w/w、小于约0.0005%w/w或小于约0.0001%w/w。在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本物理和/或化学纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。

在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本物理纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本物理纯的5-氮杂胞苷的多晶型物或晶型。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的物理纯度大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的总杂质小于约5%w/w、小于约4%w/w、小于约3%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.02%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w或小于约0.001%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的各个杂质组分小于约5%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.9%w/w、小于约0.8%w/w、小于约0.7%w/w、小于约0.6%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.4%w/w、小于约0.3%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w、小于约0.001%w/w、小于约0.0005%w/w或小于约0.0001%w/w。

在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本化学纯的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。在一个实施方案中，本文所提供的方法产生基本化学纯的5-氮杂胞苷的多晶型物或晶型。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的化学纯度大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的总杂质小于约5%w/w、小于约4%w/w、小于约3%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.02%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w或小于约0.001%w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的各个杂质组分小于约5%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.9%w/w、小于约0.8%w/w、小于约0.7%w/w、小于约0.6%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.4%w/w、小于约0.3%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w、小于约0.001%w/w、小于约0.0005%w/w或小于约0.0001%w/w。

在一个实施方案中，杂质可通过HPLC(高效液相色谱法)检测。在一个实施方案中，杂质尤其包括但不限于6-氨基-5-氮杂胞嘧啶、2,4,6-三氨基三嗪、2,4-二氨基三嗪、6-甲基-5-氮杂胞嘧啶、6-氨基-5-氮杂胞苷、6-甲基-5-氮杂胞苷和1-β-D-呋喃核糖基-3-脒基脲。在一个实施方案中，杂质是基于金属的杂质，例如包含锡或铁的杂质。在一个实施方案中，杂质是挥发性有机化合物，例如甲醇、二氯甲烷、甲苯或三乙胺。在一个实施方案中，杂质是有机溶剂，例如甲醇、二氯甲烷、甲苯或二甲亚砜。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的干燥失重(LOD)小于约5%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.9%w/w、小于约0.8%w/w、小于约0.7%w/w、小于约0.6%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.4%w/w、小于约0.3%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w或小于约0.01%w/w。

在一个实施方案中，本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤：在金属路易斯酸的存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与受保护的β-D-呋喃核糖反应，得到受保护的5-氮杂胞苷，使受保护的5-氮杂胞苷脱保护，得到5-氮杂胞苷后，对5-氮杂胞苷进行纯化，得到基本上不含一种或多种杂质的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物，所述杂质包括但不限于基于金属的杂质。

在一个实施方案中，预期的基于金属的杂质包含与金属路易斯酸中的相同的金属元素，包括但不限于来源于用于先前偶联反应中的金属路易斯酸的锡、铁、锌、钛、铝或硼，例如氯化锡、氯化铁、氯化锌、四氯化钛、氯化铝、烷基氯化铝、二烷基氯化铝、三氟化铝或三氟化硼。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的总的基于金属的杂质小于约500ppm(百万分之几)w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppmw/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w或小于约0.1ppm w/w。在一个实施方案中，与总批量相比，5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的各基于金属的杂质(例如锡或铁含量)小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w、小于约0.1ppm w/w、小于约0.05ppm w/w、小于约0.02ppm w/w或小于约0.01ppm w/w。

在具体的实施方案中，本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤的任意1、2、3、4、5或6个：

(a)使5-氮杂胞嘧啶与甲硅烷基化试剂反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶；

(b)在金属路易斯酸存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与酰基受保护的β-D-呋喃核糖反应；用水和至少一种中和试剂猝灭反应，得到受保护的5-氮杂胞苷；

(c)在醇中，使受保护的5-氮杂胞苷与选自醇盐、氨和四取代的氢氧化铵的碱反应，得到5-氮杂胞苷；

(d)在有机溶剂中，使得自步骤(c)的5-氮杂胞苷与酸接触，得到5-氮杂胞苷的盐；

(e)在有机溶剂中，使得自步骤(d)的5-氮杂胞苷与碱接触，得到作为游离碱的5-氮杂胞苷；和

(f)使得自步骤(e)的5-氮杂胞苷重结晶。

在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶是下式(A)的化合物：

其中每个R₁独立地为任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₁为直链烷基、支链烷基、环烷基或芳基，包括但不限于甲基、乙基、异丙基、叔丁基、苯基、二甲苯基和苄基。在一些实施方案中，R₁为甲基。在一些实施方案中，R₁为乙基。在一些实施方案中，R₁为异丙基。在一些实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶为：

可以使用各种合适的保护基以保护β-D-呋喃核糖中的羟基以形成受保护的β-D-呋喃核糖，其可与甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶(例如式(A)的化合物)偶联。可在反应顺序的后期(例如在受保护的5-氮杂胞苷形成后)，在合适的条件下脱去保护基。本领域技术人员应了解并选择β-D-呋喃核糖的羟基部分的合适保护基，并且可选择用于安装这类保护基的合适条件。参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in OrganicSynthesis”,第3版,John Wiley&Sons,Inc.,1999。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖购自市售来源或按照文献方法制备。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖具有一个或多个酰基、烷基、甲硅烷基、缩醛或缩酮保护基或其组合。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖具有1、2、3或4个被合适的保护基保护的羟基。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖中的全部4个羟基受到保护。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖是酰基受保护的β-D-呋喃核糖。在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖是四酰基受保护的β-D-呋喃核糖。

在一个实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖是下式(B)的化合物：

其中每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₂为任选取代的甲基或任选取代的苯基。在一些实施方案中，R₂为甲基。在一些实施方案中，R₂为苯基。在一些实施方案中，受保护的β-D-呋喃核糖为：

在一个实施方案中，金属路易斯酸是含有金属原子的路易斯酸，包括但不限于锡、铁、锌、钛、铝和硼。在一个实施方案中，金属路易斯酸选自氯化锡、氯化铁、氯化锌、四氯化钛、氯化铝、烷基氯化铝(例如EtAlCl₂)、二烷基氯化铝(例如Et₂AlCl)、氟化铝、三氟化硼等。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡或氯化铁。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化铁。

在一个实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷是下式(C)或(D)的化合物：

其中每个R₁独立地为任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基；每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。在一些实施方案中，R₁为直链烷基、支链烷基、环烷基或芳基，包括但不限于甲基、乙基、异丙基、叔丁基、苯基、二甲苯基和苄基。在一些实施方案中，R₁为甲基。在一些实施方案中，R₂为任选取代的甲基或任选取代的苯基。在一些实施方案中，R₂为甲基。在一些实施方案中，R₂为苯基。

在一个实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷是式(C)的化合物。

在一个实施方案中，式(D)的化合物由甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与受保护的β-D-呋喃核糖之间的偶联反应形成，然后在反应的水法后处理期间转化为式(C)的化合物。在一个实施方案中，式(C)的化合物在反应的水法后处理之后分离。

在具体的实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷为：

在具体的实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷为：

在一个实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷为：

在一个实施方案中，本文提供用于按以下流程1所述制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法：

其中R₁和R₂在本文其它部位中定义。

在一个实施方案中，在指定的一批5-氮杂胞苷中，5-氮杂胞苷的纯化包括5-氮杂胞苷的盐的形成以显著降低杂质含量，例如基于金属的杂质。在一个实施方案中，在指定的一批5-氮杂胞苷中，形成5-氮杂胞苷的酸加成盐以显著降低杂质含量，例如基于金属的杂质。例如，在具体的实施方案中，在溶剂(例如甲醇等醇)中，将5-氮杂胞苷用例如盐酸等酸搅拌。产生5-氮杂胞苷的酸加成盐。然后分离5-氮杂胞苷的盐，例如，经过滤收集，并用溶剂(例如甲醇等醇)洗涤。任选在环境温度下或在升高的温度(例如50-60℃)下，将5-氮杂胞苷的盐真空干燥。5-氮杂胞苷的盐可作为结晶固体分离，其具有显著降低的杂质含量，例如金属含量，例如锡或铁含量。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的盐基本上是物理纯的。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的盐基本上是化学纯的。

在一个实施方案中，将5-氮杂胞苷的盐用碱处理以分解5-氮杂胞苷的酸加成盐并形成5-氮杂胞苷的游离碱。在一些实施方案中，使用约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.5或约3.0当量的碱以从酸加成盐中产生5-氮杂胞苷的游离碱。在其它实施方案中，使用大于约3.0当量的碱以从酸加成盐中产生5-氮杂胞苷的游离碱。在具体的实施方案中，例如，在溶剂(例如甲醇等醇)中，将5-氮杂胞苷的盐用碱(例如三乙胺等有机碱)搅拌。形成5-氮杂胞苷的游离碱。然后分离5-氮杂胞苷的游离碱，例如经过滤收集并用溶剂(例如甲醇等醇)洗涤。洗涤可持续进行直到滤液基本上不含酸式盐抗衡离子，例如氯离子。任选在环境温度下或在升高的温度(例如50-60℃)下，将分离的5-氮杂胞苷的游离碱真空干燥。5-氮杂胞苷的游离碱可作为结晶固体分离，其具有显著降低的杂质含量，例如金属含量，例如锡或铁含量。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的游离碱是基本物理纯的。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的游离碱是基本化学纯的。

在一个实施方案中，5-氮杂胞苷通过重结晶纯化。例如，在具体的实施方案中，在足以允许5-氮杂胞苷溶解的温度下，例如高于约85℃的温度下，将5-氮杂胞苷或其盐溶于溶剂(例如二甲亚砜(DMSO))中。任选将5-氮杂胞苷的溶液例如通过滤纸过滤。过滤可在升高的温度(例如高于约85℃的温度)下进行。任选可使用热的DMSO洗涤经过滤而保留的颗粒。向5-氮杂胞苷的溶液中加入抗溶剂(例如甲醇等醇)。混合物冷却后，5-氮杂胞苷重结晶。在其它实施方案中，可在5-氮杂胞苷的DMSO溶液冷却步骤期间加入抗溶剂。例如，可先将热的5-氮杂胞苷的DMSO溶液冷却至一定温度，然后加入抗溶剂，接着进一步冷却所得混合物。晶体5-氮杂胞苷可经过滤收集。可将晶体5-氮杂胞苷用溶剂(例如甲醇等醇)洗涤。在一些实施方案中，在环境温度下或在升高的温度下，例如在约40℃、约50℃、约60℃、约70℃、约80℃或约90℃下，将重结晶的5-氮杂胞苷真空干燥。重结晶的5-氮杂胞苷可作为结晶固体分离，其基本不含杂质含量，例如金属含量，例如锡或铁含量。在一个实施方案中，重结晶的5-氮杂胞苷是基本物理纯的。在一个实施方案中，重结晶的5-氮杂胞苷是基本化学纯的。

在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括盐形成步骤、游离碱形成步骤和/或重结晶步骤的组合。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)盐形成，(2)游离碱形成，和(3)重结晶。在另一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)盐形成，(2)重结晶，和(3)游离碱形成。在另一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)重结晶，(2)盐形成，和(3)游离碱形成。在另一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)盐形成，和(2)游离碱形成。在另一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)盐形成，和(2)重结晶。在另一个实施方案中，5-氮杂胞苷的纯化包括以下步骤：(1)重结晶，和(2)盐形成。

