CN107335055B - 一种兽用中药免疫增强剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于兽用药品领域,尤其涉及一种兽用疫苗免疫增强剂及其应用,它是由下述重量份数的原料制配而成:当归多糖7‑14份、香菇多糖2‑10份、芦荟多糖3‑8份、聚氧乙烯氢化蓖麻油10‑30份、无水乙醇5‑15份、乙酸乙酯20‑40份、注射用水10‑30份;将兽用中药免疫增强剂应用于新城疫灭活灭活疫苗(La Sota株),发挥中药自身的免疫增强作用,规避传统佐剂不足,显著提升免疫效果,安全高效无毒,同时制备成纳米乳剂,实现抗原缓释,延长疫苗的免疫期,极大提高疫苗品质。

Description

一种兽用中药免疫增强剂及其应用
技术领域
本发明属于兽用药品领域,尤其涉及一种兽用疫苗免疫增强剂及其应用。
背景技术
畜禽免疫抑制是临床多见的病理现象,对养殖业危害严重。引起蓄禽免疫抑制的原因较多,包括饲料中霉菌毒素污染,药物尤其是含有免疫抑制成分药物的不规范使用,长期饲养管理不当,环境应激等等。免疫抑制使畜禽的生理代谢受到限制,生长发育受到影响,养殖成本大幅度上升;另一方面,免疫系统受到损害,参与免疫应答的器官、组织和细胞受到破坏,抗原的递呈受到干扰,抗体的形成被抑制或阻断,机体的屏障保护功能减弱或丧失,导致畜禽继发或并发多种疾病, 也可导致使其畜禽对疫苗免疫的反应能力下降,经常出现达不到有效保护的免疫水平,造成免疫保护失败。
中药多糖具有双向调节作用,可使受到抑制的免疫系统重新恢复生理功能,也可以有效增强健康畜禽的免疫力,且具有安全绿色无残留的特点,是防治畜禽免疫抑制、提升畜禽抵抗力的比较理想的手段。纳米乳剂具有均一性高、分散性优良、缓释控释等特点,可有效的提高抗原对机体的细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫应答能力,同时缓慢释放抗原,延长保护时间,具有较理想的免疫增强作用。因此,本发明提供一种疫苗免疫增强剂,并介绍其在鸡新城疫灭活疫苗中的应用,以期为预防免疫抑制引起的免疫失败,提升畜禽抵抗力提供一种新的方案。
发明内容
本发明的目的在于克服技术中存在的不足,而提供一种兽用疫苗免疫增强剂及其应用。
本发明的目的是这样实现的:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7-14份、香菇多糖2-10份、芦荟多糖3-8份、聚氧乙烯氢化蓖麻油10-30份、无水乙醇5-15份、乙酸乙酯20-40份、注射用水10-30份。
一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖9-12份、香菇多糖3-8份、芦荟多糖4-6份、聚氧乙烯氢化蓖麻油15-25份、无水乙醇7-13份、乙酸乙酯25-35份、注射用水15-25份。
一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖10份、香菇多糖6份、芦荟多糖4份、聚氧乙烯氢化蓖麻油20份、无水乙醇10份、乙酸乙酯30份、注射用水20份。
一种兽用中药免疫增强剂的应用,其特征在于:在无菌条件下,先将上述权利要求1-3中任一份量的聚氧乙烯氢化蓖麻油和无水乙醇混匀,再加入上述权利要求1-3中任一份量的乙酸乙酯,混匀,获得混合液1,取上述权利要求1-3中任一份量的当归多糖、香菇多糖、芦荟多糖和注射用水混合均匀,获得混合液2,将混合液2加入到混合液1中,加入过程中不断搅拌,持续搅拌10-20分钟,直至形成均匀透明的体系,之后逐滴加入新城疫灭活灭活抗原(La Sota株)50份,混合搅拌均匀制备成鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂。
当归具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效,为临床使用频率最高的中药之一,素有“十方九归”之称。当归多糖是当归中的主要成分之一,在抗肿瘤、肝损伤、免疫增强等方面具有明显的作用:能抑制环磷酰胺引起的小鼠脾脏萎缩和胸腺萎缩,也能对抗氢化可的松引起的小鼠脾脏萎缩,增加小鼠脾重,而对于正常及免疫抑制小鼠胸腺影响不大。当归多糖可使荷瘤小鼠的巨噬细胞数目及吞噬能力及脾细胞的NK活性显著增加,从而提高主动免疫治疗效应;促进小鼠淋巴细胞增殖,提高IL-2和血清抗体的水平。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分,是一种宿主免疫增强剂,临床与药理研究表明,香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。
芦荟多糖主要存在于芦荟叶的凝胶部位,目前已被检出的有乙酚化葡聚糖、葡甘聚糖、阿拉伯-半乳聚糖等,是芦荟提取物中的有效成分之一。具有多种生物学功能,包括可促进损伤组织的再生和愈合,增强机体免疫力,解毒、降血脂、美容养颜,以及促进实验性贫血造血功能的恢复。
本发明的优点在于:
1、提供一种兽用中药免疫增强剂,可有效激活当前各类原因引起的畜禽机体免疫抑制,帮助恢复机体正常免疫力。
2、将兽用中药免疫增强剂应用于新城疫灭活灭活疫苗(La Sota株),发挥中药自身的免疫增强作用,规避传统佐剂不足,显著提升免疫效果,安全高效无毒,同时制备成纳米乳剂,实现抗原缓释,延长疫苗的免疫期,极大提高疫苗品质。
