CN101089175A - 一种同时高产柚苷酶和橙皮苷酶的黑曲霉菌wz001及其应用 - Google Patents
一种同时高产柚苷酶和橙皮苷酶的黑曲霉菌wz001及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种可同时高产柚苷酶和橙皮苷酶、并能实现工业化生产的黑曲霉菌WZ001(Aspergillus niger WZ001)及其应用。所述黑曲霉菌WZ001保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNo.206047，保藏日期2006年5月15日，提议的分类命名为黑曲霉菌WZ001。本发明所述的黑曲霉菌WZ001产酶量高，采用液态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到14000U/g发酵原料以上；采用固态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到6000U/g发酵原料以上。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种可同时高产柚苷酶和橙皮苷酶的黑曲霉菌WZ001(Aspergillus niger WZ001)及其应用。
(二)背景技术
柚苷酶是由α-1，2-鼠李糖苷酶和β-葡萄糖苷酶组成的一个酶系，α-1，2-鼠李糖苷酶能使柚皮苷水解得到柚皮素单糖苷和鼠李糖，β-葡萄糖苷酶进一步使柚皮素单糖苷水解得到柚皮素和葡萄糖，柚苷酶可由黑曲霉、米曲霉、青霉菌产生。
橙皮苷酶是由α-1，6-鼠李糖苷酶和β-葡萄糖苷酶组成的一个酶系，α-1，6-鼠李糖苷酶能使橙皮苷水解得到橙皮素单糖苷和鼠李糖，β-葡萄糖苷酶再使橙皮素单糖苷水解得到橙皮素和葡萄糖。
产生柚苷酶的黑曲霉菌株通常会同时产生橙皮苷酶，但产酶量小，无法进行工业化生产。柚苷酶和橙皮苷酶的工业化生产在国外早有报道，国内也有相应的研究，但尚未应用于生产，主要原因是缺乏适合于工业生产的高产柚苷酶和橙皮苷酶菌株，发酵条件也没有得到优化。
(三)发明内容
本发明既是为了提供一种可同时高产柚苷酶和橙皮苷酶、并能实现工业化生产的黑曲霉菌WZ001(Aspergillus niger WZ001)及其应用。
为达到发明目的本发明采用的技术方案是：
一种黑曲霉菌WZ001(Aspergillusniger WZ001)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No.206047，保藏日期2006年5月15日，提议的分类命名为黑曲霉菌WZ001(Aspergillus niger WZ001)。
所述黑曲霉菌WZ001菌落特征如下：在斜面生长速度较快，在30℃条件下，一般需3-5天，菌落初期呈白色绒毛状，呈扩散状，表面较干燥，菌落后期生出棕褐色的孢子。分生孢子头幼时呈球形，具有分生孢子梗，壁光滑，顶囊球型，小梗双层，自顶囊全面着生，分生孢子球型或近球型，壁粗糙，摇瓶发酵后呈较浓的丝状，培养时间过长，菌丝体会自溶。
所述黑曲霉菌WZ001由如下方法诱变筛选得到：
从酒曲等传统发酵食品中经初筛、复筛选育出酶活力较高的黑曲霉Aspergillus niger WZ1为出发菌种进行紫外诱变和硫酸二乙酯诱变，再在柚皮苷、橙皮苷高层试管中培养，取透明层高度大的进行摇瓶发酵，测其柚苷酶和橙皮苷酶酶活力。紫外线处理条件为：在20w紫外灯40cm处，菌悬液在磁力搅拌器下边搅拌边诱变，照射时间为16min，致死率达到98.2％，正突变率为20％，选育出一突变株Aspergillus niger WZ01酶活有明显提高。再以Aspergillus niger WZ01用硫酸二乙酯处理，具体条件为：用磷酸缓冲液将Aspergillus niger WZ01新鲜斜面的孢子洗下，制成菌悬液，含孢子密度在10-6-10-7个/ml，取DES溶液和菌悬液等量(如5∶5)加入到无菌试管内混合，最后处理浓度为1％，在30℃下振荡处理30min，诱变处理结束后加入生理盐水稀释，涂于平皿中，将平皿放入30℃的培养箱中培养72h，再在柚皮苷、橙皮苷高层试管中培养，取透明层高度大的进行摇瓶发酵，测其柚苷酶和橙皮苷酶酶活力。紫外诱变和DES诱变酶活力分别提高了74.2％和99.4％。最后得到一株高产菌株Aspergillus niger WZ001。诱变后测得其中橙皮苷酶的酶活为14104.9U/g发酵原料，柚苷酶的酶活为14799.6U/g发酵原料。
所述的黑曲霉菌WZ001可用于发酵制备柚苷酶，也可用于发酵制备橙皮苷酶。
所述的黑曲霉菌WZ001可用于同时制备柚苷酶、橙皮苷酶。可采用液态发酵培养与固态发酵培养两种方式来制备。
液态发酵培养方法如下：液态发酵培养基质量含量为：麸皮1～10％，豆饼粉1～10％、豆渣5～15％，余量为水，pH自然；所述的液态发酵培养基灭菌冷却后以体积比2％接种量接入黑曲霉种曲，发酵温度30～37℃、转速150～200r/min条件下培养5～7天后，过滤得所述柚苷酶、橙皮苷酶混合酶的粗酶液。所述的灭菌为在0.1Mpa蒸汽压力灭菌20min。所述培养基组成以重量/体积百分比表示，某组分含量1％表示100mL培养基中含有1g该组分。
