CN109504725A - 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 - Google Patents
一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，属于微生物技术领域。所述方法包括如下：将猴头菌菌株接种到液体种子培养基培养至对数期，将种子转接到发酵培养基中，添加玻璃珠打散菌体，同时添加辅酶促进转化，控制pH值、温度及碳源浓度，置于摇床上振荡发酵，发酵液经酶解使菌丝形成原生质体破壁单细胞，再经加热、脱色，过滤、超滤、反复醇沉、干燥沉淀，即可制得高纯度猴头菌多糖，该多糖纯度可达90％以上，含量约为5～6g/L。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵工程领域，特别涉及一种发酵猴头菌制备猴头菌多糖的方法和发酵培养基。
背景技术
猴头菌又名猴头菇、熊头菇、刺猬菌，属多孔菌目齿菌科猴头属，是我国著名的食药兼用菌。徐光启《农政全书》记载，其味鲜美、清香可口。民间常用其治疗消化不良、神经衰弱。据记载，猴头菌具“助消化、利五脏”之功效。现代医学证明猴头菌对消化道疾病和恶性肿瘤疗效显著，大量研究发现猴头菌的生物活性主要来自其多糖，猴头菌多糖对免疫调节、癌症治疗、降糖降脂、抗氧化抗衰老等具有重大功效，是一种富有开发潜能、应用前景广阔的真菌多糖。日本及欧美国家20世纪30年代开始真菌多糖的研究，积累了大量科研资料，我国60年代开始研究，90年代成为研究热点。近年来，一些多糖类药物迅速进入市场，成为新型药品和保健品。然而伴随猴头菌多糖的研究越来越饱受关注，市场上同时出现了许多参差不齐的多糖原料，仅以子实体部分粗多糖充当纯品真菌多糖的现象屡见不鲜。所以开发一种制备高纯度猴头菌多糖且适合放大生产的产品工艺十分迫切。
猴头菌多糖根据其存在部位可分为胞内多糖和胞外多糖，胞内多糖存在于菌丝细胞内，胞外多糖指液体培养条件下分泌到培养液中的多糖，传统工艺多采用从猴头菌干品中提取分离或者从发酵液中的菌丝体中获得，而发酵液中的胞外多糖往往被人忽略。如各类保健品中的活性多糖多采用从猴头菌子实体中加工获得，猴头菌子实体从制种到采收约2～3个月，由于周期长、消耗大、菌株退化、栽培污染以及干品提取步骤繁琐、生产成本高等问题导致产率较低且产量不稳定。利用微生物的深层发酵，提高胞内、胞外多糖发酵产量，高效制备高纯度产品将是今后研究重点及主流趋势。
专利文献1中公开了“一种猴头菌多糖及其制备方法”，首先将猴头菌进行醇沉干燥制备粗多糖，粗多糖再经离子交换树脂吸附处理，可得最终猴头菌多糖。该工艺中步骤虽较为简单但离子交换法效率较低难以放大生产，且未对多糖纯度进行研究。
专利文献2中公开了“一种提取猴头菌多糖的方法”，取猴头菌子实体部分进行粉碎，对比使用微波、热水浸提、超声三种方式进行提取，最后经浓缩醇沉、干燥即可制得产品。该工艺虽在醇沉过程中可除去部分小分子杂质，但并未涉及大分子杂质如蛋白杂质的去除，产品纯度不高。
专利文献3中公开了“一种猴头菌活性多糖及其制备方法”，该工艺过程将猴头菌多糖进行原料预处理，超声降解，最终经冷冻干燥制得猴头菌高活性多糖产品。该专利工艺过程虽较为简单，但冷冻干燥工艺因成本较高并不适合生产放大。另外该专利并未对猴头菌多糖的原料来源加以说明。
非专利文献1公开了一篇“猴头菌丝多糖的发酵生产及其提取工艺优化”的文章，该工艺过程为猴头菌菌丝发酵，收集菌丝，菌丝经热水浸提，再用无水乙醇沉淀制备多糖，该工艺过程中仅收集菌丝体而发酵液中存在的胞外多糖被弃掉，同时对制备的多糖纯度并未说明。
非专利文献2公开了一篇“猴头菌液体发酵及多糖的提取纯化研究”的论文，该论文从发酵优化到最终纯化制备了三个组分的纯多糖，最终三个组分多糖含量为84.31％，78.47％和72.16％，其产品纯度仍有待提高。
从上述文章及专利来看，对于猴头菌多糖的研究较多集中在产品活性上，目前尚无一种通过发酵法来高效制备高纯度猴头菌总多糖(胞内多糖及胞外多糖)且适用于生产放大的工艺，该研究尚属空白，主要难点为：1.发酵产率较低；2.纯化工艺中较多杂质无法完全去除。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:CN 102643359 A
专利文献2:CN 103044563 A
专利文献3:CN 106478829 A
非专利文献
非专利文献1：“猴头菌丝多糖的发酵生产及其提取工艺优化”，内蒙
古科技大学数理与生物工程学院，农业机械，2011(23):167-169.
