CN103512999B

CN103512999B - 复方黄芩片的质量检测方法

Info

Publication number: CN103512999B
Application number: CN201210207336.6A
Authority: CN
Inventors: 李红兵; 罗卡; 冯世强
Original assignee: XINGHU PHARMACEUTICAL Manufacturing Co Ltd ZHAOQING
Current assignee: XINGHU PHARMACEUTICAL Manufacturing Co Ltd ZHAOQING
Priority date: 2012-06-21
Filing date: 2012-06-21
Publication date: 2015-11-25
Anticipated expiration: 2032-06-21
Also published as: CN103512999A

Abstract

本发明涉及复方黄芩片的质量检测方法，包括黄芩、穿心莲、虎杖以及功劳木的薄层色谱鉴别方法，以及黄芩苷的含量测定。本发明提高了复方黄芩片的质量控制标准，建立制剂中主药的含量测定检测指标及其检测方法，提供了黄芩、穿心莲、虎杖以及功劳木的薄层色谱定性鉴别方法，保证了本复方制剂较高的质量标准水平。

Description

复方黄芩片的质量检测方法

技术领域

本发明涉及复方黄芩片的质量检测方法。

背景技术

复方黄芩片具有清热解毒，凉血消肿的作用，主要用于咽喉肿痛，口舌生疮，感冒发热，痈肿疮疡。复方黄芩片由黄芩、虎杖、穿心莲以及功劳木组成，为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后显棕褐色；味苦。现有的复方黄芩片的质量检测方法难以准确检测复方黄芩片的质量。

发明内容

鉴于以上所述，为了确保复方黄芩片的质量，本发明有必要提供一种提高质量控制标准的复方黄芩片的质量检测方法。

本发明所采用的技术方案是，一种复方黄芩片的质量检测方法，复方黄芩片主要由黄芩800g，虎杖800g，穿心莲800g，以及功劳木800g组成，包糖衣或薄膜衣，该复方黄芩片的质量检测方法包括鉴别、检查、以及含量测定的步骤，其中鉴别方法包括黄芩薄层色谱鉴别、穿心莲薄层色谱鉴别、虎杖薄层色谱鉴别、功劳木薄层色谱鉴别，质量检测方法具体过程如下：

【鉴别】(1)黄芩薄层色谱鉴别

取复方黄芩片10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，置标口三角瓶中，加甲醇10-30ml，水浴加热回流20-50分钟，取出，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一用质量百分含量为4％醋酸钠溶液制备的以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(体积比为：5：3：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量百分含量2-5％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

(2)穿心莲薄层色谱鉴别

取复方黄芩片10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，置标口三角瓶中，加氯仿10-30ml，水浴加热回流20-50分钟，取出，放冷，滤过，滤液加活性炭0.06g，置水浴中回流加热4-6分钟，趁热滤过，滤液浓缩至1-2ml，作为供试品溶液。另取穿心莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，分别加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-无水乙醇(体积比为：19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。

(3)虎杖薄层色谱鉴别

取复方黄芩片10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，加水10-30ml，浸泡1-2小时，超声处理20-50分钟，滤过，滤液置标口三角瓶中，加盐酸2-5ml，于沸水中加热回流20-50分钟，加氯仿20-40ml，继续加热回流20-50分钟，取出，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酚对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以用质量百分数为0.3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-醋酸(体积比为：15：0.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

(4)功劳木薄层色谱鉴别

取复方黄芩片15片，除去薄膜衣或糖衣，研细，加乙醇10-30ml，浸泡1-2小时，超声处理20-50分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取功劳木1g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取对照品溶液4μl，供试品和对照药材溶液各6μl，分别点于同一以质量百分含量0.3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(体积比为：7：1：2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。

【检查】应符合片剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录ID)。

【含量测定】采用高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定，包括以下步骤：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-质量百分数为0.4％磷酸溶液(体积比：50：50)为流动相；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3300。

(2)对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备：取复方黄芩片20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混匀，取0.5-0.7g，精密称定，置标口三角瓶中，精密加入体积百分含量50％甲醇50ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1-2小时，放冷，再称定重量，用体积百分含量50％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