固态发酵培养方法如下：固态发酵培养基质量组成如下：麸皮70～80份、豆渣5～15份、豆饼粉10～20份，加入质量与上述固态混合物总质量之比为1∶1.0-1.5倍的水，分装于容器中，装料厚度为2.5～3.0cm，所述的固态发酵培养基灭菌冷却后以体积比2％接种量接入黑曲霉种曲，于32～37℃下培养5～7天后，培养物加水浸泡4～10h，过滤得所述柚苷酶、橙皮苷酶混合酶的粗酶液。所述的灭菌为0.1Mpa蒸汽压力灭菌30min。
酶活定义：在一定条件，1min转化底物得到1μg橙皮素单糖苷或柚皮素单糖苷所需的酶量为1个酶活单位U，单位为μg/min。
本发明所述的黑曲霉菌WZ001及其应用的有意效果主要体现在：所述菌株产酶量高，采用液态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到14000U/g发酵原料以上；采用固态发酵培养时，柚苷酶与橙皮苷酶产酶量均可达到6000U/g发酵原料以上。
(四)附图说明
黑曲霉菌WZ001保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNo.206047，保藏日期2006年5月15日。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
黑曲霉菌WZ001菌种经查氏培养基活化5天后，取30ml蒸馏水，制成孢子悬浮液。
液态发酵培养基质量组成：麸皮5％，豆饼粉4％、豆渣10％，余量为水，pH自然，0.1Mpa蒸汽压力灭菌20min，冷却后每瓶以体积比2％接入黑曲霉菌悬液，发酵温度30-37℃、转速150-200r/min条件下培养5-7天，过滤得粗酶液，测得其中橙皮苷酶的酶活为14104.9U/g发酵原料，柚苷酶的酶活为14799.6U/g发酵原料。
实施例2：
黑曲霉菌WZ001菌种经查氏培养基活化5天后，接种一环至液态种子培养基(麸皮4％，豆饼粉3％、豆渣8％，余量为水)中培养36h，得到种子液。
固态发酵培养基为麸皮100g、豆渣10g、豆饼粉20g，加入100ml的水，分装于500ml的三角瓶中，装料厚度为2.5-3.0cm，0.1Mpa蒸汽压力灭菌30min，冷却后每瓶以体积比2％接入黑曲霉种子液，于32℃下培养5-7天，培养物加水浸泡4h，过滤得粗酶液，测得其中橙皮苷酶的酶活为6378.5U/g发酵原料，柚苷酶的酶活为6601.7U/g发酵原料。
实施例3：
往100mL按实施例2方法所得粗酶液中，加入200mL乙醇，静置20min，离心，烘干，得柚苷酶与橙皮苷酶混合酶粉。橙皮苷酶回收率为75.2％，柚苷酶回收率为68.7％。
实施例4：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入150mL乙醇，离心所得沉淀用100mL水溶出，所得混合酶液中，橙皮苷酶回收率为71.2％，柚苷酶回收率为61.7％。
实施例5：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入220mL乙醇，离心所得沉淀用100mL水溶出，所得混合酶液中，橙皮苷酶回收率为81.6％，柚苷酶回收率为80.3％。
实施例6：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入270mL乙醇，离心所得沉淀用100mL水溶出，所得混合酶液中，橙皮苷酶回收率为83.0％，柚苷酶回收率为88.9％。
实施例7：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入300mL乙醇，离心所得沉淀用100mL蒸馏水溶出，所得混合酶液中，橙皮苷酶回收率为81.3％，柚苷酶回收率为85.7％。
实施例8：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入350mL乙醇，离心所得沉淀用100mL蒸馏水溶出，所得混合酶液中，橙皮苷酶回收率为80.7％，柚苷酶回收率为84.3％。
实施例9：
往100mL按实施例1方法所得粗酶液中，加入270ml乙醇，离心得沉淀，烘干，得混合酶粉，其中橙皮苷酶酶活为48150U/g，总回收率为68.1％，柚苷酶酶活为39596.5U/g，总回收率为66.4％。
实施例10：
利用两次硫铵沉淀、HiprepTM 16/10 Phenyl疏水层析、HiprepTM Q离子交换、SuperdeTM G75凝胶过滤等方法将橙皮苷酶和柚苷酶进行分离纯化，得电泳级α-鼠李糖苷酶和β-葡萄糖苷酶，α-1，6-鼠李糖苷酶纯化倍数为38.5倍，酶活回收为15.0％，分子量约为66kDa；α-1，2-鼠李糖苷酶的纯化倍数为倍57.3倍，酶活回收为9.4％，分子量大小约为104kDa；β-葡萄糖苷酶纯化倍数为倍41.2倍，酶活回收为15.4％，分子量约为97kDa。
Claims (9)
1.一种黑曲霉菌WZ001(Aspergillus niger WZ001)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No.206047，保藏日期2006年5月15日。
2.如权利要求1所述的黑曲霉菌WZ001，其特征在于所述黑曲霉菌WZ001菌落特征如下：在斜面生长速度较快，在30℃条件下，一般需3-5天，菌落初期呈白色绒毛状，呈扩散状，表面较干燥，菌落后期生出棕褐色的孢子，分生孢子头幼时呈球形，具有分生孢子梗，壁光滑，顶囊球型，小梗双层，自顶囊全面着生，分生孢子球型或近球型，壁粗糙，摇瓶发酵后呈较浓的丝状，培养时间过长，菌丝体会自溶。