非专利文献2：“猴头菌液体发酵及多糖的提取纯化研究”，江苏大学硕士论文，2008.
发明内容
基于此现状本发明旨在提供一种通过发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
1.一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将猴头菌菌种接种到种子培养基中，振荡培养种子，得到种子液；
步骤2：将步骤1中的种子液接种到包含玻璃珠的发酵培养基中；
步骤3：发酵过程中进行温度控制和pH控制，同时补加碳源；
步骤4：发酵结束后添加真菌酶进行酶解，得到含有破壁细胞的发酵液；和
步骤5：对发酵液进行处理，得到猴头菌多糖。
2.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所用猴头菌的保藏编号为CCTCCNO:M2018567。
3.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～0.1质量％的无机盐。
4.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素， 0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100 mL，分散剂为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种或多种。
5.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤3中，所述温度控制为：发酵2～3天发酵温度设为24～30℃，发酵3～10天发酵温度设为20～24℃。
6.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤3中，所述pH控制为：发酵2～3天时发酵pH自然，发酵3～10天时pH设为5.0～5.5。
7.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤3中，发酵4～6天时开始补加碳源，维持发酵液碳源浓度为1～1.5质量％。
8.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤3中，发酵至7～8天停止补加糖，发酵终点为发酵液中无残糖。
9.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤4中，酶解过程在摇床上进行，摇床转速为200～300rpm。
10.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤4中，所述真菌酶为选自纤维素酶、蜗牛酶、蛋白酶、真菌溶壁酶中的一种或多种，添加量为0.1～1 质量％，酶解时间为60～120min。
11.根据项1所述的方法，其特征在于，步骤5中，所述处理包括加热、脱色、过滤、超滤、醇沉和干燥。
12.根据项11所述的方法，其特征在于，所述加热的温度为50～100℃，加热时间为10～60min。
13.根据项11所述的方法，其特征在于，所述脱色为活性炭吸附脱色，活性炭为选自针剂型、椰壳型、木质粉状型和煤质柱状型中的一种或多种活性炭，发酵液中添加活性炭的量为0.1～1质量％，吸附温度为30～80℃，吸附时间为30～120min。
14.根据项11所述的方法，其特征在于，所述过滤中所用的滤膜的孔径为0.22μm。
15.根据项11所述的方法，其特征在于，所述超滤中所用的滤膜的截留分子量为1000～5000Da。
16.根据项11所述的方法，其特征在于，所述醇沉为使用乙醇沉淀，所用乙醇体积为滤液的2～5倍。
17.根据项1所述的方法，其特征在于，通过该方法制得的猴头菌多糖的含量为5～6g/L，纯度为90％以上。
18.一种发酵培养基，其特征在于，其组成为1～5质量％的碳源、1～5 质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、 0.0001～0.001质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100mL，其余为水。
19.如项18所述的发酵培养基，其特征在于，所述分散剂为选自吐温 80、EDTA和吐温60中任意一种或多种。
20.一种组合物，其包括猴头菌(Hericium erinaceus)和发酵液，所述发酵液包含猴头菌多糖，其中猴头菌多糖在所述发酵液中的浓度为2g/L以上，优选为3g/L以上，进一步优选为4g/L以上，优选5～6g/L。
用于生产发酵液的所述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、 1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、 0.0001～0.001质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100mL，分散剂为选自吐温80、EDTA和吐温 60中任意一种或多种。
具体地，本发明提供一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将猴头菌菌种接种到种子培养基中，振荡培养种子，得到种子液；