在一个实施方案中，本文提供按下列流程2中所述制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法：

其中R₁和R₂在本文其它部位中定义，X^-为本文其它部分定义的一种或多种盐抗衡离子。

在一个实施方案中，本文提供按下列流程3中所述制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法：

其中R₁和R₂在本文其它部位中定义，X^-为本文其它部分定义的一种或多种盐抗衡离子。

在一个实施方案中，本文提供按下列流程4中所述制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法：

其中R₁和R₂在本文其它部位中定义，X^-为本文其它部分定义的一种或多种盐抗衡离子。

在一个实施方案中，本文提供用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤的任意1、2、3、4、5或6个：

(a)使5-氮杂胞嘧啶与甲硅烷基化试剂反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶；

(b)在金属路易斯酸存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与酰基受保护的β-D-呋喃核糖反应；用水和至少一种中和试剂猝灭反应，得到受保护的5-氮杂胞苷；

(c)在醇中，使受保护的5-氮杂胞苷与选自醇盐、氨和四取代的氢氧化铵的碱反应，得到5-氮杂胞苷；

(d)在有机溶剂中，使得自步骤(c)的5-氮杂胞苷与酸接触，得到5-氮杂胞苷的盐；

(e)在有机溶剂中，使得自步骤(d)的5-氮杂胞苷与碱接触，得到作为游离碱的5-氮杂胞苷；和

(f)使得自步骤(e)的5-氮杂胞苷重结晶。

1.步骤(a)—5-氮杂胞嘧啶的甲硅烷基化

在一个实施方案中，用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂为三甲基甲硅烷基(TMS)试剂(即R₁为甲基)。在一个实施方案中，用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂为两种或更多种TMS试剂的混合物。在一个实施方案中，用于步骤(a)的硅烷化试剂选自六甲基二硅氮烷(HMDS)和三甲基氯硅烷(TMSCl)。在一些实施方案中，甲硅烷基化试剂包含HMDS和TMSCl的混合物。在一些实施方案中，甲硅烷基化试剂包含HMDS。在一些实施方案中，甲硅烷基化试剂是HMDS。

在一个实施方案中，用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂相对于5-氮杂胞嘧啶是摩尔过量的。在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应使用过量的HMDS。在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应使用过量的约7倍体积的HMDS(例如700mL HMDS相对于100g5-氮杂胞嘧啶)。在一个实施方案中，与5-氮杂胞嘧啶相比，步骤(a)的甲硅烷基化反应使用过量的约4倍体积、约5倍体积、约7倍体积、约10倍体积、约12倍体积或约14倍体积的HMDS。

在一个实施方案中，步骤(a)的甲硅烷基化反应在催化剂的存在下进行。在一个实施方案中，催化剂是硫酸铵。

在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在室温下进行。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在升高的温度下进行。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在以下温度下进行：高于约50℃、高于约60℃、高于约70℃、高于约80℃、高于约90℃、高于约100℃、高于约110℃、高于约120℃、高于约130℃、高于约140℃、高于约150℃、高于约160℃、高于约170℃。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在介于以下的温度之间进行：约50℃和约170℃之间、约60℃和约165℃之间、约70℃和约160℃之间、约80℃和约155℃之间、约90℃和约150℃之间、约100℃和约145℃之间、约110℃和约140℃之间、约120℃和约140℃之间。在一个实施方案中，反应在约125℃的温度下进行。在一个实施方案中，反应在约130℃的温度下进行。

在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在氮气下进行。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在氩气下进行。

甲硅烷基化反应的反应时间可在约0.5小时至约24小时间变化，这取决于反应温度、所用的甲硅烷基化试剂和反应混合物中试剂的浓度。一般来说，反应温度越高，反应时间越短。在一个实施方案中，当甲硅烷基化试剂包含HMDS时，在约125℃的反应温度下，在催化剂(例如硫酸铵)存在时，反应时间为约0.5小时、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在一个实施方案中、反应时间为约2小时、约3小时、约4小时、约5小时或约6小时。在一些实施方案中，当反应基本完成时，反应混合物变成清液。

在一个实施方案中，在不存在溶剂时使用摩尔过量的甲硅烷基化试剂，任选在催化剂存在下，进行甲硅烷基化反应。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在溶剂存在下进行。在一个实施方案中，甲硅烷基化反应在极性有机溶剂(例如乙腈)存在下进行。在一个实施方案中，在反应完成后，真空(例如10-15mmHg)除去溶剂。

在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶是下式(A)的化合物：

其中R₁在本文其它部分中定义。在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶为：

在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶作为固体被分离。在其它实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶无需分离而直接用于步骤(b)。在一些实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶在惰性气氛(例如氮气和/或氩气)下分离。在一个实施方案中，通过使用真空蒸馏除去甲硅烷基化试剂，来分离甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶。在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶经过滤分离。

在一个实施方案中，通过在无溶剂的回流下加热5-氮杂胞嘧啶、一种或多种TMS试剂(以相对于5-氮杂胞嘧啶的过量摩尔比率存在)和催化剂(例如硫酸铵)的悬浮液直到得到清液，来制备甲硅烷基化5-氮杂胞苷，其中形成三甲基甲硅烷基化5-氮杂胞苷(即式(A)的化合物，其中R₁为甲基)。在一些实施方案中，TMS试剂是HMDS。

在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶通过本领域已知技术分离。在一个实施方案中，在后续与受保护的β-D-呋喃核糖的偶联反应中，在干燥或无需干燥的情况下，使用分离的甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶。在一个实施方案中，使甲硅烷基化反应混合物冷却至环境温度，其中甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶自反应混合物中结晶。在一个实施方案中，通过合适的抗溶剂(例如庚烷)促进甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶的结晶。在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶在惰性气氛下经过滤分离。在一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶用合适的洗涤溶剂(例如庚烷)洗涤。在另一个实施方案中，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶通过经真空蒸馏除去过量的TMS试剂和任何溶剂(如果存在的话)而作为固体残余物分离。在一个实施方案中，将合适的溶剂(例如甲苯)加入甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶的固体残余物中，通过真空蒸馏除去溶剂，其中与溶剂一起除去任何残留的TMS试剂(例如HMDS)。在一个实施方案中，过量的HMDS通过真空蒸馏除去，并可用作甲硅烷基化试剂。在一个实施方案中，将分离的甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶溶于合适的溶剂(例如二氯甲烷、乙腈或1,2-二氯乙烷)中用于后续偶联步骤。

在一个实施方案中，在合适的溶剂中，在催化剂存在或不存在时，在回流下，甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶自5-氮杂胞嘧啶和等摩尔量的甲硅烷基化试剂(例如HMDS和TMSCl的混合物)制备。在一个实施方案中，溶剂是无水有机溶剂。在一个实施方案中，溶剂是无水非极性有机溶剂，包括但不限于卤化溶剂。在一个实施方案中，溶剂是无水极性有机溶剂，包括但不限于乙腈。所得甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶无需分离便可直接用于后续偶联步骤。

2.步骤(b)—偶联

在一个实施方案中，用于步骤(b)的酰基受保护的β-D-呋喃核糖是下式(B)的化合物：

其中R₂在本文其它部分中定义。在一个实施方案中，酰基受保护的β-D-呋喃核糖为：

在一个实施方案中，用于步骤(b)的酰基受保护的β-D-呋喃核糖可购自供应商(例如Suven Life Sciences Limited)。在一个实施方案中，用于步骤(b)的酰基受保护的β-D-呋喃核糖可按照文献方法自β-D-呋喃核糖制备。

在一个实施方案中，用于步骤(b)的金属路易斯酸是含有金属原子的路易斯酸，金属原子例如锡、铁、锌、钛、铝和硼。在一个实施方案中，金属路易斯酸选自氯化锡、氯化铁、氯化锌、四氯化钛、氯化铝、烷基氯化铝(例如EtAlCl₂)、二烷基氯化铝(例如Et₂AlCl)、氟化铝、三氟化硼等。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡或氯化铁。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化锡。在一个实施方案中，金属路易斯酸是氯化铁。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应在无水有机溶剂中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在具有低水溶性的溶剂中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在具有低水溶性的无水有机非极性溶剂中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在卤化溶剂中进行，卤化溶剂包括但不限于二氯甲烷、四氯化碳、氯仿和二氯乙烷。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在二氯甲烷中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在无水极性有机溶剂中进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在乙腈中进行。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约30℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约25℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约15℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约10℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约5℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在低于约0℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约-20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约-10℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在高于约0℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在介于约0℃和约5℃之间的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在介于约-5℃和约-10℃的温度之间进行。在一个实施方案中，步骤(b)的反应在介于约-15℃和约-20℃的温度之间进行。

在一个实施方案中，步骤(b)的偶联反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，偶联反应在氮气氛下进行。在一个实施方案中，偶联反应在氩气氛下进行。

步骤(b)的偶联反应的反应时间可自约1小时至约24小时变化，这取决于反应温度、所用试剂和反应混合物中试剂的浓度。一般来说，反应温度越高，反应时间越短，然而，较高的反应温度可引起副反应或产物分解。在具体的实施方案中，步骤(b)的反应时间为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在某些实施方案中，当路易斯酸是氯化锡时，在约0℃和约5℃之间的反应温度下，反应时间为约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时或约10小时。在某些实施方案中，在约0℃和约5℃之间的反应温度下，当路易斯酸是氯化铁时，反应时间为约2小时、约4小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在一些实施方案中，例如通过取等分量的反应混合物，用水溶液将其猝灭，并使其通过HPLC，监测反应过程。在一个实施方案中，例如通过反应过程监测，当确定反应基本完成时，将反应猝灭。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应如下进行：通过在保持在约0℃和约5℃之间的温度下的溶剂中，将甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与酰基受保护的β-D-呋喃核糖一起搅拌；加入金属路易斯酸，例如氯化锡或氯化铁，同时保持反应混合物的温度；并在约0℃和约5℃之间的温度下搅拌反应混合物直到反应基本完成。在一个实施方案中，步骤(b)的反应如下进行：通过在保持在约0℃和约5℃之间的温度下的溶剂中，搅拌酰基受保护的β-D-呋喃核糖和金属路易斯酸，例如氯化锡或氯化铁；加入甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶，同时保持反应混合物的温度；并在约0℃和约5℃之间的温度下搅拌反应混合物直到反应基本完成。

在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的酰基受保护的β-D-呋喃核糖相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约0.5(即，[酰基受保护的β-D-呋喃核糖]/[5-氮杂胞嘧啶]=0.5)、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9、约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9或约2.0。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的酰基受保护的β-D-呋喃核糖相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约0.9。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的酰基受保护的β-D-呋喃核糖相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约1.0。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的酰基受保护的β-D-呋喃核糖相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约1.1。