3.如权利要求1所述的黑曲霉菌WZ001在发酵制备柚苷酶中的应用。
4.如权利要求1所述的黑曲霉菌WZ001在发酵制备橙皮苷酶中的应用。
5.如权利要求1所述的黑曲霉菌WZ001在制备柚苷酶、橙皮苷酶混合酶中的应用。
6.如权利要求5所述的黑曲霉菌WZ001在制备柚苷酶、橙皮苷酶混合酶中的应用，其特征在于所述的混合酶制备方法如下：液态发酵培养基质量含量为：麸皮1～10％，豆饼粉1～10％、豆渣5～15％，余量为水，pH自然；所述的液态发酵培养基灭菌冷却后以2％接种量接入黑曲霉种曲，发酵温度30～37℃、转速150～200r/min条件下培养5～7天后，过滤得所述柚苷酶、橙皮苷酶混合酶的粗酶液。
7.如权利要求6所述的黑曲霉菌WZ001在制备柚苷酶、橙皮苷酶混合酶中的应用，其特征在于所述的液态发酵培养基灭菌为在0.1Mpa蒸汽压力灭菌20min。
8.如权利要求5所述的黑曲霉菌WZ001在制备柚苷酶、橙皮苷酶混合酶中的应用，其特征在于所述的混合酶制备方法如下：固态发酵培养基质量组成如下：麸皮70～80份、豆渣5～15份、豆饼粉10～20份，加入质量与上述固态混合物总质量1.0-1.5倍的水，分装于容器中，装料厚度为2.5～3.0cm，所述的固态发酵培养基灭菌冷却后以2％接种量接入黑曲霉种曲，于32～37℃下培养5～7天后，培养物加水浸泡4～10h，过滤得所述柚苷酶、橙皮苷酶混合酶的粗酶液。
9.如权利要求9所述的黑曲霉菌WZ001在制备柚苷酶、橙皮苷酶混合酶中的应用，其特征在于所述的固态发酵培养基灭菌为0.1Mpa蒸汽压力灭菌30min。
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Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102732491A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-17 | 福州大学 | 利用黑曲霉发酵桔皮粉和豆渣生产柚苷酶的培养基及方法 |
| CN103740610A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-23 | 河北农业大学 | 链球菌auh-jld109及其在柚皮素生物合成中的应用 |
| CN105441410A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-03-30 | 宁夏乙征生物工程有限公司 | 一种鼠李糖苷酶的生产方法 |
| CN105602917A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-05-25 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种橙皮苷酶的生产方法及应用 |
| CN105670945A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-06-15 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种高产橙皮苷酶的黑曲霉kh005及其应用 |
| CN106148446A (zh) * | 2015-04-22 | 2016-11-23 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种通过酶促水解新橙皮苷或橙皮苷制备橙皮素的方法 |
| CN107254387A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-10-17 | 合肥润雨农业科技有限公司 | 一种富含谷胱甘肽樱桃酒的生产方法 |
| CN108603212A (zh) * | 2016-01-27 | 2018-09-28 | (株)基多生活 | 利用来自曲霉属菌的辅酶的花色素苷低聚物的制造方法 |
| CN110423700A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-11-08 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种高产鼠李糖苷酶的黑曲霉菌株 |
| CN111500371A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-08-07 | 浙江工业大学 | 一种利用微生物发酵法提取橘皮精油的方法 |
| CN111662831A (zh) * | 2020-06-12 | 2020-09-15 | 浙江工业大学 | 黑曲霉Rha-N1及其应用 |
| CN114369558A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-04-19 | 华南理工大学 | 一株粘质沙雷氏菌及其在生产柚苷酶中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5866406A (en) * | 1990-02-02 | 1999-02-02 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Oxidase-producing aspergillus niger |