测得：本品每片含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于16mg。

【功能与主治】清热解毒，凉血消肿。主要用于急性咽炎，风热感冒。

【用法与用量】口服，一次4片，一日3～4次，小儿酌减。

【贮藏】密封。

本发明复方黄芩片的质量检测方法提高了复方黄芩片的质量控制标准，建立制剂中主药的含量测定检测指标及其检测方法，提供了黄芩、穿心莲、虎杖以及功劳木的薄层色谱定性鉴别方法，保证了本复方制剂较高的质量标准水平。

附图说明

图1-1为在一温湿度下在高效预制板上复方黄芩片与黄芩苷、黄芩和黄芩阴性对照，薄层色谱鉴别结果图谱；

图1-2至图1-5为在不同温湿度、展距下在自制板上复方黄芩片与黄芩对照药材色谱和黄芩苷对照品色谱；

图2-1为在一温湿度下在硅胶薄层板上复方黄芩片与脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯、穿心莲对照药材、以及穿心莲阴性对照，薄层色谱鉴别结果图谱；

图2-2至图2-5为在不同温湿度、展距下在硅胶薄层板上复方黄芩片与脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯、穿心莲对照药材、以及穿心莲阴性对照的薄层图谱；

图3-1为在一温湿度下在硅胶预制板上复方黄芩片与大黄酚、虎杖对照药材、以及虎杖阴性对照，薄层色谱鉴别结果图谱；

图3-2至图3-5为在不同温湿度、展距下在自制板上复方黄芩片与大黄酚、虎杖对照药材、以及虎杖阴性对照的薄层图谱；

图4-1为在一温湿度下在硅胶预制板上复方黄芩片与盐酸小檗碱、功劳木对照药材、以及功劳木阴性对照，薄层色谱鉴别结果图谱；

图4-2至图4-5为在不同温湿度、展距下在自制板上复方黄芩片与盐酸小檗碱、功劳木对照药材、以及功劳木阴性对照的薄层图谱；

图5-1为黄芩苷对照品图谱；

图5-2为复方黄芩片缺黄芩阴性图谱；

图5-3为复方黄芩片供试品图谱；

图5-4为黄芩苷线性关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明复方黄芩片的质量检测方法作进一步详细的描述。

实施例

【处方】复方黄芩片的配方由黄芩800g，虎杖800g，穿心莲800g，功劳木800g组成。

【制法】取黄芩加水煎煮两次，第一次1～3个小时，第二次0.5～2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25，干燥成浸膏，备用；虎杖、穿心莲、功劳木加水煎煮两次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25,干燥成浸膏，备用。将上述两种浸膏混匀，加入粘合剂(该粘合剂可以是乙醇溶液、聚丙烯酸树脂溶液等)制成颗粒，加入适量辅料(该辅料可以是蔗糖粉、糊精、微晶纤维素、羧甲纤维素钠、甲基纤维素、淀粉、滑石粉、羧甲淀粉钠、磷酸二氢钠等)混匀，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。

【性状】本品为糖衣片或者薄膜衣片，除去包衣后显棕褐色；味苦。

本发明复方黄芩片的质量检测方法为：

1.黄芩薄层色谱鉴别

1.1.仪器与试药：高效硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，规格：10×20cm)；硅胶G自制板(硅胶G，青岛海洋化工有限公司提供，生产日期：080521；玻璃板：10×20cm，涂布厚度：0.3mm)；醋酸乙酯，丁酮，甲酸均为分析纯。

1.2.对照品：黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，110715-200514，供含量测定用)

1.3.对照药材：黄芩(中国药品生物制品检定所提供，120955-200406)

1.4.供试品：复方黄芩片(肇庆星湖制药有限公司生产，批号：080501、080502、080503)，复方黄芩片阴性制剂(缺黄芩，肇庆星湖制药有限公司生产)。

1.5.试验情况

供试品溶液的制备：取本品10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，置标口三角瓶中，加甲醇20ml，水浴加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。

对照药材的制备：取黄芩对照药材，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法，制成缺黄芩的阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩的阴性对照溶液。

