CN110208394A - 一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法 - Google Patents

一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,包括待测样品前处理以及前处理后采用超高效液相色谱‑串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量。其中所述待测样品前处理包括:酶解待测样品得到酶解液;向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐提取,得到第一上清液;将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取,得到第二上清液,复溶,过滤,得到待测样品液。本发明检测方法优化了待测样品前处理步骤,省去了提取过程反复调节pH的步骤以及净化过程采用分散性固相萃取,减少了试剂的消耗,节约了大量的时间成本,具有操作简单、准确可靠、灵敏度高的特点,适用于畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的快速检测。

Description

一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法
技术领域
本发明属于食品添加剂检测领域,具体涉及一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法。
背景技术
莱克多巴胺、沙丁胺醇及克伦特罗均属于β-受体激动剂,可用于防治人、动物的支气管哮喘和痉挛,因其在动物中使用可显著提高瘦肉率而备受关注。人们食用含有此类药物残留的食品后会产生胸闷、心悸等不良反应,给人的身体造成极大伤害。因此,该类药物已经被多国禁止在畜禽生产中使用,我国也颁布了多项法规将β-受体激动剂列为禁止使用的兽药。
目前,关于莱克多巴胺、沙丁胺醇及克伦特罗这三种物质的检测方法有很多,主要有气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法等,其中液相色谱-串联质谱因其快速、灵敏、准确等特点而被广泛应用。但在实际使用时,用常规的液相色谱-串联质谱来检测,往往需要花费几十分钟的时间。
另外,在进行仪器测定前,为了满足仪器检测的要求,去除基质干扰,提高仪器检测的灵敏度,样品先要进行前处理步骤,该阶段一般包括提取和净化过程,现有的液相色谱-串联质谱法测定β-受体激动剂的标准(如GB/T 22286-2008)中,在提取过程中需要反复调节pH,造成试剂的大量消耗。而在净化过程中,现有的标准中也多采用MCX、PCX等固相萃取的方式,该过程需要经过活化、上样、淋洗以及洗脱四个繁琐步骤,从而导致耗时较长,且消耗了大量的试剂,不利于大批量的监测工作。因而,探寻一种快速、准确测定畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇及克伦特罗含量的检测方法具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有技术中对畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗进行检测时待测样品前处理过程耗时较长、试剂消耗量大的问题,以及现有检测方法中使用常规液相色谱-串联质谱法检测,检测时间较长的问题。
为了解决上述技术问题,本发明提供的一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,包括:
待测样品前处理;
在所述待测样品前处理之后,采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量;所述待测样品为畜肉,所述多种特定成分为莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗;
其中,所述待测样品前处理包括:
向待测样品中加入乙酸盐缓冲液和第一酶,混匀后放置于水浴中酶解,得到酶解液;
向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐,混匀,离心,得到第一上清液;
将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取,得到第二上清液,经氮气吹干后复溶,滤膜过滤,得到待测样品液。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述乙酸盐缓冲液为乙酸铵缓冲液和/或乙酸钠缓冲液,所述乙酸铵缓冲液的浓度为2mol/L,pH为5.2;所述乙酸钠缓冲液的浓度为2mol/L,pH为5.2。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述第一酶为β-葡萄糖醛苷酶和/或芳基硫酸酯酶。
所述待测样品前处理步骤中,所述氨水乙腈溶液中氨水和乙腈的体积比为1:99。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述无水硫酸盐为无水硫酸镁。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述离心的速度为8000r/min,离心的时间为10min。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取包括将第一上清液转移至Cleanert LipoNo净化管中,振摇,静置。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述氮气吹干的温度为50℃。
