CN101336612B - 一种马铃薯试管苗集群式切段繁殖方法 - Google Patents

一种马铃薯试管苗集群式切段繁殖方法 Download PDF

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Abstract

一种马铃薯试管苗集群式切段繁殖方法，其特点是：配制简化MS培养基，再加琼脂粉6克/升，蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；在无菌工作台上，一次取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.3-1.5倍；将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放；将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；重复上述步骤直至所需要的量。

Description

一种马铃薯试管苗集群式切段繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种马铃薯的繁殖方法，特别是一种马铃薯试管苗的繁殖方法。
背景技术
马铃薯是重要的粮食作物之一，我省马铃薯的种植面积在常年100万亩以上，是第三大种植作物。在过去，马铃薯生产长期以来一直受“马铃薯退化”的影响，新品种的优良种性不断丧失，导致马铃薯产量长期低下，品质也得不到保证。随着马铃薯脱毒技术的推广应用，这个问题才根本上逐渐得以解决。但是脱了毒的马铃薯在大田生产中很容易再次感染病毒，表现出“退化”现象，三代以后即不能再作为种子使用。这就要求必须持续提供脱过毒的马铃薯试管苗，为整个马铃薯生产源源不断地提供优质的马铃薯脱毒种薯。马铃薯脱毒苗繁殖技术是马铃薯脱毒种薯生产技术基础，无论是在隔离网棚还是在隔离温室，生产马铃薯脱毒原原种都需要提供大量的脱毒试管苗。传统的马铃薯试管苗生产采用单株试管苗单节切段繁殖技术，一般每次取一株试管苗，放培养皿内，依节间切成小段，再放入培养瓶(皿)中，每个培养瓶内放约30个切段；一般每个培养瓶中，需要切6株试管苗、切30次才能完成一瓶。每切一株试管苗，就必须对剪切工具进行一次灭菌处理。切成小段的试管苗在培养皿内的培养基上，再进行扩大培养，从而完成马铃薯试管苗的繁殖。这种方法操作烦琐，效率低，成本高；严重制约试管苗繁殖效率，影响脱毒马铃薯在马铃薯生产中的大面积推广应用。
发明的内容
本发明的目的是要提供一种生产效率高、操作次数少、成本低、种苗受污染的几率也低的马铃薯试管种苗繁殖方法。
本发明的技术方案是：a.基础苗培养：马铃薯试管苗在20-22℃，16小时光照/8小时暗培养的条件下培养22-25天，每个试管苗长到5-6片叶子；
b.配制培养基：配制简化MS培养基，即只含大量元素和微量元素成分的MS培养基，加琼脂粉6克/升，蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；取出平置，冷却凝固，待用；
c.集群切段：在无菌工作台上，一次性用消过毒的镊子取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.3-1.5倍；
d.茎段摆放：切完一瓶基础苗后，用消过毒的镊子将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放，使每个茎段均匀分散平摆在培养基上，封口；
e.培养：将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；
f.再次切段繁殖：重复步骤b-e，直至所需要的量。
本发明具有如下的优点和效果：1、由于是将全部试管苗一次全部拿出进行切段，而不是一根一根地切段，所以效率大幅度提高。如果，一次处理30根试管苗，则效率可提高30倍。2、由于是将试管苗一次切入培养瓶中，茎段的摆放也仅仅是个别调整而已。而不是将茎段一个一个地放入瓶中，也大大提高了效率。3、由于一次成批处理多根试管苗，所以大大减少了对操作工具的灭菌次数。如果一次处理30根试管苗，则切30根试管苗才对操作工具进行一次灭菌处理，而现有技术，每处理1根试管苗，就要对操作工具灭菌一次。同时，相比于现有技术还大大减少了试管苗染菌的几率。最后，由于效率的提高使得人力资源得到节省，也就降低了成本。灭菌次数的减少，也降低了成本。
具体实施方式
实施例1、马铃薯青薯9号脱毒试管苗繁殖
a.基础苗培养：马铃薯试管苗在20-22℃，16小时光照/8小时暗培养的条件下培养22-25天，每个试管苗长到5-6片叶子；每瓶约30根苗；
b.配制培养基：配制简化MS培养基，即只含大量元素和微量元素成分的MS培养基，加琼脂粉6克/升、蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；取出平置，冷却凝固，待用；
c.集群切段：在无菌工作台上，一次性用消过毒的镊子取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.5倍；
d.茎段摆放：切完一瓶基础苗后，用消过毒的镊子将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放，使每个茎段均匀分散平摆在培养基上，封口；
e.培养：将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；
f.再次切段繁殖：重复步骤b-e，直至所需要的量。
结果显示，培养25天后每瓶培养基上的苗子平均为30根，生长正常，茎粗，株高、叶片数、根长等生长指标与同期用传统方法繁殖培养的苗子没有显著差异。
实施例2、马铃薯青薯2号脱毒试管苗繁殖
a.基础苗培养：马铃薯试管苗在20-22℃，16小时光照/8小时暗培养的条件下培养22-25天，每个试管苗长到5-6片叶子；每瓶约30根苗；
b.配制培养基：配制简化MS培养基，即只含大量元素和微量元素成分的MS培养基，加琼脂粉6克/升、蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；取出平置，冷却凝固，待用；
c.集群切段：在无菌工作台上，一次性用消过毒的镊子取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.3倍；
d.茎段摆放：切完一瓶基础苗后，用消过毒的镊子将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放，使每个茎段均匀分散平摆在培养基上，封口；
e.培养：将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；
f.再次切段繁殖：重复步骤b-e，直至所需要的量。
结果显示，培养25天后每瓶培养基上的苗子平均为30根，生长正常，茎粗，株高、叶片数、根长等生长指标与同期用传统方法繁殖培养的苗子没有显著差异。
实施例3、炸片型马铃薯大西洋品种脱毒试管苗繁殖
a.基础苗培养：马铃薯试管苗在20-22℃，16小时光照/8小时暗培养的条件下培养22-25天，每个试管苗长到5-6片叶子；每瓶约30根苗；
b.配制培养基：配制简化MS培养基，即只含大量元素和微量元素成分的MS培养基，加琼脂粉6克/升、蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；取出平置，冷却凝固，待用；
c.集群切段：在无菌工作台上，一次性用消过毒的镊子取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.5倍；
d.茎段摆放：切完一瓶基础苗后，用消过毒的镊子将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放，使每个茎段均匀分散平摆在培养基上，封口；
e.培养：将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；
f.再次切段繁殖：重复步骤b-e，直至所需要的量。
结果显示，集群式切段繁殖的马铃薯试管苗生长指标与传统方法繁殖的试管苗的生长指标间没有显著差异，单人切断繁殖效率是传统方法的6倍。

