CN103937765A - 一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法,以嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)为菌种,对产α-葡萄糖苷酶的培养条件进行优化,确定实验最佳条件,在此基础之上,进行多批次的5L小型发酵实验和20L放大发酵实验,对收集的产物,采用离心、高压破壁法,得到α-葡萄糖苷酶粗酶。最后,以磁性壳聚糖微球为载体,采用吸附-交联法固定α-葡萄糖苷酶。本发明所得的α-葡萄糖苷酶是工业上生产低聚异麦芽糖的关键酶,作为主要酶制剂用于淀粉加工工业中的糖苷的转移提供了一种方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法。
背景技术
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase,EC.3.2.l.20),系统命名为α-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶,又名α-葡萄糖基转移酶或麦芽糖酶,简称α-糖苷酶。它在糖的催化反应方面具有水解和转糖苷双重作用,可从α-葡萄糖苷、寡糖和葡聚糖的非还原性末端切开α-1,4糖苷键,释放出葡萄糖,或将游离出的葡萄糖残基以α-1,6糖苷键转移到另一个糖类底物上,从而得到非发酵性的异麦芽低聚糖(简称IMO)、糖脂或糖肽等。
不同来源的α-葡萄糖苷酶相对分子质量差异很大,一般在40000-150000之间。pI在3.0-5.0之间,多数具有较高的热稳定性和最适温度,属于键专一性酶,可专一性地切开糖类底物分子中的α-1,4糖苷键,个别种类的也可以作用于蔗糖的α-1,2糖苷键。目前,α-葡萄糖苷酶已广泛应用于基础和开发研究领域,主要包括生产低聚异麦芽糖、淀粉水解、酒精发酵、催化化学合成、代谢机理研究、食品成分分析、临床检测和医学诊断等方面。
自20世纪80年代日本从黑曲霉中筛选出α-葡萄糖苷酶生产菌种,并得以工业化生产酶制剂以来,α-葡萄糖苷酶在基础研究和工业生产上发挥着越来越重要的作用。目前,国外生产的α-葡萄糖苷酶大部分为纯酶,酶活较高;而国内主要以粗酶液为主,酶活较低。而且,国内尚未有商品化α-葡萄糖苷酶酶制剂出售,用于生产的酶均来自国外少数几个酶制剂厂,进口价格昂贵。微生物发酵是α-葡萄糖苷酶产业化的基础,研究其生化性质、转糖苷反应条件、优化发酵工艺和固定化等方面,不仅可弥补工业生产中该酶依赖进口所带来的不便,还可填补国内研究领域空白,具有重要的理论和应用价值。
在实际生产中,由于游离酶价格昂贵,难以回收利用,稳定性和可控性欠佳,难以在工业中得到广泛的应用。而酶固定化技术是实现酶重复连续使用和改善稳定性的有效手段。与游离酶相比,固定化酶具有储存稳定性高、易于分离回收、可多次重复使用、操作连续可控、工艺简便等优点,不仅在化学生物学、生物工程医学及生命科学等领域异常活跃,而且具有节省能源与资源、减少污染的生成。在固定化酶领域中,关键技术是交联试剂与载体的选择。壳聚糖是一种生物相容性好、易生物降解、无毒无副作用的天然高分子材料,其分子表面存在着丰富的羟基和氨基等官能团。具有磁性的壳聚糖微球固定化酶技术,不但能保持酶催化高效性和专一性,而且易于分离,有利于酶的重复性使用及产品的纯化。
发明内容
鉴于上述,本发明的目的在于提供一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法。该方法以嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)为菌种,对产α-葡萄糖苷酶的培养条件进行优化,确定实验最佳条件,在此基础之上,进行多批次的5L小型发酵实验和20L放大发酵实验,对收集的产物,采用离心、高压破壁法,得到α-葡萄糖苷酶粗酶。最后,以磁性壳聚糖微球为载体,采用吸附-交联法固定α-葡萄糖苷酶。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现:
一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法,其步骤是:
1.产α-葡萄糖苷酶菌株的发酵
①营养肉汁培养基:分别称取蛋白胨(OXIDE),牛肉提取物(BBI),氯化钠,加入蒸馏水,混合均匀,使氢氧化钠调整至pH7.0,1.05Kg/cm2灭菌20min。
②产酶培养基:分别称取蛋白胨(OXIDE),牛肉提取物(BBI),氯化钠,加入蒸馏水,混合均匀,自然pH,1.05Kg/cm2灭菌20min。
③种子液的制备:将嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)为菌种接种营养肉汁培养基中,在40-50℃下振荡培养15-25h,初始pH5.0-7.0,装瓶量20-40ml,接种量5-20%,转速100-300 r/min。
2.粗酶液的制备
将③得到的种子液以10%的接种量,接种于产酶培养基,在45℃下振荡培养24h,于10000r/min离心20min,去除上清液,收集沉淀,将菌体沉淀使用高压破壁,即为α-葡萄糖苷酶。