可选的,所述待测样品前处理步骤中,所述滤膜的孔径为0.22μm。
在所述待测样品前处理之后,本发明采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量。
其中所述超高效液相色谱的色谱条件为:
所述超高效液相色谱中的色谱柱为ZORBAX SB-C18柱,所述色谱柱内径及长度为2.1×100mm,粒径为1.8μm。
所述超高效液相色谱的流动相为甲酸水溶液和乙腈;流动相洗脱方式为梯度洗脱。
可选的,所述超高效液相色谱的流动相中A相为0.1%v/v甲酸水溶液,B相为乙腈;所述梯度洗脱的程序为:
0~0.5min,5%B;0.5~2.5min,5%B~95%B;2.5~3.0min,95%B;3.0~3.1min,95%B~5%B;3.1~5.0min,5%B。
所述超高效液相色谱中的流速为0.3mL/min。
所述超高效液相色谱的柱温为30℃。
可选的,所述质谱的质谱条件为:
所述质谱的离子源为电喷雾离子源,检测为正离子扫描模式,多反应监测模式检测。
离子源温度:500℃;喷雾电压:4500V;气帘气压力:207kPa;雾化气压力:345kPa;辅助加热气压力:345kPa;碰撞室进口电压:10V;碰撞室出口电压:13V。
其中,上述所述畜肉为猪肉、牛肉或羊肉。
与现有技术相比本发明具有以下优点:
本发明所述的待测样品前处理中的提取过程采用氨水乙腈溶液和无水硫酸盐直接提取,省去了现有标准中反复调节pH的步骤,净化过程使用基质分散性固相萃取替代了传统的固相萃取方式,省略了固相萃取过程中活化、上样、淋洗以及洗脱的复杂过程,减少了试剂的消耗,节约了大量的时间成本。
进一步地,在所述待测样品前处理步骤中,将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取时采用将第一上清液转移至Cleanert LipoNo净化管中,振摇,静置,即可达到分层的目的,在保证药物良好回收率的同时,使本发明方法操作简单便捷。
进一步地,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的含量,超高效液相色谱色谱柱内径及长度选择为2.1×100mm,粒径选择为1.8μm,相较于常规液相色谱-串联质谱大大缩短了检测所需时间。
由实验可知,采用本发明的检测方法,莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检出限为0.5μg/kg,回收率在89.3%~103%之间,精密度(相对标准偏差RSD)≤10%,可以满足日常检测的要求。
附图说明
图1为本发明实施例中一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法的工艺流程图;
图2为本发明实施例中可选的一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法的工艺流程图;
图3为莱克多巴胺标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。
图4为沙丁胺醇标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。
图5为克伦特罗标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。
具体实施方式
如背景技术中所述,现有技术中检测莱克多巴胺、沙丁胺醇及克伦特罗的方法常采用常规的液相色谱-串联质谱来检测,花费时间较长;另外现有技术在待测样品前处理过程中,提取过程需要反复调节pH,造成试剂的大量消耗,而净化过程常采用固相萃取的方式也使净化步骤繁琐,从而导致耗时较长,且消耗了大量的试剂。
本发明技术方案中,通过优化待测样品前处理步骤,在提取过程采用氨水乙腈溶液和无水硫酸盐直接提取,省去了现有标准中反复调节pH的步骤,净化过程使用基质分散性固相萃取替代了传统的固相萃取方式,省略了固相萃取过程中活化、上样、淋洗以及洗脱的复杂过程,减少了试剂的消耗,节约了大量的时间成本。另外本发明技术方案中采用了超高效液相色谱-串联质谱法测定畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的含量,相较于常规液相色谱-串联质谱大大缩短了检测所需时间。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂,下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。
除特殊注明外,本发明对所用试剂的来源通常没有特殊限制,例如可以采用市售即可。
图1是本发明实施例一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法的工艺流程图。本发明实施例的检测方法可以应用于畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测,检测方法即为图1中的各个步骤。
图1所示畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,包括:
待测样品前处理;
具体地,所述待测样品前处理包括:
S101,向待测样品中加入乙酸盐缓冲液和第一酶,混匀后放置于水浴中酶解,得到酶解液;
S102,向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐,混匀,离心,得到第一上清液;
S103,将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取,得到第二上清液,经氮气吹干后复溶,滤膜过滤,得到待测样品液;