薄层板：用质量百分数为4％醋酸钠溶液制备的以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板。

点样：供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样10μl。

展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(体积比：5：3：1：1)展开方式：上行展开。

显色：晾干，喷以质量百分数为2％三氯化铁乙醇溶液。

色谱识别：供试品色谱中，在与黄芩对照药材色谱和黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置无干扰，结果见附图1-1。

耐用性考察：(1)温湿度：取点样后的薄层板，分别在不同的温度(低温8℃，常温20℃)下和用硫酸调节相对湿度32％和70％的层析缸中展开，检视，结果表明在温度8℃～20℃，湿度32％～70％的条件下试验，对鉴别无显著影响。(见图1-2、图1-3、图1-4、图1-5)

(2)薄层板：取自制板、高效预制板按上述方法进行试验，供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点(见图1-1、图1-5)，试验结果表明自制板、高效预制板对鉴别无明显影响。

2.穿心莲薄层色谱鉴别

2.1.仪器与试药：高效硅胶GF₂₅₄预制板(青岛海洋化工厂分厂，规格：10×20cm)；硅胶GF₂₅₄自制板(硅胶GF₂₅₄，青岛海洋化工有限公司提供，生产日期：080611；玻璃板：10×20cm，涂布厚度：0.3mm)；氯仿，无水乙醇均为分析纯。

2.2.对照品：穿心莲内脂(中国药品生物制品检定所提供，0797-200106，供含量测定用)，脱水穿心莲内脂(中国药品生物制品检定所提供，110854-200306，供含量测定用)

2.3.对照药材：穿心莲(中国药品生物制品检定所，121082-200302)

2.4.供试品：复方黄芩片(肇庆星湖制药有限公司生产，批号：080501、080502、080503)，复方黄芩片阴性制剂(缺穿心莲，肇庆星湖制药有限公司生产)。

2.5.试验情况

供试品溶液的制备：取本品10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，置标口三角瓶中，加氯仿20ml，水浴加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，滤液加活性炭0.06g，置水浴中回流加热5分钟，趁热滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取穿心莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，分别加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法，制成缺穿心莲的阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法，制成缺穿心莲的阴性对照溶液。

薄层板：硅胶GF254薄层板。

展开剂：氯仿-无水乙醇(体积比：19：1)。

展开方式：上行展开。

显色：晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。

色谱识别：供试品色谱中，在与穿心莲对照药材色谱和穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置无干扰，结果见图2-1。

耐用性考察：

(1)温湿度：取点样后的薄层板，分别在不同的温度(低温8℃，常温20℃)下和用硫酸调节相对湿度32％和70％的层析缸中展开，检视，结果表明在温度8℃～20℃，湿度32％～70％的条件下试验，对鉴别无显著影响。(见图2-2、图2-3、图2-4、图2-5)

(2)薄层板：取自制板、高效预制板按上述方法进行试验，供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点(见图2-1、图2-5)，试验结果表明自制板、高效预制板对鉴别无明显影响。

3.虎杖薄层色谱鉴别

3.1.仪器与试药：高效硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，规格：10×20cm)；硅胶G自制板(硅胶G，青岛海洋化工有限公司提供，生产日期：080521；玻璃板：10×20cm，涂布厚度：0.3mm)；甲苯，醋酸乙酯，醋酸均为分析纯。

3.2.对照品：大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所提供，796-200107，供含量测定用)

3.3.对照药材：虎杖(中国药品生物制品检定所提供，0980-200002)

3.4.供试品：复方黄芩片(肇庆星湖制药有限公司生产，批号：080501、080502、080503)，复方黄芩片阴性制剂(缺虎杖，肇庆星湖制药有限公司生产)。

3.5.试验情况

供试品溶液的制备：取本品10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，加水20ml，浸泡1小时，超声处理30分钟，滤过，滤液置标口三角瓶中，加盐酸2ml，于沸水中加热回流30分钟，加氯仿30ml，继续加热回流30分钟，取出，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：取大黄酚对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法，制成缺虎杖的阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法，制成缺虎杖的阴性对照溶液。

薄层板：质量百分数为0.3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板。

点样：供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液分别点样2μl。

展开剂：甲苯-醋酸乙酯-醋酸(体积比：15：0.5：0.1)

