CN103555597A - 一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 - Google Patents
一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103555597A CN103555597A CN201310401993.9A CN201310401993A CN103555597A CN 103555597 A CN103555597 A CN 103555597A CN 201310401993 A CN201310401993 A CN 201310401993A CN 103555597 A CN103555597 A CN 103555597A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- beta
- enzyme
- kluyveromyces marxianus
- culture
- galactosidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种β-半乳糖苷酶的制备与固定化的方法，以马克斯克鲁维酵母马克斯变种(Kluyveromyces marxianus)为菌种，进行发酵实验，离心收集细胞，高压破壁后得到β-半乳糖苷酶。然后，以磁性壳聚糖微球为载体，采用吸附-交联法固定β-半乳糖苷酶。本发明所得的β-半乳糖苷酶是食品工业中生产低聚半乳糖的关键酶，作为主要酶制剂为食品加工工业中的水解和转糖苷提供了一种方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法。
背景技术
β-半乳糖苷酶（EC3.2.1.23 β-galactosidase）,又称乳糖酶(Lactase)，广泛存在于动物、植物、细菌和真菌中。β-半乳糖苷酶的分子质量在100-850 ku之间。根据其用途的不同，β-半乳糖苷酶最适pH范围较宽，在2.5-7.5之间。酶的最适作用温度范围也较宽，在20-90℃之间。它具有两种催化性质，可催化乳糖水解，将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖，或催化半乳糖基转移反应，在乳糖分子的半乳糖上连接1-4个半乳糖，生成低聚半乳糖(galactooligosaccharide，GOS)。目前，β-半乳糖苷酶在医药、食品、免疫、环境检测等领域应用广泛，用于提高乳制品的甜度，促进果蔬软化和成熟，生产低聚半乳糖，应用于发酵乳制品、乳清加工、基因诊断和基因治疗等方面。
目前，β-半乳糖苷酶应用的研究热点主要在固定化酶、生产低聚半乳糖和基因工程技术生产乳糖酶等方面。利用微生物发酵法生产β-半乳糖苷酶，酶源丰富，产量高，成本低，周期短，已成为工业化生产酶制剂的主要来源。近20多年来，人们对β-半乳糖苷酶进行了大量研究，由于游离酶在反应过程中不稳定，难以重复利用，生产成本高，不适合工业化生产。与游离酶相比，固定化酶具有催化效率高、稳定性好、低能耗、低污染，低成本，可重复使用、操作连续及工艺可控等优点，而且酶固定化技术是实现酶重复连续使用和改善稳定性的有效手段。壳聚糖是从甲壳类动物的外壳中提取的一种氨基多糖，易降解，无毒性，应用十分广泛。壳聚糖作为固定化酶载体具有机械性能好，化学性质稳定，耐热好，存在的游离氨基易与酶共价结合，又可络合金属离子，使酶免受金属离子的抑制。具有磁性的壳聚糖微球固定化酶技术，能保持酶催化高效性和专一性，有利于酶的重复性使用及产品的纯化。
发明内容
本发明在制备β-半乳糖苷酶的过程中采用菌种名称：马克斯克鲁维酵母马克斯变种15D(Kluyveromyces marxianus Var.marxianus15D），该菌种已2013年6月28日保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC）,保藏编号CCTCC No：M2013297.
