CN108179144A - 用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于促进食品营养吸收的固定活化酶。由FeSO4·7H2O、FeCl3·6H2O、FeCl2·4H2O、NH3·H2O制备成混合物A；将混合物A洗涤后经羟丙基环糊精、藻酸钾、酪蛋白酸钠制备的混合液处理后得到混合物C；将混合物C洗涤后经壳聚糖和过硫酸铵制备的混合液处理后得到混合物D；将混合物D洗涤后经硫酸铵铝、聚乙烯基吡咯烷酮、戊二醛和乳糖酶制备的混合液处理后得到物质即为用于促进食品营养吸收的固定活化酶。本发明的有益效果是，制得的用于促进食品营养吸收的固定活化酶具有活性高、适应性强、寿命长、便于分离及重复利用等特点。

Description

用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺
技术领域
本发明属于食品生物技术领域，特别涉及一种用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺。
背景技术
乳糖酶亦称为β-半乳糖苷酶，可催化乳糖水解生成半乳糖和葡萄糖，生产低乳糖乳。同时乳糖酶又具有转糖苷能力，能把半乳糖连接到乳糖上，生成低聚半乳糖，作为添加剂用于其他食品。使用乳糖酶水解的牛乳制作酸乳比普通脱脂乳要省时和节省蔗糖的用量，而且可以改善酸乳的风味和口感，这是由于乳糖分解成葡萄糖和半乳糖后增加了酸乳的甜度，并且乳酸菌可以直接利用葡萄糖和半乳糖，使产酸速度加快。在乳味面包制作过程中，添加乳糖酶水解乳与添加普通脱脂乳相比，能够增加面包的甜度，提高酵母菌产气量，使面包更加膨大，而且水解产生的半乳糖有利于褐变，改善面包色泽。乳糖酶已用于梨、苹果、番茄、甜瓜、樱桃和牛油果等相关水果制品的加工生产中。乳糖酶的利用可普遍提高人们对食品中的多种蛋白质、维生素、矿物质以及糖类等营养物质的消化吸收利用，促进肠道中有益菌群的生长、繁殖，从而促进广大人群对食品中多种营养物质更全面、更直接的吸收，而有益于身体健康。由于优质游离乳糖酶售价普遍较高，一次性投入使用会明显增加低乳糖含量乳制品的生产成本，这些都会使游离乳糖酶在食品工业中的应用受到限制。而选择合适、安全、效率高的载体将乳糖酶进行固定化，通过一定的技术手段使其实现重复性使用，在连续操作的同时还能一定程度上缩短乳糖水解的时间，有效降低生产成本。因此，在现代食品科研领域和工业生产中，酶的固定化是一项重要的课题和技术。目前，还缺少用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于促进食品营养吸收的固定活化酶，其制备方法的具体步骤如下：
(1)将装有800mL去离子水的三口烧瓶放到温度为65℃的恒温水浴锅中，在气体流速为110L/h的条件下向三口烧瓶中通入氮气40分钟，然后加入6.4克FeSO4·7H2O、4.1克FeCl3·6H2O和2.3克FeCl2·4H2O，在1000r/min条件下搅拌15分钟，冷却到室温后得到混合液H1；
(2)将50毫升NH3·H2O加入到混合液H1中，在温度为45℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液H2；
(3)采用磁铁对混合液H2进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A；
(4)将混合物A加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A1；
(5)将混合物A1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A2；
(6)将混合物A2加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A3；
(7)将混合物A3加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B；
(8)将6.89克羟丙基环糊精加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液J1、混合液J2、混合液J3、混合液J4、混合液J5；
(9)将1.36克藻酸钾和0.98克酪蛋白酸钠加入到混合液J1中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K1；
(10)将混合物B加入到混合液K1中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B1；
(11)将1.31克藻酸钾和0.93克酪蛋白酸钠加入到混合液J2中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K2；
(12)将混合物B1加入到混合液K2中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B2；
(13)将1.26克藻酸钾和0.88克酪蛋白酸钠加入到混合液J3中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K3；
(14)将混合物B2加入到混合液K3中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B3；
(15)将1.21克藻酸钾和0.83克酪蛋白酸钠加入到混合液J4中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K4；
(16)将混合物B3加入到混合液K4中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B4；
(17)将1.16克藻酸钾和0.78克酪蛋白酸钠加入到混合液J5中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K5；
(18)将混合物B4加入到混合液K5中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C；
(19)将15.6克壳聚糖加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液L1、混合液L2、混合液L3、混合液L4、混合液L5；
(20)将混合物C加入到混合液L1中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M1；
(21)在1000r/min条件下将20mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M1中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C1；
(22)将混合物C1加入到混合液L2中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M2；
(23)在1000r/min条件下将18mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M2中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C2；
(24)将混合物C2加入到混合液L3中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M3；
(25)在1000r/min条件下将16mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M3中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C3；
(26)将混合物C3加入到混合液L4中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M4；
(27)在1000r/min条件下将14mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M4中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C4；
(28)将混合物C4加入到混合液L5中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M5；
(29)在1000r/min条件下将12mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M5中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D；
(30)将混合物D加入到400mL异丙醇中，在1000r/min条件下搅拌15min后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D1；
(31)将混合物D1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D2；
(32)将混合物D2加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E；
(33)将4.26克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为7％的聚乙烯基吡咯烷酮溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液N1、混合液N2、混合液N3、混合液N4；
(34)将7.76克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为20％的戊二醛溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液O1、混合液O2、混合液O3、混合液O4；
(35)将混合物E加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入4.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E1；
(36)将混合物E1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F；
(37)将混合物F加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E2；
(38)将混合物E2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F1；
(39)将混合物F1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E3；
(40)将混合物E3加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F2；
