CN106267184B - 一种水包油包水型乳化剂及其用途和使用方法 - Google Patents
一种水包油包水型乳化剂及其用途和使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种水包油包水型乳化剂及其用途和使用方法,其中水包油包水型乳化剂包含以下组分和质量百分含量:油相:70~98wt%;亲水性表面活性剂:1~29wt%;亲油性表面活性剂:1~29wt%;其中,亲水性表面活性剂包括聚乙二醇264单油酸酯、聚乙二醇400单油酸酯、聚乙二醇600单油酸酯中的一种或多种。本发明提供乳化剂具有的有益效果包括:具有超高的稳定性,进而使得制得疫苗溶液在室温下有良好的稳定性,并且经研究对比发现,本发明的乳化剂的稳定性与ISA206佐剂的稳定性相当。
Description
技术领域
本发明涉及一种水包油包水型乳化剂及其用途和使用方法。
背景技术
佐剂种类很多,目前尚无统一的分类方法,常用的佐剂可分为4类:无机佐剂,如氢氧化铝,明矾等;有机佐剂,微生物及其产物等;合成佐剂,如人工合成的双链多聚核苷酸(双链多聚腺苷酸、尿苷酸)、左旋咪唑、异丙肌苷等;油佐剂,如弗氏佐剂、花生油乳化佐剂、矿物油、植物油等。
油佐剂目前在动物中最常用,又可分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种。不完全佐剂即油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂相混合而成,当其再与抗原混合通过机械剪切形成油包水(W/O)乳剂,可用于免疫注射,制成油包水(W/O)乳剂的佐剂称为油包水(W/O)佐剂,又称单相佐剂。在不完全佐剂中加入死的分枝杆菌,即成为弗氏完全佐剂。完全佐剂的免疫强度大于不完全佐剂。但是油包水(W/O)型疫苗由于粘度大,注射较困难;同时由于疫苗中的白油含量较高,常常导致严重的接种副反应,在接种部位会可见有浮、肿胀、硬结和坏死等。而粘度较小,易于注射的水包油(O/W)型疫苗,由于免疫原性弱,仅能诱导动物体内产生弱的免疫应答,限制了其在动物疫苗方面的推广和应用。
而水包油包水(W/O/W)双相佐剂与油包水单相佐剂(W/O)相比具有同等抗原性,但前者更易于乳化(中速搅拌即可)、制成的疫苗黏度小、安全性好、易于吸收,制成的疫苗更为稳定。因此制成的水包油包水疫苗乳液,即便与注射有具有良好的免疫原性,是最理想的乳剂疫苗。
现在最好的水包油包水(W/O/W)双相佐剂是进口法国SEPPIC公司的生产的ISA206佐剂。其通过自乳化技术制备了W/O/W型乳剂疫苗,解决了W/O/W型乳剂疫苗制备难的问题,而且具有一定的稳定性,在全球范围内得到了广泛应用。其不足之处为所制备的W/O/W型乳剂疫苗稳定性还不太令人满意,并且价格昂贵。专利“一种自乳化疫苗佐剂及其制备方法”(CN1679933A)公布了W/O/W型乳化剂,但其用到的有些原料较贵且不易得;同时乳化疫苗在田间试验时有副反应发生。专利“一种复方油佐剂及其制备方法和应用”(CN102813922A)公布的W/O/W型乳化疫苗,其稳定性在室温时不是太理想,因此不适于商业化应用。
所以开发稳定性好,免疫活性强和简单低廉的W/O/W性乳化剂具有极其重要的现实意义和市场价值。
发明内容
本发明旨在解决上面描述的问题。本发明的目的是提供一种水包油包水型乳化剂,通过简单易得的原料,经特定的配置比例,使制备出的乳化剂具有比以往同类乳化剂更好的稳定性,且价格低廉,适用于商业推广。
根据本发明的一个方面,提供一种水包油包水型乳化剂,该水包油包水型乳化剂包括以下组分和质量百分含量:
油相: 70~98wt%;
亲水性表面活性剂: 1~29wt%;
亲油性表面活性剂: 1~29wt%;
其中,所述亲水性表面活性剂包括聚乙二醇264单油酸酯、聚乙二醇400单油酸酯、聚乙二醇600单油酸酯中的一种或多种。
其中,油相包括白油或矿物油中的一种或两种;亲油性表面活性剂包括司盘60,司盘65,司盘80,甘露醇单油酸酯中的一种或多种。
其中,水包油包水型乳化剂还包括下述组分和质量百分含量:
助乳化剂: 0~3wt%。
其中,水包油包水型乳化剂包含下述组分和质量百分含量:
油相: 92~94wt%;
亲水性表面活性剂: 3~5wt%;
亲油性表面活性剂: 3~5wt%。
其中,水包油包水型乳化剂包含下述组分和质量百分含量:
油相: 75~90wt%,
亲水性表面活性剂: 3~10wt%
亲油性表面活性剂: 1~15wt%
其中,助乳化剂包括脂肪醇聚氧乙烯醚、吐温40、吐温60、吐温80中的一种或多种。
其中,水包油包水型乳化剂包括下述组分和质量百分含量:
根据本发明的另一个方面,提供一种该水包油包水型乳化剂的使用方法,具体包括以下步骤:
1)将所述水包油包水型乳化剂加热至25~35℃。
2)将加热后水包油包水型乳化剂与抗原水溶液混合搅拌,制得疫苗乳液。
其中,步骤2)包括:水包油包水型乳化剂与抗原水溶液的混合质量比为1~1.5:1。
根据本发明的第三个方面,提供一种该水包油包水型乳化剂的用途,具体包括本发明提供的乳化剂在制备动物疫苗中的应用。
本发明通过大量的实验发现,当表面活性剂选用本发明选用乙二醇(264,400,600)单油酸酯时,该乳化剂更易在体内被降解,并且不会引起副作用。探究其原因可能是因为,聚乙二醇(264,400,600)单油酸酯是脂肪酸在催化剂的作用下与环氧乙烷加成,形成的非离子表面活性剂。非离子表面活性剂溶于水时不发生解离,其分子中的亲油基团与离子型表面活性剂的亲油基团大致相同,但是其亲水基团主要是由具有一定数量的含氧基团(如羟基和聚氧乙烯链)构成。由于非离子表面活性剂在溶液中不是以离子状态存在,所以它的稳定性高,不易受强电解质存在的影响,也不易受酸、碱的影响。正是由于非离子表面活性剂具有在水中不电离的特点,决定了它在某些方面较离子型表面活性剂优越,如在水中和有机溶剂中都有较好的溶解性,因而该表面活性剂体系也更适用于配制复合型水包油包水型乳化佐剂。同时,该表面活性剂的疏水基脂肪酸链和不同长度的聚氧乙烯亲水基是由酯键相连接的,在体内容易被代谢降解,其生物兼容性好,会引起相对较小的副作用。
本发明的水包油包水型乳化剂具有以下有益效果:
(1)本发明通过选取合适的油相原料、亲水型表面活性原料、亲油型表面活性原料,并通过三者的合理配比,使制得的乳化剂具有超高的稳定性,进而使得制得疫苗溶液在室温下有良好的稳定性,并且经研究对比发现,本发明的乳化剂的稳定性与ISA206佐剂的稳定性相当,二者的稳定性均大于专利CN1679933A公开的自乳化疫苗佐剂;
另外,本发明还可通过加入与基础原料成分相适合的助乳化剂和助乳化剂含量,进一步强化自身的稳定性,进一步提升疫苗溶液的室温稳定性。
(2)经大量临床实验证明,本发明的水包油包水型乳化剂与进口产品ISA206具有相近的免疫活性。并且,本发明的乳化剂在临床实验中,无副反应发生,对比国内以往的水包油包水型乳化剂,具有更高的安全性,适用于市场推广。
(3)该水包油包水型乳化剂的各组分包括油相、亲水型表面活性剂、亲油型表面活性剂和助乳化剂的原料选择均不需进口,价格低廉,且容易得到,具有很高的商业价值,适用于商业推广。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
实施例1 乳化剂X1
乳化剂X1包括:矿物油88克;聚乙二醇400单油酸酯9克;甘露醇单油酸酯3克。
其使用方法包括以下步骤:
1)将乳化剂X1加热至30℃;
2)取加热后的乳化剂X130克放入200mL的烧杯中,另取35℃抗原(灭活的猪口蹄疫病毒)水溶液30克也加入到该烧杯中,加完后把烧杯置于机械搅拌器下,保持200转/每分钟的转速搅拌15分钟,使乳液均匀一致,即得到自制的疫苗乳化液1。
乳化剂X1的用途为:作为猪口蹄疫疫苗的佐剂。
实施例2 乳化剂X2
乳化剂X2包括:矿物油85克;聚乙二醇400单油酸酯9克;甘露醇单油酸酯3克,脂肪醇聚氧乙烯醚3克。
其使用方法包括以下步骤:
1)将乳化剂X2加热至35℃;
2)取加热后的乳化剂X2 45克放入200mL的烧杯中,另取15℃抗原(灭活的猪口蹄疫病毒)水溶液30克也加入到该烧杯中,加完后把烧杯置于机械搅拌器下,保持250转/每分钟的转速搅拌15分钟,使乳液均匀一致,即得到自制的疫苗乳化液2。
乳化剂X2的用途为:作为猪口蹄疫疫苗的佐剂。
实施例3 乳化剂X3
乳化剂X3包括:矿物油82克;聚乙二醇400单油酸酯9克;甘露醇单油酸酯3克,脂肪醇聚氧乙烯醚3克。
其使用方法包括以下步骤:
1)将乳化剂X3加热至30℃;
2)取加热后的乳化剂X3 40克放入200mL的烧杯中,另取20℃抗原(灭活的猪口蹄疫病毒)水溶液30克也加入到该烧杯中,加完后把烧杯置于机械搅拌器下,保持225转/每分钟的转速搅拌12分钟,使乳液均匀一致,即得到自制的疫苗乳化液3。