菌种的来源：利用中科院微生物研究所提供的马克斯克鲁维酵母马克斯变种15D(Kluyveromyces marxianus Var.marxianus15D)为出发菌株，经紫外射线和硫酸二乙酯、亚硝基胍复合诱变，得到了马克斯克鲁维酵母马克斯变种15D。
菌种培养方法：
(1)诱变方法：菌体培养至对数期（测定A600nm=0.4-0.6之间），取 10ml菌液3000r/min离心15min，弃上清，用无菌生理盐水溶解沉淀，制成菌悬液，作为待处理菌液，取 5ml加到直径6cm的无菌培养皿内，并放人无菌磁力搅拌器，15W紫外灯50cm处分别照射0min、30min、60min，在红灯下将菌液稀释，
取0.5ml涂布于培养皿上，28℃恒温培养箱中培养72h，记录菌落数，计算致死率。取 10ml菌液 （测定A600nm=0.4-0.6之间），3000r/min离心15min，弃上清，用无菌生理盐水溶解沉淀，制成菌悬液加入到含有的亚硝基肌溶液的培养皿中，放入无菌磁力搅拌转子，在254nm紫外灯50cm处，分别照射30min、35min、40min后，分别取出0.5ml加入1ml生理盐水终止反应，涂布于麦芽汁固体培养皿，28℃培养72h之后测定酶活，从中选出了酶活最高的菌株 S8；再以菌株S8 为出发菌，用紫外线、硫酸二乙醋复合处理一次，测定酶活；最后再用紫外线、亚硝基肌复合处理一次，方法同上，最终得到酶活最高的菌株15D。
(2)突变株的筛选：随机挑取大、中、小菌落接入斜面，进一步用摇瓶发酵培养，从中筛选出高产β-半乳糖苷酶的菌株15D。
本发明提供一种β-半乳糖苷酶的制备与固定化的方法。该方法以马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)为菌种，进行发酵实验，离心收集细胞，高压破壁后得到β-半乳糖苷酶。最后，以磁性壳聚糖微球为载体，采用吸附-交联法固定β-半乳糖苷酶。
一种β-半乳糖苷酶的制备与固定化的方法，通过以下步骤来实现：
1.产β-半乳糖苷酶菌株的发酵
①麦芽汁培养基：麦芽汁配成10°Be， pH6.0-8.0，常压灭菌30min；
②产酶培养基：分别称取糖蜜，尿素，磷酸二氢铵，硫酸镁，硫酸铜，pH5.9，0.56-0.71 Kg/cm2压力，灭菌20min；
③种子液的制备：将马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)为菌种接种产酶培养基中，在25-45℃下振荡培养20-40h，初始pH5.0-7.0，装瓶量15-40ml，接种量5-10%，转速100-200 r/min；
2.粗酶液的制备
将③得到的种子液以2-8%的接种量，接种于产酶培养基，在25-45℃下振荡培养20-40h，于10000r/min离心20min，去除上清液，收集沉淀，将菌体沉淀溶于pH7.0的磷酸缓冲液中，使用高压破壁，即为β-半乳糖苷酶粗酶液；
3.β-半乳糖苷酶的固定化
①磁性壳聚糖微球的制备：称取纳米Fe3O4微球与4 mg/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后，进行超声分散1-3h，混和均匀，在三角瓶中加入液体石蜡和司盘80，在40℃磁力搅拌下混合均匀，然后逐滴加入Fe3O4的壳聚糖溶液，40℃磁力搅拌10-40min，加入5-20mL 4%戊二醛溶液，反应0.5-2h，然后加入NaOH，使体系的pH达到9-11，升温至60℃，继续反应1-3h。减压过滤，依次用异丙醇，丙酮，乙醇，去离子水清洗，在60℃下真空干燥得磁性壳聚糖微球，置于4℃冰箱内保存；
②酶的固定化：称取一定量的的磁性壳聚糖微球加入到三角瓶中，用1.5%的乙酸溶液充分溶胀12h，加入0.1mol/l NaOH调节体系pH为7。同时，将a-葡萄糖苷酶溶于pH6.8 0.1 mol/l的磷酸缓冲液中，得到5-8 mg/mL的酶液，然后将配制好的酶液加入到磁性壳聚糖溶液中，在30℃、一定转速条件下，振荡吸附0.5-2h，再加入1%戊二醛溶液，在30℃、一定转速条件下，振荡交联0.5-2h，用磁铁收集磁性固定化酶，用缓冲液充分洗涤，用茚三酮法检测至无游离酶检出，在4℃下保存固定化的β-半乳糖苷酶。
本发明的优点和产生的有益效果：
1.本发明所得的β-半乳糖苷酶是食品工业中生产低聚半乳糖的关键酶，利用其催化乳糖水解功能，可生产低乳糖乳和奶粉等低乳糖制品。
2.本发明以纳米Fe3O4微球为基质，磁性壳聚糖微球为载体，采用吸附-交联法，固定β-半乳糖苷酶制备方便、简捷，酶活回收率高，具有良好的热稳定性和使用稳定性。
3.磁性壳聚糖微球是一种新型功能高分子材料，有利于固定化酶从反应体系中分离和回收，提高酶的催化效率和回收率。目前未见有以磁性壳聚糖微球为载体固定化β-半乳糖苷酶的报道及应用。
4、本发明采用马克斯克鲁维酵母马克斯变种产β-半乳糖苷酶，酶的活性较高，稳定性较好，克服了目前工业生产一般采用米曲霉和黑曲霉中的β-半乳糖苷酶，但存在产酶菌株的活力不高，稳定性较差等缺点。为进一步应用于工业化生产提供了一定的实验依据。