展开方式：上行展开

显色：晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

色谱识别：供试品色谱中，在与虎杖对照药材色谱和大黄酚对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照在相应位置无干扰，结果见图3-1。

耐用性考察：

(1)温湿度：取点样后的薄层板，分别在不同的温度(低温8℃，常温20℃)下和用硫酸调节相对湿度32％和70％的层析缸中展开，检视，结果表明在温度8℃～20℃，湿度32％～70％的条件下试验，对鉴别无显著影响。(见图3-2、图3-3、图3-4、图3-5)

(2)薄层板：取自制板、高效预制板按上述方法进行试验，供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点(见图3-1，图3-2)，试验结果表明自制板、高效预制板对鉴别无明显影响。

4.功劳木薄层色谱鉴别

4.1.仪器与试药：高效硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，规格：10×20cm)；硅胶G自制板(硅胶G，青岛海洋化工有限公司提供，生产日期：080521；玻璃板：10×20cm，涂布厚度：0.3mm)；正丁醇，醋酸均为分析纯。

4.2.对照品：盐酸小檗碱(中国药品生物制品检定所提供，110713-200609，供含量测定用)

4.3.对照药材：功劳木(080701)

4.4.供试品：复方黄芩片(肇庆星湖制药有限公司生产，批号：080501、080502、080503)，复方黄芩片阴性制剂(缺功劳木，肇庆星湖制药有限公司生产)。

4.5.试验情况

供试品溶液的制备：取本品15片，除去薄膜衣或糖衣，研细，加乙醇20ml，浸泡1小时，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取功劳木对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法，制成缺功劳木的阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法，制成缺功劳木的阴性对照溶液。

点样：取对照品溶液4μl，供试品、对照药材溶液和阴性对照溶液各6μl。

展开剂：正丁醇-醋酸-水(体积比：7：1：2)的上层溶液

展开方式：上行展开

显色：晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

色谱识别：供试品色谱中，在与功劳木对照药材色谱和盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照在相应位置无干扰，结果见图4-1。

耐用性考察：

(1)温湿度：取点样后的薄层板，分别在不同的温度(低温8℃，常温20℃)下和用硫酸调节相对湿度32％和70％的层析缸中展开，检视，结果表明在温度10℃～20℃，湿度32％～65％的条件下试验，对鉴别无显著影响。(见图4-2，图4-3，图4-4，图4-5)

(2)薄层板：取自制板、高效预制板按上述方法进行试验，供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点(见图4-1，图4-2)，试验结果表明自制板、高效预制板对鉴别无明显影响。

【黄芩苷的含量测定】试验情况如下：

1仪器与试药

1.1仪器：Waters515型高效液相色谱仪；2487型紫外检测器；Empower色谱工作站超声波清洗器。

1.2对照品：黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，110715-200514，供含量测定用)。

1.3供试品：复方黄芩片(批号：080409、080410、080501、080502、080503、080504、080505、080506、080507、080508，肇庆星湖制药有限公司生产并提供，共10批次)。

1.4试剂：甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2色谱条件与系统适用性试验

2.1色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-体积百分含量0.4％磷酸溶液(体积比：50：50)为流动相；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3300。

2.2系统适用性试验

2.2.1参照《中国药典》2005年版一部中黄芩苷含量测定测定方法，选用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，本试验使用Hibar,RP-18e(4.6×250mm,5μ),No.733150。

2.2.2测定波长的选择：检测波长为278nm。取黄芩苷对照品，用流动相配成浓度为11.2μg/ml供试溶液，在200～500nm波长范围内扫描，结果黄芩苷在278nm波长处有最大吸收，当选用278nm为检测波长时，黄芩苷的检测灵敏度较高，杂质峰较少，基线平稳，杂质均不干扰测定，故选用278nm为测定波长。

2.2.3以甲醇-0.4％磷酸溶液(50：50)为流动相，结果供试品中黄芩苷峰达到基线分离，峰形对称，拟定理论板数不得低于3300。

3供试品溶液的制备

取复方黄芩片20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混匀，取约0.6g，精密称定，置标口三角瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

