CN106892791A - 提取植物源角鲨烯组合物的方法和含角鲨烯的药物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及功能食品领域，公开了一种提取植物源角鲨烯组合物的方法、一种含角鲨烯的药物的制备方法以及由该方法制备得到的含角鲨烯的药物及其应用。提取植物源角鲨烯组合物的方法包括：将富含角鲨烯的原料依次进行预处理和富集分离，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有35-80重量％的角鲨烯，所述富含角鲨烯的原料中含有5-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。使用本发明的方法提取得到的新的植物源角鲨烯组合物在不需要进一步提纯的前提下就可以获得与现有技术提供的高纯度的角鲨烯(纯度通常高于90％)相当甚至更好的抗氧化效果。

Description

提取植物源角鲨烯组合物的方法和含角鲨烯的药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及功能食品领域，具体地，涉及一种提取植物源角鲨烯组合物的方法、一种含角鲨烯的药物的制备方法以及由该方法制备得到的含角鲨烯的药物及其应用。
背景技术
角鲨烯是一种高度不饱和的烃类化合物，是一种具有特殊气味的无色油状液体，其系统命名为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯，分子式为C30H50。角鲨烯属于一种高度不饱和的直链三萜类化合物，结构式为：
角鲨烯具有抗氧化、促进皮肤健康、促进心血管健康、提高人体耐缺氧能力等诸多功效，广泛应用在医药、化妆品领域，近些年来在保健品领域的应用也逐步扩展。
目前市售的角鲨烯产品均为从深海鲨鱼肝油中提取得到的，随着对深海鲨鱼的动物保护呼声高涨，欧盟国家于2006年在大西洋东北方向限制深海鲨鱼的捕捞，这导致了以深海鲨鱼肝脏为原料的角鲨烯资源日益匮乏。
科研人员也试图通过化学或者生物合成的方法扩充角鲨烯的市场供应，但是化学反应的工艺流程长，且多采用有毒的化学药剂，生产工艺距离工业化大规模生产还存在一定的距离，而且化学合成的角鲨烯双键结构与天然角鲨烯的全反式结构存在差别。
另外，CN102257149B公布了一种制备纯化酵母的方法，采用超量生产角鲨烯的酵母制备高纯度的角鲨烯，用来制备水包油乳液用作免疫佐剂。CN103266137B涉及一种角鲨烯的生产方法，将角鲨烯合成酶基因进行克隆并在大肠杆菌中共表达，从而构建了能合成角鲨烯的重组菌株的方法。但是，生物合成在菌种和目的物的得率等方面都还不理想，还存在某些局限性，距离工业化大规模生产还有一定距离。
由于角鲨烯在植物中也广泛存在，有研究工作以橄榄油或脱臭馏出物为原料对植物源的角鲨烯进行提取研究，由于原料中角鲨烯含量偏低，考虑到生产成本，对角鲨烯进行提纯并不具备工业化生产和商业化的条件，因此植物源角鲨烯的工作多局限在研究所和高校等机构。
由于物料体系组分复杂，并且所涉及的植物源角鲨烯的提纯生产均以较高纯度(90％以上)的角鲨烯产品为目标，现有技术均需要采用多步工艺才可能达到分离纯化的目的，而且采用的处理步骤多，实验流程长，溶剂和能量消耗大，生产效率低。
目前从植物油脱臭过程中产生的植物油脱臭馏出物，尤其是橄榄油脱臭馏出物中提取角鲨烯成为一个有效的方法，根据我国国情，大部分橄榄油都是依靠进口，缺乏橄榄油脱臭馏出物的稳定资源。因此从我国现有的油脂资源中开发设计分离角鲨烯的工艺是一种经济可行的处理方式。
CN102146014A公开了以油茶籽为原料提取角鲨烯的方法，其提取方法的工艺流程为：浸提、浓缩、甲酯化、配位剂-硼砂反应、大孔树脂色谱分离纯化、浓缩、萃取以及洗涤后继续浓缩，得到角鲨烯粗油后再进行超临界二氧化碳萃取，得到含量为80％以上的角鲨烯产品。然而，该方法工艺路线复杂，溶剂能耗消耗大，而且色谱分离存在死吸附、填料需要再生的问题，增加了生产成本。
CN1284752C公开了一种植物角鲨烯的提取方法，将罗汉果的种仁或种籽破碎，用有机溶剂浸渍提取出脂溶性物质，除去有机溶剂，制得罗汉果角鲨烯粗品；将罗汉果角鲨烯粗品过硅胶层析柱，用有机溶剂洗脱，收集洗脱液无色部分，用减压蒸馏法除去有机溶剂，制得罗汉果角鲨烯精品。然而，该方法存在原料角鲨烯含量低，提取成本高的缺点。
CN103483305A公开了采用尿素及溶剂为助剂，使其与油脂脱臭馏出物溶解混合，进行真空脱气并密封，再采用超高压使馏出物中的饱和脂肪酸、脂肪烃和甾醇等快速结晶凝聚，压滤分离后得到滤渣和滤液，脱除溶剂后可得较高纯度的VE、角鲨烯和多不饱和脂肪酸的混合物。此工艺也采用了超高压，并需要真空脱气，增加了能耗和后续处理的难度。
