CN103751779A - O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂及其制备方法,该凝胶佐剂包括19~23g泊洛沙姆407、1~8g泊洛沙姆188以及水。制备方法是将泊洛沙姆407与泊洛沙姆188加入部分去离子水,冷藏静置至完全溶解,加入剩余去离子水,临用前,添加O型口蹄疫多肽抗原,使其浓度达到50μg/mL,摇匀。本发明制备的泊洛沙姆凝胶佐剂具有高的免疫学性能及良好的体外缓释性能。
Description
技术领域
本发明涉及一种O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂,属于药剂领域。
背景技术
泊洛沙姆是一类由聚氧乙烯(PEO)、聚氧丙烯(PPO)组成的PEO-PPO-PEO型非离子三嵌段共聚物,已被美国和欧洲药典收录,已注册的商品名有Pluronic,Synperonic或Tetronic。当泊洛沙姆水溶液的浓度处于某一临界值之上之后,随着温度的上升,表现出溶胶-凝胶(低温溶胶-凝胶边界)和凝胶-溶胶(高温凝胶-溶胶边界)的转变,凝胶相在两临界转变温度之间出现,转变温度依聚合物组成和浓度而异。
泊洛沙姆温敏凝胶具有很多优点,包括良好的生物相容性、顺应性和缓控释能力,和较高的安全性,泊洛沙姆188的急性毒性试验表明其LD50(小鼠,iv)达到1g/kg,大鼠为7.5g/kg,对家兔进行为期14天的静脉注射(0.5g/kg·d)未见明显不良反应。温度敏感原位凝胶给药体系经液体形式注射,在注射部位形成药物储库,达到缓慢释放药物的目的。现有研究多应用于药物制剂,滴眼剂,栓剂,凝胶剂等,在生物制品上的应用报道较少,尤其是兽医上应用目前国内未见报道。
近年来,我国在多肽类抗原药物的研究有了较大的发展,多肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列,通过化学合成技术制备的疫苗。多肽疫苗由于完全是合成的,不存在毒力回升或灭活不全的问题。由于多肽疫苗价廉、安全、特异性强、容易保存和应用的优点,越来越受到重视,但也因其免疫原性差、功效低以及半衰期短等不足影响了免疫效果。Freund等首次报道油乳佐剂具有增强疫苗免疫活性的作用,有人发现矿物油制成的佐剂可刺激机体产生更高的抗体水平,其中使用较多的是弗氏完全佐剂(FCA)和弗氏不完全佐剂(FIA)。弗氏完全佐剂是矿物油和乳化剂形成W/O乳液后,再加入灭活的分支杆菌;弗氏不完全佐剂是在弗氏完全佐剂中未加分支杆菌成分。两种佐剂因具有高度活性被应用于科研工作中,但其较大的毒副反应(包括溃疡、肉芽肿、发热等)限制了其在临床上的应用;AS02佐剂是含有MPL和QS-21的乳剂,可诱导强烈的抗体应答、Th1型和CTL应答。临床试验表明,AS02佐剂在结核、乙肝、癌症、疟疾和HIV疫苗中的主要副反应包括全身寒战、肌痛、头痛和局部疼痛,而且在疟疾疫苗的临床试验中发现对儿童可产生良好的持续性抗体应答。整体而言,油乳佐剂虽然具有增强疫苗免疫活性的功能,但毒副作用大,对机体的刺激性强,容易引起炎症反应及其他不良反应,需要改善。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂,具有高的免疫性性能及具有良好的缓慢释放性能。
为解决上述技术问题,本发明是这样实现的:
一种O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂,其特征在于包括以下组份:
泊洛沙姆407 19~23g
泊洛沙姆188 1~8g
水 加至100mL。
制备方法如下:称量去离子水,将泊洛沙姆407与泊洛沙姆188加入去离子水适量,4℃静置24h,加入去离子水至所需比例,临用前,添加O型口蹄疫多肽抗原,使其浓度达到50μg/mL,摇匀。
1、本发明申请采用泊洛沙姆作为疫苗佐剂,具有较好的生物相容性及安全性,将两种不同规格的泊洛沙姆进行配比,调节凝胶的胶凝温度和粘度,可以产生不同程度的免疫效果,试验中发现,粘度较高的高配比佐剂激发的免疫效果更好。采用冷溶法制备泊洛沙姆温敏凝胶,通过调整泊洛沙姆407和泊洛沙姆188用量比例控制其稳定性和胶凝温度,获得胶凝温度为33.0±2.0℃的泊洛沙姆温敏凝胶溶液;
2、建立无膜溶出模型,采用测重法对泊洛沙姆温敏凝胶的体外溶蚀情况进行检测,并采用BCA蛋白浓度检测试剂盒对泊洛沙姆温敏凝胶的体外多肽释放情况进行测定,结果显示,在8h时的蛋白释放度已达到全部蛋白水平的90%。
3、将泊洛沙姆温敏凝胶包裹O型口蹄疫多肽疫苗,对Wistar大鼠进行免疫,于3-8周采用ELISA检测免疫后抗体产生情况,抗体效价最高能够达到29,而商品化油佐剂对照组为210。
总体而言,本申请制备了O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂,延长了泊洛沙姆在体内的多肽释放时间、提高了O型口蹄疫多肽疫苗的免疫效价。