具体实施方式
实施例1:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖10克、香菇多糖6克、芦荟多糖4克、聚氧乙烯氢化蓖麻油20克、无水乙醇10克、乙酸乙酯30克、注射用水20克。
在无菌条件下,先将20克聚氧乙烯氢化蓖麻油和10克无水乙醇混匀,再加入30克乙酸乙酯,混匀,获得混合液1,取10克当归多糖、6克香菇多糖、4克芦荟多糖和20克注射用水混合均匀,获得混合液2,将混合液2加入到混合液1中,加入过程中不断搅拌,持续搅拌15分钟,直至形成均匀透明的体系,之后逐滴加入新城疫灭活灭活抗原(La Sota株)50克,混合搅拌均匀制备成鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂。
实施例2:当归多糖、香菇多糖、芦荟多糖最优比例的筛选
(1)分组与处置
对当归多糖、香菇多糖和芦荟多糖进行3因子3水平正交设计L9(34)分组,每种多糖作为一个因子,均取不同浓度作为水平项,正交设计分组结果见表1。将体重为18-22g昆明小鼠随机分为11个组,每组10只,用苦味酸标记。其中1-9组为正交设计多糖组:灌胃给予相应的各组中药多糖组方;正常对照组和环磷酰胺对照组:灌胃生理盐水。各组小鼠的灌胃量均为0.2 ml,每天给一次药,连续用药14 d。除正常对照组外,其余各组小鼠分别于第3、6、9d腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,体积为0.2 ml。
表1 正交试验的因素与水平(mg/kg.bw)
因素水平 当归多糖 香菇多糖 芦荟多糖
1 5 2 4
2 10 4 8
3 15 6 12
(2)指标检测
①脏器指数检测
将上述已去除脾脏的小鼠,取其胸腺,用滤纸吸干其表面的液体后,称重,按下式计算脾脏指数和胸腺指数。
脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重(mg)/体重(g)
②脾脏细胞增殖刺激指数SI
末次给药24h后,小鼠称重并记录,摘取眼球处死小鼠,75%酒精浸泡3-5min,消毒。按下述操作进行实验。
1)无菌条件取出小鼠脾脏,称重并记录后,在装有少量预冷RPMI-1640培养液(含2%血清,1%双抗)的平皿中,去除表面的脂肪和结缔组织。
2)将脾脏转移至200目细胞筛上,筛下为装有同样预冷培养液的玻璃皿,用剪刀快速剪碎组织,并用L形玻璃棒轻轻将其压过细胞筛,制成脾细胞悬液。在剪碎过程中,约隔半分钟用预冷的培养液轻轻浇过细胞筛上的组织,防止细胞无营养死亡。
3)将细胞悬液收集于离心管中,1500rpm离心5 min,弃上清。
4)向沉淀细胞中加入红细胞裂解液(Tris-NH4Cl工作液)裂解红细胞,作用3min后1500 rpm离心5min,弃上清。
5)用预冷RPMI-1640培养液洗2次,第二次离心后,弃上清。
6)所得细胞沉淀用RPMI-1640培养液重悬,1500rpm离心5min,弃上清。
7)将细胞悬浮于RPMI-1640完全培养液(含10%血清,1%双抗)中。为了除去巨噬细胞,采用玻璃黏附法纯化脾细胞,将所获得的脾细胞悬液置于玻璃培养皿中,37℃ 5%CO2孵育2h。
8)收集未贴壁的细胞,细胞计数,用台盼蓝染色计数活细胞数在95%以上后,用RPMI-1640完全培养液调整细胞悬液浓度为1×106个/ml。
9)于96孔培养板中每孔加入100μl脾细胞悬液,然后每孔再分别加入含Con A(终浓度5μg/ml)的RPMI-1640培养液,每孔总体积为200μl,不足者用RPMI-1640完全培养液补至200μl。同时设阴性对照组(细胞和RPMI-1640培养液)和空白对照组(RPMI-1640培养液)。
10)将细胞于37℃,5%CO2培养箱中培养48h后,每孔加入20μl的CCK8溶液,继续培养2h。
11)酶标仪于490nm测其OD值,按下式计算增殖刺激指数SI。
SI =(A加药-A空白)/(阴性-A空白)
(3)结果
用spss10.0对结果分析比较,脾脏指数、胸腺指数、脾细胞增殖刺激指数详见表2。
表2 免疫指标结果
脾脏指数 胸腺指数 增殖刺激指数
1 4.04±0.71* 1.70±0.57* 2.65±0.54#
2 3.72±1.31 1.88±0.42* 2.92±0.51#
3 4.89±1.54*# 1.88±0.43* 2.19±0.35#
4 3.08±0.92 1.91±0.21* 1.79±0.68*
5 3.18±0.82 1.80±0.36* 2.68±1.11#
6 4.26±1.07* 2.07±0.39 2.73±0.39#
7 3.98±1.23* 1.96±0.11 2.07±0.75#
8 3.27±1.16 2.24±0.22 1.81±0.34*
9 4.04±1.04* 1.99±0.76 2.23±0.23#
正常组 2.79±0.40 2.34±0.38# 2.60±0.18#
环磷酰胺组 3.76±0.96 1.87±0.18* 1.35±0.13*
注:*与正常对照组比较,差异显著,P<0.05。
#与环磷酰胺对照组比较,差异显著,P<0.05。
脾脏作为机体最大的外周淋巴组织器官,是T、B淋巴细胞定居的场所,也是产生免疫应答的重要部位,在天然免疫和适应性免疫反应中均有重要作用。脾脏指数经常作为药物对免疫功能影响的一个初步指标。其脏器指数以及在有丝分裂原刺激后所发生的增殖分化,可以共同作为脾脏功能评价的标准。
