CN103512984B - 一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法,该方法未使用卤素制剂,减少碱化后液液萃取过程,操作过程简单、快速。该方法采用“酶解+提取+净化”的方式进行样品前处理,具体为将经过酶解的样品经酸化甲醇进行提取后,直接利用MCX固相萃取柱进行净化,液相色谱串联质谱检测。6小时内可完成24个样品的检测,检测时间节省近一半,检测成本也大大降低。
Description
技术领域:
本发明涉及一种生物检测方法,具体涉及一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法。
背景技术:
“瘦肉精”,最初是盐酸克伦特罗的俗称,现泛指养殖业非法使用的具有促进动物生长、提高瘦肉率的含β-肾上腺能受体激动剂类的一类物质。包括我国在内的许多国家都对食品动物中β2-受体激动剂的违法使用实施了严格的监管,自2002年以来,我国就先后发布了176号、193号、235号公告,2010年又发布了1519号公告,明确规定禁止使用盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸多巴胺、西马特罗、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗等β2-受体激动剂及盐酸可乐定、盐酸赛庚啶等共计18种“瘦肉精”药物。
为了加强对“瘦肉精”药物的监管,国内外科研人员针对动物性食品中“瘦肉精”残留的检测方法开展了广泛的研究。目前,关注较多的主要有克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等3种药物,对其他药物的检测方法相对滞后;而对同时检测可乐定、赛庚啶、苯乙醇胺A、氯丙那林等新型“瘦肉精”药物残留的分析方法国内外尚未有报道。
从检测标准来看,我国虽已发布了多个检测动物组织中β2-受体激动剂的检测标准,如:GB-T22286-2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》、农业部1025号公告-18-2008《动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法》等标准,也仅针对10余种β2-受体激动剂的检测,而且在样品前处理过程中,液液萃取程序复杂、操作繁琐,耗时耗力,对工作人员的操作技术要求较高,对检测结果的准确性和精确度有直接影响;此外,试验过程中还使用了大量的卤素制剂(高氯酸),如对废液处理不当极易对环境和生物造成较大的影响。
在现代兽药残留检测中,液相色谱串联质谱仪等大型仪器设备日趋先进,样品前处理作为关键步骤更为重要,直接影响分析结果的精密度和准确度,选择合适的前处理方法,缩短样品的前处理时间,因此,良好的样品前处理技术是保证检测质量、提高检测效率的一个重要途径和关键环节。
目前的分析方法存在检测过程繁琐、所用试剂对环境影响较大、操作技术要求较高等问题。检测机构在实际应用时,容易出现检测结果不稳定,精密度和准确度不高,易造成对检测结果的误判,出现漏检或假阳性的现象,从而导致行政管理部门对“瘦肉精”监管不力。
更为重要的是,目前国内外尚没有同时检测农业部禁止使用的这些“瘦肉精”药物的有效方法,因而,对于可乐定、赛庚啶、苯乙醇胺A、氯丙那林等新型“瘦肉精”的非法使用的监管尚没有有效的技术手段,极易造成“监管真空”。
发明内容
克伦特罗等β2-受体激动剂与靶组织细胞膜β2-受体结合,进而发生其药理作用,在体内一般为轭合状态,尤其是沙丁胺醇等水杨酸类β2-受体激动剂轭合比例更高一些。因此,在样品提取前,通常需要通过酶解将轭合态的待测物解离以进一步进行液液萃取。β2-受体激动剂一般在碱性条件下易溶于有机溶剂,在酸性条件下易溶于水溶液等极性溶剂。由于许多有机溶剂易对环境造成较大压力,因此,本发明拟用酸化的甲醇溶液进行提取,以尽量少的使用有机溶剂,尤其是有毒溶剂;同时,还兼顾可乐定和赛庚啶两种药物在酸化甲醇中的溶解特性,以达到同时提取分析的目的。
为了建立同时检测所有我国农业部规定的禁止在食品动物中使用的“瘦肉精”药物的液相色谱串联质谱法,同时还克服目前分析方法检测过程繁琐、所用卤素试剂对环境影响较大、操作技术要求较高等问题,本发明提供了一种可同时检测动物血液、肌肉、肝脏、肾脏、肺脏等动物组织中可乐定、赛庚啶以及苯乙醇胺A、氯丙那林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、特布他林、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、福莫特罗、喷布特罗、甲基克伦特罗、沙美特罗、塞布特罗、克仑丙罗、非诺特罗等19种β2-受体激动剂共计21种“瘦肉精”药物的样品前处理过程。操作过程简单、试剂使用量少,且使用的试剂、操作步骤遵循环境友好型的原则,以尽可能减少对环境造成的破坏。
由于β2-受体激动剂在动物机体内容易与蛋白结合,因此,在残留分析过程中,主要采用“酶解+提取+净化”的方式进行样品前处理。将经过酶解的样品经酸化甲醇进行提取后,直接利用MCX固相萃取柱进行净化,液相色谱串联质谱检测。
具体实施方案:
实施例1:
准确称取2g血液、体液等液体样品或肌肉组织于50mL离心管中,加入pH5.2的乙酸铵溶液(0.2mol/L)5mL,再加入20μL葡萄糖苷酸酶-硫酸酯酶(sigma公司)涡动30s,置37℃过夜,次日取出后,4000rpm离心5min,取上清液置另一离心管中;残渣加入1%甲酸甲醇溶液5mL,涡动30s,4000rpm离心5min,合并上清液,再加入5mL1%甲酸甲醇溶液提取一次,合并上清液,待净化。
实施例2:
准确称取2g肝脏、肾脏、肺脏等组织样品于50mL离心管中,除加入1%甲酸甲醇溶液5mL,涡动30s,10000rpm离心5min外,其他步骤与实施例1相同。
实施例3:
取5mL提取的溶液加入经3mL甲醇、纯水活化的MCX固相萃取柱净化,依次用3mL纯水和甲醇洗涤,将MCX净化萃取柱抽干,用3mL5%氨化甲醇溶液洗脱,氮气吹干后用0.1%甲酸水溶液/乙腈(9:1,v/v)溶解,经液相色谱-串联质谱仪检测(内标法定量)后可获得满意的结果。具体的检测参数如下:
1、方法的灵敏度:血液、肌肉中21种药物的检测限可达0.1μg/kg,定量限为0.25μg/kg;肝脏、肾脏、肺脏组织21种药物的检测限可达0.2μg/kg,定量限为0.5μg/kg,与现有检测方法相比有较大提高或相当,能够完全满足动物性食品中“瘦肉精”监管的要求。
2、方法的精确度和准确度:以肝脏中21种药物在0.5μg/kg、1.0μg/kg和2.0μg/kg的添加浓度条件下药物的回收率、变异系数(相对标准偏差,RSD)如表1所示。(同上)
3、检测参数的范围:目前的检测方法只能对可乐定和赛庚啶或单纯的β-受体激动剂进行检测,本方法可同时对上述不同种类的“瘦肉精”药物进行检测,扩大的检测的范围。
表 肝脏中21种药物残留检测回收率及相对标准偏差
上述实验数据说明:本发明在样品前处理过程中,未使用卤素制剂,减少碱化后液液萃取过程,操作过程简单、快速,6小时内可完成24个样品的检测,检测时间节省近一半,检测成本也大大降低。
Claims (1)
1.一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法,其特征在于,所述方法采用“酶解+提取+净化”的方式进行样品前处理,其特征在于将经过酶解的样品经酸化甲醇进行提取后,直接利用MCX固相萃取柱进行净化,液相色谱串联质谱检测;
其中所述的酶解为:准确称取2g样品于50mL离心管中,加入pH5.2,0.2mol/L的乙酸铵溶液5mL,再加入20μL葡萄糖苷酸酶‐硫酸酯酶涡动30s,置37℃过夜,次日取出后,4000rpm离心5min,取上清液置另一离心管中;
其中所述的提取为:将酶解后的残渣加入1%甲酸甲醇溶液5mL,涡动30s,4000rpm离心5min,合并上清液,再加入5mL1%甲酸甲醇溶液提取一次,合并上清液,待净化;其中所述的净化为:取5mL提取的溶液加入经3mL甲醇、纯水活化的MCX固相萃取柱净化,依次用3mL纯水和甲醇洗涤,将MCX净化萃取柱抽干,用3mL5%氨化甲醇溶液洗脱,氮气吹干后用体积比为9:1的0.1%甲酸水溶液/乙腈溶解,经液相色谱‐串联质谱仪检测,利用内标法定量;
所述不同种类“瘦肉精”残留为:可乐定、赛庚啶以及苯乙醇胺A、氯丙那林、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、西马特罗、特布他林、班布特罗、齐帕特罗、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、福莫特罗、喷布特罗、甲基克伦特罗、沙美特罗、塞布特罗、克仑丙罗、非诺特罗。
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Generic sample preparation combined with high-resolution liquid chromatography–time-of-flight mass spectrometry for unification of urine screening in doping-control laboratories;R.J.B.Peters等;《Anal.Bioanal.Chem.》;20100216;第396卷;2583-2598 * |
Separation of Salbutamol by Nano-baskets of Calix[4]arene Bearing Sulfonyl-carboxamides in Partial-cone Conformation;MOKHTARI Bahram等;《CHEM.RES.CHINESE UNIVERSITIES》;20121231;第28卷(第6期);1112-1118 * |
余洁芝.液相色谱-质谱法对猪肉制品中瘦肉精(盐酸克伦特罗与莱克多巴胺)的检测.《轻工科技》.2013,(第5期),20-21,36. * |
液相色谱-串联质谱法测定羊肉中的瘦肉精;甘盛等;《现代食品科技》;20111231;第27卷(第9期);文章摘要、第1节 * |
液相色谱质谱联用法测定食品中瘦肉精的残留量;王侠文等;《中国仪器仪表》;20121231(第12期);50-53 * |
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