3.1甲醇提取时间的选择

为考察提取时间，取供试品(批号：080501)10粒的内容物，精密称定，研细，混匀，精密称取细粉适量(约含黄芩苷20mg)，共3份，至100ml量瓶中，各加50％甲醇50ml，分别加热回流15min，30min，45min，60min，90min，120min，按拟定的含量测定条件测定黄芩苷的含量。请参阅表1-1，结果表明，甲醇提取时间45分钟和60分钟的测定结果无显著差异，拟定甲醇提取时间为60分钟。

表1-1：甲醇提取时间考察

提取时间

15分钟

30分钟

45分钟

60分钟

90分钟

120分钟

黄芩苷

8.02％

8.07％

8.10％

8.14％

8.09％

8.06％

4对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得。(对照品储备液Ⅰ)

5测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

6方法学验证

6.1准确度

取已测得含量的供试品080503的内容物，精密称定，研细，混匀，精密称取细粉适量(约相当于黄芩苷10mg)6份，置100ml量瓶中，精密加入对照品储备液Ⅰ(约相当于黄芩苷10mg)，按含量测定方法测定，计算黄芩苷的回收率。(见下表1-2)

表1-2：黄芩苷加样回收率实验结果(n＝6)

6.2精密度

6.2.1重复性：取同一供试品(批号：080502)，精密称取6份，按含量测定方法测定。结果表明，重复性良好。(见下表1-3)

表1-3：精密度-重复性

序号	1	2	3	4	5	6	均值	RSD
									含量(mg/片)	23.15	23.42	23.33	23.22	23.31	23.20	23.27	0.96％

6.2.2中间精密度：为考察随机变动因素对精密度的影响，分别由三人使用同一设备，对同一批供试品(批号：080505)进行试验，每人2份共6份，按拟定的含量测定方法，测定供试品中黄芩苷的含量，结果表明，本法精密度良好(见下表1-4)。

表1-4：精密度－中间精密度

6.2.3专属性：取按处方比例及制法制备的缺黄芩的阴性样品，按供试品溶液的制备及测定方法进行处理和测定。结果未见空白试验有干扰。HPLC图谱见图5-1至图5-3。

6.3线性考察

取黄芩苷对照品12mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，使溶解，加流动相至刻度，摇匀，得对照品贮备液Ⅱ。分别精密量取1、3、5、7、10ml，置50ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，分别吸取10μl，注入高效液相色谱仪，按含量测定方法测定峰面积。结果见下表1-5。

表1-5：线性关系考察

序号	浓度(μg/ml)	峰面积
			1	2.36	243640
2	7.08	497478
			3	11.8	751869
4	16.52	1002107
			5	23.6	1257863

请参阅图5-4，以对照品浓度作为横座标，测得的峰面积作为纵座标，进行线性回归，得回归方程为：黄芩苷y＝250763x,R²＝0.9999，线性范围：2.36～23.6μg·ml^-1。

结果表明，黄芩苷在2.36～23.6μg·ml^-1内线性关系良好。

6.4范围准确度

本标准规定每片含黄芩苷不得少于16mg。现按限度的50％和2倍考察范围的准确度。

精密量取黄芩苷对照品溶液适量(低限：62.8ug/ml×127ml，高限：62.8ug/ml×510ml)，分置具塞锥形瓶中(低限、高限各6份)，蒸干。取供试品(批号：080504，每片含黄芩苷21.72mg，平均片重：0.3092g)内容物，混匀，精密称取细粉适量(低限：0.11g，高限0.45g)，自“精密加入50％甲醇50ml”起，按拟定的含量测定方法测定黄芩苷的含量，计算黄芩苷的回收率。请参阅表1-6范围准确度(低限)实验结果(n＝6)，以及表1-6范围准确度(高限)实验结果(n＝6)。

表1-6：范围准确度(低限)实验结果(n＝6)

表1-7：范围准确度(高限)实验结果(n＝6)

