CN103601764A - 栀子提取物中西红花苷的纯化分离技术 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种栀子提取物中西红花苷的纯化分离技术，即利用泡沫分离器及不同极性大孔树脂柱对西红花苷类成分进行吸附、纯化、分离技术，本发明依据西红花苷中不同组分的亲水性及极性差异，先将栀子提取物水溶液置于泡沫分离器中，加入乙酸乙酯进行萃取，下层液浓缩成干膏放入至15%的乙醇中充分溶解，溶解液通入四种大孔树脂柱进行吸附，并通过不同浓度乙醇进行梯度洗脱，来实现西红花苷-1，苷-2，苷-3，苷-4的纯化分离目的，本发明选用的原料价廉易得，分离纯化工艺操作简便，纯化后的西红花苷各组分纯度高，杂质少，质量性能指标可达到药品、食品以及化妆品等行业标准。

Description

栀子提取物中西红花苷的纯化分离技术

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种栀子提取物中西红花苷的纯化分离技术。

背景技术

西红花苷主要分为西红花苷-1、苷-2、苷-3、苷-4，近年来大量药理学研究表明，西红花苷的药用价值巨大，目前发现西红花苷的主要功效为：（1）西红花苷能抑制细胞内钙离子的升高，具有明显的钙拮抗作用；（2）国内外学者对西红花苷的降脂作用进行了大量的临床研究，研究表明西红花苷能够显著改善脂肪肝患者的肝功能及血液环境，对于脂肪肝有良好的治疗效果；（3）西红花苷能提高细胞内NOS的活性及细胞NO的含量，从而保护内皮细胞不受损伤，而动脉粥样硬化与内皮细胞功能失调有直接关系，因而其能够很好的抗动脉粥样硬化；（4）西红花苷能降低外因引起的ALT、AST及MDA的升高，对肝损伤有一定的保护作用；（5）西红花苷可阻滞肿瘤细胞于G₀/G₁期，影响RNA的转录并调控相关蛋白的合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖；（6）目前研究显示西红花苷对心血瘀阻型冠心病具有较好的治疗效果。目前有极少数技术是对四种西红花苷进行分离，要确认四种西红花苷分别具有哪种功效，就需要对每种西红花苷进行具体的药理学研究，能够提纯、分离出四种纯净的西红花苷具有重大的意义。

 除此之外，西红花苷还被大量应用在作为食品添加剂和化妆品等领域，市场需求量大，目前，市场上的西红花苷主要是从西红花以及栀子果实中提取，而西红花价格昂贵，主要从伊朗进口，提取西红花苷原料费用巨大，栀子果实中西红花苷的含量较低，目前工艺只有通过水和醇进行提取，没有进行深层次分离纯化，产品杂质多，质量达不到所需标准，很难将其应用于医药、食品以及化妆品等领域。本发明以栀子作为原料，来源广泛，价格便宜，技术中结合西红花苷亲水性，采用泡沫分离技术将西红花苷与其他成分分离，达到纯化目的，根据四种西红花苷极性不同，选择不同的大孔树脂吸附以及不同浓度的乙醇洗脱，以分离四种西红花苷，本发明工艺简单，条件要求低，很易达到，最终产物纯度高，杂质少。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术中不能得到高纯度的西红花苷等问题而提供了一种新的纯化分离技术，即利用泡沫分离与大孔树脂吸附技术，工艺操作简单，所得西红花苷类成分纯度高，各理化指标符合食品、医药、化妆品等行业标准。

为了实现本发明目的，采用栀子提取物为原料，按照以下步骤进纯化分离西红花苷：

（1）将一定量的栀子提取物溶解在适量水中，注入至泡沫分离器中，然后再加入相对于栀子提取物2倍量的乙酸乙酯，在一定的温度和压力条件下以一定流量向泡沫分离器中通入氮气，2h-3h后将泡沫分离器中的水层分离出来，乙酸乙酯层以备它用；