申请号为201410375211.3现有技术公开了一种络合提取角鲨烯的工艺，将油茶树的种仁破碎，加石油醚进行超声提取，过滤，滤液减压浓缩，然后将所得山茶油脂溶性物质浓缩液与强碱的醇溶液混合，加热回流后用石油醚提取，然后加入硝酸银甲醇水溶液进行络合反应，然后继续用石油醚反萃取得到解离后的角鲨烯石油醚有机相；将角鲨烯石油醚有机相用NaCl水溶液清洗后进行减压蒸馏，再次用蒸馏水清洗，真空干燥，即得到终产物角鲨烯精品。然而，该现有技术的工艺流程中引入了硝酸银进行络合反应，大幅度增加了工艺成本，并产生了化学污染的可能，不利于工业生产的推广。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，在不降低含有角鲨烯的产品的效果的前提下提供一种新的植物源角鲨烯组合物，以及提供一种工艺流程简单、成本低且适合工业化生产的获得所述新的植物源角鲨烯组合物的方法，使用本发明的方法提取得到的新的植物源角鲨烯组合物在不需要进一步提纯的前提下就可以获得与现有技术提供的高纯度的角鲨烯(纯度通常高于90％)相当甚至更好的抗氧化效果。
本发明的发明人是基于以下考虑完成本发明的技术方案的：植物源的角鲨烯原料与动物源的角鲨烯原料存在很大的差异，一些组分的含量在动物源中相对较少，而植物源的原料中则含量丰富，以豆甾醇为例，其分子量为412.69，与角鲨烯的分子量(410.72)非常接近，很难与角鲨烯分离开来。发明人考虑若是能够通过简单的工艺操作获得角鲨烯含量适中且能够保留植物源角鲨烯原料中的其它多种活性物质的组合物，则能够大大节约生产成本并且实现含角鲨烯的产品的绿色生产。基于此，发明人进行了一系列创造性研究，并且发现通过简单的工艺操作获得的角鲨烯含量适中且保留植物源角鲨烯原料中的其它多种活性物质的组合物在功效上与高纯度(90％以上)的角鲨烯相当，甚至效果更佳。
第一方面，本发明提供一种提取植物源角鲨烯组合物的方法，该方法包括：将富含角鲨烯的原料依次进行预处理和富集分离，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有35-80重量％的角鲨烯，所述富含角鲨烯的原料中含有5-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。
第二方面，本发明提供一种含角鲨烯的药物的制备方法，该方法包括：
(1)提取植物源角鲨烯组合物：采用本发明前述的提取植物源角鲨烯组合物的方法提取植物源角鲨烯组合物；
(2)制备药物：将含有步骤(1)得到的所述植物源角鲨烯组合物的药学活性成分与药用辅料进行混合。
第三方面，本发明提供由本发明的前述方法制备得到的含角鲨烯的药物。
第四方面，本发明提供前述含角鲨烯的药物在用于增强免疫力、抗氧化和降低血脂密度的产品中的应用。
由本发明所涉及的提取植物源角鲨烯组合物的方法得到的植物源角鲨烯组合物中除了含有35-80重量％的角鲨烯以外还含有甾醇等活性物质，由本发明的方法提取得到的植物源角鲨烯组合物能够保持与现有技术相当甚至更好的药学活性。而且，本发明的提取植物源角鲨烯组合物的方法工艺简单，生产成本低，适合作为工业化方法进行推广。
本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1是本发明提供的测试例的结果示意图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
第一方面，本发明提供了一种提取植物源角鲨烯组合物的方法，该方法包括：将富含角鲨烯的原料依次进行预处理和富集分离，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有35-80重量％的角鲨烯，所述富含角鲨烯的原料中含有5-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。
优选地，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有40-70重量％的角鲨烯。
优选情况下，所述富含角鲨烯的原料中含有10-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。
所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-10重量％的甾醇；更加优选地，所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-5重量％的甾醇。
本发明所述的甾醇为植物甾醇，包括豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇中的至少一种。