步骤2：将步骤1中的种子液接种到包含玻璃珠的发酵培养基中；
步骤3：发酵过程中进行温度控制和pH控制，同时补加碳源；
步骤4：发酵结束后添加真菌酶进行酶解，得到含有破壁细胞的发酵液；和
步骤5：对发酵液进行处理，得到猴头菌多糖。
上述猴头菌优选为保藏编号为CCTCC No:M2018567的猴头菌。
在步骤1中，具体地，菌种为保藏在试管斜面的猴头菌菌丝体；
可以在种子培养基中加入玻璃珠及分散剂，振荡培养种子；
上述玻璃珠是在接种前在种子培养基中加入的灭菌玻璃珠，玻璃珠直径为1～10mm，添加量为10～50粒/100mL；
分散剂可以为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种，优选为吐温 80，添加量为0.05～0.1质量％；
振荡培养在20～25℃、100～200rpm摇床振荡培养5～10天；
上述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～0.1质量％的无机盐。
在步骤2中，具体地，种子液以5～10体积％的接种量，100～200rpm摇床振荡培养；
上述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠 10～50粒/100mL；
分散剂可以为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种或多种，优选为吐温80，添加量为0.05～0.1质量％，发酵培养基中加入分散剂来提高发酵过程中的菌丝分散效率；
上述玻璃珠的直径为1～10mm，玻璃珠用于在发酵过程中分散菌体。
上述步骤1、步骤2中，种子培养基、发酵培养基均含有碳源、氮源、无机盐。上述碳源为微生物常用碳源，可以为甘油、蔗糖、果糖、葡萄糖和麦芽糖中的一种或多种，种子培养基优选为蔗糖，发酵培养基优选为葡萄糖；
上述氮源为微生物培养常用氮源，可以为牛肉膏、蛋白胨、酵母粉和豆饼粉中的一种或多种，种子培养基优选为牛肉膏，发酵培养基优选为酵母粉；
上述无机盐为微生物培养常用无机盐，可以为氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钾和硫酸钠中的一种或多种，种子培养基及发酵培养基无机盐均优选为磷酸二氢钠和硫酸钠；
发酵培养基中含有微量元素，可以为氯化亚铁、氯化锌中的一种或多种，优选为氯化锌；
发酵培养基中含有辅酶，可以为生物素、烟酸、磷酸吡哆醛、甜菜碱、维生素B12和核黄素中的一种或多种，优选为磷酸吡哆醛。
在步骤3中，具体地，上述温度控制为：发酵2～3天发酵温度设为 24～30℃，发酵3～10天发酵温度设为20～24℃；
上述pH控制为：发酵2～3天时发酵pH自然，发酵3～10天时pH设为 5.0～5.5；可以通过补加碱来控制pH在5.0～5.5，上述碱可以为NaOH、氨水和尿素中的一种或多种，优选为NaOH溶液。
发酵4～6天时开始补加碳源，维持发酵液碳源浓度为1～1.5质量％；
发酵至7～8天停止补加糖，发酵终点为发酵液中无残糖。
在步骤4中，具体地，酶解过程在摇床上进行，摇床转速为200～300rpm；
上述真菌酶为选自纤维素酶、蜗牛酶、蛋白酶、真菌溶壁酶中的一种或多种，优选为真菌溶壁酶，真菌酶的添加量为0.1～1质量％，优选为0.5质量％，酶解时间为60～120min，温度为25～35℃，优选为30℃。
在步骤5中，具体地，上述处理可以包括加热、脱色、过滤、超滤、醇沉和干燥；
上述加热的温度为50～100℃，加热时间为10～60min，以浸提多糖，变性沉淀蛋白；
上述脱色为活性炭吸附脱色，活性炭为选自针剂型、椰壳型、木质粉状型和煤质柱状型中的一种或多种活性炭，发酵液中添加活性炭的量为0.1～1 质量％，优选为0.5质量％，吸附温度为30～80℃，优选为50℃，吸附时间为30～120min，优选为40min；
上述过滤中所用的滤膜的孔径为0.22μm，以去除大分子杂质以及微生物。
上述超滤中所用的滤膜的截留分子量可以为1000～5000Da，优选为1000 Da，以去除小分子杂质。
上述醇沉为使用乙醇沉淀，所用乙醇体积为滤液的2～5倍，优选为4倍，乙醇沉淀次数为2次或多次。
上述干燥为真空干燥，干燥温度为20～50℃，优选为25℃，干燥时间为 15～30h，优选为20h。
通过本发明的方法制得的猴头菌多糖的含量为5～6g/L，纯度为90％以上。
本发明还提供一种发酵培养基，其组成为1～5质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001 质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100mL，其余为水。
具体地，分散剂为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种或多种。
本发明的制备方法利用发酵代谢调控理论对发酵过程进行控制，可提高猴头菌多糖的发酵产率。同时，引入发酵分散技术，结合高效真菌酶酶解技术，可制备破壁原生质体细胞，胞内、胞外总多糖经纯化可在引入杂质较少的前提下以较高收率获得，含量约为5～6g/L，最终制备的猴头菌多糖纯度可达90％以上，该工艺简单可行且易于放大生产，具备实现产业化生产的巨大潜力。