在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的金属路易斯酸相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约0.5(即，[路易斯酸]/[5-氮杂胞嘧啶]=0.5)、约0.6、约0.7、约0.8、约0.9、约1.0、约1.1、约1.2、约1.3、约1.4、约1.5、约1.6、约1.7、约1.8、约1.9、约2.0、约2.5、约3.0或大于约3.0。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的金属路易斯酸相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约0.9。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的金属路易斯酸相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约1.0。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的金属路易斯酸相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约1.1。在一个实施方案中，用于步骤(b)的反应中的金属路易斯酸相对于用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶的摩尔比率为约1.5。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应用水和一种或多种中和试剂猝灭，得到猝灭的组成物。在一个实施方案中，以约15℃、约10℃、约5℃或约0℃的温度猝灭步骤(b)的反应。在一个实施方案中，在低于约10℃的温度下猝灭步骤(b)的反应。猝灭步骤可能是放热的。在一个实施方案中，使反应混合物在冷却浴中冷却。在一个实施方案中，将水和一种或多种中和试剂慢慢加入步骤(b)的反应混合物中，以保持反应混合物的温度。在一个实施方案中，将水和中和试剂一起作为溶液加入步骤(b)的反应混合物中。在一个实施方案中，分别和序贯加入水和中和试剂。在一个实施方案中，在加入步骤(b)的反应混合物中前，水已冷却。在一个实施方案中，在反应被猝灭时，将有机溶剂加入步骤(b)的反应混合物中，这类有机溶剂可以是用于反应中的相同溶剂，例如二氯甲烷。

在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机试剂。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机碱，例如氢氧化锂、氢氧化钠和氢氧化钾。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是无机盐，例如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸锂、碳酸氢锂、磷酸钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、磷酸锂、磷酸氢锂、磷酸二氢锂、柠檬酸钠、柠檬酸钾和柠檬酸锂。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸盐或碳酸氢盐或其混合物。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸钠或碳酸氢钠或其混合物。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是1:1摩尔比率的碳酸钠和碳酸氢钠的混合物。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是1:1重量比的碳酸钠和碳酸氢钠的混合物。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸钠。在一个实施方案中，步骤(b)的中和试剂是碳酸氢钠。在一个实施方案中，先将中和试剂溶于水后，再将溶液加入步骤(b)的反应混合物中。在一个实施方案中，将作为固体的中和试剂加入步骤(b)的反应混合物中。在一个实施方案中，先将中和试剂加入步骤(b)的反应混合物中，然后将水加入反应混合物中。在一个实施方案中，先将水加入步骤(b)的反应混合物中，然后将中和试剂作为固体或溶液加入反应混合物中。

在一个实施方案中，搅拌猝灭的组成物约15分钟、约30分钟、约45分钟、约1小时、约1.5小时、约2小时或大于约2小时。在一个实施方案中，在约15℃、约10℃、约5℃或约0℃的温度下搅拌猝灭的组成物。在一个实施方案中，在低于约10℃的温度下搅拌猝灭的组成物。在一个实施方案中，金属氧化物例如氧化锡或氧化铁，沉淀至反应容器底部。

在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物过滤。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物通过过滤。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物通过过滤。在一个实施方案中，滤饼用有机溶剂(例如具有低水溶性的有机非极性溶剂)洗涤。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物在约15℃、约10℃、约5℃或约0℃的温度下过滤。在一个实施方案中，将步骤(b)的反应的猝灭组成物在低于约10℃的温度下过滤。

在一个实施方案中，步骤(b)的反应的猝灭组成物的滤液含有有机相和水相。在一个实施方案中，将滤液的有机相与其水相分离，所需产物一般存在于有机相中。在一个实施方案中，将有机相用水进一步洗涤。在一个实施方案中，滤液(例如滤液的有机相)用含水EDTA(乙二胺四乙酸)盐溶液洗涤。在一个实施方案中，滤液用含水EDTA二钠盐溶液(例如10%EDTA二钠盐溶液)洗涤。在一个实施方案中，滤液的洗涤、萃取和/或相分离在约15℃、约10℃、约5℃或约0℃的温度下进行。在一个实施方案中，滤液的洗涤、萃取和/或相分离在低于约10℃的温度下进行。在一个实施方案中，滤液(例如滤液的有机相)经无水盐(例如无水硫酸钠或无水硫酸镁)干燥。在一个实施方案中，将滤液的溶剂滤出，得到受保护的5-氮杂胞苷，为固体残余物。在一个实施方案中，将甲醇加入受保护的5-氮杂胞苷的固体残余物中以使产物重新悬浮，然后将该混合物的溶剂馏出，得到受保护的5-氮杂胞苷的固体残余物。在某些实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷的固体残余物是结晶固体。在一个实施方案中，将用于萃取的滤液的溶剂(例如二氯甲烷)部分馏出，得到受保护的5-氮杂胞苷的浓缩溶液，接着将醇(例如甲醇)加入混合物中，接着真空蒸馏以基本上除去溶剂(例如二氯甲烷)，得到受保护的5-氮杂胞苷在醇(例如甲醇)中的浆液。

如本文所述，对于偶联步骤，通过使用非极性无水有机溶剂，可使受保护的5-氮杂胞苷在水中的暴露降至最小。或者，如果在偶联步骤使用无水有机极性溶剂，则可在猝灭前，除去溶剂，并用无水非极性有机溶剂更换。猝灭组成物可保持在低温(例如低于约10℃)下，以降低水法萃取期间乳化的可能性和后处理步骤(例如猝灭、过滤和萃取)期间产物的分解。

在一个实施方案中，步骤(b)的受保护的5-氮杂胞苷是下式(C)的化合物：

其中R₁和R₂在本文其它部位中定义。在一个实施方案中，受保护的5-氮杂胞苷为：

在一个实施方案中，按照步骤(a)和(b)，获得约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%收率的受保护的5-氮杂胞苷。在一个实施方案中，收率根据用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶计算。

3.步骤(c)—脱保护

在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为醇盐、氨或四取代的氢氧化铵。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为醇盐。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为氨。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为四取代的氢氧化铵，例如苄基三甲基氢氧化铵。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为醇钠。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的碱为甲醇钠。

在一个实施方案中，用于步骤(c)中的醇为甲醇。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的醇为乙醇。在一个实施方案中，用于步骤(c)中的醇为异丙醇。

在一个实施方案中，步骤(c)的反应在室温下进行。在一个实施方案中，步骤(c)的反应在约20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(c)的反应在约25℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(c)的反应在约30℃的温度下进行。

步骤(c)的脱保护反应的反应时间可自约1小时至约24小时变化，这取决于反应温度、所用的碱和反应混合物中试剂的浓度。一般来说，反应温度越高，反应时间越短，然而，较高的反应温度可引起副反应或产物分解。在具体的实施方案中，步骤(c)的反应时间为约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在某些实施方案中，在介于约25℃和约30℃之间的反应温度下，反应时间为约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在一些实施方案中，监测反应过程，例如通过取等分量的反应混合物并使其流过HPLC。在一个实施方案中，当例如通过反应过程监测确定反应基本完成时，便猝灭反应。

在一个实施方案中，步骤(c)的反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，步骤(c)的反应在氮气下进行。在一个实施方案中，步骤(c)的反应在氩气下进行。

在一个实施方案中，步骤(c)的反应如下进行：通过在醇中搅拌受保护的5-氮杂胞苷，加入碱，并在环境温度下搅拌混合物直到反应基本完成。在一个实施方案中，在加入碱后，反应混合物的pH值超过约pH10。在一个实施方案中，加入额外的碱直到反应混合物的pH值超过约pH10。

在一个实施方案中，步骤(c)的5-氮杂胞苷经过滤收集。在一个实施方案中，步骤(c)的5-氮杂胞苷用非水溶剂洗涤，非水溶剂包括但不限于醇，例如甲醇。在一个实施方案中，步骤(c)的5-氮杂胞苷经真空(例如10-15mmHg)干燥。在一个实施方案中，将步骤(c)的5-氮杂胞苷在升高的温度(例如约60℃)下真空(例如10-15mmHg)干燥。

在一个实施方案中，按照步骤(a)-(c)，得到约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%收率的5-氮杂胞苷。在一个实施方案中，收率根据用于步骤(a)中的5-氮杂胞嘧啶计算。

4.步骤(d)—盐形成

在一个实施方案中，用于步骤(d)中的盐形成的酸为有机酸或无机酸，包括但不限于能够形成药学上可接受的盐的酸。在具体的实施方案中，酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸和甲磺酸。在一些实施方案中，步骤(d)中所使用的酸是盐酸。

在一个实施方案中，用于步骤(d)中的有机溶剂是甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、甲基乙基酮、乙醚、甲基叔丁基醚、乙腈、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷或氯仿等，或其混合物。在一个实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是醇或其混合物。在一些实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是甲醇。在一些实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是乙醇。在一些实施方案中，步骤(d)中的有机溶剂是异丙醇。

在一个实施方案中，步骤(d)的盐形成反应如下进行：通过在有机溶剂中搅拌5-氮杂胞苷，加入酸，并在环境温度下搅拌混合物。

在一个实施方案中，使用摩尔过量的酸(相对于5-氮杂胞苷)。在一个实施方案中，酸和5-氮杂胞苷之间的摩尔比率为约1:1。

在一个实施方案中，步骤(d)的反应在室温下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在约20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在约25℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在约30℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在低于约25℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在介于约25℃和约30℃之间的温度下进行。

在一个实施方案中，步骤(d)的反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在氮气下进行。在一个实施方案中，步骤(d)的反应在氩气下进行。

在一个实施方案中，步骤(d)的反应的反应时间可从约0.5小时至约24小时变化。在一个实施方案中，反应时间为约0.5小时、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在一个实施方案中，反应时间为约1小时。在一个实施方案中，反应时间为约2小时。在一个实施方案中，反应时间为约3小时。在一个实施方案中，反应时间为约4小时。在一些实施方案中，反应物料先变成清液，然后变成悬浮液，其中盐自反应物料中结晶。在一个实施方案中，使步骤(d)的反应混合物冷却至低于约20℃、低于约15℃、低于约10℃或低于约5℃的温度，以促进盐的结晶。

在一个实施方案中，步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐经过滤收集。在一个实施方案中，步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐用有机溶剂洗涤，包括但不限于醇(例如甲醇)。

在一个实施方案中，通过浓缩步骤(d)的反应混合物，接着过滤，来分离步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐。在一个实施方案中，通过真空(例如10-15mmHg)浓缩步骤(d)的反应混合物以除去挥发性溶剂，来分离步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐。

在一个实施方案中，将步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐真空(例如10-15mmHg)干燥。在一个实施方案中，在升高的温度(例如约50℃或约60℃)下将步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐真空(例如10-15mmHg)干燥。

在一个实施方案中，按照步骤(d)，得到约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约99%或约99.9%收率的5-氮杂胞苷的盐。在一个实施方案中，收率根据用于盐形成反应的5-氮杂胞苷计算。

在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐是基本纯的。在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐是基本物理纯的。在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐是基本化学纯的。在一个实施方案中，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐基本不含杂质，例如基于金属的杂质。在一个实施方案中，得到作为基本上是化学和/或物理纯的结晶材料的步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐。

在一个实施方案中，与总批量相比，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐的化学纯度为大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。

在一个实施方案中，与总批量相比，得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐的物理纯度为大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。

在一个实施方案中，在得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐中，与总批量相比，总的基于金属的杂质小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppmw/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w或小于约0.1ppm w/w。在一个实施方案中，在得自步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐中，与总批量相比，各基于金属的杂质(例如锡或铁含量)小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppmw/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w、小于约0.1ppm w/w、小于约0.05ppm w/w、小于约0.02ppm w/w或小于约0.01ppm w/w。