(41)将混合物F2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入2.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E4；
(42)将混合物E4加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G；
(43)将混合物G加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G1；
(44)将混合物G1加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G2；
(45)将混合物G2加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G3；
(46)将混合物G3加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物H；
(47)将混合物H冷冻干燥24小时后得到的物质即为用于促进食品营养吸收的固定活化酶。
本发明的有益效果是，制得的用于促进食品营养吸收的固定活化酶具有活性高、适应性强、寿命长、便于分离及重复利用等特点。
具体实施方式
本发明提供一种用于促进食品营养吸收的固定活化酶及制备工艺，下面通过一个实例来说明其实施过程。
实施例1.
(1)将装有800mL去离子水的三口烧瓶放到温度为65℃的恒温水浴锅中，在气体流速为110L/h的条件下向三口烧瓶中通入氮气40分钟，然后加入6.4克FeSO4·7H2O、4.1克FeCl3·6H2O和2.3克FeCl2·4H2O，在1000r/min条件下搅拌15分钟，冷却到室温后得到混合液H1；
(2)将50毫升NH3·H2O加入到混合液H1中，在温度为45℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液H2；
(3)采用磁铁对混合液H2进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A；
(4)将混合物A加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A1；
(5)将混合物A1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A2；
(6)将混合物A2加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A3；
(7)将混合物A3加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B；
(8)将6.89克羟丙基环糊精加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液J1、混合液J2、混合液J3、混合液J4、混合液J5；
(9)将1.36克藻酸钾和0.98克酪蛋白酸钠加入到混合液J1中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K1；
(10)将混合物B加入到混合液K1中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B1；
(11)将1.31克藻酸钾和0.93克酪蛋白酸钠加入到混合液J2中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K2；
(12)将混合物B1加入到混合液K2中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B2；
(13)将1.26克藻酸钾和0.88克酪蛋白酸钠加入到混合液J3中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K3；
(14)将混合物B2加入到混合液K3中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B3；
(15)将1.21克藻酸钾和0.83克酪蛋白酸钠加入到混合液J4中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K4；
(16)将混合物B3加入到混合液K4中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B4；
(17)将1.16克藻酸钾和0.78克酪蛋白酸钠加入到混合液J5中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K5；
(18)将混合物B4加入到混合液K5中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C；
(19)将15.6克壳聚糖加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液L1、混合液L2、混合液L3、混合液L4、混合液L5；
(20)将混合物C加入到混合液L1中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M1；
(21)在1000r/min条件下将20mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M1中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C1；
(22)将混合物C1加入到混合液L2中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M2；
(23)在1000r/min条件下将18mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M2中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C2；
(24)将混合物C2加入到混合液L3中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M3；
(25)在1000r/min条件下将16mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M3中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C3；
(26)将混合物C3加入到混合液L4中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M4；
(27)在1000r/min条件下将14mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M4中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C4；
(28)将混合物C4加入到混合液L5中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M5；
(29)在1000r/min条件下将12mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M5中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D；
(30)将混合物D加入到400mL异丙醇中，在1000r/min条件下搅拌15min后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D1；
(31)将混合物D1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D2；
(32)将混合物D2加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E；
(33)将4.26克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为7％的聚乙烯基吡咯烷酮溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液N1、混合液N2、混合液N3、混合液N4；
(34)将7.76克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为20％的戊二醛溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液O1、混合液O2、混合液O3、混合液O4；
(35)将混合物E加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入4.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E1；
(36)将混合物E1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F；
(37)将混合物F加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E2；
(38)将混合物E2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F1；
(39)将混合物F1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E3；
(40)将混合物E3加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F2；
(41)将混合物F2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入2.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E4；
(42)将混合物E4加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G；
(43)将混合物G加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G1；
(44)将混合物G1加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G2；
(45)将混合物G2加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G3；
(46)将混合物G3加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物H；
(47)将混合物H冷冻干燥24小时后得到的物质即为用于促进食品营养吸收的固定活化酶。
对运用本发明方法制得的用于促进食品营养吸收的固定活化酶的活力和重复使用性进行了检测，结果表明：本发明制备的固定活化酶的活力是游离酶的77.6％，固定活化酶在重复使用10次后的活力是初始活力的67.3％。