附图说明
图1为实施例2所制备的泊洛沙姆温敏凝胶体外蛋白释放曲线;进行释放度试验时设定恒温摇床的温度为37℃,转速为200rpm,在一50mL离心管中,先将2mL含有口蹄疫多肽的凝胶加入到离心管底部放置0.5h,待凝胶完全胶凝后在凝胶上层小心加入20mL的同温水,分别在0.5,1,2,4,8,12,18,24h取上层水0.5mL,缓慢补充0.5mL的同温水。由图1可见,在8h时的蛋白释放度已高于全部蛋白水平的90%。
图2是所得泊洛沙姆凝胶佐剂的免疫学试验结果图,由图2可见,阳性对照组抗体效价较高,在6-8周达到了210;实施例1组与实施例2组的血清抗体效价低于阳性对照组,且在6-8周时抗体效价从25-210不等。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步的详细说明。
O型口蹄疫多肽抗原(由申联生物医药(上海)有限公司提供),浓度7.88mg/mL;泊洛沙姆407和泊洛沙姆188(购于巴斯夫(中国)有限公司)。
实施例1至5制备泊洛沙姆凝胶佐剂所采用的原料用量如表1:
表1
实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | |
泊洛沙姆407/g | 1.9 | 2.3 | 2.0 | 2.1 | 2.2 |
泊洛沙姆188/g | 0.1 | 0.8 | 0.3 | 0.5 | 0.6 |
去离子水/mL | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
临界胶凝温度/℃ | 34.8 | 34.9 | 34.9 | 34.2 | 35.0 |
37℃凝胶粘度/Pas | 794.3 | 422.1 | 526.4 | 628.7 | 798.6 |
25℃凝胶粘度/Pas | 21.31 | 0.111 | 12.17 | 24.59 | 21.71 |
制备过程:
称量10mL的去离子水,将泊洛沙姆407与泊洛沙姆188按比例加入去离子水中,4℃静置约24小时以形成凝胶溶液,待凝胶溶液完全澄清后,临用前,添加O型口蹄疫多肽抗原使其浓度达到50μg/mL,摇匀,静置。
采用试管倒转法测定凝胶佐剂的临界胶凝温度,采用流变仪测定凝胶佐剂的临界胶凝温度及相关流变学性质。
免疫学试验:
免疫动物:Wistar大鼠,3-4周龄,雌性(购于上海斯莱克实验动物有限责任公司);
组别设置:共设置4组实验组,每组各4只Wistar大鼠,按体重随机分组,给药方式是腹腔注射,具体如下:
阴性对照组:注射0.5mL注射用水;
阳性对照组:注射0.5mL市售油佐剂(O型口蹄疫多肽浓度为50μg/mL);
样品组:0.5mL实施例1(低配比凝胶)组、实施例2(高配比凝胶)制备的凝胶佐剂。
实验过程:分别于给药后的0、2、4、6、8周进行眼眶后静脉丛采血,离心取血清进行ELISA检测(Wistar大鼠O型口蹄疫ELISA检测试剂盒(购于中国农业科学院兰州兽医研究所)),检测结果如下:
由上表可见,阴性对照组未检出抗体,阳性对照组抗体效价较高,在6-8周达到了210;实施例1组与实施例2组的血清抗体效价低于阳性对照组,且在6-8周时抗体效价从25-210不等。结果显示,O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂能够诱导Wistar大鼠产生较高的抗体水平,于6-8周时抗体效价达25-210不等,但低于O型口蹄疫多肽的油佐剂抗体效价水平。
上述具体实施方式不以任何形式限制本发明的技术方案,凡是采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案均落在本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂,其特征在于包括以下组份:
泊洛沙姆407 19~23g
泊洛沙姆188 1~8g
水 加至100mL。
2.权利要求1所述的O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝胶佐剂制备方法,其特征在于步骤如下:将泊洛沙姆407与泊洛沙姆188加入部分去离子水,冷藏静置至完全溶解,加入剩余去离子水,临用前,添加O型口蹄疫多肽抗原,使其浓度达到50μg/mL,摇匀。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106853246A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-06-16 | 中国兽医药品监察所 | 一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗 |
CN107233298A (zh) * | 2016-03-28 | 2017-10-10 | 复旦大学 | 一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂 |
CN111840214A (zh) * | 2020-08-21 | 2020-10-30 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的温敏型水凝胶佐剂、制备方法及其应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1377706A (zh) * | 2002-04-22 | 2002-11-06 | 沈阳药科大学 | 具有适宜相转变温度的眼用原位凝胶制剂 |
CN101184501A (zh) * | 2005-04-15 | 2008-05-21 | 梅瑞尔有限公司 | 新的疫苗制剂 |
CN101444477A (zh) * | 2009-01-06 | 2009-06-03 | 中国药科大学 | 阿奇霉素眼用即型凝胶及其制备方法 |
CN102026623A (zh) * | 2008-05-14 | 2011-04-20 | 奥德纳米有限公司 | 用于治疗耳部病症的控制释放皮质类固醇组合物和方法 |
CN102307569A (zh) * | 2009-02-06 | 2012-01-04 | 泰勒麦迪克斯公司 | 适于局部给药的包含咪唑喹啉(胺)及其衍生物的药物组合物 |
-
2014
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1377706A (zh) * | 2002-04-22 | 2002-11-06 | 沈阳药科大学 | 具有适宜相转变温度的眼用原位凝胶制剂 |
CN101184501A (zh) * | 2005-04-15 | 2008-05-21 | 梅瑞尔有限公司 | 新的疫苗制剂 |
CN102026623A (zh) * | 2008-05-14 | 2011-04-20 | 奥德纳米有限公司 | 用于治疗耳部病症的控制释放皮质类固醇组合物和方法 |
CN101444477A (zh) * | 2009-01-06 | 2009-06-03 | 中国药科大学 | 阿奇霉素眼用即型凝胶及其制备方法 |
CN102307569A (zh) * | 2009-02-06 | 2012-01-04 | 泰勒麦迪克斯公司 | 适于局部给药的包含咪唑喹啉(胺)及其衍生物的药物组合物 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ROBERT L HUNTER: "Overview of vaccine adjuvants: present and future", 《VACCINE》, 31 May 2002 (2002-05-31), pages 9, XP004361367, DOI: doi:10.1016/S0264-410X(02)00164-0 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107233298A (zh) * | 2016-03-28 | 2017-10-10 | 复旦大学 | 一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂 |
CN107233298B (zh) * | 2016-03-28 | 2021-01-22 | 复旦大学 | 一种促进蛋白多肽药物口服吸收的酵母细胞壁微粒制剂 |
CN106853246A (zh) * | 2017-01-16 | 2017-06-16 | 中国兽医药品监察所 | 一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗 |
CN106853246B (zh) * | 2017-01-16 | 2020-01-21 | 中国兽医药品监察所 | 一种布鲁氏菌病温敏凝胶剂型疫苗 |
CN111840214A (zh) * | 2020-08-21 | 2020-10-30 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的温敏型水凝胶佐剂、制备方法及其应用 |
WO2022036885A1 (zh) * | 2020-08-21 | 2022-02-24 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的温敏型水凝胶佐剂、制备方法及其应用 |
CN111840214B (zh) * | 2020-08-21 | 2022-03-15 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的温敏型水凝胶佐剂、制备方法及其应用 |
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