5.步骤(e)—游离碱形成

在一个实施方案中，用于形成步骤(e)中的5-氮杂胞苷游离碱的碱是有机碱或无机碱。在一个实施方案中，用于步骤(e)的碱是有机碱，包括但不限于三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、二异丙胺、2,6-卢剔啶、N-甲基吗啉、N,N-二环己基甲胺等。在一些实施方案中，步骤(e)中的碱是三乙胺。

在一个实施方案中，用于步骤(e)的有机溶剂是甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、甲基乙基酮、乙醚、甲基叔丁基醚、乙腈、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷或氯仿等，或其混合物。在一个实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是醇或其混合物。在一些实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是甲醇。在一些实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是乙醇。在一些实施方案中，步骤(e)中的有机溶剂是异丙醇。

在一个实施方案中，步骤(e)的游离碱形成反应如下进行：通过在有机溶剂中搅拌5-氮杂胞苷的盐，加入碱，并在环境温度下搅拌混合物。

在一个实施方案中，使用摩尔过量的碱(相对于5-氮杂胞苷)。在一个实施方案中，碱和5-氮杂胞苷之间的摩尔比率为约1:1。

在一个实施方案中，步骤(e)的反应在室温下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在约20℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在约25℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在约30℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在低于约30℃的温度下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在介于约25℃和约30℃间的温度下进行。

在一个实施方案中，步骤(e)的反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在氮气下进行。在一个实施方案中，步骤(e)的反应在氩气下进行。

在一个实施方案中，步骤(e)的反应的反应时间可从约0.5小时至约24小时变化。在一个实施方案中，反应时间为约0.5小时、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时或约24小时。在一个实施方案中，反应时间为约1小时。在一个实施方案中，反应时间为约2小时。在一个实施方案中，反应时间为约3小时。在一个实施方案中，反应时间为约4小时。在一些实施方案中，在5-氮杂胞苷的游离碱形成时搅拌作为浆液的反应物料。在一个实施方案中，在将步骤(e)的反应混合物过滤前，使其冷却至低于约20℃、低于约15℃、低于约10℃或低于约5℃的温度。

在一个实施方案中，步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱经过滤收集。在一个实施方案中，步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱用有机溶剂例如醇(例如甲醇)洗涤。在一个实施方案中，持续洗涤步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱直到步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱基本不含杂质，例如酸加成盐抗衡离子(例如氯离子)。在一个实施方案中，步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱基本不含杂质，杂质包括但不限于基于金属的杂质和酸加成盐抗衡离子。

在一个实施方案中，将步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱真空(例如10-15mmHg)干燥。在一个实施方案中，在升高的温度下(例如约50℃或约60℃)，将步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱真空(例如10-15mmHg)干燥。

在一个实施方案中，按照步骤(e)，得到约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约99%或约99.9%收率的5-氮杂胞苷的游离碱。在一个实施方案中，收率根据所用的5-氮杂胞苷的盐计算。

在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱是基本纯的。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱是基本物理纯的。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱是基本化学纯的。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱基本不含杂质，例如基于金属的杂质和/或酸加成盐抗衡离子。在一个实施方案中，得到作为基本上是化学和/或物理纯的结晶材料的步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱。

在一个实施方案中，与总批量相比，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱的化学纯度大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。

在一个实施方案中，与总批量相比，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱的物理纯度大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。

在一个实施方案中，与总批量相比，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱中总的基于金属的杂质小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppmw/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w或小于约0.1ppm w/w。在一个实施方案中，得自步骤(e)的5-氮杂胞苷的游离碱中，与总批量相比，各基于金属的杂质(例如锡或铁含量)小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w、小于约0.1ppm w/w、小于约0.05ppm w/w、小于约0.02ppm w/w或小于约0.01ppm w/w。

6.步骤(f)—重结晶

在一个实施方案中，步骤(f)包括以下步骤：

(1)在足以允许5-氮杂胞苷溶解的温度下，将得自步骤(e)的5-氮杂胞苷游离碱溶于二甲亚砜中；任选将溶液过滤以除去不溶性颗粒；

(2)将抗溶剂加入步骤(1)的溶液中；和

(3)使步骤(2)的混合物冷却，其中5-氮杂胞苷重结晶。

在一个实施方案中，在升高的温度下，例如在约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃、约90℃、约95℃或约100℃的温度下，将5-氮杂胞苷溶于步骤(f)(1)的二甲亚砜(DMSO)中。在一个实施方案中，步骤(f)(1)中的任选过滤在升高的温度下进行，例如在约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃、约90℃、约95℃或约100℃的温度下进行。在一个实施方案中，任选不溶性颗粒用热的DMSO洗涤。

在一个实施方案中，步骤(f)(2)的抗溶剂是醇。在一个实施方案中，步骤(f)(2)的抗溶剂是甲醇。在一个实施方案中，在约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃或约85℃的温度下，将抗溶剂慢慢加入5-氮杂胞苷DMSO溶液中。在一个实施方案中，抗溶剂是甲醇，在介于约70℃和约80℃之间、介于约60℃和约70℃之间、介于约50℃和约60℃之间、介于约40℃和约50℃之间或介于约30℃和约40℃之间的温度下，将甲醇慢慢加入5-氮杂胞苷DMSO溶液中。

在一个实施方案中，使步骤(f)(3)的混合物冷却至约35℃、约30℃、约25℃、约20℃、约15℃、约10℃、约5℃或约0℃的温度。在一个实施方案中，使步骤(f)(3)的混合物冷却至介于约25℃和约30℃之间的温度。在一个实施方案中，在约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时或约12小时的时间内，使步骤(f)(3)的混合物慢慢冷却。在一个实施方案中，在冷却后，搅拌步骤(f)(3)的混合物达约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时的一段时间。在一个实施方案中，在使混合物冷却至介于约25℃和约30℃之间的温度后，在介于约25℃和约30℃之间温度下搅拌混合物约15小时。

在具体的实施方案中，在添加抗溶剂时引起5-氮杂胞苷沉淀。在具体的实施方案中，在冷却时引起沉淀。在具体的实施方案中，通过添加抗溶剂和冷却两者引起沉淀。

在一个实施方案中，步骤(f)(1)在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，步骤(f)(2)在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，步骤(f)(3)在惰性气氛下进行。

在一个实施方案中，步骤(f)还包括以下步骤：

(4)经过滤收集得自步骤(3)的重结晶的5-氮杂胞苷；和

(5)将得自步骤(4)的5-氮杂胞苷真空干燥。

在一个实施方案中，步骤(f)(4)的过滤在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，固体产物用溶剂(例如甲醇)洗涤。在一个实施方案中，固体产物用溶剂洗涤，所述溶剂与步骤(f)(2)中的抗溶剂所使用的溶剂相同。

在一个实施方案中，将固体产物真空(例如10-15mmHg)干燥。在一个实施方案中，干燥在室温下进行。在一个实施方案中，干燥在升高的温度下进行，例如在约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃、约90℃、约95℃或约100℃下进行。在一个实施方案中，干燥在介于约85℃和约90℃之间的温度下进行。在一个实施方案中，持续干燥直到干燥失重降至约0.4%w/w以下。在一个实施方案中，干燥在约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约36小时、约48小时、约60小时或约72小时的时间内进行。

在一个实施方案中，按照步骤(f)，得到约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约99%或约99.9%收率的重结晶的5-氮杂胞苷。在一个实施方案中，收率根据用于重结晶的5-氮杂胞苷计算。

7.其它实施方案

在一个实施方案中，先使5-氮杂胞嘧啶在硫酸铵存在下与HMDS反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶，使其在氯化锡(SnCl₄)存在下与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖偶联，得到三乙酰基受保护的5-氮杂胞苷。在一些实施方案中，三乙酰基受保护的偶联产物的化学和/或物理纯度大于约50%w/w、大于约60%w/w、大于约70%w/w、大于约80%w/w、大于约90%w/w或大于约95%w/w。在一个实施方案中，三乙酰基受保护的偶联产物的化学和/或物理纯度大于约75%w/w。在一些实施方案中，偶联反应的收率介于约50%和约99%之间、介于约60%和约90%之间、介于约60%和约80%之间或介于约65%和约75%之间(收率以粗产物的化学纯度计)。在一个实施方案中，偶联反应的收率为约70%(收率以粗产物的化学纯度计)。

在另一个实施方案中，先使5-氮杂胞嘧啶在硫酸铵存在下，与HMDS反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶，使其在氯化铁(FeCl₃)存在下与1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖偶联，得到三乙酰基受保护的5-氮杂胞苷。在一些实施方案中，三乙酰基受保护的偶联产物的化学和/或物理纯度大于约40%w/w、大于约50%w/w、大于约60%w/w、大于约70%w/w、大于约80%w/w或大于约90%w/w。在一个实施方案中，三乙酰基受保护的偶联产物的化学和/或物理纯度大于约60%w/w。在一些实施方案中，偶联反应的收率介于约30%和约99%之间、介于约40%和约90%之间、介于约40%和约80%之间、介于约40%和约70%之间、介于约40%和约60%之间或介于约45%和约55%之间(收率以粗产物的化学纯度计)。在一个实施方案中，偶联反应的收率为约50%(收率以粗产物的化学纯度计)。

在一个实施方案中，乙酰基受保护的5-氮杂胞苷用甲醇中的甲醇钠溶液脱乙酰化，得到5-氮杂胞苷的粗产物。在一些实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，粗制5-氮杂胞苷的化学和/或物理纯度大于约80%w/w、大于约90%w/w、大于约95%w/w或大于约99%w/w。在一个实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，粗制5-氮杂胞苷的化学和/或物理纯度大于约95%w/w。在其它实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，粗制5-氮杂胞苷的化学和/或物理纯度大于约80%w/w、大于约90%w/w、大于约95%w/w或大于约99%w/w。在一个实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，粗制5-氮杂胞苷的化学和/或物理纯度大于约90%w/w。在一些实施方案中，当SnCl₄用作路易斯酸时，偶联步骤和脱保护步骤的综合收率介于约40%和约90%之间、介于约50%和约75%之前或介于约55%和约65%之间(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。在一个实施方案中，当SnCl₄用作路易斯酸时，偶联步骤和脱保护步骤的综合收率为约60%(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。在其它实施方案中，当FeCl₃用作路易斯酸时，偶联步骤和脱保护步骤的综合收率介于约20%和约80%之间、介于约30%和约65%之间或介于约35%和约45%之间(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。在一个实施方案中，当FeCl₃用作路易斯酸时，偶联步骤和脱保护步骤的综合收率为约40%(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。

在一个实施方案中，粗制5-氮杂胞苷用含异丙醇-HCl(IPA-HCl)的甲醇处理，得到5-氮杂胞苷HCl盐。在一些实施方案中，5-氮杂胞苷HCl盐的化学和/或物理纯度大于约90%w/w、大于约92%w/w、大于约94%w/w、大于约96%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w或大于约99.5%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷HCl盐的化学和/或物理纯度大于约98%w/w。在一些实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约60%、约70%、约80%、约90%、约95%或约99%。在一个实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约80%。在其它实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约50%、约60%、约70%、约80%、约90%或约95%。在一个实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约72%。