就脾脏指数而言,与正常对照组比较,中药多糖组方1、3、6、7、9组脾脏指数均显著高于正常对照组(P<0.05);组3、6数值最高;说明不同比例的中药多糖组方能不同程度的提高环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠脾脏指数,并使其恢复甚至超出正常水平。此外,与正常对照组比较,环磷酰胺组脾脏指数与之无显著差异(P>0.05),但其脾T淋巴细胞的增殖刺激指数却极显著小于正常组,原因可能是在造模后,小鼠自身有一定程度的代偿恢复,导致免疫抑制小鼠脾脏代偿性增大,但是其T细胞增殖功能却远不能恢复至正常水平。
实验研究结果显示,环磷酰胺能显著降低小鼠的胸腺指数,抑制胸腺发育;中药多糖6、7、8、9 组胸腺指数与正常组比较无明显差异(P>0.05),其余各组均显著小于正常组(P<0.05),表明不同比例的中药多糖组方能改善环磷酰胺引起的胸腺萎缩,促进其生长发育,使其向正常水平恢复。
Con A是T细胞有丝分裂原,主要诱导T淋巴细胞增殖。实验中采用Con A体外刺激小鼠脾细胞增殖程度及脾脏指数,检测相应药物灌胃14天后对小鼠脾脏功能的影响。结果显示,与正常对照组比较,环磷酰胺模型对照组Con A诱导脾淋巴细胞的增殖刺激指数SI值均显著减小(P<0.05);中药组能不同程度促进 Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应,改善环磷酰胺引起的免疫抑制小鼠T 淋巴细胞介导的细胞免疫反应,使其向正常水平恢复,其中1、2、5、6组效果最好。
综合实验结果分析,环磷酰胺能显著降低小鼠的免疫器官指数,抑制免疫器官发育;中药多糖能改善环磷酰胺引起的胸腺、脾脏萎缩,促进其生长发育,使其向正常水平恢复;可有效诱导T淋巴细胞增殖,提高机体免疫力。其中组6在各指标中均表现出了良好的优越性,故选择组6 作为当归多糖、香菇多糖、芦荟多糖最佳组方,即当归多糖10份、香菇多糖6份、芦荟多糖4份。
实施例3:中药增强剂对鸡新城疫疫苗(La Sota株)的抗体作用
将7日龄AA白羽肉鸡50只,随机平均分为①生理盐水组,②鸡新城疫灭活抗原组,③中药增强剂组,④中药增强剂+灭活抗原组,⑤市售鸡新城疫灭活疫苗(La Sota株)组,于7日龄、14日龄胸部肌肉注射免疫两次,分别于免疫后14、21、28、35天,采集血液分离血清,用HI法检测相应新城疫抗体的含量,检测结果见表3。
表3 鸡新城疫疫苗(La Sota株)抗体检测结果
组别 14天 21天 28天 35天
生理盐水组 3 3 3 3
鸡新城疫灭活抗原组 5 6 6 5
中药增强剂组 3 3 3 3
中药增强剂+灭活抗原组 6 9 11 11
鸡新城疫疫灭活苗(La Sota株)组 6 8 9 9
由检验结果可以看出,单纯的鸡新城疫灭活抗原仅能刺激机体产生5-6的抗体滴度,且在第四周既有下降趋势,市售灭活疫苗可产生8-9的抗体滴度,而抗原与本发明合用可产生强而持久的抗体,显示较强的优势,且纯中药多糖无毒副作用,无残留,具有广阔的市场潜力。
实施例4:鸡新城疫纳米乳剂灭活疫苗(La Sota株)处方的筛选
(1)油相和助表面活性剂的筛选
通过考察中药水溶液在乙酸乙酯、液体石蜡、肉豆蔻酸异丙酯中的溶解性,筛选出适合的油相。将筛选的油相中分别加入无水乙醇、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇等助表面活性剂,考察三者对纳米乳形成的影响。结果表明乙酸乙酯可以增大中药水溶液的溶解度,适合做本体系的油相;表明无水乙醇与1,2-丙二醇、1,3-丁二醇相比更易形成纳米乳,同时可以提高中药多糖蜂胶的载药量,故做该体系的助表面活性剂。
(2)表面活性剂的筛选
选择纳米乳常用的表明活性剂:聚氧乙烯氢化蓖麻油、EL-40、Tween80等。在制备纳米乳佐剂时,将表面活性剂分别与无水乙醇按照1:1、1:2、1:3、2:1、2:3、3:1、3:2的比例混合均匀,然后加入一定量的乙酸乙酯,恒温磁力搅拌器不断搅拌,同时缓慢滴加中药水溶液,边加边搅拌,直至乳液成透明状。根据表面活性剂、助表面活性剂、白油、注射水水的量绘制伪三元相图,结果显示3种表面活性剂所形成的纳米乳体系都可以被水稀释至顶点而保持澄明状态,但聚氧乙烯氢化蓖麻油载中药水溶液量最大。
(3)油相比例的筛选
将筛选好的表面活性剂和助表面活性剂混合后,将其与乙酸乙酯分别按照1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的比例混合均匀,并缓慢加入超纯水,边滴边搅拌,直至乳液呈透明状。结果显示,当聚氧乙烯氢化蓖麻油:无水乙醇:乙酸乙酯为2:1:3时,形成的纳米乳能在较大范围内被水稀释而仍能保持水包油的状态不被破坏。
(4)水相的筛选
将筛选好的表面活性剂、助表面活性剂及油相混匀后,然后分别按照1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的比例缓慢加入中药多糖水溶液(含当归多糖25%、香菇多糖15%、芦荟多糖10%,注射水50%),边加边搅拌,直至乳液呈透明状。经加水滴定法确定的疫苗纳米乳佐剂的最终质量比为:聚氧乙烯氢化蓖麻油:无水乙醇:乙酸乙酯:中药多糖水溶最适比例为2:1:3:4。