在本发明所述的富含角鲨烯的原料中还可以含有少量的其它烃类、醇类和酯类物质等。
在本发明中，所述富含角鲨烯的原料可以为各种常规的满足上述组成的原料。在一种优选实施方式中，所述富含角鲨烯的原料可以通过包括以下步骤的工艺获得：
(1)将植物油脱臭馏出物依次进行酯化反应和转酯化反应，并将得到的反应产物进行第一结晶分离，得到第一固体相和第一液体相；
(2)将所得第一液体相进行第一分子蒸馏，得到富含维生素E和角鲨烯的馏分；以及
(3)将所得到的富含维生素E和角鲨烯的馏分依次进行第一色谱分离和蒸发，得到高纯度的维生素E和富含角鲨烯的原料。
在本发明中，优选所述植物油脱臭馏出物为植物油在精炼脱臭过程中产生的副产物。
在本发明中，优选所述植物油脱臭馏出物中含有10-80重量％的脂肪酸、10-30重量％的甘油酯、0.5-20重量％的维生素E、0.5-20重量％的植物甾醇、0.5-20重量％的植物甾醇酯和0.5-30重量％的角鲨烯。
在本发明中，为了获得所述富含角鲨烯的原料，可以采用公开号为CN105016956A的专利申请中所述的方法获得。本发明在此不再赘述。
优选地，所述预处理的步骤选自皂化、酯化、尿素包合和冷冻结晶中的至少一种。更加优选地，所述预处理的步骤为皂化或者皂化和酯化。
根据一种优选的具体实施方式，所述预处理的步骤采用皂化进行，所述皂化的步骤包括：在碱性条件下，将所述富含角鲨烯的原料进行回流反应，然后采用有机溶剂将回流反应后得到的混合物进行萃取，并收集油相。优选地，所述回流反应的时间为1.5-5h。在本发明中，所述回流反应的溶剂可以为多种，优选地，参与所述回流反应的溶剂例如可以为乙醇。更加优选情况下，所述皂化的操作可以为：将所述富含角鲨烯的原料溶于少量乙醇中，并且加热至60-88℃以有利于所述原料的溶解；然后取适量上述溶解的原料在氢氧化钾-乙醇溶液中进行回流反应，优选地，参与所述回流反应的富含角鲨烯的原料的浓度为0.5-2g/mL；反应结束后加入水并持续搅拌至室温，然后采用所述有机溶剂将回流反应后得到的混合物进行萃取，并收集油相。进行萃取的有机溶剂例如可以为正己烷。本发明还可以将收集得到的所述油相在例如10重量％的乙醇-水溶液中进行洗涤至中性，得到待进行富集分离的样品。
优选地，所述富集分离的步骤采用三级分子蒸馏或真空精馏进行。
优选地，所述三级分子蒸馏中的第一级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为120-140℃，刮膜转速为200-300rpm；第二级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为110-125℃，刮膜转速为200-300rpm；第三级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为100-120℃，刮膜转速为200-300rpm。更加优选情况下，所述第三级分子蒸馏的温度比所述第二级分子蒸馏的温度低5-10℃。本发明的发明人发现，控制所述第三级分子蒸馏的温度比所述第二级分子蒸馏的温度低5-10℃且在本发明的上述范围内时，能够使得得到的植物源角鲨烯组合物的抗氧化作用更强。
优选地，所述真空精馏的条件包括：压力为100-2000Pa，温度为180-250℃，理论塔板数为15-30。更加优选地，所述真空精馏的条件包括：压力为300-600Pa，温度为200-230℃，理论塔板数为15-25。本发明的所述真空精馏可以在例如氮气作为保护气体存在下进行，将其中的轻组分馏分蒸出，釜底所得的馏分还含有部分重质的蜡和烷烃类物质，可以通过后续进行尿素包合处理或者冷冻结晶处理进行去除。
根据本发明的另一种优选的具体实施方式，本发明的方法包括：所述富集分离的步骤采用三级分子蒸馏进行，而且在进行所述富集分离之前，先将经过所述皂化后得到的产物进行酯化反应。优选地，所述酯化反应的条件包括：温度为70-90℃，时间为1-10h。
根据本发明的另一种优选的具体实施方式，本发明的方法包括：所述富集分离的步骤采用真空精馏进行，而且在进行所述富集分离之前，先将经过所述皂化后得到的产物进行酯化反应；以及将所述富集分离后得到的产物进行尿素包合处理和/或冷冻结晶处理。优选地，所述酯化反应的条件包括：温度为70-90℃，时间为1-10h。优选地，所述尿素包合处理的步骤可以为：1)配制浓度为0.01-7g/mL的尿素-乙醇溶液，然后向该尿素-乙醇溶液中加入所述富集分离后得到的产物，并加热回流0.5-8h进行包合；2)将步骤1)得到的产物冷却至室温，并置于零下20℃至零上10℃的条件下进行冷却结晶3-48h，然后进行过滤；3)向步骤2)所得滤液中加入有机溶剂(例如正己烷)，并且使用有机溶剂对过滤后得到的滤渣进行洗涤，合并有机相后依次用例如5重量％氯化钠溶液和水进行洗涤，收集有机相并进行浓缩。优选地，所述冷冻干燥的步骤可以为：将所述富集分离后得到的产物溶于适量乙醇中，加热至完全溶解；然后置于0-35℃中放置0.5-5h，然后转入更低的温度(第二温度)下放置1-10小时，有大量晶体析出；过滤后，再把滤液置于第二温度下放置过夜，进行二次冷析；为了促进结晶生长，可在体系中加入硅藻土进行促晶生长，过滤后收集滤液并蒸干溶剂。
