CN103463634A

CN103463634A - 免疫增强剂及其使用方法

Info

Publication number: CN103463634A
Application number: CN201310405668XA
Authority: CN
Inventors: 徐志伟
Original assignee: Zhenjiang Wanshan Hongbian Agriculture Garden
Current assignee: Zhenjiang Institute of Agricultural Sciences Jiangsu Hilly Area
Priority date: 2013-09-09
Filing date: 2013-09-09
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2033-09-09
Also published as: CN103463634B

Abstract

本发明涉及一种免疫增强剂及其使用方法，该免疫增强剂包括蜂胶、海藻糖和香菇多糖，各组分的体积份数为蜂胶4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份；其使用方法包括配制、混合、免疫和检测等步骤，本发明可缩短免疫程序、简便免疫操作，并对免疫抗体产生显著的效果。

Description

免疫增强剂及其使用方法

技术领域

本发明涉及一种免疫刺激添加剂，具体涉及一种免疫增强剂及其使用方法。

背景技术

佐剂是一类先于抗原或与抗原同时作用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答的一种物质。抗原在免疫动物前，通常需要与佐剂混合并乳化，形成乳胶（Emulsion）的形式注射使用。乳胶有“油包水”和“水包油” 两种形式。前者有利于延长抗原在体内的存在时间和提高抗原的免疫原性，但对局部组织具有很强的刺激反应。后者有利于抗原的快速吸收，副作用小，但免疫反应可能弱且持续的时间短。

佐剂的作用原理主要包括三个方面，一是激活先天性免疫应答反应，如弗氏佐剂、免疫刺激复合物和CpG佐剂等。二是提高抗原对免疫系统的提呈和刺激作用，如脂质体类佐剂和免疫刺激复合物（ISCOM）。三是延长抗原（免疫原）在机体内的存在时间和保持对免疫系统的持续激活作用。很多佐剂中的矿物油成分主要是起到缓释作用。除了弗氏佐剂兼具这三种特性以外，大多数佐剂在功能上都存在一定的缺陷。

弗氏佐剂是含油佐剂的一种，其最大的特点是具有较强的免疫增强效应，是应用最为广泛的实验用佐剂。弗氏佐剂包括弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA）和弗氏不完全佐剂 (Freun’s incomplated adjuvant, FIA)。FCA除了含有矿物油等成分外，还含有灭活结核杆菌,对体液和细胞免疫系统具有很强的激活作用。佐剂与抗原的体积一般各占50％。最终所形成的抗原佐剂混合物是典型的“油包水”乳胶混合体。FCA能够刺激机体产生很强的体液免疫和细胞免疫应答，但也具有很强的副作用，特别是皮下注射时在注射部位引起很强烈的炎症和溃疡。由于注射部位强烈的副反应，该佐剂只用于实验目的的免疫研究，不适合用于制备疫苗。而FIA的起效较慢，通常需要进行8～10次免疫才能得到有实用价值的抗体，导致免疫程序长，免疫操作复杂，生产成本较高。

发明内容

发明目的：为了克服上述现有佐剂的不足，本发明提供一种操作简单、起效快的免疫增强剂。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供的免疫增强剂包括蜂胶、海藻糖和香菇多糖，各组分的体积份数为蜂胶4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份。

作为优选，各组分的体积份数为蜂胶5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份。

本发明同时提出上述免疫增强剂的使用方法，包括以下步骤：

1）免疫增强剂的配制，将体积份数为蜂胶4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份混合得到免疫增强剂；

2）免疫增强剂与抗原的混合，将步骤1）所得免疫增强剂与抗原按照1:9的体积比混合得到抗原混合物；

3）乳化，将步骤2）所得抗原混合物与弗氏佐剂按照1:1的体积比混合，在搅拌器中以8000～10000rpm的搅拌速度乳化1～2分钟制成乳剂；

4）抗原的免疫，每次免疫采用10点注射法，在免疫动物每侧腋下2点、每侧腹股沟部位3点注射步骤3）所得乳剂，每个点皮下注射0.2ml，共计2.0ml，共计免疫6～8次，每次免疫的间隔时间为7～14天；

5）效价检测，不同时间采血，分离血清，检测抗体效价。

其中步骤4）第1次免疫使用抗原混合物用弗氏完全佐剂乳化得到的乳剂，第2～8次免疫使用抗原混合物用弗氏不完全佐剂乳化得到的乳剂。

有益效果：本发明的免疫增强剂及其使用方法可以缩短免疫程序、简便免疫操作，并对免疫抗体的增强具有显著的效果。

具体实施方式

实施例：为验证新型佐剂配方在动物上的免疫效果，采用本发明的免疫增强剂和使用方法进行大组试验：一组抗原中加入本发明的免疫增强剂，另一组抗原中未加免疫增强剂。

（一）含免疫增强剂的抗原乳剂制备：

1）免疫增强剂的配制，将体积份数为蜂胶5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份的三种原料混合；