6.5耐用性：

6.5.1色谱柱：取同一供试品(080410)，按拟定含量测定方法操作，用三种不同商品规格的色谱柱测定黄芩苷的含量，结果无明显差异(见表1-8)。

A：Hibar,RP-18e(4.6×250mm,5μ),No.733150；

B：Kromasil，C18(4.6×250mm，5μ)，E30213；

C：Phenomenex，LunaC18(4.6×250mm，5μ)，S/No329197-1。

表1-8：色谱柱考察

6.5.2稳定性：精密吸取同一供试品(080507)溶液，分别在开机2小时后的0、2、4、6、8、10及24小时，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。结果表明，供试品溶液在10小时内基本稳定(详见表1-9)。

表1-9：稳定性考察

7供试品含量测定

取本品10批，按含量测定项下方法进行测定，用外标法计算样品中黄芩苷的含量。结果见下表1-10：

表1-10：供试品含量测定结果

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种复方黄芩片的质量检测方法，其特征在于：

复方黄芩片的处方组成为：黄芩800g，虎杖800g、穿心莲800g及功劳木800g，取黄芩加水煎煮两次，第一次1～3小时，第二次0.5～2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩干燥成浸膏；虎杖、穿心莲、功劳木加水煎煮两次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩干燥成浸膏；将上述两种浸膏混合均匀，加入粘合剂制成颗粒，加入辅料，混合均匀，压片，包衣，即得；

1)黄芩薄层色谱鉴别：取复方黄芩片10片，除去包衣，研细，置标口三角瓶中，加甲醇20ml，水浴加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一用质量百分数为4％醋酸钠溶液制备的以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水体积比为5：3：1：1为展开剂，展开，取出，晾干后喷加质量百分含量为2％的三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置无干扰；

耐用性考察：(1)温湿度：取点样后的薄层板，分别在低温8℃，常温20℃的温度下和用硫酸调节相对湿度32％和70％的层析缸中展开，检视，结果表明在温度8℃～20℃，湿度32％～70％的条件下试验，对鉴别无显著影响；

(2)薄层板：取自制板、高效预制板按上述方法进行试验，供试品色谱中，在对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，试验结果表明自制板、高效预制板对鉴别无明显影响；

2)穿心莲薄层色谱鉴别：取复方黄芩片10片，除去包衣，研细，置标口三角瓶中，加氯仿20ml，水浴加热回流30分钟，取出，放冷，滤过，滤液加活性炭0.06g，水浴加热回流5分钟，趁热滤过，浓缩滤液至1ml，作为供试品溶液；另取穿心莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，分别加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-无水乙醇体积比19：1为展开剂，展开，取出，晾干，置光波长为254nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性对照在相应位置无干扰；

3)虎杖薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品10片，除去薄膜衣或糖衣，研细，加水20ml，浸泡1小时，超声处理30分钟，滤过，滤液置标口三角瓶中，加盐酸2ml，于沸水中加热回流30分钟，加氯仿30ml，继续加热回流30分钟，取出，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；对照药材溶液的制备：取虎杖对照药材1g，同法制成对照药材溶液；对照品溶液的制备：取大黄酚对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；阴性对照溶液的制备：按处方比例及制法，制成缺虎杖的阴性对照样品，取相当于供试品的量，按供试品溶液的制备方法，制成缺虎杖的阴性对照溶液；取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各2μl，分别点于同一以0.3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-醋酸体积比为15：0.5：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在波长365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点，阴性对照在相应位置无干扰；

4)功劳木薄层色谱鉴别：取复方黄芩片15片，除去包衣，研细，加乙醇20ml，浸泡1小时，超声30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取功劳木1g，同法制成对照药材溶液；再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；照薄层色谱法，吸取对照品溶液4μl，供试品和对照药材溶液各6μl，分别点于同一以质量百分含量为0.3％羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板上，以正丁醇-醋酸-水体积比为7：1：2的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯在光波365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点，阴性对照在相应位置无干扰；

5)复方黄芩片中黄芩苷的含量测定：采用高效液相色谱法，步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-质量百分含量为0.4％磷酸溶液以体积比50：50为流动相；检测波长为278nm；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3300；

(2)对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.06mg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取复方黄芩片20片，除去薄膜衣，精密称定，研细，混匀，取约0.6g，精密称定，置标口三角瓶中，精密加入50％甲醇50ml，密塞，称定重量，水浴加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，测得：复方黄芩片每片含黄芩以黄芩苷计，不得少于16mg。