CN101361839B - 一种血府逐瘀口服液的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法,在原检测标准基础上增加了血府逐瘀口服液处方中牛膝、甘草的薄层色谱法检测方法,改进了枳壳的薄层色谱法,增加了处方中当归、川芎的高效液相色谱法测定含量。本发明提供的方法先进,精密度及重现性好,用于血府逐瘀口服液药物的质量控制,能够全面的对该药品进行质量控制,保证产品质量的稳定性、均一性。
Description
技术领域
本发明公开一种血府逐瘀口服液的检测方法,属于医药学检测方法技术领域。
背景技术
本发明涉及的“血府逐瘀口服液”是通过以下工艺制备的:将当归180g、川芎90g、柴胡60g、赤芍120g、枳壳120g酌予碎断,加6倍量水用水蒸汽蒸馏法蒸馏8小时提取挥发油,挥发油备用;药渣与桃仁240g、红花180g、地黄180g、牛膝180g、桔梗90g、甘草60g等六味加水煎煮三次,加水量第一次6倍药材量,第二次6倍药材量,第三次5倍药材量,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至相对密度1.10~1.14(60℃)的清膏,放冷,加入乙醇使溶液中含醇量达70%,静置48小时,滤过,滤液回收乙醇,放冷,加入炼制好的蜂蜜600g,混匀,再缓缓加入挥发油及含苯甲酸钠3g、羟苯乙酯0.375g的乙醇溶液,加水至1000ml,搅拌均匀,灌封,即得,棕褐色粘稠液体;气微,味甜,微苦。功能主治:活血化瘀,行气止痛。用于瘀血内阻,头痛或胸痛,内热憋闷,失眠多梦,心悸怔仲,急躁善怒。
“血府逐瘀口服液”的原检测标准收载于中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第十三册,原标准中只有药材枳壳和赤芍的薄层色谱鉴别以及赤芍的高效液相色谱法检测含量,由于原标准的检测方法很少,因此,不能保证对该药品进行全面的检测。
发明内容
本发明一种血府逐瘀口服液的质量控制检测方法,用于血府逐瘀口服液药物的质量控制,用于对该药品作全面的质量控制。
本发明的技术解决方案如下:1)取血府逐瘀口服液10ml,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,用水洗涤2次,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一以1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂,展开,展距3cm,取出,晾干,再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂,展开,展距8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点;
2)取血府逐瘀口服液40ml,用水饱和正丁醇提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,加热回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,氯仿层蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取齐墩果酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;另取牛膝对照药材3g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,以下同供试溶液制备,制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-二甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶3∶2∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
3)取步骤2)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl,分别点于105℃活化30分钟的硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶5∶0.3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
4)检查:PH值为3.5~5.5,相对密度为1.14~1.18;其它应符合合中国药典2005年版一部附录I J剂项下有关的各项规定;
5)含量测定:阿魏酸照高效液相色谱法测定
阿魏酸:照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-1%醋酸(24∶76)为流动相;检测波长为313nm,柱温为室温。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:称取阿魏酸对照品约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,用甲醇溶解,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,阿魏酸每1ml含0.2mg:
供试品溶液的制备:精密吸取装量差异项下本品10ml,置分液漏斗中,加水10ml,摇匀,用稀盐酸调PH2~3,再用乙醚提取5次,每次20ml,合并提取液,蒸干,残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
每支含川芎、当归以阿魏酸C10H10O4计,不得少于0.07mg。
本发明的积极效果在于:在原标准基础上增加了血府逐瘀口服液处方中牛膝、甘草的薄层色谱法检测方法,改进了枳壳的薄层色谱法,增加了处方中当归、川芎的高效液相色谱法测定含量。本发明提供的方法先进,精密度及重现性好,能够全面的对该药品进行质量控制,保证产品质量的稳定性均一性。
附图说明
图1:枳壳薄层色谱图;
1、4、5供试品,2阴性对照,3橙皮苷
图2:牛膝的薄层谱谱图;
1、2供试品,3牛膝对照药材,4齐墩果酸,5阴性对照
图3:甘草的薄层色谱图;
1甘草对照药材,2、3、4供试品,5阴性对照
图4:阿魏酸对照品紫外吸收图;
图6:阿魏酸对照品的HPLC色谱图;
图7:供试品溶液的HPLC色谱图;
图8:阴性对照液的HPLC色谱图;
图9:溶剂的HPLC色谱图。
具体实施方式
为了便于理解本发明,特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。
实施例1