具体实施方式
实施例1：
本发明采用的菌株为：马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)
本发明所使用的试剂：糖蜜，尿素，麦芽汁培养基，医药用纳米Fe3O4微球（99.6%，≤20nm球形，市售），茚三酮，其他试剂均为分析纯。
本发明所采用的仪器：Mettler Toledo AL204分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；LDZM型立式智能压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)；SHA-B水浴恒温振荡器(江苏常州)；BS-1E恒温振荡培养箱(江苏金坛市亿通电子有限公司)；UV-1800PC紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；MD2300全自动5L液体发酵罐(B. E. Marubsishi 日本)。GL-21M高速冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)。AH100B高压细胞破碎机（ATS 工业系统有限公司）；DL-SB-5Z20低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；791型磁力加热搅拌器（南汇电讯器材厂）；DZG-6050型真空干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；SHB-B95A型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
下面结合实施例本发明的技术方案再作进一步的说明：
一种β-半乳糖苷酶的制备与固定化的方法，其步骤是：
1.产β-半乳糖苷酶菌株的发酵
一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法
其步骤如下：
1.培养基的制备
①麦芽汁培养基：麦芽汁配成10°Be， pH6.0-8.0，常压灭菌30min。该培养基可用于Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D菌株生长；
②产酶培养基：20°Be糖蜜，尿素0.1%，磷酸二氢铵0.34%，硫酸镁0.15%，硫酸铜0.1%，pH5.9，0.56-0.71 Kg/cm2压力，灭菌20min。
③种子液的制备：将马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)为菌种接种产酶培养基中，在25-45℃下振荡培养20-40h，初始pH5.0-7.0，装瓶量15-40ml，接种量5-10%，转速100-200 r/min；
2.粗酶液的制备
将③得到的种子液以2-8%的接种量，接种于产酶培养基，在25-45℃下振荡培养20-40h，于10000r/min离心20min，去除上清液，收集沉淀，将菌体沉淀溶于pH7.0的磷酸缓冲液中，使用高压破壁，即为β-半乳糖苷酶粗酶液。
β-半乳糖苷酶的固定：
1.磁性壳聚糖微球的制备：称取0.16g纳米Fe3O4微球与4 mg/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后，进行超声分散1.5h，混和均匀。在三角瓶中加入160mL液体石蜡和14mL司盘80，在40℃磁力搅拌下混合均匀，然后逐滴（10-15滴/分）加入Fe3O4的壳聚糖溶液，40℃磁力搅拌30min，加入10mL 4%戊二醛溶液，反应1h，然后加入12mL 1mol/L的NaOH，使体系的pH达到10，升温至60℃，继续反应2h。减压过滤，依次用异丙醇，丙酮，乙醇，去离子水清洗。在60℃下真空干燥得磁性壳聚糖微球，置于4℃冰箱内保存。
2.酶的固定化：称取8mg的磁性壳聚糖微球加入到三角瓶中，用2ml 1.5%的乙酸溶液充分溶胀12h，加入6ml 0.1mol/l NaOH调节体系pH为7。同时，将a-葡萄糖苷酶溶于pH6.8 0.1 mol/l的磷酸缓冲液中，得到浓度为6.5 mg/mL的酶液，然后吸取3ml配制好的酶液加入到磁性壳聚糖溶液中，在30℃、转速150 r/min条件下，振荡吸附1h，再加入2ml 1%戊二醛溶液，在30℃、转速150 r/min条件下，振荡交联1h，用磁铁收集磁性固定化酶，用pH6.8 0.1 mol/l的磷酸缓冲液洗涤，用茚三酮法检测至无游离酶检出，在4℃下保存固定化的β-半乳糖苷酶。
试验例
β-半乳糖苷酶5L发酵实验
在试管和摇瓶培养的基础上采用5L发酵罐完成发酵实验。培养基选用发酵用液体培养基，发酵条件：接种量为2-8%，pH5.0-7.0，培养温度25-45℃，培养时间20-40h。将试管培养的菌株接入到三角瓶中，放置在摇床上，搅拌速度100-200r/min，温度25-45℃培养20-40h后测定酶活力。把培养20-40h后的三角瓶中的菌株，接入到发酵罐中，搅拌速度400-600r/min，通气量2.0-2.5，温度25-45℃培养20-40h后测定酶活力，酶活力为22.1 U/mL，通过十批次的稳定性发酵试验，酶活力趋于恒定基本在20-30 U/mL之间。