第二方面，本发明提供了一种含角鲨烯的药物的制备方法，该方法包括：
(1)提取植物源角鲨烯组合物：采用本发明前述的方法提取植物源角鲨烯组合物；
(2)制备药物：将含有步骤(1)得到的所述植物源角鲨烯组合物的药学活性成分与药用辅料进行混合。
在本发明的第二方面中，有关所述提取植物源角鲨烯组合物的方法如本发明的前述第一方面所述，为了避免重复，本发明在此不再赘述。
优选地，在步骤(1)中，所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-10重量％的甾醇；更加优选地，所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-5重量％的甾醇。
本发明步骤(1)获得的植物源角鲨烯组合物在不需要进一步提纯的前提下就能够直接与药用辅料进行混合以制备药物。这大大节约了生产成本，也有利于本发明的富含角鲨烯的原料中的其它活性成分的保留。
本发明所述的药用辅料可以为本领域内常规使用的各种药用辅料，例如明胶、甘油等。优选地，在本发明所述的含角鲨烯的药物的制备方法中，本领域技术人员可以根据本领域的常规用量确定所述药学活性成分与药用辅料的用量比例，例如所述药学活性成分与药用辅料的用量重量比可以为1：0.1-1000。
第三方面，本发明提供了由前述方法制备得到的含角鲨烯的药物。
第四方面，本发明提供了前述含角鲨烯的药物在用于增强免疫力、抗氧化和降低血脂密度的产品中的应用。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
在没有特别说明的情况下，以下使用的各种原料均来自商购。
在本发明中的回收率(％)根据最终所得到的纯物质的重量占原料中的纯物质总重量的百分含量计算。
以下角鲨烯通过HPLC进行分析，分析条件为采用XunionC18柱(5um，4.6mm×150mm)，流动相体积比为乙腈：甲醇＝60：40，流速为2mL/min，检测在210nm处紫外吸收，控制柱温为25℃。
甾醇采用GC进行测定，分析条件为分流比为39：1，氮气流量为40mL/min，进样口和检测器(FID检测器)温度为300℃。采用程序升温，初始温度为210℃，以10℃/min升至275℃，保留25min。
制备例1用于说明本发明的富含角鲨烯的原料的来源。
实施例1-7用于说明本发明的提取植物源角鲨烯组合物的方法。
测试例1用于说明本发明的含角鲨烯的组合物的应用。
制备例1
取1000g菜籽油脱臭馏出物(组成以及相关参数如表1所示，其余为杂质)，加入35g浓硫酸和300g甲醇在70℃下进行酯化反应，将酯化反应产物进行水洗并蒸发脱水至水分含量0.4重量％以下，然后加入40g甲醇钠和300g甲醇在70℃温度下进行转酯化反应，然后将转酯化反应产物进行第一结晶分离。在所述第一结晶分离步骤中以8℃/h的降温速率降温至15℃，维持这一温度养晶10小时，然后进行第一次固液分离；将第一次固液分离得到的液体进行第二降温，降温速率为4℃/h，降温至5℃，维持这一温度养晶10小时，进行第二次固液分离。两次固液分离所得固体(即粗植物甾醇固体)经乙醇清洗、重结晶、干燥后得到纯度为94.8重量％的植物甾醇118.14g，回收率71.79％。
第二次固液分离所得滤液进行第一分子蒸馏，其中第一级分子蒸馏的压力为15Pa，温度为120℃，刮膜转速为280rpm；第二级分子蒸馏的压力为20Pa，蒸馏温度为160℃，刮膜转速为280rpm；第三级分子蒸馏的压力为15Pa，蒸馏温度为200℃，刮膜转速为280rpm；
收集第一级分子蒸馏和第二级分子蒸馏轻相馏分，得到脂肪酸酯约750g；
收集第三级分子蒸馏所得轻相馏分并进行第一色谱分离，填料采用阴离子交换树脂，流动相采用无水乙醇，上样后用流动相进行冲洗，收集未吸附的物质，即得到富含角鲨烯的原料。
所得到的富含角鲨烯的原料的组成及含量分别为角鲨烯15重量％，甾醇28重量％。
再往色谱柱中冲入二氧化碳气体进行解吸，用流动相冲洗，收集得解吸相即为富含维生表E的液体相，将得到富集维生素E的液体相进行浓缩，再进行精制，得到纯度为90.3重量％的维生素E产品43.19g，回收率90.70％。
表1
组分 含量(重量％)
脂肪酸和甘油酯 77.01