1)取血府逐瘀口服液10ml,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,用水洗涤2次,正丁醇层蒸干,残渣 加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一以1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂,展开,展距3cm,取出,晾干,再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂,展开,展距8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点见图1;
2)取血府逐瘀口服液40ml,用水饱和正丁醇提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,加热回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,氯仿层蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取齐墩果酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;另取牛膝对照药材3g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,以下同供试溶液制备,制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-二甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶3∶2∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图2;
3)取步骤2)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl,分别点于105℃活化30分钟的硅 胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(4∶8∶5∶0.3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图3;
4)检查:PH值为3.5~5.5,相对密度为1.14~1.18;其它应符合合中国药典2000年版一部附录I J剂项下有关的各项规定;
5)含量测定:芍药苷照高效液相色谱法测定;
色谱法条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水(35∶65)为流动液;检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1400;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品5mg,置25ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得每1ml中含芍药苷0.2mg;
供试品溶液的制备:精密量取本品1ml,置于D101型大孔吸附树脂柱上,为玻璃柱,内径约1.5cm,柱长约10cm,湿法装柱,以每分钟1.5ml的流速,依次用水51ml、氨试液2ml、水50ml洗柱,继以40%乙醇洗脱,收集洗脱液80ml置水浴上蒸干,残渣以甲醇-水(35:65)混合溶液溶解至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;每1ml含赤芍以芍药苷C23H28011计,不得少于1.40mg;
阿魏酸:照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-1%醋酸(24:76)为流动相;检测波长为313nm,柱温为室温。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:称取阿魏酸对照品约10mg,精密称定,置50ml 量瓶中,用甲醇溶解,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,阿魏酸每1ml含0.2mg:
供试品溶液的制备:精密吸取装量差异项下本品10ml,置分液漏斗中,加水10ml,摇匀,用稀盐酸调PH2~3,再用乙醚提取5次,每次20ml,合并提取液,蒸干,残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
每支含川芎、当归以阿魏酸C10H10O4计,不得少于0.07mg。
高效液相色谱测定阿魏酸含量法标准确定说明:
一、仪器与试药:仪器:LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-10AVP检测器;试药:阿魏酸对照品购于中国药品生物制品检定所,批号:0773-9708;规格:供含量测定用。
二、对照品溶液的制备:称取阿魏酸对照品约10mg,精密称定为11.0mg,置50ml量瓶中。加甲醇溶解,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml含阿魏酸0.22mg)。
三、供试品溶液的制备与测定:同前述。
四、检测波长的确定:供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液同时进行紫外光谱的测定,测定结果供试品溶液及对照品溶液的紫外吸收光谱均在313nm处有吸收峰,阴性对照液在此处无吸收峰。确定检测波长为313nm。见图4
五、流动相的选择:流动相为甲醇-1%醋酸(24∶76)。
六、色谱条件:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-1%醋酸(24∶ 76)为流动相;检测波长为313nm;柱温为40℃;流速1ml/min。
七、理论板数的计算:依前述色谱条件测定,测定结果以阿魏酸峰计为:N=5.54×(100.2/3.8)2=3852
故确定以阿魏酸峰计理论板数不少于3000。
八、方法学考察
1、标准曲线的制备
分别精密吸取阿魏酸对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0μl注入液相色谱仪,测定,以峰面积分值为纵坐标,以对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线,见图5,表1。
表1 阿魏酸标准曲线数据
回归方程:A=-2177.659+6737370.885C,r=0.9999
线性范围:0.044~0.440μg
2、空白试验
为进一步确定方法的可行性,取不含当归、川芎的阴性对照液,依法测定,结果阴性对照液色谱在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰,表明无干扰,方法可行见图6、7、8、9。