3.α-葡萄糖苷酶的固定化
①磁性壳聚糖微球的制备:称取纳米Fe3O4微球与0.01 g/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后,进行超声分散10-30min,边搅拌边缓慢加入液体石蜡和司盘-80,室温下充分搅拌10-30min,加入浓度为4%戊二醛溶液,在60-80℃下充分搅拌1-3 h,之后在70-90℃水浴中,熟化1-3 h,用磁铁收集得到的产物,最后依次用石油醚、丙酮、蒸馏水充分洗涤,在50-70℃下真空干燥,得到磁性壳聚糖微球;
②酶的固定化:将磁性壳聚糖微球加入三角瓶中,加入pH为7.0的磷酸-磷酸钾缓冲液,充分混合1-3h,将磁性壳聚糖微球取出,同时,将α-葡萄糖苷酶溶于pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液中,得到浓度为0.8 mg/mL的酶液,然后将磁性壳聚糖微球加入到配制好的酶液中,再加入浓度为1%的戊二醛溶液,恒温振荡1.5 h,用磁铁收集磁性固定化酶,用缓冲液充分洗涤,在4℃下保存固定化的α-葡萄糖苷酶。
本发明的优点和产生的有益效果:
1.本发明所得的α-葡萄糖苷酶是工业上生产低聚异麦芽糖的关键酶,作为主要酶制剂用于淀粉加工工业中的糖苷的转移。
2.本发明以纳米Fe3O4微球为基质,磁性壳聚糖微球为载体,采用吸附-交联法固定α-葡萄糖苷酶,将固定化的酶与游离的酶相比,均有较大提高,特别是在固定化过程中较高温度时,使酶活性损失减少,酶的复活回收率较高。
3.磁性壳聚糖微球是一种新型功能高分子材料,兼有磁性无机物与壳聚糖聚合物的优点,有利于固定化酶从反应体系中分离和回收,提高了酶的催化效率和回收率,操作简便、成本较低,可实现生产工艺的连续化和工业化。
具体实施方式
实施例1
本发明采用的菌株为:嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus )
本发明所使用的试剂:蛋白胨(OXIDE),牛肉提取物(BBI),医药用纳米Fe3O4微球(99.6%,≤20nm球形,市售),其他试剂均为分析纯。
本发明所采用的仪器:Mettler Toledo AL204分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);LDZM型立式智能压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂); SHA-B水浴恒温振荡器(江苏常州);BS-1E恒温振荡培养箱(江苏金坛市亿通电子有限公司); UV-1800PC紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);MD2300全自动5L液体发酵罐(B. E. Marubsishi 日本)。GL-21M高速冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)。AH100B高压细胞破碎机(ATS 工业系统有限公司);DL-SB-5Z20低温冷却液循环泵(郑州长城科工贸有限公司)
一种嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)产α-葡萄糖苷酶的方法,其步骤如下:
1.培养基的制备
①营养肉汁培养基:分别称取蛋白胨(OXIDE) 10.0g,牛肉提取物(BBI) 3.0g,氯化钠5.0g,加入蒸馏水1.0L,混合均匀,使用5mol/L氢氧化钠(约0.2ml)调整至pH7.0,1.05Kg/cm2灭菌20min;该培养基可用于Bacillus stearothermophilus菌株生长;
②产酶培养基:分别称取蛋白胨(OXIDE) 10.0g,牛肉提取物(BBI) 3.0g,氯化钠5.0g,加入蒸馏水1.0L,混合均匀,自然pH,1.05Kg/cm2灭菌20min。
③种子液的制备:将菌种嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)接种营养肉汁培养基中,在45℃下振荡培养24h;初始pH5.0-7.0,装瓶量20-40ml,接种量5-20%,转速100-300 r/min。
2.粗酶液的制备
将种子液以10%的接种量,接种于产酶培养基,在45℃下振荡培养24h,于10000r/min离心20min,去除上清液,收集沉淀,将菌体沉淀使用高压破壁,即为α-葡萄糖苷酶。
实施例2
α-葡萄糖苷酶的固定方法为:
1. 磁性壳聚糖微球的制备:取0.40 g Fe3O4粒子与100 mL 0.01 g/mL壳聚糖乙酸溶液混合后,进行30 min超声分散,边搅拌边缓慢加入到70 mL液体石蜡和3 mL 司盘-80中,常温下搅拌30min,加入25mL 4%戊二醛,在80℃下搅拌2 h,然后在90℃水浴中熟化1.5 h,得到的产物用磁铁收集。再依次用石油醚、丙酮、蒸馏水充分洗涤,于60℃真空干燥,得磁性壳聚糖微球;