植物甾醇含量 15.60
维生素E含量 4.30
角鲨烯含量 2.01
实施例1
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-分子蒸馏的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：取制备例1制备得到的富含角鲨烯的原料78.65g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流2h后加入50mL蒸馏水，并保持搅拌以防止分层，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后静置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重复洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗涤己烷相至所述己烷相呈中性时停止洗涤。旋蒸浓缩己烷相，得黄色油状液体。
分子蒸馏：将皂化后得到的油状物进行分子蒸馏，通过三级分子蒸馏提纯得到角鲨烯组合物，其中，
第一级分子蒸馏的压力为10Pa，温度为125℃，刮膜转速为250rpm；
第二级分子蒸馏的压力为10Pa，温度为115℃，刮膜转速为250rpm；
第三级分子蒸馏的压力为10Pa，温度为108℃，刮膜转速为250rpm。
结果第三级分子蒸馏所得轻相中角鲨烯的含量为42.34重量％，甾醇的含量为3.6重量％。
实施例2
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-酯化-分子蒸馏的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：取制备例1制备得到的富含角鲨烯的原料98.81g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流4h后加入50mL蒸馏水，并保持搅拌以防止分层，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后静置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重复洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗涤己烷相至所述己烷相呈中性时停止洗涤。旋蒸浓缩己烷相，得黄色油状液体。
酯化：向上述皂化反应后得到的产物中加入溶有4.4g的甲醇钠的66g的甲醇中，于70℃回流1.5h；然后向回流反应混合物中加入含有4g浓硫酸的30mL的甲醇，保持温度70℃回流2小时；然后将所得产物用水进行洗涤直至pH值为7.0；收集油相，得到酯化后样品。
分子蒸馏：将酯化后得到的油状物进行分子蒸馏，通过三级分子蒸馏提纯得到角鲨烯组合物，其中，
第一级分子蒸馏的压力为10Pa，温度为125℃，刮膜转速为260rpm；
第二级分子蒸馏的压力为12Pa，温度为118℃，刮膜转速为260rpm；
第三级分子蒸馏的压力为10Pa，温度为108℃，刮膜转速为250rpm。
通过HPLC分析，结果第三级分子蒸馏所得轻相中角鲨烯的含量为53.25重量％，甾醇的含量为2.9重量％。
实施例3
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-酯化-真空精馏-尿素包合的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：取制备例1制备得到的富含角鲨烯的原料180.56g，置于500mL容量瓶中，加入50mL(0.5mol/L)KOH-乙醇溶液，于88℃下回流3h后加入50mL蒸馏水，并保持搅拌以防止分层，然后向其中加入32mL己烷，充分混合后静置分液，再向其中加入32mL己烷，并分液，如此重复洗5次，充分提取不皂化物。然后使用16mL(10重量％)乙醇-水溶液洗涤己烷相至所述己烷相呈中性时停止洗涤。旋蒸浓缩己烷相，得黄色油状液体。
酯化：向上述皂化反应后得到的产物中加入溶有9.0g的甲醇钠的150g的甲醇中，于80℃回流2.5h；然后向回流反应混合物中加入含有8g浓硫酸的60mL的甲醇，保持温度80℃回流3h；然后将所得产物用水进行洗涤直至pH值为7.0；收集油相，得到酯化后样品。
真空精馏：将酯化后产品进行真空精馏分离，精馏在相当于20个塔板高度的塔上，在300Pa的真空下进行，将酯化后样品注入温度为210℃的塔顶，同时充入氮气进行保护，将轻组分的馏分蒸出，釜底所得的馏分棕黄色油状液体。