Claims (1)
1.马克斯克鲁维酵母马克斯变种15D (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)菌种，该菌种已于2013年6月28日保藏在中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC）,保藏编号CCTCC No：M2013297；马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus var marxianus 15D)菌种，保藏编号CCTCC No：M2013297，通过中科院微生物研究所提供的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus Var.marxianus)为出发菌株，经紫外射线和硫酸二乙酯、亚硝基胍复合诱变，得到了马克斯克鲁维酵母马克斯变种15D；
培养方法：
(1)诱变方法：菌体培养至对数期（测定A600nm=0.4-0.6之间），取 10ml菌液3000r/min离心15min，弃上清，用无菌生理盐水溶解沉淀，制成菌悬液，作为待处理菌液，取 5ml加到直径6cm的无菌培养皿内，并放入无菌磁力搅拌器，15W紫外灯50cm处分别照射0min、30min、60min，在红灯下将菌液稀释，
取0.5ml涂布于培养皿上，28℃恒温培养箱中培养72h，记录菌落数，计算致死率；
取 10ml菌液 （测定A600nm=0.4-0.6之间），3000r/min离心15min，弃上清，用无菌生理盐水溶解沉淀，制成菌悬液加入到含有的亚硝基肌溶液的培养皿中，放入无菌磁力搅拌转子，在254nm紫外灯50cm处，分别照射30min、35min、40min后，分别取出0.5ml加入1ml生理盐水终止反应，涂布于麦芽汁固体培养皿，28℃培养72h之后测定酶活，从中选出了酶活最高的菌株 S8；再以菌株S8 为出发菌，用紫外线、硫酸二乙醋复合处理一次，测定酶活；最后再用紫外线、亚硝基肌复合处理一次，方法同上，最终得到酶活最高的菌株15D；
(2)突变株的筛选：随机挑取大、中、小菌落接人斜面，进一步用摇瓶发酵培养，从中筛选出高产β-半乳糖苷酶的菌株15D；
1、一种β-半乳糖苷酶的制备与固定化的方法，其步骤是：
（1）产β-半乳糖苷酶菌株的发酵
①麦芽汁培养基：麦芽汁配成10°Be， pH6.0-8.0，常压灭菌30min；
②产酶培养基：分别称取糖蜜，尿素，磷酸二氢铵，硫酸镁，硫酸铜，pH5.9，0.56-0.71 Kg/cm2压力，灭菌20min；
③种子液的制备：将马克斯克鲁维酵母马克斯变种 (Kluyveromyces marxianus)为菌种接种产酶培养基中，在25-45℃下振荡培养20-40h，初始pH5.0-7.0，装瓶量15-40ml，接种量5-10%，转速100-200 r/min；
（2）粗酶液的制备
将③得到的种子液以2-8%的接种量，接种于产酶培养基，在25-45℃下振荡培养20-40h，于10000r/min离心20min，去除上清液，收集沉淀，将菌体沉淀溶于pH7.0的磷酸缓冲液中，使用高压破壁，即为β-半乳糖苷酶；
（3）β-半乳糖苷酶的固定化
①磁性壳聚糖微球的制备：称取纳米Fe3O4微球与4 mg/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后，进行超声分散1-3h，混和均匀；
在三角瓶中加入液体石蜡和司盘80，在40℃磁力搅拌下混合均匀，然后逐滴加入Fe3O4的壳聚糖溶液，40℃磁力搅拌10-40min，加入5-20mL 4%戊二醛溶液，反应0.5-2h，然后加入NaOH，使体系的pH达到9-11，升温至60℃，继续反应1-3h；
减压过滤，依次用异丙醇，丙酮，乙醇，去离子水清洗，在60℃下真空干燥得磁性壳聚糖微球，置于4℃冰箱内保存；
②酶的固定化：称取一定量的磁性壳聚糖微球加入到三角瓶中，用1.5%的乙酸溶液充分溶胀12h，加入0.1mol/l NaOH调节体系pH为7，同时，将a-葡萄糖苷酶溶于pH6.8 0.1 mol/l的磷酸缓冲液中，得到一定浓度的酶液，然后将配制好的酶液加入到磁性壳聚糖溶液中，在30℃、一定转速条件下，振荡吸附0.5-2h，再加入1%戊二醛溶液，在30℃、一定转速条件下，振荡交联0.5-2h，用磁铁收集磁性固定化酶，用缓冲液充分洗涤，用茚三酮法检测至无游离酶检出，在4℃下保存固定化的β-半乳糖苷酶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310401993.9A CN103555597A (zh) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | 一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310401993.9A CN103555597A (zh) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | 一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103555597A true CN103555597A (zh) | 2014-02-05 |