在一个实施方案中，在甲醇的存在下，将5-氮杂胞苷HCl盐用三乙胺处理，得到5-氮杂胞苷的游离碱。在一些实施方案中，5-氮杂胞苷游离碱的化学和/或物理纯度大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w或大于约99.9%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷游离碱的化学和/或物理纯度大于约99%w/w。在一些实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，游离碱形成步骤的收率为约70%、约80%、约90%、约95%、约98%或约99%。在一个实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，游离碱形成步骤的收率为约95%。在其它实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约70%、约80%、约90%、约95%、约98%或约99%。在一个实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，盐形成步骤的收率为约99%。

在一个实施方案中，使5-氮杂胞苷游离碱在DMSO和甲醇中重结晶，得到5-氮杂胞苷，为最终产物。在一些实施方案中，5-氮杂胞苷最终产物的化学和/或物理纯度大于约90%w/w、大于约95%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w或大于约99.9%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷最终产物的化学和/或物理纯度大于约99%w/w。在一些实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，重结晶步骤的收率为约70%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。在一个实施方案中，当SnCl₄用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，重结晶步骤的收率为约94%。在其它实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，重结晶步骤的收率为约70%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。在一个实施方案中，当FeCl₃用作之前偶联步骤中的路易斯酸时，重结晶步骤的收率为约85%。

在一个实施方案中，本文提供同位素标记的5-氮杂胞苷的方法，其中所述方法使用一种或多种同位素标记的起始原料。在某些实施方案中，使用氘标记的起始原料。在某些实施方案中，使用氚标记的起始原料。在某些实施方案中，使用¹³C标记的起始原料。在某些实施方案中，使用¹⁵N标记的起始原料。在某些实施方案中，使用¹⁷O标记的起始原料。在某些实施方案中，同位素标记的起始原料具有两个或更多个同位素标记，包括但不限于氘、氚、¹³C、¹⁵N和/或¹⁷O标记。在某些实施方案中，本文提供制备具有一个或多个同位素标记的5-氮杂胞苷的方法，包括但不限于氘、氚、¹³C、¹⁵N和/或¹⁷O标记。在一个实施方案中，同位素标记的5-氮杂胞苷是基本化学和/或物理纯的。在某些实施方案中，步骤(a)中使用至少一种同位素标记的起始原料。在某些实施方案中，步骤(b)中使用至少一种同位素标记的起始原料。

C.5-氮杂胞苷的盐

在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的酸加成盐，其中用于制备5-氮杂胞苷盐的酸是有机酸或无机酸，包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸和甲磺酸。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的盐，包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐(包括例如硫酸氢盐和半硫酸盐)和甲烷磺酸盐(即甲磺酸盐)。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷半硫酸盐。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷一盐酸盐。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷一氢溴酸盐。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷半硫酸盐，其用甲醇溶剂化。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷半硫酸盐用甲醇溶剂化，且5-氮杂胞苷和甲醇的摩尔比率为约1:1。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷甲磺酸盐，其用甲醇溶剂化。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷甲磺酸盐用甲醇溶剂化，且5-氮杂胞苷和甲醇的摩尔比率为约1:1。在一个实施方案中，本文提供是基本化学和/或物理纯的5-氮杂胞苷的盐或溶剂合物。在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的盐或溶剂合物基本上不含一种或多种杂质，例如基于金属的杂质。

在一个实施方案中，本文提供5-氮杂胞苷的药学上可接受的盐，包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐和甲磺酸盐。在一个实施方案中，本文提供是基本化学和/或物理纯的5-氮杂胞苷的药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本文提供基本上不含一种或多种杂质的5-氮杂胞苷的药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，本文提供是基本化学和/或物理纯的5-氮杂胞苷的一盐酸盐。在一个实施方案中，本文提供基本上不含一种或多种杂质的5-氮杂胞苷一盐酸盐。在具体的实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐是基本纯的。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐是基本物理纯的。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐是基本化学纯的。

在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐的化学和/或物理纯度大于约95%w/w、大于约96%w/w、大于约97%w/w、大于约98%w/w、大于约99%w/w、大于约99.5%w/w、大于约99.8%w/w、大于约99.9%w/w、大于约99.95%w/w、大于约99.98%w/w或大于约99.99%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐中的总杂质小于约5%w/w、小于约4%w/w、小于约3%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.02%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w或小于约0.001%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐中的各个杂质组分小于约5%w/w、小于约2%w/w、小于约1%w/w、小于约0.9%w/w、小于约0.8%w/w、小于约0.7%w/w、小于约0.6%w/w、小于约0.5%w/w、小于约0.4%w/w、小于约0.3%w/w、小于约0.2%w/w、小于约0.1%w/w、小于约0.05%w/w、小于约0.01%w/w、小于约0.005%w/w、小于约0.001%w/w、小于约0.0005%w/w或小于约0.0001%w/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐的总的基于金属的杂质小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppmw/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppm w/w、小于约0.2ppm w/w或小于约0.1ppmw/w。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷一盐酸盐中的各基于金属的杂质(例如锡或铁含量)小于约500ppm w/w、小于约200ppm w/w、小于约100ppm w/w、小于约50ppm w/w、小于约20ppm w/w、小于约10ppm w/w、小于约5ppm w/w、小于约2ppm w/w、小于约1ppm w/w、小于约0.5ppmw/w、小于约0.2ppm w/w、小于约0.1ppm w/w、小于约0.05ppm w/w、小于约0.02ppm w/w或小于约0.01ppm w/w。

在一个实施方案中，本文提供具有下表18或表20中所列峰的任意3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个的5-氮杂胞苷的游离碱。

在一个实施方案中，本文提供具有下表24或表26中所列峰的任意3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个的5-氮杂胞苷的一盐酸盐。

在一个实施方案中，本文提供具有下表28中所列峰的任意3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个的5-氮杂胞苷的硫酸盐(例如半硫酸盐)。

在一个实施方案中，本文提供具有下表30中所列峰的任意3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个的5-氮杂胞苷的甲磺酸盐。

在一个实施方案中，本文提供具有下表32中所列峰的任意3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个的5-氮杂胞苷的氢溴酸盐。

本文还提供用于制备5-氮杂胞苷的酸加成盐的方法，所述方法包括将5-氮杂胞苷在有机溶剂中与酸混合，并分离5-氮杂胞苷的盐。

在一个实施方案中，采用本文所述方法，制备用于盐形成的5-氮杂胞苷游离碱。在其它实施方案中，用于盐形成的5-氮杂胞苷获自市售来源。在其它实施方案中，用于盐形成的5-氮杂胞苷按照文献方法制备。

在一个实施方案中，将5-氮杂胞苷以约1:1的摩尔比率与酸混合。在其它实施方案中，使用过量的酸以形成5-氮杂胞苷盐。

在一个实施方案中，用于盐形成的酸是有机酸或无机酸，其中本文的其它部分提供有机酸和无机酸的实例。合适酸的非限制性实例包括甲磺酸、三氟乙酸、对甲苯磺酸、盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸和磷酸。

在一个实施方案中，用于制备5-氮杂胞苷的盐的有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、丙酮、甲基乙基酮、乙醚、甲基叔丁基醚、乙腈、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、二氯甲烷或氯仿，或其一种或多种的组合。在一个实施方案中，用于盐形成的有机溶剂是醇，例如甲醇、乙醇和异丙醇，或其一种或多种的混合物。在一个实施方案中，用于盐形成的有机溶剂是甲醇。

在一个实施方案中，如下形成5-氮杂胞苷的盐：通过在有机溶剂系统中搅拌5-氮杂胞苷，加入酸，并在环境温度下搅拌混合物。在一个实施方案中，盐形成反应在惰性气氛下进行。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的盐经过滤收集。在一个实施方案中，5-氮杂胞苷的盐用有机溶剂(例如甲醇)洗涤。在一个实施方案中，如下分离5-氮杂胞苷的盐：通过真空(例如10-15mmHg)浓缩含有5-氮杂胞苷盐(按上述方法获得)的混合物以除去挥发性溶剂，并经过滤分离盐。

在一个实施方案中，将5-氮杂胞苷的盐真空(例如10-15mmHg)干燥。在一个实施方案中，在升高的温度(例如约50℃或约60℃)下，将步骤(d)的5-氮杂胞苷的盐真空(例如10-15mmHg)干燥。

VI.实施例

按照下列非限制性实施例对某些实施方案进行说明。

在下面的实施例中，除非另有说明，否则所有温度均以摄氏度给出，所有分数和百分比均以重量计。试剂可购自供应商，例如

Chemical Co.，并且无需进一步纯化便可使用，除非另有说明。试剂也可按照本领域技术人员已知的标准文献方法制备。溶剂可购自例如

并可原样使用或可采用本领域技术人员已知的标准方法纯化，除非另有说明。

除非另有说明，否则下面给出的反应一般在环境温度下进行。反应通过HPLC测定，并根据对起始原料消耗的判断来中止。

在下面的实施例中，化合物结构和纯度通过一种或多种下列方法证实：质子核磁共振(¹H NMR)光谱法、¹³C NMR光谱法、质谱法、红外光谱法、熔点、X射线晶体学和/或HPLC。¹H NMR光谱采用在某种磁场强度下操作的核磁共振波谱仪来测定。化学位移以来自内标(例如TMS)的百万分之几(ppm，δ)低磁场报告。或者，如下将¹H NMR光谱与来自氘化溶剂中残余质子的信号进行参比：CDCl₃=7.25ppm；DMSO-d₆=2.49ppm；C₆D₆=7.16ppm；CD₃OD=3.30ppm。如下标明峰裂数：s，单峰；d，双峰；dd，双双重峰；t，三重峰；dt，双三重峰；q，四重峰；br，宽峰；和m，多重峰。耦合常数以赫兹(Hz)给出。使用具有APCI或ESI电离的质谱仪获取质谱(MS)数据。

A.氯化锡路线

1.甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶的制备

在氮气氛、25-30℃下，将5-氮杂胞嘧啶(100.0g，0.8921mol，纯度≥98%)和六甲基二硅氮烷(HMDS)(700.0mL，541.8g，3.3568mol，纯度≥98%)装入3-L4颈圆底烧瓶中。加入硫酸铵(5.0g，0.0378mol)。在125-130℃下将混合物逐渐加热至回流。保持回流6小时。通常，在2-4小时(例如约3小时)后，反应物料变成清液，清液一形成，反应便完成。

使反应物料逐渐冷却至40-50℃。在40-50℃下真空(10-15mmHg)馏出HMDS，得到白色固体。使用氮气中断固体之上的真空。在25-30℃下将甲苯(200.0mL)加入残余物中，在40-50℃下真空(10-15mmHg)馏出溶剂，得到固体。使用氮气中断固体之上的真空。使固体逐渐冷却至25-30℃，并将其转入下一步骤。以75-80%的收率回收HMDS，其纯度为90-95%。

另使用4、5、7、10和14倍体积的HMDS(例如400、500、700、1000或1400mL HMDS，对于100g5-氮杂胞嘧啶)，进行了甲硅烷基化反应。

2.乙酰基受保护的5-氮杂胞苷的制备(偶联)

向甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶(实施例A-1)中加入二氯甲烷(1.5L)。在氮气氛、25-30℃下搅拌混合物10分钟，得到清液。使溶液逐渐冷却至0-5℃。在0-5℃、氮气氛下，一次性加入1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖(255.5g，0.8029mol)。在0-5℃下搅拌混合物10分钟，得到清液。在1小时时间内，在≤10℃时，滴加氯化锡(255.6g，0.9813mol)(加入是轻微放热的)。在0-5℃、氮气氛下搅拌反应物料5小时。