发明的具体实施方式
以下将对本发明做以详细说明。
本发明提供的发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，包括以下步骤：
步骤1：将猴头菌菌种接种到种子培养基中，振荡培养种子，得到种子液；
步骤2：将步骤1中的种子液接种到包含玻璃珠的发酵培养基中；
步骤3：发酵过程中进行温度控制和pH控制，同时补加碳源；
步骤4：发酵结束后添加真菌酶进行酶解，得到含有破壁细胞的发酵液；和
步骤5：对发酵液进行处理，得到猴头菌多糖。
本发明的猴头菌多糖的制备方法引入发酵分散技术，结合高效真菌酶酶解技术，可制备破壁原生质体细胞，胞内、胞外总多糖经纯化可在引入杂质较少的前提下以较高收率获得。
步骤1
步骤1：将猴头菌菌种接种到种子培养基中，振荡培养种子，得到种子液。
上述猴头菌优选为保藏编号为CCTCC No:M2018567的猴头菌。利用该菌株时有利于得到猴头菌多糖。猴菇菌为真菌类担子菌纲多孔菌目齿菌科猴头菌Hericium erinaceus(Rull ex F.)Pers.，是一种腐生菌，也是一种著名的食用菌。全形似刺猬或猴头，故俗称猴头菇或猴菇。其中，猴头菌优选为猴头菌HT-3(Hericium erinaceus HT-3)CCTCC No：M2018567，已于2018年8月23日在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏地址：中国武汉武汉大学，该菌株是本申请人发现的新的猴头菌种，而且发现其可用于麦角硫因的生物合成。
在一个具体的实施方式中，猴头菌菌种为保藏在试管斜面的猴头菌菌丝体。
在一个具体的实施方式中，在种子培养基中加入玻璃珠及分散剂，振荡培养种子；上述玻璃珠是在接种前在种子培养基中加入的灭菌玻璃珠，玻璃珠直径为1～10mm，添加量为10～50粒/100mL；玻璃珠用于分散菌体；分散剂可以为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种，优选为吐温80，添加量为0.05～0.1质量％，通过添加分散剂可以提高菌丝分散效率。
在一个具体的实施方式中，振荡培养在20～25℃、100～200rpm摇床振荡培养5～10天。在该条件下培养，猴头菌可以良好地生长。
上述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～0.1质量％的无机盐。
碳源可以为微生物常用碳源，没有特别限定，例如可以为甘油、蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖等，优选为蔗糖。氮源可以为微生物培养常用氮源，没有特别限定，例如可以为牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等，优选为牛肉膏。无机盐可以为微生物培养常用无机盐，没有特别限定，例如可以氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钾、硫酸钠等，优选为磷酸二氢钠和硫酸钠。
步骤2
步骤2：将步骤1中的种子液接种到包含玻璃珠的发酵培养基中。通过在发酵培养基中添加玻璃珠，可以利用发酵分散技术。
在一个具体的实施方式中，种子液以5～10体积％的接种量，100～200rpm 摇床振荡培养。
在一个具体的实施方式中，上述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1 质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100mL。分散剂可以为选自吐温80、EDTA 和吐温60中任意一种或多种，优选为吐温80，添加量为0.05～0.1质量％，发酵培养基中加入分散剂来提高发酵过程中的菌丝分散效率；上述玻璃珠的直径为1～10mm，玻璃珠用于在发酵过程中分散菌体。
碳源可以为微生物常用碳源，没有特别限定，例如可以为甘油、蔗糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖等，优选为葡萄糖。氮源可以为微生物培养常用氮源，没有特别限定，例如可以为牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、豆饼粉等，优选为酵母粉。无机盐可以为微生物培养常用无机盐，没有特别限定，例如可以氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钾、硫酸钠等，优选为磷酸二氢钠和硫酸钠。微量元素，也没有特别限定，例如可以为氯化亚铁、氯化锌等，优选为氯化锌。辅酶例如可以为生物素、烟酸、磷酸吡哆醛、甜菜碱、维生素 B12、核黄素等，优选为磷酸吡哆醛。
步骤3
步骤3：发酵过程中进行温度控制和pH控制，同时补加碳源。利用发酵代谢调控理论对发酵过程进行控制，可提高猴头菌多糖的发酵产率。
在一个具体的实施方式中，温度控制为：发酵2～3天发酵温度设为 24～30℃，发酵3～10天发酵温度设为20～24℃；pH控制为：发酵2～3天时发酵pH自然，发酵3～10天时pH设为5.0～5.5；可以通过补加碱来控制pH 在5.0～5.5，上述碱可以为NaOH、氨水和尿素中的一种或多种，优选为NaOH 溶液。补加碳源为：发酵4～6天时开始补加碳源，维持发酵液碳源浓度为 1～1.5质量％；发酵至7～8天停止补加糖，发酵终点为发酵液中无残糖。通过进行上述控制，能够提高猴头菌多糖的发酵产率。