2）免疫增强剂与抗原的混合，将步骤1）所得免疫增强剂与人载脂蛋白A1(ApoA1)抗原按照1:9的体积比混合；

3）乳化：将步骤2）的得到的免疫增强剂与抗原的混合物与弗氏佐剂按照1:1的体积比混合，在搅拌器中以8000～10000rpm的搅拌速度乳化1～2分钟制成乳剂。

（二）不含免疫增强剂的抗原乳剂制备：

直接将人载脂蛋白A1(ApoA1)抗原与弗氏佐剂按照1:1的体积比混合，在搅拌器中以8000～10000rpm的搅拌速度乳化1～2分钟制成乳剂。

（三）免疫，分两组，第一组40头羊，免疫步骤（一）所得含免疫增强剂的抗原乳剂；第二组10头羊，免疫步骤（二）所得不含免疫增强剂的抗原乳剂。每次免疫采用10点注射法，即在每侧腋下2点、每侧腹股沟部位3点注射抗原乳剂，每个点皮下注射0.2ml，共计2.0ml/羊，共计免疫6次；第1次免疫用弗氏完全佐剂乳化得到的乳剂，第2～6次免疫用弗氏不完全佐剂乳化得到的乳剂。第1次免疫后间隔14天进行第2次免疫，以后每次免疫间隔时间10天左右。

（四）效价检测，分别于第4、5、6次免疫后10天左右采血，分离血清，用琼扩方法检测抗体效价，得到以下相应的中间检测记录1、2、3。

（五）试验结果分析：

Figure 201310405668X100002DEST_PATH_IMAGE001

从中间检测记录1可知，第4次免疫后，40头加免疫增强剂的羊抗体平均水平达到1:9.9，10头未加免疫增强剂的羊抗体平均为1:3.8，使用免疫增强剂的羊抗体水平比未使用免疫增强剂的羊抗体水平提高近2倍。

从中间检测记录2可知，第5次免疫后，40头加免疫增强剂的羊抗体平均水平达到1:18，10头未加免疫增强剂的羊抗体平均为1:4.2，使用免疫增强剂的羊抗体水平比未使用免疫增强剂的羊抗体水平提高3倍。

Figure 201310405668X100002DEST_PATH_IMAGE003

从中间检测记录3可知，第6次免疫后，40头加免疫增强剂的羊抗体平均水平达到1:20.5，10头未加免疫增强剂的羊抗体平均为1:7，使用免疫增强剂的羊抗体水平比未使用免疫增强剂的羊抗体水平提高2倍。

从以上中间检测记录可知，在疫苗佐剂中添加了本发明的免疫增强剂，在第5次免疫后羊的抗体水平即可达到1:16以上，比未添加免疫增强剂的羊抗体水平提高2－3倍，说明采用此免疫增强剂可简化免疫程序，减少免疫次数，缩短免疫时间，只要进行5次免疫即可；而未使用免疫增强剂，即使6次免疫仍达不到1:16的合格水平，根据文献资料的介绍，人的ApoA1抗原免疫羊一般需8－10次后才能达到合格水平。因此，采用本公司的免疫增强剂，可减少免疫次数3～5次，缩短免疫时间1至1.5月，从而大大简化免疫程序，简便免疫操作，节约了生产成本，显著提高了经济效益。

Claims

1.一种免疫增强剂，其特征在于包括蜂胶、海藻糖和香菇多糖，各组分的体积份数为：蜂胶4～6份，海藻糖2～3份，香菇多糖2～3份。

2.根据权利要求1所述的免疫增强剂，其特征在于，各组分的体积份数为：蜂胶5份，海藻糖2.5份，香菇多糖2.5份。

3.根据权利要求1所述的免疫增强剂的使用方法，其特征在于包括以下步骤：

5）效价检测，不同时间采血，分离血清，检测抗体效价。

4.根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于：所述步骤4）中第1次免疫使用抗原混合物用弗氏完全佐剂乳化得到的乳剂，第2～8次免疫使用抗原混合物用弗氏不完全佐剂乳化得到的乳剂。

5.根据权利要求3所述的使用方法，其特征在于：所述第1次免疫与第2次免疫的间隔时间为14天，以后每次免疫的间隔时间为10天。