经过所述待测样品前处理之后,S104,采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量;所述待测样品为畜肉,所述的畜肉可以为猪肉、牛肉或羊肉,所述多种特定成分为莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗。
本发明采用超高效液相色谱-串联质谱法进行检测,超高效液相色谱提高了色谱分离的效率,串联质谱提高了检测的分辨率、灵敏度及准确性,适用于畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的快速检测。
向待测样品中加入乙酸盐缓冲液和第一酶,其中所述乙酸盐缓冲液可选为乙酸铵缓冲液和/或乙酸钠缓冲液,所述乙酸铵缓冲液的浓度可选为2mol/L,pH为5.2;所述乙酸钠缓冲液的浓度可选为2mol/L,pH为5.2;所述第一酶可选为β-葡萄糖醛苷酶和/或芳基硫酸酯酶。
向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐,其中所述氨水乙腈溶液中氨水和乙腈的体积比可选为1:99,所述无水硫酸盐可选为无水硫酸镁。
在对加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐的酶解液进行离心时,所述离心的速度可选为8000r/min,离心的时间可选为10min。
将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取时,可采用现有技术中披露的基质分散性固相萃取产品对第一上清液进行萃取,并无特殊限制。本发明选择采用将第一上清液转移至Cleanert LipoNo净化管中,振摇,静置来对所述第一上清液进行基质分散性固相萃取。
所述Cleanert LipoNo净化管是博纳艾杰尔科技有限公司基于基质分散性固相萃取法开发的一种产品,Cleanert LipoNo为大颗粒材料,填料表面修饰了许多长的碳链,可针对性地吸附脂肪,无需离心,静置即可分层,可使本发明方法在操作上进一步简化,能在除脂的同时,保证药物的良好回收率,方法操作简单便捷。
得到第二上清液后,需要进一步经氮气吹干浓缩,本发明采用氮气吹干的温度可选为50℃。吹干后进行复溶,滤膜过滤,即得到待测样品液,本发明采用的滤膜的孔径可选为0.22μm。
在所述待测样品前处理之后,本发明采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量。
其中所述超高效液相色谱中的色谱柱可选为ZORBAX SB-C18柱,所述色谱柱内径及长度可选为2.1×100mm,粒径可选为1.8μm。
所述超高效液相色谱的流动相为甲酸水溶液和乙腈;流动相洗脱方式为梯度洗脱。所述超高效液相色谱的流动相中A相可选为0.1%v/v甲酸水溶液,B相为乙腈;所述梯度洗脱的程序可选为:
0~0.5min,5%B;0.5~2.5min,5%B~95%B;2.5~3.0min,95%B;3.0~3.1min,95%B~5%B;3.1~5.0min,5%B。
所述超高效液相色谱中的流速可选为0.3mL/min。
所述超高效液相色谱的柱温可选为30℃。
所述质谱的的离子源可选为电喷雾离子源,检测可选为正离子扫描模式,多反应监测模式检测。离子源温度可选为:500℃;喷雾电压可选为:4500V;气帘气压力可选为:207kPa;雾化气压力可选为:345kPa;辅助加热气压力可选为:345kPa;碰撞室进口电压可选为:10V;碰撞室出口电压可选为:13V。
所述超高效液相色谱-串联质谱检测过程需配制莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的标准工作溶液,具体操作为:将空白样品按上述待测样品前处理步骤进行处理,得到空白样品提取液,取莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的混合标准溶液用空白样品提取液分别配成0、0.5、2、5、20、40ng/mL的基质混合标准工作溶液(含内标浓度为5ng/mL),供上机检测。得到莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。以各定量离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标,对照溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线,按回归方程计算出待测样品中的莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的含量。
为了进一步说明本发明,下面结合实例来对上述实施例作更具体的分析,以便于本领域的技术人员进一步地理解。
实例一
仪器:
TRIPLE QUADTM 5500(配备ESI电离源,美国SCIEX公司);Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司);pH计(瑞士梅特勒-托利多公司);冷冻离心机(德国Eppendorf公司);氮吹仪(上海安谱实验科技股份有限公司);恒温振荡水浴锅(德国Julabo公司)。
试剂与材料:
实验用水(一级水);氨水(分析纯);乙酸铵(分析纯);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);β-葡萄糖醛苷酶(≥100,000units/mL);Cleanert LipoNo净化管(15mL);莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺-D5、沙丁胺醇-D3、克伦特罗-D9。其中,莱克多巴胺-D5、沙丁胺醇-D3、克伦特罗-D9分别为莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗的氘代化合物。