（2）将上述步骤中分离出来的水层减压蒸干，蒸干后的干膏放入到15%的乙醇中充分溶解；

（3）将四根大孔树脂柱分别进行串联，柱子内分别盛有D101，AB-8，HPD500，S-8四种不同的大孔树脂，编号为1、2、3、4；将上述步骤中乙醇溶液以10-15ml/min流速注入至大孔树脂柱，吸附1-2h后分别用45%-50%的乙醇对1号柱子进行洗脱，得到西红花苷-1的洗脱液；用55%-60%的乙醇对2号柱子进行洗脱，得到西红花苷-2的洗脱液；用65%-70%的乙醇对3号柱子进行洗脱，得到西红花苷-4的洗脱液；用75%-80%的乙醇对4号柱子进行洗脱，得到西红花苷-3的洗脱液；

（4）分别将上述四种洗脱液进行浓缩，减压干燥，得到四种西红花苷最终产物。

其中，所述步骤（1）中泡沫分离塔的温度为40℃-50℃，压力为0.5Mpa-0.6Mpa，通入氮气的流速为1L/h-1.5L/h；

所述步骤（2）中，所用的乙醇浓度为15%；

所述步骤（2）和（4）中，减压蒸干的温度为55℃-60℃，压力为0.06Mpa-0.08Mpa；

所述步骤（3）中，将四种不同的大孔树脂柱进行串联吸附，然后分别进行洗脱；

所述步骤（3）中，洗脱西红花苷-1的乙醇浓度为45%-50%，洗脱西红花苷-2的乙醇浓度为55%-60%，洗脱西红花苷-4的乙醇浓度为65%-70%，洗脱西红花苷-3的乙醇浓度为75%-80%；

所述步骤（4）中，浓缩温度为80℃，浓缩后溶液相对密度为1.10-1.20，减压干燥温度及压力为60℃、0.06Mpa-0.08Mpa。

经过对上述所得四种产物用高效液相色谱仪进行检测分析，分别得到西红花苷-1的含量为90%-95%，西红花苷-2的含量为85%-90%，西红花苷-3的含量为85%-95%，西红花苷-4的含量为85%-90%。

本发明的优点在于：

（1）本发明选用栀子提取物作为原料，价格便宜；（2）通过使用不同极性的大孔树脂吸附以及不同浓度乙醇梯度洗脱，能够分别得到高质量高纯度的西红花苷-1、苷-2、苷-3、苷-4；（3）产物收率高，杂质少，质量性能指标满足食品、药品以及化妆品等行业的标准。

具体实施方法

 实施例1

（1）将5g的栀子提取物溶解在其3倍量的水中，注入到泡沫分离器中，加入相对于栀子提取物2倍量的乙酸乙酯，在45℃，0.5Mpa条件下以1.2L/h的流速向泡沫分离器中通入氮气，2h-3h后将泡沫分离器中的水层分离出来，乙酸乙酯层以备它用；

（2）将上述步骤中分离出来的水层在58℃、0.07Mpa条件下进行减压蒸干，蒸干后的干膏放入到15%的乙醇中充分溶解；

（3）将四根大孔树脂柱分别进行串联，柱子内分别盛有D101，AB-8，HPD500，S-8四种不同的大孔树脂，编号分别为1、2、3、4；将上述步骤中的乙醇溶液以10ml/min流速注入串联大孔树脂柱中，吸附1.5h后分别用45%乙醇对1号柱子进行洗脱，得到西红花苷-1的洗脱液；用60%乙醇对2号柱子进行洗脱，得到西红花苷-2的洗脱液；用70%乙醇对3号柱子进行洗脱，得到西红花苷-4的洗脱液；用80%乙醇对4号柱子进行洗脱，得到西红花苷-3的洗脱液；

（4）分别将上述四种洗脱液在80℃条件下进行浓缩至相对密度为1.15，浓缩液在60℃、0.06Mpa进行减压干燥，得到四种西红花苷最终产物，称重得苷-1的质量为1.22g，苷-2的质量为0.53g，苷-3的质量为0.42g，苷-4的质量为0.46g。

