CN103392595A - 一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，涉及马铃薯试管署的培育方法。包括以下步骤：（1）在MS液体培养基中加入含量为10%的糖，1%的活性炭，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；（2）将准备诱导的脱毒苗切段放入MS培养基中，培养15～25d，培养室温度20～26℃，光照强度为2500～3000Lux，光照时间12h/d；（3）当脱毒苗切断长到7～10cm的时候，将灯光关掉，在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。本发明降低了诱导试管薯的成本；无需加入激素、不用物理等诱导方式诱导结薯；可显著提高结薯率，平均每株脱毒苗结薯2～3粒。

Description

一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法

技术领域

本发明涉及马铃薯试管署的培育方法，具体涉及一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法。

背景技术

马铃薯试管薯是指在培养瓶内通过诱导，于试管苗叶腋间形成的直径为2—10毫米大小的块茎。试管薯不仅保持了试管苗的所有优点，而且由于体积小、重量轻，繁殖期间杜绝了外来病菌的再次侵染，具有贮藏、运输、种植方便的优点。因此，马铃薯试管薯的诱导与生产，对于马铃薯种质保存、种子交换、脱毒苗繁殖等方面都有重要意义。

在诱导试管薯中延长生长调节物质的使用，尤其是生长激素可能造成薯体改变和其它有害作用。生长激素除了使外植体和试管薯发育的内源激素不平衡外，还导致了试管薯的芽眼减少，皮孔变大，周皮变薄，延长和不规则休眠等反常现象。所以人们尝试发展无生长激素的试管薯诱导体系，这个体系本质是建立在蔗糖和各种光周期联合诱导效果上的。然而这个系统未被证明能够像使用细胞分裂素那样对于试管薯是可以多产的。

低剂量辐射已经被报道在离体条件下用来刺激植物的生长。因为2．5Gy是低剂量辐射，所以在提高试管薯诱导时不会带来有害的遗传变异。辐射增加了试管薯的数量但并没有影响试管薯的重量和发芽能力，所以在离体条件下低剂量伽马辐射的应用对于试管薯的产量是非常有利的。研究中2．5Gy的伽马辐射增加了试管薯的产量，比对照多38％。

高温促使的马铃薯减产可能归结于增加了其呼吸作用，抑制了光合作用以及把损失的块茎中的干物质转移到了茎和叶上了。在高温条件下(28℃)对照植株没有试管薯的形成，而辐射的植株则有试管薯的形成，虽然发生的频率很低。经高温诱导的试管薯形状变异，但是在田间表现正常的萌发。

激素调节块茎诱导的一个新颖途径是利用外来基因改变转基因植物，产生一个类似激素的效果来影响常规的激素作用。ml基因能够引起植物中基因的明显改变。这种基因的作用也就是mlB，c分别与生长素和细胞分裂素的作用类似。发现rolB，c编码的蛋白质在离体条件下能够水解改变生长素和细胞分裂素。然而 ml基因作用的确切机理仍然不明确。数据表明rolB，c基因能明显的改变细胞对IAA和细胞分裂素的灵敏性。结果表明，植物激素能很大的影响块茎诱导的参数，KT主要作用于块茎的起始因此增加块茎的数量，而生长素主要强化块茎的生长，导致产生加大的块茎。因此不同的块茎诱导阶段被植物激素所不同的调控。但是这些影响都很大程度的依赖于蔗糖的浓度和马铃薯的基因型。例如，植物激素在一些马铃薯品种上对块茎产量的作用是在低糖培养基中起诱导作用，在中间浓度起刺激作用，在高糖时起抑制作用。

综上所述，现有的马铃薯试管薯诱导存在高成本、高技术含量等不利于广泛推广的难点，在培养基中加入激素诱导试管薯是否存在质量安全等问题尚未有明确报道，这些是目前试管薯诱导存在的问题。

发明内容

本发明是为了解决现有技术存在的上述缺陷，而提供了一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，包括以下步骤：

（1）在MS液体培养基中加入含量为10%的糖，1%的活性炭，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