实施例5:兽用疫苗免疫增强剂在鸡新城疫灭活疫苗(La Sota株)的应用
将本发明结合现代纳米技术,制备成鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂:在无菌条件下,先将20克聚氧乙烯氢化蓖麻油和10克无水乙醇混匀,再加入30克乙酸乙酯,混匀,获得混合液1,取10克当归多糖、6克香菇多糖、4克芦荟多糖和20克注射用水混合均匀,获得混合液2,将混合液2加入到混合液1中,加入过程中不断搅拌,持续搅拌15分钟,直至形成均匀透明的体系,之后逐滴加入新城疫灭活灭活抗原(La Sota株)50克,混合搅拌均匀制备成鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂。该纳米乳剂的质量评价如下:
(1)黏度
取1ml玻璃吸管(上口内径为2.7mm,出口内径为1.2mm),室温条件下,吸取lml鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂样品,令其垂直自然流出,记录流出0.4ml样品所需时间,测定三次,取平均值,该鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂的黏度值为3.7s
(2)结构类型鉴别
利用红色油溶性染料苏丹红Ⅲ和蓝色水溶性染料亚甲基兰在鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂中扩散快慢来判断,蓝色的扩散速度大于红色,因此鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂为O/W型。
(3)微观形态观察及其粒径分布
采用透射电镜下观察纳米乳疫苗的颗粒大小及形态;激光粒度分析仪测定其平均粒径。透射电镜结果显示,鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂的液滴呈球形,液滴大小均匀,分散性良好,粒度分析结果表明,液滴大小均匀,鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂平均粒径为13.50nm。
(4)稳定性考察
制备3批次的鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂开展有关稳定性的试验:将制备的鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂5000r/min,离心30min,鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂呈均一稳定液态,未见分层、浑浊等现象。另将制备的3批次鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂疫苗,分别放置在4℃、37℃环境中21天,未见分层、浑浊等现象。说明本鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂稳定性较好。
(5)无菌检验
将制备的鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂分别接种于相应细菌培养基、支原体培养基中,37℃培养96h,未见细菌生长。
(6)安全性考察
首先考察鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂的内毒素、热原水平,然后从动物体内评价复配鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂的急性毒性、皮肤肌肉刺激、过敏反应、重复(长期)毒性等安全性指标。结果均未见异常反应,用药部位及全身无刺激或炎性反应,实验动物均健活,鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂安全性符合规定。
(7)免疫效果研究
将制备的鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂分别免疫AA肉鸡,分别于7日龄、14日龄各免疫一次,分别于免疫后14天、21天、28天,35天采集血液(AA肉鸡出栏时间一般为50日龄左右),通过HI法检测新城疫抗体水平及产生变化规律。结果显示,鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂在免疫14天后抗体水平达到6个滴度,随后持续升高,至28天达到高峰并维持在11个滴度,显示出良好的保护力。
实施例6:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例7:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例8:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例9:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖10克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例10:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例11:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例12:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇15克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例13:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯40克、注射用水10克。