待测样品为新鲜或冷冻畜肉,可以为猪肉、牛肉或羊肉,使用前可捣碎或搅碎使均质。本实例中的待测样品为牛肉。
空白样品为新鲜或冷冻的不含莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的畜肉,包括猪肉、牛肉或羊肉,使用前可捣碎或搅碎使均质。本实例中的空白样品为不含莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的牛肉。
主要溶液配制:
乙酸铵缓冲液(2mol/L):称取154g乙酸铵,溶解于1000mL水中,用适量乙酸调pH至5.2。
氨水乙腈溶液(1%v/v):量取1mL氨水和99mL乙腈混合均匀。
乙腈-0.1%v/v甲酸水溶液(10%v/v):量取10mL乙腈和90mL 0.1%v/v甲酸水溶液混合均匀。
混合标准溶液(1μg/mL):准确称取适量莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗标准品,用甲醇分别配制成100μg/mL的标准储备溶液,避光-20℃保存。精密量取1mL莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗标准储备溶液至100mL容量瓶中,甲醇定容,配制成1μg/mL的混合标准溶液,避光-20℃保存。
同位素内标工作溶液(10ng/mL):准确称取适量莱克多巴胺-D5、沙丁胺醇-D3、克伦特罗-D9,用甲醇配制成100μg/mL的标准储备溶液,避光-20℃保存。精密量取上述标准储备溶液用甲醇进行适当稀释,配制成10ng/mL的同位素内标工作溶液,避光-20℃保存。
参照图2所示的一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法的工艺流程图,以下通过具体步骤进行详细说明:
首先,进行待测样品前处理,包括:
S201,称取2g待测样品,加入8mL乙酸铵缓冲液(pH5.2)和40μLβ-葡萄糖醛苷酶,涡旋混匀1min,37℃水浴酶解12h,得到酶解液。
S202,取出酶解液冷却至室温,加入10mL氨水乙腈溶液(1%v/v)和1.5g无水硫酸镁,手动振摇1min混匀,8000r/min离心10min,得到第一上清液。
S203,将全部第一上清液转移至Cleanert LipoNo净化管中,振摇1min,静置1min后得到第二上清液,转移第二上清液于另一离心管中,第二上清液在50℃下氮气吹干,残渣用乙腈-0.1%v/v甲酸水溶液(10%v/v)定容至1mL,0.22μm滤膜过滤,得到待测样品液。
配制标准工作溶液:
将空白样品按上述待测样品前处理步骤进行处理,得到空白样品提取液,取莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的混合标准溶液用空白样品提取液分别配成0、0.5、2、5、20、40ng/mL的基质混合标准工作溶液(含内标浓度为5ng/mL),供上机检测。
S105,采用超高效液相色谱-串联质谱法检测待测样品液中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的含量。
其中,所述超高效液相色谱的色谱条件:
色谱柱:ZORBAX SB-C18柱(内径及长度为2.1×100mm,粒径1.8μm);进样体积:5μL;柱温:30℃;流动相中A相为0.1%v/v甲酸水溶液,B相为乙腈,具体流动相梯度洗脱程序如表1。
表1液相色谱梯度洗脱条件
时间(min) 流速(mL/min) 流动相A/% 流动相B/%
0 0.3 95 5
0.5 0.3 95 5
2.5 0.3 5 95
3.0 0.3 5 95
3.1 0.3 95 5
5.0 0.3 95 5
质谱条件:
离子源:电喷雾离子源(ESI);正离子扫描;多反应监测(MRM);离子源温度:500℃;喷雾电压:4500V;气帘气压力:207kPa;雾化气压力:345kPa;辅助加热气压力:345kPa;碰撞室进口电压:10V;碰撞室出口电压:13V。
莱克多巴胺(Ractopamine)的内标物为莱克多巴胺-D5(Ractopamine-D5),沙丁胺醇(Salbutamol)的内标物为沙丁胺醇-D3(Salbutamol-D3),克伦特罗(Clenbuterol)的内标物为克伦特罗-D9(Clenbuterol-D9),莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗及相应内标物的具体质谱参数见表2。
表2莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗及相应内标MRM条件
注:*定量离子
标准工作曲线及定量结果分析:
采用上述检测条件测定0、0.5、2、5、20、40ng/mL的基质混合标准工作溶液(含内标浓度为5ng/mL),得到莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗标准物质的多反应监测(MRM)色谱图,如图3、图4、图5所示。其中图中横坐标t(min)表示时间(分钟),纵坐标intensity表示强度。
Ractopamine代表莱克多巴胺,Ractopamine-D5代表莱克多巴胺-D5;Salbutamol代表沙丁胺醇,Salbutamol-D3代表沙丁胺醇-D3;Clenbuterol代表克伦特罗,Clenbuterol-D9代表克伦特罗-D9。
以各定量离子质量色谱峰与相应同位素内标的峰面积比为纵坐标,对照溶液的浓度为横坐标,绘制标准曲线,按回归方程计算出待测样品中的莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的含量,回归方程及相关系数见表3。