2. 固定化酶的制备:将90 mg磁性壳聚糖微球加入锥形瓶中,用10 mLpH7.0的磷酸-磷酸钾缓冲液充分溶胀2.5h取出,同时将α-葡萄糖苷酶溶于pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液中,配制成0.8 mg/mL的酶液。然后将微球加入α-葡萄糖苷酶缓冲溶液中,并加20 mL 1%的戊二醛,恒温摇床振荡1.5 h,用磁铁收集磁性固定化酶,用缓冲液充分洗涤,最后在4℃下保存固定化的α-葡萄糖苷酶。
试验例1
酶的性质
将酶分别在40-60℃温度下,缓冲液用pH6.8的磷酸盐缓冲液(0.2mol/L),以pNPG作为底物进行酶活测定,最高酶活为100%。
用不同pH5.0-9.0的40mmol/L Brittion-Robinson 通用缓冲液(40 mmol/L磷酸-40 mmol/L硼酸-40 mmol/L乙酸,用NaOH调pH)取代酶活测定方法中的缓冲液进行酶活测定。
取适量酶液(终浓度为5mM)分别在不同温度45-60℃下保温4h,每隔1h取出一组样品,置于4℃冰箱内,待保温结束后统一在标准条件下测定残余酶活,以未处理的酶液的酶活设为100%。
酶在不同pH4.0-9.0的0.2mol/L Brittion-Robinson通用缓冲液中常温下24h处理后,加入0.2mol/L、pH6.8缓冲液恢复pH,然后在标准条件下测定残余酶活,以未处理的酶液的酶活设为100%。
经金属离子(Fe3+、Al3+、Cu2+、Mg2+、Ca2+、K+)和化学试剂(EDTA)与酶液混合,使其最终浓度分别达到1.0 mM,5.0 mM,然后在45℃下测定酶活。以未经金属离子和化学试剂处理的酶液的酶活设为100%。
试验例2
酶活测定
α-葡萄糖苷酶活测定方法:采用对硝基酚-α-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物。精确吸取0.1ml pNPG溶液(浓度为5mmol/L)、0.2ml0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.8)和0.2ml蒸馏水于60℃水浴中保温5min,加入0.1ml适度稀释的酶液,反应10min后,立即加入3.0ml 0.2mol/L硼酸钠终止反应,在400nm测定吸光度值。
酶活力定义:每分钟水解产生1μmol对硝基酚所需的酶量为一个酶活力单位。在如下公式中计算酶活力:
酶活力单位(μmol/ml)=Y(A样)/(M×V)
使用空白管作为参比溶液,将测得的吸光度值在对硝基酚标准曲线中查找生成对硝基酚的量Y(A样),M代表反应时间(10min),V代表加入酶量(0.1ml)。
试验例3
α-葡萄糖苷酶5L小型发酵实验和20L放大发酵实验
(1)产α-葡萄糖苷酶5L小型发酵实验
在试管和摇瓶培养的基础上采用5L 发酵罐完成小型发酵实验。培养基选用经优化的小型发酵用液体培养基,发酵条件:接种量为5-20%,pH5.0-7.0,培养温度40-50℃,培养时间15-25h。将试管培养的菌株接入到三角瓶中,放置在摇床上,搅拌速度100-300r/min,温度40-50℃培养15-25h后测定酶活力。把培养15-25h后的三角瓶中的菌株,接入到发酵罐中,搅拌速度100-300r/min,通气量1.0-2.0,温度40-50℃培养15-25h后测定酶活力,酶活力为2.80 U/mL,通过十批次的稳定性发酵试验,酶活力趋于恒定基本在2.5-3.0 U/mL之间。
(2)产α-葡萄糖苷酶20L放大发酵实验
在试管和摇瓶培养的基础上采用20L发酵罐完成放大发酵实验。培养基选用经优化的小型发酵用液体培养基,发酵条件:接种量为5-20%,pH5.0-7.0,培养温度40-50℃,培养时间15-25h。将试管培养的菌株接入到三角瓶中,放置在摇床上,搅拌速度100-300r/min,温度40-50℃培养15-25h后测定酶活力。把培养15-25h后的三角瓶中的菌株,接入到发酵罐中,搅拌速度100-300r/min,通气量2-4,温度40-50℃培养15-25h 后测定酶活力。酶活力为13.5U/mL,通过十二批次的稳定性发酵试验,酶活力趋于恒定基本在10-15U/mL之间。
Claims (1)
1.一种耐热α-葡萄糖苷酶的制备与固定化的方法,其步骤是:
(1)产α-葡萄糖苷酶菌株的发酵
①营养肉汁培养基:分别称取蛋白胨,牛肉提取物,氯化钠,加入蒸馏水,混合均匀,使氢氧化钠调整至pH7.0,1.05Kg/cm2灭菌20min;
②产酶培养基:分别称取蛋白胨,牛肉提取物,氯化钠,加入蒸馏水,混合均匀,自然pH,1.05Kg/cm2灭菌20min;
③种子液的制备:将嗜热脂肪芽孢杆菌为菌种接种营养肉汁培养基中,在40-50℃下振荡培养15-25h,初始pH5.0-7.0,装瓶量20-40ml,接种量5-20%,转速100-300 r/min;
(2)粗酶液的制备
将种子液以10%的接种量,接种于产酶培养基,在45℃下振荡培养24h,于10000r/min离心20min,去除上清液,收集沉淀,将菌体沉淀使用高压破壁,即为α-葡萄糖苷酶;
(3)α-葡萄糖苷酶的固定化