步骤4
步骤4：发酵结束后添加真菌酶进行酶解，得到含有破壁细胞的发酵液。通过利用真菌酶酶解技术，可制备破壁原生质体细胞，胞内、胞外总多糖经纯化可在引入杂质较少的前提下以较高收率获得。
在一个具体的实施方式中，酶解过程在摇床上进行，摇床转速为200～300 rpm。
真菌酶可以为选自纤维素酶、蜗牛酶、蛋白酶、真菌溶壁酶中的一种或多种，优选为真菌溶壁酶，真菌酶的添加量为0.1～1质量％，优选为0.5质量％，酶解时间为60～120min，温度为25～35℃，优选为30℃，由此能够更彻底地破壁原生质体细胞，将胞内多糖释放到细胞外。
步骤5
步骤5：对发酵液进行处理，得到猴头菌多糖。
上述处理只要能够高收率地获得猴头菌多糖就没有特别限制，可以包括加热、脱色、过滤、超滤、醇沉和干燥。
在一个具体的实施方式中，上述加热的温度为50～100℃，加热时间为 10～60min，通过该条件下加热，能够浸提多糖，变性沉淀蛋白。
上述脱色只要能够使发酵液脱色即可，没有特别限制，优选为活性炭吸附脱色，活性炭可以为选自针剂型、椰壳型、木质粉状型和煤质柱状型中的一种或多种活性炭，发酵液中添加活性炭的量为0.1～1质量％，优选为0.5 质量％，吸附温度为30～80℃，优选为50℃，吸附时间为30～120min，优选为40min，通过该条件下脱色，能够得到色相更好的猴头菌多糖。
过滤没有特别限制，所用的滤膜的孔径优选为0.22μm，由此能够更好地去除大分子杂质以及微生物。
超滤没有特别限制，所用的滤膜的截留分子量可以为1000～5000Da，优选为1000Da，由此能够更好地去除小分子杂质。
醇沉没有特别限制，可以为乙醇沉淀，所用乙醇体积为滤液的2～5倍，优选为4倍，乙醇沉淀次数为2次或多次，由此能够更高收率地提取猴头菌多糖。
干燥没有特别限制，可以为真空干燥，干燥温度为20～50℃，优选为 25℃，干燥时间为15～30h，优选为20h，由此能够更好地保留猴头菌多糖的活性。
通过本发明的制备方法制得的猴头菌多糖的含量为5～6g/L，纯度为 90％以上。
本发明的以下实施例仅用来说明实现本发明的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本发明的限制。其他的任何在未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本发明的保护范围之内。
实施例
下面结合具体实施例对本发明进一步的说明。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1(发酵pH控制)
(1)种子液的制备
培养基配制：按照质量分数称取20份的蔗糖、10份牛肉膏、1份磷酸二氢钠、0.5份硫酸钠、1份吐温80，加水至1000份，pH自然。
种子培养：于250mL三角瓶中装入100mL上述种子培养基，向种子培养基中加入约20粒直径为3mm的玻璃珠。灭菌后，从猴头菌试管斜面上取3cm2的菌块接种到种子培养基中，置于摇床200rpm，25℃振荡培养7 天，使菌丝体大量合成，制备菌丝分散的种子液。
(2)发酵
培养基的配制：按照质量分数称取35份的葡萄糖、10份酵母粉、0.5 份磷酸二氢钠、0.5份硫酸钠、1份吐温80、0.1份氯化锌、0.005份磷酸吡哆醛，加水至1000份。
发酵培养：于1L三角瓶中装入300mL上述发酵培养基，向发酵培养基中加入约50粒直径为3mm的玻璃珠，灭菌后，按照5体积％的接种量将种子液接种到发酵培养基中，置于摇床200rpm，25℃振荡培养，分别设pH 值自然、pH 4.5～5、pH 5～5.5、pH 5.5～6.0、pH分段控制即发酵3天后控制 pH值在5～5.5，振荡培养发酵至葡萄糖完全耗尽后发酵结束，苯酚硫酸法测定发酵液中多糖含量。
(3)苯酚硫酸法检测多糖含量。
1)仪器：可见-紫外分光光度计、分析天平(精度0.0001g)、漩涡混合器
2)试剂：
标准溶液：精确称取干燥恒重的葡萄糖(分析纯)100mg至容量瓶中，加水定容至250mL，摇匀后精确吸取10mL该溶液，加水定容至100mL。
80％苯酚溶液的配制：准确移取重蒸酚(重蒸过的苯酚)80mL，加蒸馏水定容至100mL，即得80％苯酚溶液，棕色瓶中避光保存。
6％苯酚溶液的配制：将80％苯酚溶液加水稀释至6％，临用现配。
采用优级纯浓硫酸。
3)检测：
制作标准曲线：分别吸取葡萄糖标准液0.0mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、 1.6mL、2.0mL于具塞试管中，各加水补至2.0mL。分别加入6％苯酚溶液 1.0mL，混合均匀后快速加入浓硫酸5.0mL(浓硫酸时悬空加入，不能贴壁)，即刻摇匀，室温反应20min后于490nm测吸光度，以0管(加入葡萄糖标准液0.0mL的试管)做空白对照，纵坐标为多糖浓度，横坐标为吸光度，得标准曲线。
样品制备：分别称取0.2g或0.2mL待检测样品置50mL容量瓶中，加适量水，完全溶解后加水定容至刻度作为贮备液，摇匀。用前量取贮备液 5mL，置50mL容量瓶中，加水至刻度，再以相同方法稀释10倍。取2mL 于具塞试管中，按上述“加入6％苯酚溶液1.0mL”起，同法操作，由标准曲线得待测样品多糖浓度，根据稀释倍数计算多糖含量。