Claims (1)

1.一种马铃薯试管苗集群式切段繁殖方法，其特征在于：
a.基础苗培养：马铃薯试管苗在20-22℃，16小时光照/8小时暗培养的条件下培养22-25天，每个试管苗长到5-6片叶子；
b.配制培养基：配制简化MS培养基，即只含大量元素和微量元素成分的MS培养基，加琼脂粉6克/升，蔗糖30克/升，调节pH值为5.8；分装到培养瓶中，放入高压灭菌锅在121℃下灭菌20分钟；取出平置，冷却凝固，待用；
c.集群切段：在无菌工作台上，一次性用消过毒的镊子取出培养瓶中的全部基础苗，用消过毒的剪刀，将取出的基础苗基本按其节间位置同时切断，切入准备好的培养瓶；每瓶基础苗切入4个新的培养瓶中；每个培养瓶放置的茎段为基础苗数的1.3-1.5倍；
d.茎段摆放：切完一瓶基础苗后，用消过毒的镊子将切入新的培养瓶中的茎段进行摆放，使每个茎段均匀分散平摆在培养基上，封口；
e.培养：将封口的培养瓶置于培养室进行培养；培养条件为20-22℃，16小时光照/8小时黑暗，培养22-25天；
f.重复步骤b-e；直至所需要的量。
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