Claims (1)

1.一种用于促进食品营养吸收的固定活化酶，其特征在于，制备该固定活化酶方法的具体步骤如下：
(1)将装有800mL去离子水的三口烧瓶放到温度为65℃的恒温水浴锅中，在气体流速为110L/h的条件下向三口烧瓶中通入氮气40分钟，然后加入6.4克FeSO4·7H2O、4.1克FeCl3·6H2O和2.3克FeCl2·4H2O，在1000r/min条件下搅拌15分钟，冷却到室温后得到混合液H1；
(2)将50毫升NH3·H2O加入到混合液H1中，在温度为45℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液H2；
(3)采用磁铁对混合液H2进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A；
(4)将混合物A加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A1；
(5)将混合物A1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A2；
(6)将混合物A2加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物A3；
(7)将混合物A3加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B；
(8)将6.89克羟丙基环糊精加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液J1、混合液J2、混合液J3、混合液J4、混合液J5；
(9)将1.36克藻酸钾和0.98克酪蛋白酸钠加入到混合液J1中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K1；
(10)将混合物B加入到混合液K1中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B1；
(11)将1.31克藻酸钾和0.93克酪蛋白酸钠加入到混合液J2中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K2；
(12)将混合物B1加入到混合液K2中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B2；
(13)将1.26克藻酸钾和0.88克酪蛋白酸钠加入到混合液J3中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K3；
(14)将混合物B2加入到混合液K3中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B3；
(15)将1.21克藻酸钾和0.83克酪蛋白酸钠加入到混合液J4中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K4；
(16)将混合物B3加入到混合液K4中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物B4；
(17)将1.16克藻酸钾和0.78克酪蛋白酸钠加入到混合液J5中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，得到混合液K5；
(18)将混合物B4加入到混合液K5中，在温度为55℃的摇床中摇动20分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动20分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C；
(19)将15.6克壳聚糖加入到2000mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量5份，得到混合液L1、混合液L2、混合液L3、混合液L4、混合液L5；
(20)将混合物C加入到混合液L1中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M1；
(21)在1000r/min条件下将20mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M1中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C1；
(22)将混合物C1加入到混合液L2中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M2；
(23)在1000r/min条件下将18mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M2中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C2；
(24)将混合物C2加入到混合液L3中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M3；
(25)在1000r/min条件下将16mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M3中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C3；
(26)将混合物C3加入到混合液L4中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M4；
(27)在1000r/min条件下将14mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M4中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物C4；
(28)将混合物C4加入到混合液L5中，在温度为60℃的摇床中摇动15分钟，然后在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，冷却到室温后得到混合液M5；
(29)在1000r/min条件下将12mL质量百分比浓度为5％的过硫酸铵溶液滴加到混合液M5中，在温度为60℃的摇床中摇动30分钟，在温度为80℃的摇床中摇动30分钟，然后在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D；
(30)将混合物D加入到400mL异丙醇中，在1000r/min条件下搅拌15min后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D1；
(31)将混合物D1加入到400mL乙醇中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物D2；
(32)将混合物D2加入到400mL去离子水中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E；
(33)将4.26克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为7％的聚乙烯基吡咯烷酮溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液N1、混合液N2、混合液N3、混合液N4；
(34)将7.76克硫酸铵铝加入到200mL质量百分比浓度为20％的戊二醛溶液中，在1000r/min条件下搅拌3分钟，摇匀后分成等量4份，得到混合液O1、混合液O2、混合液O3、混合液O4；
(35)将混合物E加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入4.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E1；
(36)将混合物E1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O1，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F；
(37)将混合物F加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E2；
(38)将混合物E2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入6.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O2，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F1；
(39)将混合物F1加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入3.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E3；
(40)将混合物E3加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O3，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物F2；
(41)将混合物F2加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入2.6克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液N4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物E4；
(42)将混合物E4加入到1000毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，加入5.1克乳糖酶，在温度为35℃的摇床中摇动15分钟，然后加入混合液O4，在温度为30℃的摇床中摇动30分钟，采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G；
(43)将混合物G加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G1；
(44)将混合物G1加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G2；
(45)将混合物G2加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物G3；
(46)将混合物G3加入到400毫升pH值为7.4的磷酸钾缓冲液中，在1000r/min条件下搅拌15分钟后采用磁铁进行磁分离，弃去上清液，得到混合物H；
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