CN1033914C - 葛根有效成份提取物的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种中草药葛根有效成分提取物的提取方法。该种提取物主要有效成分为异黄酮。将葛根原料经煎煮、过滤、滤液浓缩、酒沉、再次过滤、滤液回收乙醇得原浆,原浆经稀释或喷雾干燥制得葛根有效成分提取液(或粉)。该种提取物可用于防癌药物,其防癌效果显著,无毒副作用,成本低廉。
Description
本发明涉及一种中草药提取物的提取方法,特别是一种从中草药葛根中提取可作为防癌药物的有效成分提取物的提取方法。
自从七十年代后期至今,人们根据肿癌流行病学与肿癌发生发展的生物学特性,世界各国耗资数十亿美元进行了上万种防癌药物筛选与试验,但往往体外试验(试管试验)有效,体内试验(动物试验)就无效或抑癌率在30%以下,超过30%就认为有可能作为防癌药。而维生素类、激素类与少数微量或常量金属元素(如锌、硒、钙等)又无显著的防癌效果,且有的毒副作用大,成本高。有的流行病学家认为,未来十年人类癌症预防最有希望取得突破的领域是癌症的药物预防(化学预防),改善膳食与营养,控制职业致癌,停止吸烟。其中,癌症的药物预防是癌症防治药物的崭新领域。目前,治疗癌症的药物不少,但至今国内外尚无一个获得公认的防癌药物。
本发明的目的在于为人们提供一种可作为防癌药物,且效果好、无毒副作用、成本低的中草药防癌有效成分提取物的提取方法。
本发明的目的是通过以下措施来达到的。
(1)、R1=R2=R3=H时的大豆甙元,
(2)、R1=H,R2=吡喃葡萄糖,R3=CH3时的芒柄花甙,
(3)、R1=R3=H,R2=吡喃葡萄时的大豆甙,
(4)、=R2=R3=H,R1=吡喃葡萄糖时的葛根素,
(5)、R1=H,R2=R3=吡喃葡萄糖时的大豆甙元-4′,7-二葡萄糖甙。
本发明葛根有效成分提取物为液体(1ml提取液含0.5~1.5g葛根)时异黄酮含量为1-20%,提取物为粉末状固体时异黄酮含量为30-80%。
本发明葛根有效成分提取物的提取方法,是首先将葛根原料加水煎煮至有效成分被提出,过滤以滤去原料残渣,滤液浓缩至易于进行酒沉操作的程度,如果不浓缩,则酒沉时耗乙醇量太大。浓缩后浓缩液加入乙醇溶液进行酒沉,以除去浓缩液中的淀粉、树脂、多糖、蛋白等杂质。酒沉时以加入浓度为80-95%的乙醇溶液,控制每次滤液中乙醇含量在70-80%为宜,因含量高于80%,乙醇用量大,成本提高,低于70%,酒沉效果又不好。酒沉后的溶液在0-10℃低温下放置一定时间至沉淀完全(超过10℃乙醇易挥发:酒沉淀效果差,低于0℃又易结冰而将造成无法过滤)。酒沉后再次过滤,滤液回收乙醇至无醇味制得原浆。原浆经稀释或喷雾干燥制得葛根有效成分提取物(提取液或提取粉)。
本发明提取方法还可以通过以下措施来实现。
原料最好采用干燥葛根,先切成小块,去杂后加水煎煮不少于2次,过滤后滤液浓缩至原体积的1/3至1/5,加入乙醇溶液酒沉至少2次,酒沉时同样控制滤液中乙醇含量在70-80%,然后在0-10℃低温放置48-72小时。滤液回收乙醇至无醇味后按1ml提取液含葛根0.5-1.5g加水稀释,再在0-10℃低温放置至沉淀完全,过滤后即制得葛根有效成分提取液,简称901R(液)(以下同)。
本发明亦可将上述提取方法所制得之原浆或有效成分提取液经喷雾干燥制成粉末状固体——葛根有效成分提取粉,简称901R(粉)(以下同)。其喷雾干燥条件为喷入的空气予热至280℃±20℃,喷入的空气压力为3-6kg/cm2,干燥室内温度保持在120℃±20℃,高于以上温度,破坏提取物中的有效成分,低于以上温度则干燥效果差。
本发明所述葛根有效成分提取物,可作为防癌药物的用途。可将提取物制成各种剂型,按每人每天0.5-1.5克提取粉量服用,提取液用量可按提取粉用量折算。
本发明提取物经药理药化、流行病学与肿瘤病理等研究室多年的动物实验和临床前实验证明,不仅有十分显著的防癌效果,而且无毒副作用,现例举实验内容及结果如下。
实验1 901R对抗磷酰胺(CPA)所致的小鼠骨髓细胞微核增高实验
以昆明小鼠(雄性,体重200g±2g)进行实验,实验共设阴性对照(生理盐水)、阳性对照(CPA)、CPA与25g901R(液)/kg合用、CPA与10g901R(液)/kg合用四个组。均灌胃给药。
实验结果表明:阳性对照组小鼠骨髓细胞的微核率为19.9%,比阴性对照组微核率为2.8%有明显差异(P<0.001),而CPA与25g901R(液)/kg合用和CPA与10g901R(液)/kg合用的微核率分别为2.5%和7.0%,其微核率明显下降(P<0.05-0.01)。证明901.R.有很强的对抗CPA所致的骨髓细胞微核的增高作用。