由表3可以看出,莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗在0.5~40ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,线性相关系数r在0.9965~0.9997范围内。
表3莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗回归方程及相关系数
化合物 线性方程 相关系数r
莱克多巴胺 y=1.57354x+0.09683 0.9965
沙丁胺醇 y=0.09773x+0.01832 0.9993
克伦特罗 y=0.21190x+0.07701 0.9997
检出限以添加回收中各化合物的定量离子和定性离子信噪比均≥3定义,本实例中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的在畜肉中的检出限均为0.5μg/kg,具有较高的灵敏度。
接下来,本实例对本发明方法的准确度和精密度进行检测。方法的准确度、精密度分别用回收率和相对标准偏差(RSD%)衡量。对同一样品在相同条件下,取样6次,并根据测定结果的平均值计算莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的相对标准偏差;本实例中空白样品提取液添加莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗浓度分别为0.5μg/kg、1.0μg/kg和5.0μg/kg,进行回收率实验,不同浓度添加回收结果见表4。
表4物质的添加回收率与精密度(n=6)
结果表明(见表4),样品中化合物回收率的RSD均≤10%,满足精密度要求。
虽然本发明披露如上,但本发明并非限定于此。任何本领域技术人员,在不脱离本发明的精神和范围内,均可作各种更动与修改,因此本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。

Claims (17)

1.一种畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,包括:
待测样品前处理;
在所述待测样品前处理之后,采用超高效液相色谱-串联质谱法来检测待测样品液中多种特定成分的含量;所述待测样品为畜肉,所述多种特定成分为莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗;
其中,所述待测样品前处理包括:
向待测样品中加入乙酸盐缓冲液和第一酶,混匀后放置于水浴中酶解,得到酶解液;
向所述酶解液中加入氨水乙腈溶液和无水硫酸盐,混匀,离心,得到第一上清液;
将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取,得到第二上清液,经氮气吹干后复溶,滤膜过滤,得到待测样品液。
2.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述乙酸盐缓冲液为乙酸铵缓冲液和/或乙酸钠缓冲液,所述乙酸铵缓冲液的浓度为2mol/L,pH为5.2;所述乙酸钠缓冲液的浓度为2mol/L,pH为5.2。
3.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述第一酶为β-葡萄糖醛苷酶和/或芳基硫酸酯酶。
4.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述氨水乙腈溶液中氨水和乙腈的体积比为1:99。
5.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述无水硫酸盐为无水硫酸镁。
6.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于:所述离心的速度为8000r/min,离心的时间为10min。
7.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述将所述第一上清液进行基质分散性固相萃取包括将第一上清液转移至CleanertLipoNo净化管中,振摇,静置。
8.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述氮气吹干的温度为50℃。
9.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述滤膜的孔径为0.22μm。
10.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱中的色谱柱为ZORBAX SB-C18柱,所述色谱柱内径及长度为2.1×100mm,粒径为1.8μm。
11.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱的流动相为甲酸水溶液和乙腈;流动相洗脱方式为梯度洗脱。
12.根据权利要求11所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱的流动相中A相为0.1%v/v甲酸水溶液,B相为乙腈;所述梯度洗脱的程序为:
0~0.5min,5%B;0.5~2.5min,5%B~95%B;2.5~3.0min,95%B;3.0~3.1min,95%B~5%B;3.1~5.0min,5%B。
13.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱中的流速为0.3mL/min。
14.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述超高效液相色谱的柱温为30℃。