经检测得到的西红花苷-1的含量为92.5%，苷-2的含量为89.8%，苷-3的含量为87.9%，苷-4的含量为89.5%。

实施例2

（1）将5g的栀子提取物溶解在3倍量的水中，注入到泡沫分离器中，然后再加入相对于栀子提取物2倍量的乙酸乙酯，在50℃，0.6Mpa条件下以1.5L/h的流速向泡沫分离器中通入氮气，2h-3h后将泡沫分离器中的水层分离出来，乙酸乙酯层以备它用；

（2）将上述步骤中分离出来的水层在55℃，0.08Mpa条件下进行减压蒸干，蒸干后的干膏放入到15%的乙醇中充分溶解；

（3）将四根大孔树脂柱分别进行串联，柱子内分别盛有D101，AB-8，HPD500，S-8四种不同的大孔树脂，编号为1、2、3、4；将上述步骤中的乙醇溶液以15ml/min流速注入大孔树脂柱中，吸附2h后分别用50%乙醇对1号柱子进行洗脱，得到西红花苷-1的洗脱液；用55%乙醇对2号柱子进行洗脱，得到西红花苷-2的洗脱液；用65%乙醇对3号柱子进行洗脱，得到西红花苷-4的洗脱液；用75%乙醇对4号柱子进行洗脱，得到西红花苷-3的洗脱液；

（4）分别将上述四种洗脱液在80℃条件下浓缩至相对密度1.20，浓缩液于60℃，0.07Mpa条件下进行减压干燥，得到四种西红花苷最终产物，称重得苷-1的质量为1.24g，苷-2的质量为0.49g，苷-3的质量为0.44g，苷-4的质量为0.47g。

经检测得到的西红花苷-1的含量为91.8%，苷-2的含量为89.4%，苷-3的含量为86.6%，苷-4的含量为88.9%。

本领域的技术普通技术人员都会理解，在本发明的保护范围内，对于上述实施例进行修改，添加和替换都是可能的，其都没有超出本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种栀子提取物中西红花苷的纯化分离技术，按以下步骤进行：

（1）将一定量的栀子提取物溶解在适量水中，注入至泡沫分离器中，然后再加入相对于栀子提取物2倍量的乙酸乙酯，在一定的温度和压力条件下以一定流量向泡沫分离器中通入氮气，2h-3h后将泡沫分离器中的水层分离出来，乙酸乙酯层以备它用；

（2）将上述步骤中分离出来的水层减压蒸干，蒸干后的干膏放入到15%的乙醇中充分溶解；

（3）将四根大孔树脂柱分别进行串联，柱子内分别盛有D101，AB-8，HPD500，S-8四种不同的大孔树脂，编号为1、2、3、4；将上述步骤中乙醇溶液以10-15ml/min流速注入至大孔树脂柱，吸附1-2h后分别用45%-50%的乙醇对1号柱子进行洗脱，得到西红花苷-1的洗脱液；用55%-60%的乙醇对2号柱子进行洗脱，得到西红花苷-2的洗脱液；用65%-70%的乙醇对3号柱子进行洗脱，得到西红花苷-4的洗脱液；用75%-80%的乙醇对4号柱子进行洗脱，得到西红花苷-3的洗脱液；

（4）分别将上述四种洗脱液进行浓缩，减压干燥，得到四种西红花苷类成分。

2.一种如权利要求1所述，其特征在于：

所述步骤（1）中泡沫分离塔的温度为40℃-50℃，压力为0.5Mpa-0.6Mpa，通入氮气的流速为1L/h-1.5L/h；

所述步骤（2）中，所用的乙醇浓度为15%；

所述步骤（2）和（4）中，减压蒸干的温度为55℃-60℃，压力为0.06Mpa-0.08Mpa；

所述步骤（3）中，将四种不同的大孔树脂柱进行串联吸附，然后分别进行洗脱；

所述步骤（3）中，洗脱西红花苷-1的乙醇浓度为45%-50%，洗脱西红花苷-2的乙醇浓度为55%-60%，洗脱西红花苷-4的乙醇浓度为65%-70%，洗脱西红花苷-3的乙醇浓度为75%-80%；

所述步骤（4）中，浓缩温度为80℃，浓缩后溶液相对密度为1.10-1.20，减压干燥温度及压力为60℃、0.06Mpa-0.08Mpa。