通过HPLC检查反应进程。取出5g反应物料，在10℃下用饱和NaHCO₃水溶液中和。分离二氯甲烷层，并提供用于IPC-HPLC(过程质量控制HPLC)。一旦符合IPC(根据HPLC，5-氮杂胞嘧啶不大于0.5%)，将反应物料转移至5-L圆底烧瓶用于后处理。

在≤10℃时，向反应物料中加入二氯甲烷(1.0L)和碳酸氢钠(800.0g)。在≤10℃时，在30分钟内，滴加冷却水(1.0L)(放热)。在≤10℃时，将混合物搅拌30分钟。在15-30分钟后，白色固体(氧化锡)沉淀至烧瓶底。混合物经

过滤后，用二氯甲烷(0.5L)洗涤。在≤10℃时，分离有机层，并且在≤10℃时，用水(0.75L)洗涤。在≤10℃时，有机层用10%EDTA二钠盐溶液洗涤两次(150.0g盐，2x750mL)，用水洗涤一次(1.0L)。有机层经无水硫酸钠过滤，在40-45℃、大气条件下将溶剂馏出，进一步在40-45℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到粘性的布满泡沫的固体。在30-35℃下向残余物中加入甲醇(200.0mL)。然后在40-45℃下真空(10-15mmHg)馏出溶剂，并真空脱气30分钟，得到2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷，为固体(315.0g，白色至灰白色结晶固体)。2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷在多次运行期间的平均产量为约305.2g，其平均纯度为约83.7%，平均收率为约77.2%(%收率考虑了产物的HPLC纯度)。在5次运行期间，2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷的最大收率为约81.5%(%收率考虑了产物的HPLC纯度)。在5次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约87.8%。

3.5-氮杂胞苷的制备(脱保护)

在25-30℃下向2’?,3’,5’-?三乙酰基-5-氮杂胞苷(315.0g，实施例A-2)中加入甲醇(2.0L)。在25-30℃下搅拌浆液10分钟后，在25-30℃、氮气氛下，慢慢加入含25%甲醇钠的甲醇(40.0mL)。加入后，反应物料变成清液，并且立即形成产物。反应物料的pH值高于10。在25-30℃下搅拌反应物料18小时。

通过HPLC检查反应进程。取出反应物料的样品，并提供用于IPC-HPLC。一旦符合IPC(IPC-HPLC：2’,3’,5’-三乙酰基阿扎胞苷≤0.5%)，便将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(300.0mL)洗涤。将产物在60-65℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到白色至灰白色结晶固体(144.8g)。在多次运行期间5-氮杂胞苷的平均产量为约141.3g，其平均纯度为约96.8%，平均收率为约64.8%(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。在5次运行期间，5-氮杂胞苷的最大收率为约73.2%(收率以5-氮杂胞嘧啶计)。在5次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约98.83%。

4.反应进展(Reaction Development)(偶联和脱保护步骤)

通过改变多个参数，使偶联和脱保护步骤最优化。结果概括于下表1中。便宜的市售容易获得的金属路易斯酸，例如氯化锡和氯化铁，为偶联步骤提供合乎需要的收率。

5.5-氮杂胞苷HCl盐的制备(盐形成)

为了除去杂质，例如基于金属的杂质，在获自脱乙酰反应的5-氮杂胞苷中，形成5-氮杂胞苷的盐酸盐。所得盐在下一步中分解，得到游离碱，使用甲醇作为抗溶剂，使游离碱从DMSO中重结晶，得到作为最终产物的纯化的5-氮杂胞苷。

在25-30℃、氮气氛下，向3-L4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷(140.0g，0.5732mol，实施例A-3)和甲醇(1.4L)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟，然后冷却至20-25℃。在≤25℃时，在5分钟内慢慢加入异丙醇-HCl(280.0mL，约14%溶液)。加入后，反应物料变成清液，并且在15-60分钟后，形成产物。在25-30℃下搅拌反应物料总共4小时。将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(280.0mL)洗涤。将产物在50-60℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到5-氮杂胞苷一盐酸盐，为白色结晶固体(138.0g)。在多次运行期间5-氮杂胞苷一盐酸盐的平均产量为约135.5g，其平均纯度为约99.3%，平均收率为约86.4%。在5次运行期间，5-氮杂胞苷一盐酸盐的最大收率为约93.29%。在5次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.64%。

在一个实施方案中，采用上述程序，测定接下来的所得一盐酸盐的HCl含量：

理论值：13.0%

第1A批：12.99%

第1B批：13.95%

第1C批：12.82%

第1D批：12.66%

第1E批：12.79%。

6.反应进展(盐形成步骤)

(a)5-氮杂胞苷半硫酸盐的制备

在25-30℃、氮气氛下，将5-氮杂胞苷(140.0g，0.5732mol)在甲醇(1.4L)中的混合物搅拌10分钟后，冷却至20-25℃，得到白色浆液。在25℃以下，在30分钟的时间内向该混合物中慢慢加入硫酸(56.16g，0.5732mol)。在25-30℃下，搅拌所得混合物2小时。然后在25-30℃、氮气氛下，将混合物过滤，用甲醇(280mL)洗涤。在50-60℃下将固体真空干燥，得到5-氮杂胞苷半硫酸盐的甲醇溶剂合物，为白色固体(163.5g，MW325.2；收率87.7%；熔化范围：141.2-144.2℃；SOR：-4.0°(水中25℃下C=1)。

在一个实施方案中，采用上述程序，测量接下来的所得半硫酸盐甲醇溶剂合物的硫酸含量：

理论值：15.0%

第2A批：15.69%

第2B批：15.67%

第2C批：14.93%。

(b)5-氮杂胞苷甲磺酸盐的制备

在25-30℃、氮气氛下，将5-氮杂胞苷(3.0g，12.28mmol)在甲醇(30mL)中的混合物搅拌5分钟，得到白色浆液。在30℃以下，在5分钟的时间内向该混合物中慢慢加入甲磺酸(1.18g，12.28mmol)，得到清液。在25-30℃下搅拌所得混合物2小时(约15-30分钟后，白色固体沉淀)。然后在25-30℃、氮气氛下，将混合物过滤，用甲醇(9mL)洗涤。在50-60℃下将固体真空干燥，得到5-氮杂胞苷甲磺酸盐的甲醇溶剂合物，为白色结晶固体(2.4g，MW372.35；收率52.7%；熔化范围：133.5-136.8℃；SOR：-2.3°(水中25℃下C=1)。

(c)5-氮杂胞苷氢溴酸盐的制备

在25-30℃、氮气氛下，将5-氮杂胞苷(3.0g，12.28mmol)在甲醇(30mL)中的混合物搅拌5分钟后，冷却至20-25℃，得到白色浆液。在25℃以下，在30分钟的时间内，向该混合物中慢慢加入含HBr的乙酸(33%w/w，3.01g，12.28mmol)，得到清液。在25-30℃下搅拌所得混合物12小时(约4-5小时后，白色固体沉淀)。然后在25-30℃、氮气氛下，将混合物过滤，用甲醇(9mL)洗涤。在50-60℃下将固体真空干燥，得到5-氮杂胞苷氢溴酸盐，为白色结晶固体(2.68g，MW325.12；收率67.0%；熔化范围：162.4-164.9℃；SOR：-3.9°(水中25℃下C=1)。

在一个实施方案中，采用上述程序，测定接下来的所得氢溴酸盐的HBr含量：

理论值：24.88%

第3A批：25.15%

第3B批：25.27%。

(d)5-氮杂胞苷盐和金属含量

针对5-氮杂胞苷盐形成，对多种无机和有机酸进行了评价，并测定5-氮杂胞苷盐中的残留金属含量。结果概括于下表2。

盐酸(HCl)与5-氮杂胞苷形成稳定的盐，其含有低含量的锡(8ppm)。5-氮杂胞苷盐酸盐的形成得到基本不含残留金属杂质的产物。

7.5-氮杂胞苷的游离碱的制备(游离碱形成)

在25-30℃、氮气氛下，向3-L4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷HCl盐(120.0g，0.4274mol，实施例A-5)和甲醇(1.2L)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟。在≤30℃时，慢慢加入三乙胺(64.8g，0.64mol)。在25-30℃下搅拌浆液2小时。将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(300mL)洗涤。通过将10%硝酸银溶液加入一部分滤液中，来监测滤液中氯化物的存在。试验表明在此阶段存在氯化物(观察到白色混浊)。将湿产物悬浮于甲醇(1.0L)中，并在25-30℃下搅拌10分钟。将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(200.0mL)洗涤。在甲醇洗涤后，在滤液中未观察到氯化物。然后将产物在50-60℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到5-氮杂胞苷游离碱，为白色结晶固体(103.5g)。在多次运行期间，5-氮杂胞苷游离碱的平均产量为约103.4g，其平均纯度为约99.5%，平均收率为约97.5%。在5次运行期间，5-氮杂胞苷游离碱的最大收率为约99.13%。在5次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.77%。

8.反应进展(游离碱形成步骤)

针对盐分解和5-氮杂胞苷游离碱形成步骤对多种碱进行了评价。结果概括于下表3。

9.5-氮杂胞苷的重结晶

在25-30℃、氮气氛下，向500-mL4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷游离碱(80.0g，0.3275mol，实施例A-7)和DMSO(200.0mL)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟后，逐步加热至85-90℃。将物料在85-90℃下搅拌10分钟，得到清液。在85-90℃下，将清液通过滤纸过滤除去不溶性颗粒后，用热的DMSO(80.0mL)洗涤。在70-80℃下，在3-4小时的时间内，将甲醇(1.2L)慢慢装入经过滤的含有产物的DMSO溶液中。在70-80℃下搅拌混合物15分钟后，在2-3小时内逐渐冷却至25-30℃。在25-30℃下搅拌物料15小时，在氮气下过滤。在25-30℃下将固体产物用甲醇(240.0mL)洗涤。将固体产物在85-90℃下真空(10-15mmHg)干燥，直到干燥失重(LOD)降到0.4%以下，得到5-氮杂胞苷，为白色结晶固体(75.6g)。在多次运行期间，在重结晶步骤后，5-氮杂胞苷的平均产量为约75.8g，其平均纯度为约99.6%，平均收率为约95.1%。在3次运行期间，5-氮杂胞苷的最大收率为约95.80%。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.71%。

B.氯化铁路线

1.甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶的制备

在25-30℃、氮气氛下，将5-氮杂胞嘧啶(200.0g，1.7842mol，纯度≥98%)和六甲基二硅氮烷(HMDS)(1.4L，6.72mol，纯度≥98%)装入3-L4颈圆底烧瓶中。加入硫酸铵(10.0g，0.0756mol)。在125-130℃下将混合物逐渐加入至回流。保持回流6小时。通常，在2-4小时后，反应物料变成清液，而且一旦清液形成，反应便基本完成。

使反应物料逐渐冷却至40-50℃。在40-50℃下真空(10-15mmHg)馏出HMDS，得到白色固体。使用氮气中断固体之上的真空。在25-30℃下，将甲苯(400.0mL)加入固体残余物中后，在40-50℃下真空(10-15mmHg)馏出溶剂，得到固体。使用氮气中断固体之上的真空。使固体逐渐冷却至25-30℃，并将其转入下一步骤。以75-80%的收率回收HMDS，其纯度为约90-95%。