Family
ID=50009963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310401993.9A Pending CN103555597A (zh) | 2013-09-06 | 2013-09-06 | 一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103555597A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105002102A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-10-28 | 光明乳业股份有限公司 | 一种马克思克鲁维酵母及其培养方法和应用 |
| CN108179144A (zh) * | 2018-03-26 | 2018-06-19 | 北京环尔康科技开发有限公司 | 用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺 |
| CN109295040A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-02-01 | 石河子开发区天易特色果蔬加工生产力促进中心（有限责任公司） | 一种毕赤酵母β-葡萄糖苷酶制剂的制备方法 |
| CN112251481A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-22 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种低聚半乳糖的制备方法 |
| CN114438058A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-05-06 | 北京工商大学 | 一种固定化β-半乳糖苷酶的制备方法及固定化酶在制备低聚半乳糖中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1587404A (zh) * | 2004-08-30 | 2005-03-02 | 西北师范大学 | 一种生物多糖高分子微球固定化β－半乳糖苷酶及其制备方法 |
| CN102311946A (zh) * | 2010-07-07 | 2012-01-11 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种提高产1，3-丙二醇融合菌筛选效率的方法 |
-
2013
- 2013-09-06 CN CN201310401993.9A patent/CN103555597A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1587404A (zh) * | 2004-08-30 | 2005-03-02 | 西北师范大学 | 一种生物多糖高分子微球固定化β－半乳糖苷酶及其制备方法 |
| CN102311946A (zh) * | 2010-07-07 | 2012-01-11 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种提高产1，3-丙二醇融合菌筛选效率的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李鸿玉等: "磁性壳聚糖微球固定化果胶酶的研究", 《食品科学》, no. 09, 15 September 2008 (2008-09-15) * |
| 陈朋等: "采用复合诱变方法选育高产β-半乳糖苷酶菌株", 《现代生物医学进展》, no. 02, 28 February 2008 (2008-02-28) * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105002102A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-10-28 | 光明乳业股份有限公司 | 一种马克思克鲁维酵母及其培养方法和应用 |
| CN105002102B (zh) * | 2015-08-25 | 2019-01-08 | 光明乳业股份有限公司 | 一种马克思克鲁维酵母及其培养方法和应用 |
