CN103450000A - 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 - Google Patents

一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种从贯叶连翘中高效提纯金丝桃素的方法，包括以下步骤：以碱液为溶剂提取贯叶连翘中的金丝桃素，得到提取液A；将提取液A的pH值调节至酸性，得到溶液B；然后离心得上清液C；经过模拟移动床色谱上进行分离纯化，得到富含金丝桃素的洗脱液D；将洗脱液D浓缩，再经喷雾干燥得到含金丝桃素5%～6%的终产物；本发明所述金丝桃素的提取方法，步骤简单，产率较高，以本发明的技术方案得到的金丝桃素总收率为85%以上。

Description

一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法
技术领域
本发明涉及一种从贯叶连翘中提取分离制备金丝桃素的方法。
背景技术
金丝桃素（Hypericin）是贯叶连翘中最具有生物活性的物质，除了贯叶连翘外，还广泛分布于金丝桃属Euhypericum组其他植物和Campyloporus 组植物中。金丝桃素是金丝桃属植物中一种重要的次生代谢产物，1830年首次被正式报道，它是一种天然光敏型的二蒽酮类化合物。金丝桃素具有抗病毒，抗抑郁，抗肿瘤，治疗失忆，延缓衰老，预防和治疗痴呆症，抗炎镇痛，抗禽流感病毒，视网膜神经细胞的保护等功能,并用于光动力治疗。在过去的几十年中越来越多的证据表明金丝桃素具有很大的药用潜力和临床价值。但是最新大量研究表明金丝桃素类成分对RNA类病毒有显著的抑制作用。其中最热点的是人体免疫缺陷病毒(HIV)。
目前现有技术中，金丝桃素的提取纯化工艺有醇提酸沉结晶法、大孔树脂吸附法、醇提萃取层析法、CTAB反胶束萃取法、超声提取大孔树脂吸附法、以及超临界CO2萃取法等。
模拟移动床色谱技术是将模拟移动床的设计思想引入液相制备色谱中，既保持了液相制备色谱的消耗小、分离纯度高，以及可变温操作等优点，又克服了通常液相制备色谱不能连续操作的缺点，使其具有分离能力强，设备体积小，投资成本低，并特别有利于分离热敏性高及难分离的物系等特点。
发明内容
本发明旨在提供一种能够从贯叶连翘中高效提纯金丝桃素的方法。
本发明的技术方案为：一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，包括以下步骤：
Figure 992723DEST_PATH_IMAGE001
 以碱液为提取溶剂，提取贯叶连翘中的金丝桃素，得到提取液A；
Figure 680319DEST_PATH_IMAGE002
 将提取液A的pH值调节至酸性，得到溶液B；
Figure 902353DEST_PATH_IMAGE003
 将溶液B离心，分离得到上清液C；
Figure 501830DEST_PATH_IMAGE004
 将上清液C经过模拟移动床色谱上进行分离纯化，得到富含金丝桃素的洗脱液D；
Figure 983076DEST_PATH_IMAGE005
 将洗脱液D浓缩，再经喷雾干燥得到金丝桃素含量为5%～6%的终产物。
本发明所述步骤
Figure 102342DEST_PATH_IMAGE001
中，所述碱液为1%的氢氧化钠溶液，提取溶剂体积与原料质量之比为20～25L/kg，提取方式可以是加热浸提、超声波辅助提取、微波辅助提取。
本发明所述步骤
Figure 478966DEST_PATH_IMAGE002
中，使用10%的盐酸溶液调节pH=3～4。
本发明所述步骤
Figure 316472DEST_PATH_IMAGE003
中，离心机转速为4000转/min，离心时间10min。
本发明所述步骤
Figure 508681DEST_PATH_IMAGE004
中，模拟移动床色谱填充的吸附剂为非极性大孔吸附树脂（如D101，HPD100），水洗区为纯化水，解吸剂为80%乙醇，树脂吸附再生溶剂为95%乙醇或2～4%氢氧化钠水溶液；吸附区流速1～2BV/h；水洗区流速1～3BV/h；解吸区流速1～3BV/h；再生区流速2～3BV/h；切换时间为600～800s；温度控制在40℃～60℃；压力控制在0.2MPa～0.6MPa。
本发明所述步骤
Figure 934983DEST_PATH_IMAGE005
中，将洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30～40%，再经喷雾干燥得到金丝桃素终产物，喷雾干燥的参数为：进风温度120～140℃，出风温度40～60℃。
进一步地，本发明所述步骤
Figure 43360DEST_PATH_IMAGE004
中，模拟移动床色谱的切换时间优选700～800s。
进一步地，本发明所述步骤
Figure 118894DEST_PATH_IMAGE004
中，模拟移动床色谱填充的吸附剂为D101或HPD100。
进一步地，本发明所述步骤
Figure 426379DEST_PATH_IMAGE005
中，优选将洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30%。
本发明所述金丝桃素的提取方法，步骤简单，产率较高，以本发明的技术方案得到的金丝桃素总收率为85%以上。
具体实施方式
实施例1
称取贯叶连翘粗粉5kg，加入125L的1%氢氧化钠水溶液，在95～100℃浸提2h，得到提取液A。再用10%的盐酸溶液调节提取液A的pH至3～4，得到溶液B。将溶液B置入离心机中，设置离心机转速为4000转/min，离心10min，得到上清液C。上清液C进入模拟移动床吸附分离，吸附剂为HPD100大孔吸附树脂；水洗区为纯化水，水洗除去杂质；解吸剂为80%乙醇；树脂再生溶剂为95%乙醇；吸附区流速1.5BV/h；水洗区流速1.5BV/h；解吸区流速2BV/h；再生区流速3BV/h；切换时间为800s；温度45℃；压力0.4MPa。将得到富含金丝桃素的洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30%，再经喷雾干燥得到29g金丝桃素终产物，纯度为5.4%，总收率为88.0%。喷雾干燥的参数为：进风温度130℃，出风温度40℃。
实施例2
称取贯叶连翘粗粉8kg，加入160L的1%氢氧化钠水溶液，在95～100℃浸提2h，得到提取液A。再用10%的盐酸溶液调节提取液A的pH至3～4，得到溶液B。将溶液B置入离心机中，设置离心机转速为4000转/min，离心10min，得到上清液C。上清液C进入模拟移动床吸附分离，吸附剂为D101大孔吸附树脂；水洗区为纯化水，水洗除去杂质；解吸剂为80%乙醇；树脂再生溶剂为95%乙醇；吸附区流速2BV/h；水洗区流速2BV/h；解吸区流速2BV/h；再生区流速3BV/h；切换时间为750s；温度45℃；压力0.4MPa。将得到富含金丝桃素的洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30%，再经喷雾干燥得到47.5g金丝桃素终产物，纯度为5.2%，总收率为86.7%。喷雾干燥的参数为：进风温度130℃，出风温度40℃。
实施例3
称取贯叶连翘粗粉10kg，加入200L的1%氢氧化钠水溶液，在95～100℃浸提2h，得到提取液A。再用10%的盐酸溶液调节提取液A的pH至3～4，得到溶液B。将溶液B置入离心机中，设置离心机转速为4000转/min，离心10min，得到上清液C。上清液C进入模拟移动床吸附分离，吸附剂为HPD100大孔吸附树脂；水洗区为纯化水，水洗除去杂质；解吸剂为80%乙醇；树脂再生溶剂为95%乙醇；吸附区流速2BV/h；水洗区流速3BV/h；解吸区流速2BV/h；再生区流速3BV/h；切换时间为700s；温度50℃；压力0.4MPa。将得到富含金丝桃素的洗脱液D浓缩至固形物百分含量为30%，再经喷雾干燥得到54.4g金丝桃素终产物，纯度为5.7%，总收率为87.1%。喷雾干燥的参数为：进风温度130℃，出风温度40℃。
实施例4
用高效液相色谱法检测金丝桃素的含量：
（1）色谱条件：
色谱柱：C18，4.6×250mm，5μm  
流动相：甲醇:乙腈:水(含0.3%磷酸)，梯度洗脱
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
检测波长：588nm
（2）样品测定
在上述色谱条件下，进样测定，以金丝桃素标准品做对照，利用峰面积外标法计算样品中金丝桃素的含量。标准品HPLC谱图中金丝桃素的保留时间为44.450min，实施例4产品HPLC谱图中金丝桃素的保留时间为44.452min，二者在546nm和588nm都有特征吸收。