实验2 901,R对化学致癌剂诱发小鼠前胃鳞状细胞癌的抑制作用实验
用肌氨酸乙脂盐酸盐与亚硝酸钠诱发NIH纯系小鼠的前胃鳞癌。于89-90年先后进行二次实验,并以不同剂量901,R(粉)给药以观察剂量效应,其第二次实验结果列表如下:
组别 | 给药方法 | 动物数(只) | 生癌例数 | X2 | P值 | |||||||
时间(天) | 剂量(g/kg) | 早期 | 晚期 | 总计 | 抑制率(%) | |||||||
只 | % | 只 | % | 只 | % | |||||||
对照组 | 0 | 0 | 40 | 14 | 35 | 6 | 15 | 20 | 50 | |||
901R(粉)-1 | 88 | 1 | 32 | 10 | 31 | 5 | 15 | 15 | 46 | 7 | 0.06 | >0.05 |
901R(粉)-2 | 88 | 3 | 36 | 3 | 8.0 | 3 | 8.3 | 6 | 16 | 66.8 | 9.35 | <0.005 |
901R(粉)-3 | 88 | 4 | 34 | 3 | 8.8 | 4 | 11 | 7 | 20 | 58.8 | 5.5T | <0.025 |
实验结果表明,901,R(粉)对亚硝胺致癌具有48.7-66.6%的抑制率,并呈现剂量效应关系,从而初步确定了有效的剂量浓度。
实验3 Ame′s法测定901,R的抗致突变法
该实验将901,R(粉)配制成每ml水溶液含2μg、5μg901,R(粉)的水溶液加入细菌培养基中,实验证明2μg901,R(粉)/ml和5μg901,R(粉)/ml均有明显的对抗由苯胼芘所致的细胞突变作用。
将含葛根有效成分提取物的药物用于食管癌高发区癌前病变人群中作11个月的连续用药,在用药前后分别进行的二次食管内镜活检病理检查中,发现其自身对照有45%的观察对象有明显改善(病变性质减轻或消失)。
将含葛根有效成分提取物的药物用于毒性实验和亚急性毒性实验,其结果也证明,本提取物可作为药物应用于临床,其大剂量长期使用也无积蓄毒性作用,无任何病理改变发生。
中草药葛根在我国山区广泛生长,目前还是一种滞销中草药,此种原生药价格低廉,资源充足,充分利用这一资源,无疑也为山区群众开辟致富途径,而且降低防癌药物成本。
下面结合实施例详细说明本发明。
实施例一。取切成小块的干燥葛根,捡去杂质和发霉物,加水煎煮2次,每次1小时,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5,加入浓度为80%的乙醇溶液酒沉2次,使每次滤液中含乙醇量在70%,在1℃低温放置72小时,待静置沉淀完全后过滤,滤液回收乙醇至无醇味,再加入蒸馏水,使1ml提取液中含0.5克葛根,10℃低温放置一天(水沉),经过滤即得异黄酮含量为1-20%的葛根有效成分提取液。
实施例二。将葛根原料切小块,经去杂、煎煮、过滤后,滤液浓缩至原体积的1/3,加入浓度为95%的乙醇溶液酒沉,使滤液中含乙醇量为80%。然后10℃低温放置48小时,其余操作条件同于实施例一。所得提取液经喷雾干燥即得极细的棕黄色粉末状固体-葛根有效成分提取粉,其总异黄酮合量为40-80%。喷雾干燥时,干燥室内温度120℃±10℃,喷入的热空气予热至280℃±7℃,喷入压力为3-6kg/cm2。
Claims (2)
(1)、R1=R2=R3=H时的大豆甙元,
(2)、R1=H,R2=吡喃葡萄糖,R3=CH3时的芒柄花甙,
(3)、R1=R3=H,R2=吡喃葡萄糖时的大豆甙,
(4)、R2=R3=H,R1=吡喃葡萄糖时的葛根素,
(5)、R1=H,R2=R3=吡喃葡萄糖时的大豆甙元-4′,7-二葡萄糖甙。其特征在于将葛根原料切块、去杂后加水煎煮不少于2次,煎煮液过滤后滤液浓缩至原体积的1/3至1/5,再加入乙醇溶液酒沉至少2次,控制滤液中乙醇含量在70-80%,然后在0-10℃低温下放置48-72小时,再次过滤,滤液回收乙醇至无醇味得原浆,原浆按1ml提取液含葛根0.5-1.5g加水稀释,再在0-10℃低温放置至沉淀完全,过滤后制得异黄酮含量为1-20%的葛根有效成分提取液。
2、根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于将原浆或葛根有效成分提取液经喷雾干燥制成粉末状固体(提取粉),其喷雾干燥条件为喷入的空气予热至280±20℃,喷入的空气压力为3-6kg/cm2,干燥室内温度保持在120℃±20℃,提取粉中异黄酮含量的30-80%。
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