表1 pH控制对猴头菌多糖产量的影响
| pH控制 | 多糖含量(g/L) |
| 4.5～5.0 | 2.83 |
| 5.0～5.5 | 3.22 |
| 5.5～6.0 | 2.97 |
| 分段控制 | 3.65 |
从上述检测结果看，最佳发酵pH为发酵3天后控制pH值在5.0～5.5，此时多糖含量最高。
实施例2(发酵温度控制)
(1)种子液的制备：按照实施例1制备种子液。
(1)发酵培养
培养基的配制：按照实施例1配制培养基。
发酵培养：于1L三角瓶中装入300mL上述发酵培养基，向发酵培养基中加入约50粒直径为3mm的玻璃珠，灭菌后，按照5％的接种量将种子液接种到发酵培养基中，置于摇床200rpm振荡培养，pH分段控制发酵3 天后控制pH值在5～5.5，分别设置发酵温度22℃、25℃、28℃、温度分段控制即发酵3天后温度降低至22℃，振荡培养发酵至葡萄糖完全耗尽后发酵结束，按照实施例1的方法测定发酵液中多糖含量。
表2温度对猴头菌多糖产量的影响
| 温度控制 | 多糖含量(g/L) |
| 22℃ | 3.39 |
| 25℃ | 3.58 |
| 28℃ | 3.16 |
| 分段控制 | 3.98 |
从上述检测结果看，分段控制发酵温度时，多糖含量最高。
实施例3(补糖控制)
(1)种子液的制备：按照实施例1制备种子液。
(2)发酵培养
培养基的配制：按照实施例1配置培养基。
发酵培养：于1L三角瓶中装入300mL上述发酵培养基，向发酵培养基中加入约50粒直径为3mm的玻璃珠，灭菌后，按照5％的接种量将种子液中接种到发酵培养基中，置于摇床200rpm，25℃振荡培养3天后开始补加NaOH控制pH值在5.0～5.5，同时温度降低到22℃继续发酵至第5天，开始补加葡萄糖维持摇瓶糖浓度在1～1.5％，发酵至第8天停止补糖，同时以不补糖作为对照，发酵至葡萄糖完全耗尽后发酵结束，按照实施例1测定发酵液中多糖含量。
表3补糖控制对猴头菌多糖产量的影响
从上述检测结果看，补糖的多糖含量要高于不补糖的多糖含量。
实施例4(猴头菌发酵液的酶解条件比较)
提取工艺：取实施例3中补糖组发酵液多份每份各300mL分别采用以下多种处理方式，条件如下：
纤维素酶：添加量2％，酶解温度35℃，酶解时间3h，酶解pH 6.5；
蜗牛酶：添加量2.5％，酶解温度35℃，酶解时间4h，酶解pH 6.5；
纤维素酶、蜗牛酶复合酶：纤维素酶添加量1.5％，蜗牛酶添加量2.5％，酶解温度35℃，酶解时间5h，酶解pH 6.5；
蜗牛酶、崩溃酶复合酶：蜗牛酶添加量2.5％，崩溃酶添加量0.005％，酶解温度38℃，酶解时间4h，酶解pH 6.5；
真菌溶壁酶：添加量0.5％，酶解温度30℃，酶解时间2h，酶解pH 6.0；
超声：超声功率1200w，超声时间为30min；
均质：均质主轴转速为3000r/min，均质时间为10～30min；
(2)浸提：上述酶解液分别于80℃水浴中加热搅拌30min，经0.22μm 滤芯过滤去除微生物细胞碎片等杂质，分别检测上述处理液中多糖含量。
表4酶解方式对猴头菌多糖产量的影响
| 酶解方式 | 酶解处理液中多糖含量(g/L) |
| 纤维素酶 | 4.61 |
| 蜗牛酶 | 4.64 |
| 纤维素酶、蜗牛酶复合酶 | 4.98 |
| 蜗牛酶、崩溃酶复合酶 | 5.17 |
| 真菌溶壁酶 | 5.97 |
| 超声 | 4.52 |
| 均质 | 4.48 |
从上述检测结果看，最佳提取工艺为酶解条件为添加0.5％真菌溶壁酶，酶解温度30℃，酶解时间2h，酶解pH 6.0。
实施例5(发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖)
(1)发酵培养基的配制：按照质量分数称取35份的葡萄糖、10份酵母粉、 0.5份磷酸二氢钠、0.5份硫酸钠、1份吐温80、0.1份氯化锌、0.005份磷酸吡哆醛，加水至1000份。
(2)发酵培养：于1L三角瓶中装入300mL上述发酵培养基，向发酵培养基中加入约50粒直径为3mm的玻璃珠，灭菌后，按照5％的接种量取实施例(1)中种子液接种到发酵培养基中，置于摇床200rpm，25℃振荡培养3 天后开始补加NaOH控制pH值在5.0～5.5，同时温度降低到22℃继续发酵至第5天，开始补加葡萄糖维持摇瓶糖浓度在1～1.5％，发酵至第8天停止补糖，发酵至第10天葡萄糖完全耗尽后发酵结束。
(3)酶解：取300mL上述发酵液按照实施例6中操作选择真菌溶壁酶进行酶解。
(4)浸提、吸附：酶解液于80℃水浴中搅拌加热30min，按照体积加3g 针剂型活性碳，50℃搅拌吸附40min。
(5)过滤：吸附液经0.22μm滤芯过滤，去除活性炭、微生物和其他杂质。滤液经1000Da孔径滤膜超滤浓缩，得超滤浓缩液100mL。
(6)沉淀、干燥：以4倍体积95％的乙醇沉淀滤液，弃去上清液，沉淀再次以100mL纯水溶解，4倍体积95％的乙醇沉淀溶解液，得沉淀。沉淀经真空干燥20h后即可得到最终产品白色猴头菌多糖，称重共计1.62g，苯酚硫酸法测猴头菌多糖纯度为91.8％。
实施例6(猴头菌50L发酵放大实验)
(1)发酵培养基的配制：按照实施例(5)培养基比例配制，加水至35L置于50L发酵罐中。