3、稳定性试验
取同一供试品溶液,进样10μl,在依正文方法在0、2、4、6、8小时测定,
结果见表2。
表2 稳定性试验结果
试验结果表明供试品中阿魏酸在8小时以内基本稳定。
4、精密度试验吸取同一供试品溶液10μl,连续进样5次,依法测定,结果见表3
表3 精密度试验结果
试验结果表明:精密度较好。
5、重现性试验
取批号为070508的样品,依正文方法独立测定5次,结果见表4。
表4 重现性试验结果
试验结果表明重现性较好。
6、回收率试验
取批号为030501样品,已知含量的样品(含阿魏酸0.9572mg/g)约3g。精密吸取装量差异下的本品5ml,加入阿魏酸对照品溶液2ml(浓度为0.022mg/ml),按正文含量测定项下方法测定,计算回收率,
结果见表5。
表5 回收率测定结果
回收率平均值为97.996%,试验证明此方法可行。
九、10批样品的含量测定及含量限度的确定取10批样品按本发明方法进行测定,结果见表6
表6 10批样品测定结果
根据10批样品测定结果,考虑到原料的采收、贮藏、运输及阿魏酸的稳定性,确定每支含阿委酸不得少于0.07mg。
Claims (1)
1.一种血府逐瘀口服液的检测方法,包括以下步骤:
1)取血府逐瘀口服液10ml,置分液漏斗中,用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,用水洗涤2次,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液,另取橙皮苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一以1%氢氧化钠制备的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯∶甲醇∶水=100∶17∶13为展开剂,展开,展距3cm,取出,晾干,再以甲苯∶醋酸乙酯∶甲酸∶水=20∶10∶1∶1的上层溶液为展开剂,展开,展距8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫外光灯365nm下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点;
2)取血府逐瘀口服液40ml,用水饱和正丁醇提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,加热回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,氯仿层蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取齐墩果酸对照品,加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;另取牛膝对照药材3g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,以下同供试溶液制备,制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷∶二甲苯∶醋酸乙酯∶甲酸=5∶3∶2∶0.1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品及对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
3)取步骤2)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇40ml,回流提取1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml及盐酸3ml,回流1小时,用氯仿提取3次,每次30ml,合并提取液,蒸干,残渣加无水乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl,分别点于105℃活化30分钟的硅胶G薄层板上,以石油醚∶甲苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸=4∶8∶5∶0.3为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘至斑点显色清晰;供试品色谱中,在对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
4)检查:PH值为3.5~5.5,相对密度为1.14~1.18;其它应符合中国药典2005年版一部附录I J剂项下有关的各项规定;
5)含量测定:阿魏酸照高效液相色谱法测定
阿魏酸:照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇∶1%醋酸=24∶76为流动相;检测波长为313nm,柱温为室温;理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备:称取阿魏酸对照品10mg,精密称定,置50ml量瓶中,用甲醇溶解,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,阿魏酸每1ml含0.2mg:
供试品溶液的制备:精密吸取装量差异项下本品10ml,置分液漏斗中,加水10ml,摇匀,用稀盐酸调pH2~3,再用乙醚提取5次,每次20ml,合并提取液,蒸干,残渣用甲醇溶解于5ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
每支含川芎、当归以阿魏酸C10H10O4计,不得少于0.07mg;
所述的血府逐瘀口服液是由通过以下工艺制备的:
将当归180g、川芎90g、柴胡60g、赤芍120g、枳壳120g酌予碎断,加6倍量水用水蒸汽蒸馏法蒸馏8小时提取挥发油,挥发油备用;药渣与桃仁240g、红花180g、地黄180g、牛膝180g、桔梗90g、甘草60g六味加水煎煮三次,加水量第一次6倍药材量,第二次6倍药材量,第三次5倍药材量,第一次3小时,第二次2小时,第三次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至60℃时相对密度1.10~1.14的清膏,放冷,加入乙醇使溶液中含醇量达70%,静置48小时,滤过,滤液回收乙醇,放冷,加入炼制好的蜂蜜600g,混匀,再缓缓加入挥发油及含苯甲酸钠3g、羟苯乙酯0.375g的乙醇溶液,加水至1000ml,搅拌均匀,灌封,即得。
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CN101361839A (zh) | 2009-02-11 |
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