乳化剂X3的用途为:作为猪口蹄疫疫苗的佐剂。
本发明的乳化剂包括多种,因各组分的原料和质量百分含量的选取不同而不同,以下为表格形式的举例体现:
实验例1 稳定性检测
实验过程:对疫苗乳液1、疫苗乳液2、疫苗乳液3进行稳定性检测,采用使用法国的ISA206作为佐剂的疫苗乳液I作为实验的对照组。
检测结果:具体见表1~表3。
表1:自制疫苗乳化液和对照疫苗乳液的比较
表2:自制疫苗乳化液和对照疫苗乳液的4℃稳定性
表3:自制疫苗乳化液和对照疫苗乳液的室温(20~25℃)稳定性
静置时间 | 疫苗乳液1 | 疫苗乳液2 | 疫苗乳液3 | 疫苗乳液4 |
0天 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 |
3天 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 |
7天 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 | 均匀一致 |
10天 | 有分层 | 均匀一致 | 均匀一致 | 有分层 |
15天 | 有分层 | 均匀一致 |
由表1可知,加入本发明的水包油包水型乳化剂X1~X3的疫苗乳液1~3,与加入ISA206乳化剂的疫苗乳液I相比,具有相近的外观和黏度,由此推断出,加入本发明的水包油包水型乳化剂的疫苗乳液与加入ISA206乳化剂的疫苗乳液具有相近似的应用范围,适用于做成注射针剂或口服药剂。
由表2可知,在温度为4℃的条件下,加入本发明的水包油包水型乳化剂X1~X3的疫苗乳液1~3,与加入ISA206乳化剂的疫苗乳液I相比,稳定性接近,并且稳定性均能保持12个月以上。
由表3可知,在20~25℃的室温下,疫苗乳液1的稳定性与疫苗乳液I的稳定性相同,疫苗乳液2和3的稳定性要明显好于疫苗乳液I的稳定性,事实上,通过大量的实验数据表明,加入本发明的乳化剂的疫苗乳液,在20~25℃的室温下,好于或等于加入ISA206乳化剂的疫苗乳液的稳定性。
实验例2 疫苗活性检测
实验过程:用实施例1和实施例3中分别制得的疫苗乳液X1和疫苗乳液X3进行活性检测实验,使用加入ISA206乳化剂的疫苗乳液I作为对照组,依照《猪口蹄疫O型灭活疫苗质量标准》,分别对5头猪进行免疫肌肉注射,通过观察动物免疫后的临床表现及监测免疫后28天抗体水平,对其安全性及效力进行评价。
检测结果:具体见表4。
备注:抗体滴度以血清稀释度的倒数表示。
由表4可知,注射了疫苗乳液1、疫苗乳液3和疫苗乳液I的猪只均未见因注射引起的死亡或明显的局部不良反应或全身反应,同时,均未见口蹄疫症状或明显的因注射疫苗引起的毒性反应,也就是说加入了本发明的乳化剂的疫苗与加入了ISA206乳化剂的疫苗具有相同的安全性,均无副作用发生。
由表4还可知,疫苗乳液1的对猪只免疫后的ELISA抗体水平等于疫苗乳液I的猪只抗体水平,疫苗乳液3的对猪只免疫后的ELISA抗体水平高于疫苗乳液I的猪只抗体水平,事实上,通过大量的临床实验数据表明,加入本发明的乳化剂的疫苗乳液,其对猪只免疫后的ELISA抗体水平,全部大于或等于加入ISA206乳化剂的疫苗乳液的猪只免疫抗体水平。
综上所述,本发明的一种水包油包水型乳化剂,配方简单、原料易得,且制成的疫苗乳液稳定性更好,并具有良好的免疫原性。
最后应说明的是:在本文中,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包含一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个…”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制。尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (1)
1.一种水包油包水型乳化剂作为佐剂在制备猪口蹄疫疫苗中的应用,其特征在于,所述水包油包水型乳化剂的组分含量如下:
矿物油 82克;
聚乙二醇400单油酸酯 9克;
甘露醇单油酸酯 3克;
脂肪醇聚氧乙烯醚 3克。
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