(2)发酵培养：上述培养基灭菌后，按照5％的接种量取实施例(1)中种子液接种到发酵培养基中，发酵罐采用平叶涡轮搅拌桨进行搅拌更利于菌丝分散，发酵条件为：
发酵温度：25℃发酵3～4天取样检测糖浓度，当糖浓度在2％～2.5％左右温度降至22℃继续发酵至结束。
发酵pH：初始温度为25℃时发酵pH自然，温度降至22℃后开始补加 NaOH控制pH值在5.0～5.5至发酵结束。
补糖方式：发酵5～6天取样检测糖浓度，当糖浓度降至1％以下时开始流加葡萄糖维持发酵液中糖浓度在1～1.5％，发酵至第8天停止补糖，发酵至第10天葡萄糖完全耗尽。
搅拌转速：400rpm
通气量：35L/min
罐压：0.03-0.05MPa
(3)上述发酵液按照实施例(5)精制纯化工艺对发酵液纯化共制备猴头菌多糖174.59g，苯酚硫酸法测多糖纯度为90.1％。
比较例1
(1)发酵培养基的配制：按照质量分数称取35份的葡萄糖、10份酵母粉、 0.5份磷酸二氢钠、0.5份硫酸钠、0.1份氯化锌、0.005份磷酸吡哆醛，加水至1000份。
(2)发酵培养：取1L三角瓶中装入300mL上述发酵培养基，灭菌后，按照5％接种量从实施例(1)中的种子液接种到发酵培养基中，置于摇床200 rpm，25℃振荡培养发酵至第6天葡萄糖完全耗尽后发酵结束。
(3)均质、浸提：300mL发酵液进行均质，均质主轴转速为3000r/min，均质时间为10～30min。均质液置于80℃水浴中，加热30min。
(4)过滤：均质液经0.22μm滤芯过滤去除微生物细胞等杂质。
(5)沉淀、干燥：以4倍体积95％的乙醇沉淀滤液，弃去上清液，得沉淀。沉淀经真空干燥20h后即可得多糖，称重共计0.78g，苯酚硫酸法测多糖纯度为74.6％。
比较例2
除了在发酵培养基中不添加分散剂吐温80以外，其余按照实施例5操作，得到猴头菌多糖，称重共计1.34g，苯酚硫酸法测多糖纯度为90.7％。
比较例3
除了在发酵培养基中不添加玻璃珠以外，其余按照实施例5操作，得到猴头菌多糖，称重共计1.40g，苯酚硫酸法测多糖纯度为91.0％。
比较例4
除了在发酵培养基中不进行酶解以外，其余按照实施例5操作，得到猴头菌多糖，称重共计1.19g，苯酚硫酸法测多糖纯度为89.8％。
比较例1的发酵培养基中没有添加玻璃珠和分散剂吐温80，未进行温度和pH控制，也没有补充碳源，没有进行酶解，因此得不到高纯度的猴头菌多糖。比较例2由于在发酵培养基中不添加分散剂吐温80，因此，猴头菌多糖的纯度和产量虽然比较高，但仍低于实施例5。比较例3由于发酵培养基中没有添加玻璃珠，因此，猴头菌多糖的纯度和产量虽然比较高，但仍低于实施例5。比较例4由于缺乏关键的酶解，因此猴头菌多糖的纯度和产量均低于实施例5，而且猴头菌多糖的纯度低于90％。
Claims (10)
1.一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将猴头菌菌种接种到种子培养基中，振荡培养种子，得到种子液；
步骤2：将步骤1中的种子液接种到包含玻璃珠的发酵培养基中；
步骤3：发酵过程中进行温度控制和pH控制，同时补加碳源；
步骤4：发酵结束后添加真菌酶进行酶解，得到含有破壁细胞的发酵液；和
步骤5：对发酵液进行处理，得到猴头菌多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所用猴头菌的保藏编号为CCTCCNo:M2018567。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述种子培养基包括以下组分：1～10质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～0.1质量％的无机盐。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述发酵培养基包括以下组分：1～5质量％的碳源、1～5质量％的有机氮源、0.5～1质量％的无机氮源、0.01～1质量％的无机盐、0.0001～0.001质量％的微量元素，0.0001～0.001质量％的辅酶，0.05～1质量％的分散剂，玻璃珠10～50粒/100mL，分散剂为选自吐温80、EDTA和吐温60中任意一种或多种。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，所述温度控制为：发酵2～3天发酵温度设为24～30℃，发酵3～10天发酵温度设为20～24℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，所述pH控制为：发酵2～3天时发酵pH自然，发酵3～10天时pH设为5.0～5.5。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，发酵4～6天时开始补加碳源，维持发酵液碳源浓度为1～1.5质量％。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，发酵至7～8天停止补加糖，发酵终点为发酵液中无残糖。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4中，酶解过程在摇床上进行，摇床转速为200～300rpm。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4中，所述真菌酶为选自纤维素酶、蜗牛酶、蛋白酶、真菌溶壁酶中的一种或多种，添加量为0.1～1质量％，酶解时间为60～120min。