①磁性壳聚糖微球的制备:称取纳米Fe3O4微球与0.01 g/mL的壳聚糖乙酸溶液混合后,进行超声分散10-30min,边搅拌边缓慢加入液体石蜡和司盘-80,室温下搅拌10-30min,加入浓度为4%戊二醛溶液,在60-80℃下充分搅拌1-3 h,之后在70-90℃水浴中,熟化1-3 h,用磁铁收集得到的产物,最后依次用石油醚、丙酮、蒸馏水充分洗涤,在50-70℃下真空干燥,得到磁性壳聚糖微球;
②酶的固定化:将磁性壳聚糖微球加入三角瓶中,加入pH为7.0的磷酸-磷酸钾缓冲液,充分混合1-3h,将磁性壳聚糖微球取出,同时,将α-葡萄糖苷酶溶于pH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲液中,得到浓度为0.8 mg/mL的酶液,然后将磁性壳聚糖微球加入到配制好的酶液中,再加入浓度为1%的戊二醛溶液,恒温振荡1.5 h,用磁铁收集磁性固定化酶,用缓冲液充分洗涤,在4℃下保存固定化的α-葡萄糖苷酶。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104962544A (zh) * | 2015-06-17 | 2015-10-07 | 集美大学 | 一种直接从发酵液中固定化单宁酶的方法 |
CN106638040A (zh) * | 2016-11-10 | 2017-05-10 | 梅庆波 | 一种棉质纤维用高色牢度环保固色剂的制备方法 |
CN108410747A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-17 | 华南理工大学 | 一种连续合成低聚异麦芽寡糖的方法 |
CN108823197A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-16 | 河南大学 | 一种α-葡萄糖苷酶磁性纳米微反应器的制备方法及其应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101270352A (zh) * | 2008-04-11 | 2008-09-24 | 东华大学 | 一种用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法 |
CN102533717A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-04 | 江南大学 | 一种β-葡萄糖苷酶的固定化及其协同纤维素酶水解秸秆纤维素的方法 |
-
2013
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101270352A (zh) * | 2008-04-11 | 2008-09-24 | 东华大学 | 一种用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法 |
CN102533717A (zh) * | 2012-03-02 | 2012-07-04 | 江南大学 | 一种β-葡萄糖苷酶的固定化及其协同纤维素酶水解秸秆纤维素的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JIANZHI WANG ET AL: "Reversible immobilization of glucoamylase onto magnetic chitosan nanocarriers", 《APPL MICROBIOL BIOTECHNOL》 * |
胡先望等: "一种嗜热菌的α-葡萄糖苷酶纯化及性质研究", 《第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集》 * |
郭伟利等: "磁性壳聚糖微球固定化糖化酶的研究", 《酿酒科技》 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104962544A (zh) * | 2015-06-17 | 2015-10-07 | 集美大学 | 一种直接从发酵液中固定化单宁酶的方法 |
CN104962544B (zh) * | 2015-06-17 | 2017-11-03 | 集美大学 | 一种直接从发酵液中固定化单宁酶的方法 |
CN106638040A (zh) * | 2016-11-10 | 2017-05-10 | 梅庆波 | 一种棉质纤维用高色牢度环保固色剂的制备方法 |
CN108410747A (zh) * | 2018-02-11 | 2018-08-17 | 华南理工大学 | 一种连续合成低聚异麦芽寡糖的方法 |
CN108823197A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-16 | 河南大学 | 一种α-葡萄糖苷酶磁性纳米微反应器的制备方法及其应用 |
CN108823197B (zh) * | 2018-07-03 | 2021-04-09 | 河南大学 | 一种α-葡萄糖苷酶磁性纳米微反应器的制备方法及其应用 |
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140723 |