2.乙酰基受保护的5-氮杂胞苷的制备(偶联)

在25-30℃、氮气氛下，向甲硅烷基化5-氮杂胞?嘧啶(?实施例B-1)中加入二氯甲烷(2.0L)。在25-30℃下搅拌混合物10分钟，得到清液。

在氮气下，在25-30℃下向单独的5-L4颈圆底烧瓶中加入1,2,3,5-四-O-乙酰基-β-D-呋喃核糖(511.1g，1.6058mol)和二氯甲烷(1.0L)。在25-30℃下搅拌混合物10分钟，得到清液。在25-30℃下一次性加入无水氯化铁(361.7g，1.9627mol)。在25-30℃下搅拌混合物10分钟，得到暗红色物料。使反应物料逐渐冷却至0-5℃。在≤10℃时，在90分钟内，滴加含甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶(实施例B-1)的二氯甲烷(添加略微放热)，形成透明的深褐色物料。在0-5℃、氮气氛下，搅拌反应物料15小时。

通过HPLC检查反应进程。取出5g反应物料，在10℃下用饱和NaHCO₃水溶液中和。分离二氯甲烷层，并提供用于IPC-HPLC。一旦符合IPC(5-氮杂胞嘧啶不大于0.5%)，将反应物料转移至10-L圆底烧瓶用于后处理。

在≤10℃时，向反应物料中加入二氯甲烷(3.0L)和碳酸氢钠(2.0kg)。在≤10℃时，在60分钟内滴加冷却水(1.6L)(添加放热)。反应物料为深褐色的，最终的pH为约6。在≤10℃时，将混合物搅拌30分钟。在15-30分钟后，氧化铁的褐色固体沉淀至烧瓶底。将

(200g)加入混合物中，在≤10℃时，搅拌物料10分钟。混合物经

过滤，用二氯甲烷(1.0L)洗涤。在≤10℃时，分离有机层，并且在≤10℃时，用水(1.0L)洗涤。然后在≤10℃时，有机层用10%EDTA二钠盐溶液洗涤两次(300g盐，2x1.5L)，用水洗涤一次(1.0L)。有机层经无水硫酸钠过滤，在40-45℃、大气条件下将溶剂馏出，进一步在40-45℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到粘性的布满泡沫的固体。在30-35℃下，向残余物中加入甲醇(200mL)。然后在40-45℃下真空(10-15mmHg)馏出溶剂，并真空脱气30分钟，得到2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷，为粘性的布满泡沫的白色固体。2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷在多次运行期间的平均产量为约524g，其平均纯度为约63.3%，平均收率为约50.2%(%收率考虑了产物的HPLC纯度)。在3次运行期间，2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷的最大收率为约64.9%(%收率考虑了产物的HPLC纯度)。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约82.45%。

3.5-氮杂胞苷的制备(脱保护)

在25-30℃下，向2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷(实施例B-2)中加入甲醇(2.0L)。在25-30℃下搅拌浆液10分钟，在25-30℃、氮气氛下，慢慢加入含25%甲醇钠的甲醇(80.0mL)。加入后，反应物料变成清液，并且立即形成产物。反应物料的pH值高于10。在25-30℃下搅拌反应物料18小时。

通过HPLC检查反应进程。取出反应物料的样品，并提供用于IPC-HPLC。一旦符合IPC(IPC-HPLC：2’,3’,5’-三乙酰基阿扎胞苷≤0.5%)，便将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(600.0mL)洗涤。将产物在60-65℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到灰白色固体(195.5g)。在多次运行期间5-氮杂胞苷的平均产量为约193.7g，其平均纯度为约91.8%，平均收率为约44.4%(以5-氮杂胞嘧啶计)。在3次运行期间，5-氮杂胞苷的最大收率为约44.86%(以5-氮杂胞嘧啶计)。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约93.28%。

4.反应进展(偶联和脱保护步骤)

通过改变参数例如试剂的摩尔比率，使偶联步骤的反应条件最优化。结果概括于下表4中。

5.5-氮杂胞苷HCl盐的制备(盐形成)

在25-30℃、氮气氛下，向3-L4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷(175.0g，0.7166mol，实施例B-3)和甲醇(1.75L)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟，然后冷却至20-25℃。在≤25℃时，在5分钟内慢慢加入异丙醇-HCl(350.0mL，约14%溶液)。加入后，反应物料变成清液，并且在15-60分钟后，形成产物。在25-30℃下搅拌反应物料总共4小时。在25-30℃下将产物在氮气下过滤，用甲醇(350.0mL)洗涤。将产物在50-60℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到5-氮杂胞苷一盐酸盐，为灰白色结晶固体(151.0g)。在多次运行期间5-氮杂胞苷一盐酸盐的平均产量为约148.8g，其平均纯度为约99.0%，平均收率为约74.0%。在3次运行期间，5-氮杂胞苷一盐酸盐的最大收率为约75.09%。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.12%。

6.5-氮杂胞苷的游离碱的制备(游离碱形成)

在25-30℃、氮气氛下，向3-L4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷盐酸盐(130.0g，0.4631mol，实施例B-5)和甲醇(1.3L)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟。在≤30℃时，慢慢加入三乙胺(70.3g，0.6946mol)。在25-30℃下搅拌浆液2小时。将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(300.0mL)洗涤。通过将10%硝酸银溶液加入一部分滤液中，检测滤液中氯化物的存在情况。试验表明在此阶段存在氯化物(观察到白色混浊)。将湿产物悬浮于甲醇(1.0L)中，并在25-30℃下搅拌10分钟。将产物在氮气下过滤，在25-30℃下用甲醇(200.0mL)洗涤。在甲醇洗涤后，在滤液中未观察到氯化物。然后将产物在50-60℃下真空(10-15mmHg)干燥，得到5-氮杂胞苷游离碱，为灰白色固体(113.0g)。在多次运行期间，5-氮杂胞苷游离碱的平均产量为约112.5g，其平均纯度为约99.2%，平均收率为约99.5%。在3次运行期间，5-氮杂胞苷游离碱的最大收率为约99.99%。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.38%。

7.5-氮杂胞苷的重结晶

在25-30℃、氮气氛下，向500-mL4颈圆底烧瓶中加入5-氮杂胞苷游离碱(100.0g，0.4095mol，实施例B-6)和DMSO(250.0mL)。在25-30℃下搅拌悬浮液10分钟，逐步加热至85-90℃。在85-90℃下搅拌物料10分钟，得到清液。在85-90℃下，将清液通过滤纸过滤除去不溶性颗粒，用热的DMSO(100.0mL)涤洗。在70-80℃下，在3-4小时的时间内，将甲醇(1.5L)慢慢装入经过滤的含有产物的DMSO溶液中。在70-80℃下搅拌混合物15分钟后，在2-3小时内逐渐冷却至25-30℃。在25-30℃下搅拌物料15小时，在氮气下过滤。在25-30℃下将固体产物用甲醇(240.0mL)洗涤。将固体产物在85-90℃下真空(10-15mmHg)干燥直到LOD降到0.4%以下，得到5-氮杂胞苷，为白色固体(86.0g)。在多次运行期间，在重结晶步骤后5-氮杂胞苷的平均产量为约86.0g，其平均纯度为约99.4%，平均收率为约86.0%。在3次运行期间，5-氮杂胞苷的最大收率为约87.5%。在3次运行期间，产物的最大HPLC纯度为约99.54%。

C.比较数据

沿用于制备5-氮杂胞苷的3个不同路线，自不同步骤的重复批量收集反应收率、纯度概况(通过HPLC)、含水量(通过KF，%w/w)、比旋光度(SOR，[α]_D)和金属杂质含量(例如Sn或Fe，当适用时)。三氟甲磺酸酯路线利用TMS-三氟甲磺酸酯作为偶联步骤的路易斯酸。氯化锡路线利用氯化锡作为偶联步骤中的路易斯酸(参见本文实施例A)。氯化铁路线利用氯化铁作为偶联步骤的路易斯酸(参见本文实施例B)。下表中概括了具体批次的数据。对于自5-氮杂胞嘧啶和乙酰基受保护的糖合成5-氮杂胞苷，氯化锡和氯化铁两者得到良好收率。盐酸盐形成及盐分解形成游离碱和游离碱重结晶的后续步骤始终得到基本不含金属杂质的5-氮杂胞苷批次。

1.三乙酰基5-氮杂胞苷的制备

表5：三氟甲磺酸酯路线

表6：氯化锡路线

表7：氯化铁路线

*5-氮杂胞嘧啶

残余量

理论%收率以HPLC纯度为基础。

2.通过脱乙酰制备5-氮杂胞苷

表8：三氟甲磺酸酯路线

表9：氯化锡路线

表10：氯化铁路线

*5-氮杂胞嘧啶

%收率以5-氮杂胞嘧啶计

3.5-氮杂胞苷盐酸盐的制备

表11：氯化锡路线

表12：氯化铁路线

4.从HCl盐制备5-氮杂胞苷游离碱

表13：氯化锡路线

表14：氯化铁路线

5.5-氮杂胞苷的重结晶

表15：氯化锡路线

表16：氯化铁路线

D.分析数据

下面获得和提供重复批次的5-氮杂胞苷最终产物、5-氮杂胞苷的盐和三乙酰基5-氮杂胞苷中间体的分析数据。

1.5-氮杂胞苷最终产物

¹H NMR(DMSO-d₆)δ8.57(s,1H),7.52(d,2H,J=10.6Hz),5.65(d,1H,J=3.7Hz),5.42(d,1H,J=5.1Hz),5.10(t,1H,J=5.0Hz),5.02(d,1H,J=5.7Hz),4.07(m,1H),4.00(m,1H),3.84(m,1H),3.67(m,1H),3.55(m,1H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ166.1,156.7,153.7,89.6,84.6,74.2,69.3,60.5。

LC-MS ESI：m/z245.2(M+H⁺)，267.1(M+Na⁺)。

对于自氯化锡路线获得的5-氮杂胞苷，图1表示IR光谱；图2表示DSC曲线；图3表示XRPD图案。下表进一步提供了XRPD数据：

表17：XRPD-最强的3个峰

表18：XRPD-峰值数据列表

对于自氯化铁路线获得的5-氮杂胞苷，图4表示IR光谱；图5表示DSC曲线；图6表示XRPD图案。下表中进一步提供XRPD数据。

表19：XRPD-最强的3个峰

表20：XRPD-峰值数据列表

下表中提供了重复批次的5-氮杂胞苷最终产物的其它分析数据。

表21：氯化锡路线

表22：氯化铁路线

测定了重复批次的5-氮杂胞苷的金属含量。对于自获得的5-氮杂胞苷氯化锡路线，3个重复批次的5-氮杂胞苷最终产物中的锡含量分别<0.1ppm、<0.1ppm和0.14ppm。对于自获得的5-氮杂胞苷氯化铁路线，3个重复批次的5-氮杂胞苷最终产物中的铁含量分别<0.1ppm、<0.1ppm和<0.1ppm。

2.5-氮杂胞苷一盐酸盐

¹H NMR(DMSO-d₆)δ9.86(s,1H),8.94(s,2H),8.91(s,1H),5.58(d,1H,J=1.4Hz),4.12(m,1H),4.05(m,1H),3.90(m,1H),3.76(m,1H),3.59(m,1H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ160.3,158.3,146.6,90.7,84.5,74.2,68.0,59.2。