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| WO2023207565A1 (zh) * | 2022-04-29 | 2023-11-02 | 广州蛋壳网络科技有限公司 | 一种基于甜菜碱超分子溶剂制备乳糖酸发酵组合物的方法及其护肤应用 |
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Families Citing this family (1)
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|---|---|---|---|---|
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101434662A (zh) * | 2008-12-29 | 2009-05-20 | 河南工业大学 | 一种制备真菌多糖的方法 |
| CN101906173A (zh) * | 2010-08-02 | 2010-12-08 | 哈尔滨工业大学（威海） | 一种生物酶制备菌丝体多糖的方法 |
| CN101971762A (zh) * | 2010-02-09 | 2011-02-16 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 猴头菇的液体深层发酵培养方法 |
| CN102604919A (zh) * | 2012-04-16 | 2012-07-25 | 山东省农业科学院农业资源与环境研究所 | 一种利用蛹虫草液体发酵生产纤溶酶的方法 |
| CN104877914A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-09-02 | 吉林大学 | 一种高产猴头菌诱变菌株h07及制备方法 |
| CN105624232A (zh) * | 2016-03-14 | 2016-06-01 | 浙江省农业科学院 | 提高猴头菌发酵多糖的方法 |
| CN106929427A (zh) * | 2017-01-10 | 2017-07-07 | 北京林业大学 | 适于药用真菌灵芝高产胞外多糖的培养基及其培养方法 |
Family Cites Families (3)
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101434662A (zh) * | 2008-12-29 | 2009-05-20 | 河南工业大学 | 一种制备真菌多糖的方法 |
| CN101971762A (zh) * | 2010-02-09 | 2011-02-16 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 猴头菇的液体深层发酵培养方法 |
| CN101906173A (zh) * | 2010-08-02 | 2010-12-08 | 哈尔滨工业大学（威海） | 一种生物酶制备菌丝体多糖的方法 |
| CN102604919A (zh) * | 2012-04-16 | 2012-07-25 | 山东省农业科学院农业资源与环境研究所 | 一种利用蛹虫草液体发酵生产纤溶酶的方法 |
| CN104877914A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-09-02 | 吉林大学 | 一种高产猴头菌诱变菌株h07及制备方法 |
| CN105624232A (zh) * | 2016-03-14 | 2016-06-01 | 浙江省农业科学院 | 提高猴头菌发酵多糖的方法 |
| CN106929427A (zh) * | 2017-01-10 | 2017-07-07 | 北京林业大学 | 适于药用真菌灵芝高产胞外多糖的培养基及其培养方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 熊艳: "液体发酵法生产香菇多糖关键技术的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020134688A1 (zh) * | 2018-12-26 | 2020-07-02 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 |
| WO2023207565A1 (zh) * | 2022-04-29 | 2023-11-02 | 广州蛋壳网络科技有限公司 | 一种基于甜菜碱超分子溶剂制备乳糖酸发酵组合物的方法及其护肤应用 |
| CN118388677A (zh) * | 2024-06-26 | 2024-07-26 | 广东嘉士利食品集团有限公司 | 一种猴头菇多糖的提取方法及其应用 |
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