尿素包合：将240mL乙醇、60g尿素在80℃下加热回流30min，趁热加入35g上述真空精馏后所得物料，继续加热回流60min，然后在5℃冷水浴中放置3h，过滤，将所得滤液与水混合，然后用50mL正己烷萃取3次，合并正己烷相，用5重量％的NaCl溶液洗涤3次，再用去离子水洗涤3次。所得有机相在55℃下旋转蒸发至溶剂挥发完毕，得油状物，所得物料继续进行第二次包合，得到角鲨烯69.89重量％，甾醇含量为1.3重量％。
实施例4
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-酯化-真空精馏-冷冻结晶的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：采用与实施例3相同的方法进行；
酯化：采用与实施例3相同的方法进行；
真空精馏：采用与实施例3相同的方法进行；
冷冻结晶：将真空精馏釜底所得物料溶于300mL乙醇中加热至45℃保持15min；然后将所得产物冷至室温后在0℃下放置5小时，有大量晶体析出；过滤后，再把滤液置于-5℃下放置过夜，进行二次冷析；过滤后收集滤液，蒸干溶剂得到油状物质，其中得到角鲨烯68.36重量％，甾醇含量为1.2重量％。
实施例5
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-分子蒸馏的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：采用与实施例1相同的方法进行；
分子蒸馏：采用与实施例1相似的方法进行，所不同的是：本实施例中第二级分子蒸馏的温度为110℃。其余均与实施例1中相同。
结果第三级分子蒸馏所得轻相中角鲨烯的含量为42.96重量％，甾醇的含量为4.6重量％。
实施例6
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-分子蒸馏的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：采用与实施例1相同的方法进行；
分子蒸馏：采用与实施例1相似的方法进行，所不同的是：本实施例中第二级分子蒸馏的温度为120℃。其余均与实施例1中相同。
结果第三级分子蒸馏所得轻相中角鲨烯的含量为42.55重量％，甾醇的含量为3.5重量％。
实施例7
提取植物源角鲨烯组合物：本实施例采用皂化-分子蒸馏的工艺提取植物源角鲨烯组合物。具体地：
皂化：采用与实施例1相同的方法进行；
分子蒸馏：采用与实施例1相似的方法进行，所不同的是：本实施例中第二级分子蒸馏的温度为108℃，第三级分子蒸馏的温度为101℃。其余均与实施例1中相同。
结果第三级分子蒸馏所得轻相中角鲨烯的含量为45.69重量％，甾醇的含量为2.8重量％。
测试例1
采用以下方法测试本发明的实施例制备得到的含角鲨烯的组合物的抗氧化作用。
制备胶束分散液：将定量的亚油酸溶于少量氯仿中，再用氩气将氯仿吹干，使亚油酸在瓶壁上形成一层薄膜，抽真空10min以除去可能残存的氯仿，然后加入含有表面活性剂的50mmol磷酸盐缓冲液(pH值为7.0)，缓冲液中加入0.1mmol的EDTA以络合可能存在的微量金属杂质，该混合物溶液在CQ250型超声波振荡器中振荡5min形成透明的胶束分散液。
氧气吸收用SP-2型氧气吸收仪测定，氧电极的电位用YEW3066型电子电位差计记录，灵敏度为5微伏，该装置可测出10-8mol/L的氧气，测定时，将本发明的上述制备得到的胶束分散液置于带有电磁搅拌的反应器中，密闭，避光，37℃恒温，用氧电极测定氧气含量，然后用进样器加入AAPH引发剂(18mmol/L)引发亚油酸的过氧化，或同时加入引发剂(18mmol/L)和上述实施例制备得到的含角鲨烯的组合物(10μmol/L)，连续记录含氧量随时间的变化，结果如图1中所示，其中，图中，
1表示不向所述胶束分散液中加入引发剂和/或含角鲨烯的组合物的情况；
2表示向所述胶束分散液中加入引发剂的情况；
3表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例1的含角鲨烯的组合物的情况；
4表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例2的含角鲨烯的组合物的情况；
5表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例3的含角鲨烯的组合物的情况；
6表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例4的含角鲨烯的组合物的情况；
7表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例5的含角鲨烯的组合物的情况；