| US5318895A (en) * | 1992-10-05 | 1994-06-07 | Merck & Co., Inc. | Aspergillus niger mutants |
| CN1185337C (zh) * | 2002-04-19 | 2005-01-19 | 浙江省农业科学院 | 黑曲霉菌株及其用途 |
| CN1184305C (zh) * | 2002-06-20 | 2005-01-12 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种黑曲霉及用其酵解人参皂甙制备稀有低极性人参皂甙的方法 |
| CN100480367C (zh) * | 2004-03-08 | 2009-04-22 | 于守存 | 一种黑曲霉菌株及其在果胶酶固态发酵生产中的应用 |
-
2006
- 2006-06-14 CN CNB200610051963XA patent/CN100467586C/zh active Active
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102732491A (zh) * | 2012-07-10 | 2012-10-17 | 福州大学 | 利用黑曲霉发酵桔皮粉和豆渣生产柚苷酶的培养基及方法 |
| CN103740610A (zh) * | 2013-12-17 | 2014-04-23 | 河北农业大学 | 链球菌auh-jld109及其在柚皮素生物合成中的应用 |
| CN103740610B (zh) * | 2013-12-17 | 2015-08-19 | 河北农业大学 | 链球菌auh-jld109及其在柚皮素生物合成中的应用 |
| CN106148446A (zh) * | 2015-04-22 | 2016-11-23 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种通过酶促水解新橙皮苷或橙皮苷制备橙皮素的方法 |
| CN105441410A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-03-30 | 宁夏乙征生物工程有限公司 | 一种鼠李糖苷酶的生产方法 |
| CN108603212A (zh) * | 2016-01-27 | 2018-09-28 | (株)基多生活 | 利用来自曲霉属菌的辅酶的花色素苷低聚物的制造方法 |
| CN108603212B (zh) * | 2016-01-27 | 2021-07-16 | (株)基多生活 | 利用来自曲霉属菌的辅酶的花色素苷低聚物的制造方法 |
| CN105602917A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-05-25 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种橙皮苷酶的生产方法及应用 |
| CN105670945B (zh) * | 2016-03-23 | 2019-04-23 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种高产橙皮苷酶的黑曲霉kh005及其应用 |
| CN105602917B (zh) * | 2016-03-23 | 2019-07-16 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种橙皮苷酶的生产方法及应用 |
| CN105670945A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-06-15 | 成都康辉生物科技有限公司 | 一种高产橙皮苷酶的黑曲霉kh005及其应用 |
| CN107254387A (zh) * | 2017-08-11 | 2017-10-17 | 合肥润雨农业科技有限公司 | 一种富含谷胱甘肽樱桃酒的生产方法 |
| CN110423700A (zh) * | 2019-06-14 | 2019-11-08 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种高产鼠李糖苷酶的黑曲霉菌株 |
| CN111500371A (zh) * | 2020-05-12 | 2020-08-07 | 浙江工业大学 | 一种利用微生物发酵法提取橘皮精油的方法 |
| CN111500371B (zh) * | 2020-05-12 | 2022-05-24 | 浙江工业大学 | 一种利用微生物发酵法提取橘皮精油的方法 |
| CN111662831A (zh) * | 2020-06-12 | 2020-09-15 | 浙江工业大学 | 黑曲霉Rha-N1及其应用 |
| CN114369558A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-04-19 | 华南理工大学 | 一株粘质沙雷氏菌及其在生产柚苷酶中的应用 |
| CN114369558B (zh) * | 2022-03-22 | 2022-06-07 | 华南理工大学 | 一株粘质沙雷氏菌及其在生产柚苷酶中的应用 |
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