（2）将准备诱导的脱毒苗切段放入MS培养基中，培养15～25d，培养室温度20～26℃，光照强度为2500～3000Lux，光照时间12h/d；

（3）当脱毒苗切断长到7～10cm的时候，将灯光关掉，在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。

 本发明方法采用增加糖份含量，采用液体培养基培养，对诱导试管薯采用半黑暗条件下培养，10～15d后开始结小薯，经过大量试验证明，单株最高结薯为3粒，平均每株脱毒苗结薯2粒，可显著增加诱导结薯的几率。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

（1）降低了诱导试管薯的成本；

（2）无需加入激素、不用物理等诱导方式诱导结薯；

（3）可显著提高结薯率，平均每株脱毒苗结薯2～3粒。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1   以“黑美人”马铃薯品种进行试验

马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，包括以下步骤：

选用培养基均为MS液体培养基+10%糖+1%活性炭进行增殖培养，培养基pH为5.8，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

将准备诱导的脱毒苗切段放入制备好的MS培养基中，放到培养架上培养15d，培养室温度25℃，光照强度为3000Lux，光照时间12h/d； 

脱毒苗长到7～10cm的时候，将灯光关掉，放置在空余培养架上培养，放置在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。单株最高结薯为3粒，平均每株脱毒苗结薯2粒。

实施例2   以“黑美人”马铃薯品种进行试验

马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，包括以下步骤：

选用培养基均为MS液体培养基+10%糖+1%活性炭进行增殖培养，培养基pH为5.9，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

将准备诱导的脱毒苗切段放入制备好的MS培养基中，放到培养架上培养22d，培养室温度26℃，光照强度为2500Lux，光照时间12h/d； 

脱毒苗长到7～10cm的时候，将灯光关掉，放置在空余培养架上培养，放置在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。单株最高结薯为3粒，平均每株脱毒苗结薯2粒。

实施例3   以“克新1号”马铃薯品种进行试验

马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，包括以下步骤：

选用培养基均为MS液体培养基+10%糖+1%活性炭进行增殖培养，培养基pH为5.7，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

将准备诱导的脱毒苗切段放入制备好的MS培养基中，放到培养架上培养20d，培养室温度23℃，光照强度为2800Lux，光照时间12h/d； 

脱毒苗长到7～10cm的时候，将灯光关掉，放置在空余培养架上培养，放置在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。单株最高结薯为3粒，平均每株脱毒苗结薯2粒。

实施例4   以“克新1号”马铃薯品种进行试验

马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，包括以下步骤：

选用培养基均为MS液体培养基+10%糖+1%活性炭进行增殖培养，培养基pH为5.8，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

将准备诱导的脱毒苗切段放入制备好的MS培养基中，放到培养架上培养25d，培养室温度20℃，光照强度为2800Lux，光照时间12h/d； 

脱毒苗长到7～10cm的时候，将灯光关掉，放置在空余培养架上培养，放置在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。单株最高结薯为3粒，平均每株脱毒苗结薯2粒。

结果显示，经过无激素高糖份液体培养基诱导试管薯，其结薯率可以达到80%，并且污染率<1%，避免了由于填加激素而重复开盖2次造成培养基污染，降低了诱导成本，相对简化了诱导条件，可简便的大量诱导试管薯。

试验证明：对“黑美人”和“克新1号”马铃薯品种进行的试验，在采用高糖份液体培养基诱导试管薯时，其结薯率可达80%以上，平均每株结薯在2粒，不仅增加了结薯率还增加了结薯量，对实际生产具有很大的影响。

Claims (1)

1.一种马铃薯脱毒苗试管薯的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在MS液体培养基中加入含量为10%的糖，1%的活性炭，不加琼脂，加入滤纸做搭桥，高温灭菌后放入培养基储备室放置两天，制得MS培养基；

（2）将准备诱导的脱毒苗切段放入MS培养基中，培养15～25d，培养室温度20～26℃，光照强度为2500～3000Lux，光照时间12h/d；

（3）当脱毒苗切断长到7～10cm的时候，将灯光关掉，在半黑暗条件下以自然光为光源，10～15d后开始结小薯。