| CN108179144A (zh) * | 2018-03-26 | 2018-06-19 | 北京环尔康科技开发有限公司 | 用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺 |
| CN109295040A (zh) * | 2018-11-29 | 2019-02-01 | 石河子开发区天易特色果蔬加工生产力促进中心（有限责任公司） | 一种毕赤酵母β-葡萄糖苷酶制剂的制备方法 |
| CN112251481A (zh) * | 2020-11-13 | 2021-01-22 | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 | 一种低聚半乳糖的制备方法 |
| CN114438058A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-05-06 | 北京工商大学 | 一种固定化β-半乳糖苷酶的制备方法及固定化酶在制备低聚半乳糖中的应用 |
| CN114438058B (zh) * | 2022-03-09 | 2023-12-26 | 北京工商大学 | 一种固定化β-半乳糖苷酶的制备方法及固定化酶在制备低聚半乳糖中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105802897B (zh) | 一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶生产菌株及其应用 | |
| CN102492673B (zh) | 一种柠檬明串珠菌发酵生产交替糖蔗糖酶的方法及应用 | |
| CN103555597A (zh) | 一种β-半乳糖苷酶的制备及其固定化方法 | |
| CN101838672A (zh) | 固定化植物乳杆菌生产γ-氨基丁酸的方法 | |
| CN106995811B (zh) | 一种褐藻胶裂解酶、其制备方法及应用 | |
| CN102703339B (zh) | 高产精氨酸脱亚胺酶菌株及用它生产l-瓜氨酸的方法 | |
| CN106754411B (zh) | 一株高产β-D-呋喃果糖苷酶的黑曲霉菌株及其液态发酵产酶方法 | |
| CN101089175A (zh) | 一种同时高产柚苷酶和橙皮苷酶的黑曲霉菌wz001及其应用 | |
| CN102206616A (zh) | 蜡状芽孢杆菌发酵产磷脂酶c的方法 | |
| WO2012016445A1 (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN109504725A (zh) | 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 | |
| CN104911135B (zh) | 一种海藻糖合酶生产菌株及其应用 | |
| CN102559538A (zh) | 高产l-天冬氨酸酶的大肠埃希氏菌及其应用 | |
| CN102533607B (zh) | 一株产β-半乳糖苷酶的菌株及用该酶生产低聚半乳糖的方法 | |
| CN102168028A (zh) | 一种节杆菌突变株、利用该突变株生产乳糖酶的方法及用乳糖酶制备乳果糖的方法 | |
| CN105175275B (zh) | 一种l‑鸟氨酸的分离纯化方法 | |
| CN103937765A (zh) | 一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法 | |
| CN103333872B (zh) | 一种制备β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂的方法 | |
| CN109456898A (zh) | 一种球毛壳菌右旋糖酐酶的发酵制备及其应用 | |
| CN110172407A (zh) | 一株产果糖基转移酶的米曲霉及其应用 | |
| CN113151055B (zh) | 产果胶酶芽孢杆菌及其发酵方法、以及胡椒脱皮的方法 | |
| CN108949854A (zh) | 固定化植物乳杆菌发酵生产胞外多糖的工艺 | |
| CN101607987A (zh) | 一种植物乳酸杆菌素及其制备方法 | |
| CN108531418A (zh) | 一种壳聚糖酶的制备方法 | |
| CN108192848A (zh) | 一种产乳糖酶的嗜冷杆菌菌株及使用该菌株制备低温乳糖酶的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C05 | Deemed withdrawal (patent law before 1993) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140205 |