LC-MS ESI：m/z245.2(M+H⁺)。

图7表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的IR光谱；图8表示5-氮杂胞苷一盐酸盐的DSC曲线。对于获自氯化锡路线的5-氮杂胞苷一盐酸盐，图9表示XRPD图案。对于获自氯化铁路线的5-氮杂胞苷一盐酸盐，图10表示XRPD图案。下表进一步提供了XRPD数据：

表23：XRPD(氯化锡路线)-最强的3个峰

表24：XRPD(氯化锡路线)-峰值数据列表

表25：XRPD(氯化铁路线)-最强的3个峰

表26：XRPD(氯化铁路线)-峰值数据列表

3.5-氮杂胞苷半硫酸盐甲醇溶剂合物

¹H NMR(DMSO-d₆)δ8.76(s,1H),8.69(s,1H),8.25(s,1H),5.61(d,1H,J=2.4Hz),4.09(m,1H),4.02(m,1H),3.87(m,1H),3.72(m,1H),3.57(m,1H),3.14(s,3H)(CH₃OH)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ162.8,157.5,150.2,90.2,84.5,74.2,68.5,59.7,48.9(CH₃OH)。

LC-MS ESI：m/z245.2(M+H⁺)。

图11表示5-氮杂胞苷半硫酸盐甲醇溶剂合物的IR光谱；图12表示5-氮杂胞苷半硫酸盐甲醇溶剂合物的DSC曲线。图13表示5-氮杂胞苷半硫酸盐甲醇溶剂合物的XRPD图案。下表中进一步提供了XRPD数据：

表27：XRPD-最强的3个峰

表28：XRPD-峰值数据列表

4.5-氮杂胞苷甲磺酸盐甲醇溶剂合物

¹H NMR(DMSO-d₆)δ9.74(s,1H),9.07(s,1H),8.94(s,1H),5.58(d,1H,J=0.9Hz),4.11(m,1H),4.05(m,1H),3.90(m,1H),3.78(m,1H),3.59(m,1H),3.15(s,3H)(CH₃OH),2.49(s,3H)(CH₃SO₃H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ160.0,158.3,146.9,90.7,84.4,74.2,67.9,59.2,48.9(CH₃OH),40.0(CH₃SO₃H)。

LC-MS ESI：m/z245.2(M+H⁺)。

图14表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐甲醇溶剂合物的IR光谱；图15表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐甲醇溶剂合物的DSC曲线。图16表示5-氮杂胞苷甲磺酸盐甲醇溶剂合物的XRPD图案。下表中进一步提供了XRPD数据：表29：XRPD-最强的3个峰

表30：XRPD-峰值数据列表

5.5-氮杂胞苷一氢溴酸盐

¹H NMR(DMSO-d₆)δ9.50(s,1H),8.91(s,1H),8.56(s,1H),5.60(d,1H,J=1.7Hz),4.12(m,1H),4.05(m,1H),3.90(m,1H),3.77(m,1H),3.59(m,1H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ160.0,158.3,147.0,90.7,84.6,74.2,68.1,59.3。

LC-MS ESI：m/z245.0(M+H⁺)。

图17表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的IR光谱；图18表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的DSC曲线。图19表示5-氮杂胞苷氢溴酸盐的XRPD图案。下表中进一步提供了XRPD数据：

表31：XRPD-最强的3个峰

表32：XRPD-峰值数据列表

6.2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷

¹H NMR(DMSO-d₆)δ8.32(s,1H),7.72(d,2H,J=9.1Hz),5.66(d,1H,J=3.2Hz),5.53(m,1H),5.41(t,1H,J=6.6Hz),4.32(dd,1H,JJ=2.8,11.6Hz),4.20(m,1H),4.14(m,1H),2.04(s,1H),2.02(s,1H),2.00(s,1H)。

¹³C NMR(DMSO-d₆)δ170.5,169.9,169.7,166.2,158.0,152.9,90.8,79.3,72.9,70.0,63.2,20.8,20.6,20.6。

LC-MS ESI：m/z371.2(M+H⁺)，393.1(M+Na⁺)。

图20表示2’,3’,5’-三乙酰基-5-氮杂胞苷的IR光谱。

上述实施方案只是示例性的，本领域技术人员应了解，或只是采用例行实验便能够确定特定化合物、原料和程序的各种等同物。所有这类等同物均被视为在本公开内容的范围内。

本文提及的所有专利、专利申请和出版物以其整体结合到本文中。本申请中任何参考文献的引用或认同并非承认这类参考文献可作为本申请的先有技术获得。参照随附权利要求书更好地理解本公开内容的整个范围。

Claims (49)

1.一种用于制备5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物的方法，所述方法包括以下步骤：在金属路易斯酸的存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与受保护的β-D-呋喃核糖反应，得到受保护的5-氮杂胞苷，使受保护的5-氮杂胞苷脱保护，得到5-氮杂胞苷，对5-氮杂胞苷进行纯化，得到基本上不含基于金属的杂质的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。

2.权利要求1的方法，其中纯化的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物中的总的基于金属的杂质小于约20ppm w/w。

3.权利要求1的方法，包括以下步骤：

(a)使5-氮杂胞嘧啶与甲硅烷基化试剂反应，得到甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶；

(b)在金属路易斯酸存在下，使甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶与酰基受保护的β-D-呋喃核糖反应；用水和至少一种中和试剂猝灭反应，得到受保护的5-氮杂胞苷；

(c)在醇中，使受保护的5-氮杂胞苷与选自醇盐、氨和四取代的氢氧化铵的碱反应，得到5-氮杂胞苷；和

(d)在有机溶剂中，使得自步骤(c)的5-氮杂胞苷与酸接触，得到5-氮杂胞苷的盐。

4.权利要求3的方法，其还包括以下步骤：

(e)在有机溶剂中，使得自步骤(d)的5-氮杂胞苷与碱接触，得到5-氮杂胞苷游离碱。

5.权利要求4的方法，其还包括以下步骤：

(f)使得自步骤(e)的5-氮杂胞苷重结晶。

6.权利要求3-5中任一项的方法，其中所述甲硅烷基化5-氮杂胞嘧啶是下式(A)的化合物：

其中每个R₁独立地为任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。

7.权利要求6的方法，其中R₁为甲基。

8.权利要求3-7中任一项的方法，其中用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂是三甲基甲硅烷基试剂。

9.权利要求3-8中任一项的方法，其中用于步骤(a)的甲硅烷基化试剂是六甲基二硅氮烷。

10.权利要求3-9中任一项的方法，其中步骤(a)的甲硅烷基化反应在硫酸铵的存在下进行。

11.权利要求3-10中任一项的方法，其中所述受保护的β-D-呋喃核糖是下式(B)的化合物：

其中每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。

12.权利要求3-10中任一项的方法，其中所述受保护的β-D-呋喃核糖是：

13.权利要求3-12中任一项的方法，其中所述金属路易斯酸是氯化锡或氯化铁。

14.权利要求3-12中任一项的方法，其中所述金属路易斯酸是氯化锡。

15.权利要求3-12中任一项的方法，其中所述金属路易斯酸是氯化铁。

16.权利要求3-11和13-15中任一项的方法，其中所述受保护的5-氮杂胞苷是下式(C)的化合物：

其中每个R₂独立地为氢、任选取代的C₁-C₁₀烷基、任选取代的C₃-C₁₀环烷基或任选取代的C₆-C₁₀芳基。

17.权利要求3-15中任一项的方法，其中所述受保护的5-氮杂胞苷是：

18.权利要求3-17中任一项的方法，其中步骤(b)的偶联反应在具有低水溶性的溶剂中进行。

19.权利要求18的方法，其中所述具有低水溶性的溶剂是二氯甲烷。

20.权利要求3-19中任一项的方法，其中步骤(b)的偶联反应在介于约0℃和约5℃之间的温度下进行。

21.权利要求3-20中任一项的方法，其中步骤(b)中的中和试剂是碳酸盐或碳酸氢盐。

22.权利要求3-20中任一项的方法，其中步骤(b)中的中和试剂是碳酸氢钠。

23.权利要求3-22中任一项的方法，其中在低于约10℃的温度下猝灭步骤(b)的反应。

24.权利要求3-23中任一项的方法，其中步骤(c)中的碱是醇盐。

25.权利要求24的方法，其中所述醇盐是甲醇钠。

26.权利要求3-25中任一项的方法，其中步骤(c)中的醇是甲醇。

27.权利要求3-26中任一项的方法，其中步骤(d)中所使用的酸是盐酸、氢溴酸、硫酸或甲磺酸。

28.权利要求3-26中任一项的方法，其中步骤(d)中所使用的酸是盐酸。

29.权利要求3-28中任一项的方法，其中步骤(d)中所使用的有机溶剂是醇。

30.权利要求3-29中任一项的方法，其中步骤(d)中所使用的有机溶剂是甲醇。

31.权利要求3-30中任一项的方法，其中在步骤(d)中形成的5-氮杂胞苷的盐是5-氮杂胞苷一盐酸盐。

32.权利要4-31求中任一项的方法，其中步骤(e)中所使用的碱是有机碱。

33.权利要求32的方法，其中所述有机碱是三乙胺。

34.权利要求4-33中任一项的方法，其中步骤(e)中所使用的有机溶剂是醇。

35.权利要求4-34中任一项的方法，其中步骤(e)中所使用的有机溶剂是甲醇。

36.权利要求5-35中任一项的方法，其中步骤(f)包括以下步骤：

(1)在足以允许5-氮杂胞苷溶解的温度下，将得自步骤(e)的5-氮杂胞苷溶于二甲亚砜中；任选将溶液过滤以除去不溶性颗粒；

(2)将抗溶剂加入步骤(1)的溶液中；和

(3)使步骤(2)的混合物冷却，其中5-氮杂胞苷重结晶。

37.权利要求36的方法，其中步骤(f)(2)的抗溶剂是醇。

38.权利要求36或37的方法，其中步骤(f)(2)的抗溶剂是甲醇。

39.权利要求36-38中任一项的方法，其中步骤(f)还包括以下步骤：

(4)经过滤收集得自步骤(3)的重结晶的5-氮杂胞苷；和

(5)将得自步骤(4)的5-氮杂胞苷真空干燥。

40.一种5-氮杂胞苷的盐，其选自盐酸盐、氢溴酸盐和硫酸盐。

41.权利要求40的盐，其中所述盐是5-氮杂胞苷的一盐酸盐。

42.权利要求40的盐，其中所述盐是5-氮杂胞苷的一氢溴酸盐。

43.权利要求40的盐，其中所述盐是5-氮杂胞苷的半硫酸盐，其是甲醇溶剂合物。

44.权利要求40的盐，其中所述盐是5-氮杂胞苷的甲磺酸盐。

45.权利要求40-44中任一项的盐，其中所述盐基本不含杂质。

46.权利要求40-45中任一项的盐，其中所述盐基本上是晶体。

47.通过权利要求1-39中任一项的方法制备的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。

48.可自权利要求1-39中任一项的方法获得的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物、水合物或多晶型物。

49.基本上是晶体的5-氮杂胞苷或其盐、溶剂合物或水合物。

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