15.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述质谱的离子源为电喷雾离子源,检测为正离子扫描模式,多反应监测模式检测。
16.根据权利要求1所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述质谱的检测条件为:离子源温度:500℃;喷雾电压:4500V;气帘气压力:207kPa;雾化气压力:345kPa;辅助加热气压力:345kPa;碰撞室进口电压:10V;碰撞室出口电压:13V。
17.根据权利要求1-16任一项所述的畜肉中莱克多巴胺、沙丁胺醇和克伦特罗的检测方法,其特征在于,所述畜肉为猪肉、牛肉或羊肉。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111443147A (zh) * 2020-04-09 2020-07-24 中维安全检测认证集团有限公司 一种检测食品中沙丁胺醇的方法
CN116297974A (zh) * 2023-03-30 2023-06-23 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种同时检测血浆中利多卡因及其代谢物megx和沙丁胺醇浓度的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101949898A (zh) * 2010-08-10 2011-01-19 上海安谱科学仪器有限公司 一种动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法
US20110212512A1 (en) * 2005-12-19 2011-09-01 Hong Wang Monitoring network based on nano-structured sensing devices
CN103512984A (zh) * 2013-10-21 2014-01-15 中国动物卫生与流行病学中心 一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法
CN105424824A (zh) * 2015-11-03 2016-03-23 中粮营养健康研究院有限公司 一种检测猪尿中β-受体激动剂的方法
CN106770792A (zh) * 2017-01-20 2017-05-31 烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心 应用浊点萃取‑液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中β‑受体激动剂类药物的方法
CN107991407A (zh) * 2017-11-27 2018-05-04 广州市食品检验所 一种同时检测肉制品中35种兽药残留的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110212512A1 (en) * 2005-12-19 2011-09-01 Hong Wang Monitoring network based on nano-structured sensing devices
CN101949898A (zh) * 2010-08-10 2011-01-19 上海安谱科学仪器有限公司 一种动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法
CN103512984A (zh) * 2013-10-21 2014-01-15 中国动物卫生与流行病学中心 一种检测不同种类“瘦肉精”残留的样品前处理方法
CN105424824A (zh) * 2015-11-03 2016-03-23 中粮营养健康研究院有限公司 一种检测猪尿中β-受体激动剂的方法
CN106770792A (zh) * 2017-01-20 2017-05-31 烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心 应用浊点萃取‑液相色谱串联质谱法检测乳或乳制品中β‑受体激动剂类药物的方法
CN107991407A (zh) * 2017-11-27 2018-05-04 广州市食品检验所 一种同时检测肉制品中35种兽药残留的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘畅 等: "高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法同时测定猪肉中31 种β-受体激动剂", 《中国食品卫生杂志》 *
张毅 等: "分散固相萃取净化与液相色谱/串联质谱法测定牛奶中8类禁用药物残留", 《分析化学》 *
李经运 等: "UPLC-MS/MS 对猪肉中3 种β-受体激动剂残留的检测", 《肉类工业》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111443147A (zh) * 2020-04-09 2020-07-24 中维安全检测认证集团有限公司 一种检测食品中沙丁胺醇的方法
CN111443147B (zh) * 2020-04-09 2022-05-06 中维安全检测认证集团有限公司 一种检测食品中沙丁胺醇的方法
CN116297974A (zh) * 2023-03-30 2023-06-23 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种同时检测血浆中利多卡因及其代谢物megx和沙丁胺醇浓度的方法

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