8表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例6的含角鲨烯的组合物的情况；
9表示向所述胶束分散液中加入引发剂和实施例7的含角鲨烯的组合物的情况；
10表示向所述胶束分散液中加入引发剂和根据CN105016956A中的实施例1制备得到的角鲨烯的情况。
从图中可以看出，本发明提供的含角鲨烯的组合物的抗氧化作用明显优于现有技术提供的高纯度的角鲨烯的抗氧化效果。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (11)

1.一种提取植物源角鲨烯组合物的方法，该方法包括：将富含角鲨烯的原料依次进行预处理和富集分离，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有35-80重量％的角鲨烯，所述富含角鲨烯的原料中含有5-30重量％的角鲨烯和10-40重量％的甾醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，控制所述富集分离的条件使得得到的植物源角鲨烯组合物中含有40-70重量％的角鲨烯。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述富含角鲨烯的原料通过包括以下步骤的工艺获得：
(1)将植物油脱臭馏出物依次进行酯化反应和转酯化反应，并将得到的反应产物进行第一结晶分离，得到第一固体相和第一液体相；
(2)将所得第一液体相进行第一分子蒸馏，得到富含维生素E和角鲨烯的馏分；以及
(3)将所得到的富含维生素E和角鲨烯的馏分依次进行第一色谱分离和蒸发，分别得到高纯度的维生素E和所述富含角鲨烯的原料。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预处理的步骤选自皂化、酯化、尿素包合和冷冻结晶中的至少一种；优选地
所述预处理的步骤采用皂化进行，所述皂化的步骤包括：在碱性条件下，将所述富含角鲨烯的原料进行回流反应，然后采用有机溶剂将回流反应后得到的混合物进行萃取，并收集油相；更加优选地
所述回流反应的时间为1.5-5h。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，所述富集分离的步骤采用三级分子蒸馏或真空精馏进行；优选地
所述三级分子蒸馏中的第一级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为120-140℃，刮膜转速为200-300rpm；第二级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为110-125℃，刮膜转速为200-300rpm；第三级分子蒸馏的条件包括：压力为5-25Pa，温度为100-120℃，刮膜转速为200-300rpm；更优选地
所述真空精馏的条件包括：压力为100-2000Pa，温度为180-250℃，理论塔板数为15-30。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述富集分离的步骤采用三级分子蒸馏进行，而且该方法进一步包括：在进行所述富集分离之前，先将经过所述皂化后得到的产物进行酯化反应；优选地
所述酯化反应的条件包括：温度为70-90℃，时间为1-10h。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述富集分离的步骤采用真空精馏进行，而且该方法进一步包括：在进行所述富集分离之前，先将经过所述皂化后得到的产物进行酯化反应；以及将所述富集分离后得到的产物进行尿素包合处理和/或冷冻结晶处理。
8.一种含角鲨烯的药物的制备方法，该方法包括：
(1)提取植物源角鲨烯组合物：采用权利要求1-7中任意一项所述的方法提取植物源角鲨烯组合物；
(2)制备药物：将含有步骤(1)得到的所述植物源角鲨烯组合物的药学活性成分与药用辅料进行混合。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，在步骤(1)中，所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-10重量％的甾醇；优选地
所述植物源角鲨烯组合物中进一步含有0.5-5重量％的甾醇。
10.由权利要求8或9所述的方法制备得到的含角鲨烯的药物。
11.权利要求10所述的含角鲨烯的药物在用于增强免疫力、抗氧化和降低血脂密度的产品中的应用。
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