Claims (9)

1.一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，包括以下步骤：
Figure 201310463115X100001DEST_PATH_IMAGE002
 以碱液为提取溶剂，提取贯叶连翘干燥全草及花朵进行提取，得到提取液A；
Figure 201310463115X100001DEST_PATH_IMAGE004
 将步骤
Figure 273541DEST_PATH_IMAGE002
中的提取液A的pH值调节至酸性，得到溶液B；
Figure 201310463115X100001DEST_PATH_IMAGE006
 将溶液B离心，分离得到上清液C；
Figure 201310463115X100001DEST_PATH_IMAGE008
 将上清液C经过模拟移动床色谱上进行分离纯化，得到富含金丝桃素的洗脱液D；
Figure 201310463115X100001DEST_PATH_IMAGE010
 将洗脱液D浓缩，再经喷雾干燥得到金丝桃素含量为5～6%的终产物。
2.如权利要求1所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 689216DEST_PATH_IMAGE002
中，所述碱液为1%的氢氧化钠溶液，每千克贯叶连翘原料使用20～25L提取溶剂，90～100℃浸提2～3h。
3. 如权利要求1或2所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 531270DEST_PATH_IMAGE004
中，使用10%盐酸溶液调节提取液A的pH=3～4。
4. 如权利要求3所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于： 所述步骤
Figure 739529DEST_PATH_IMAGE008
中，模拟移动床色谱填充的吸附剂为非极性大孔吸附树脂水洗区为纯化水，解吸剂为80%乙醇，树脂吸附再生溶剂为95%乙醇或2～4%氢氧化钠水溶液；吸附区流速1～2BV/h；水洗区流速1～3BV/h；解吸区流速1～3BV/h；再生区流速2～3BV/h；切换时间为600～800s；温度控制在40℃～60℃；压力控制在0.2MPa～0.6MPa。
5. 如权利要求4所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 443916DEST_PATH_IMAGE008
中，模拟移动床色谱的切换时间为700～800s。
6. 如权利要求1、2、4或5所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 328695DEST_PATH_IMAGE010
中，将洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30～40%，再经喷雾干燥得到金丝桃素终产物；喷雾干燥进风温度120～140℃，出风温度40～60℃。
7. 如权利要求6所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 408778DEST_PATH_IMAGE002
中，提取方式可以是超声波辅助提取、微波辅助提取。
8. 如权利要求6所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤
Figure 669995DEST_PATH_IMAGE010
中，优选将洗脱液D浓缩至固形物质量百分含量为30%。
9. 如权利要求1、2、4、5、7或8所述的一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，其特征在于：所述步骤中，模拟移动床色谱填充的吸附剂为D101或HPD100。
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