实施例14:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水30克。
实施例15:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例16:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例17:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例18:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯20克、注射用水10克。
实施例19:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水10克。
实施例20:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例21:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例22:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖2克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例23:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例24:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例25:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇5克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例26:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯20克、注射用水30克。
实施例27:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水10克。
实施例28:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖7克、香菇多糖2克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例29:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖2克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例30:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖3克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例31:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇15克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例32:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油10克、无水乙醇5克、乙酸乙酯40克、注射用水30克。
实施例33:一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖14克、香菇多糖10克、芦荟多糖8克、聚氧乙烯氢化蓖麻油30克、无水乙醇5克、乙酸乙酯20克、注射用水30克。

Claims (2)

1.一种兽用中药免疫增强剂,其特征在于,它是由下述重量份数的原料配制而成:当归多糖10份、香菇多糖6份、芦荟多糖4份、聚氧乙烯氢化蓖麻油20份、无水乙醇10份、乙酸乙酯30份、注射用水20份。
2.一种如权利要求1所述的兽用中药免疫增强剂在制备鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂中的应用,其特征在于,在无菌条件下,先将权利要求1中的聚氧乙烯氢化蓖麻油和无水乙醇混匀,再加入乙酸乙酯,混匀,获得混合液1,取当归多糖、香菇多糖、芦荟多糖和注射用水混合均匀,获得混合液2,将混合液2加入到混合液1中加入过程中不断搅拌,持续搅拌10-20分钟,直至形成均匀透明的体系,之后逐滴加入新城疫灭活抗原La Sota株50份,混合搅拌均匀制备成鸡新城疫灭活疫苗纳米乳剂。
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