CN1323678C

CN1323678C - 一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法

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Publication number: CN1323678C
Application number: CNB031485081A
Authority: CN
Inventors: 刘亚明; 冯前进; 牛欣
Original assignee: Shanxi Traditional Chinese Medical College
Current assignee: Shanxi Renyuantang Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2003-07-01
Filing date: 2003-07-01
Publication date: 2007-07-04
Anticipated expiration: 2023-07-01
Also published as: CN1565605A

Abstract

本发明公开了一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法。该组合物由葛根素、葡萄糖耐量因子组成。

Description

一种治疗糖尿病的药物组合物及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种药物组合物，特别涉及用于治疗糖尿病的药物组合物，同时涉及该组合物的制备方法。

背景技术

目前随着经济的全球化发展和人民生活方式的改变以及人口老龄化出现，糖尿(消渴)病患者(主要是II型糖尿病)的数量迅速增加，其发病率在全球范围内呈逐渐增高的趋势，尤其在发展中国家，增加的速度更快，呈现流行势态。糖尿病已成为全世界许多国家的常见病和多发病，其死亡率已居肿瘤、心血管病之后的第三位，是工业发达国家中仅次于癌症、艾滋病和心血管病之后需优先考虑的疾病。据国际糖尿病联盟(IDF)调查；10年前全世界糖尿病人口约4000万人，而在2000年已达近1.6亿。从1987年至1997年，我国也多次进行糖尿病普查，结果表明，糖尿病的总患病率呈快速增长之势。1987年的患病率仅6.09‰(标准化后为6.74‰)，1997年已经迅速增长至11.46‰(标准化后为10.67‰)；局部地区患病率最高达19.46‰(标准化后为12.41‰)。按照国际卫生组织(WHO)规定标准进行的为期10年的前瞻性研究结果显示，糖尿病患病率标准化后为12.64‰，其中糖耐量减低患病率为7.688‰每年糖耐量减低转化为糖尿病的比例为7.7％，与发达国家相比，我国糖尿病患病率较低，但我国人口较多(约占全世界的1/4左右)，将成为糖尿病患病增长最快的国家之一，预计到2010年糖尿病患者总数将居世界各国之首位。从而为糖尿(消渴)病的发生机理和防治药物的研制和开发提供了广阔的前景。

中医认为消渴病的发病机致在脏腑方面，以肾为本，肝脾并重，与肺、胃密切相关，气阴两虚是消渴病中最常见的基本病机，消渴病贯串于上中下，其脏腑病位，上焦在肺，中焦在脾胃，下焦在肝肾，而以肾为本。当消渴病后期，由于阴损及阳，阴阳两虚，则转化成消渴重症。由于血瘀证在糖尿病中具有普遍性，因而一些中西医家如施今墨、祝湛予等倡导气阴两虚及血瘀学说，但真正在临床上能够按照上述方法进行治疗的却甚少，因此通过从临床特征、病理生理基础、治法及方药等方面揭示糖尿病血瘀证的实质，确定中西医结合方法对糖尿病血瘀证的合理应用(活血化瘀和它法并用)，在目前有着重要的意义。

用传统中药防病治病在我国具有悠久历史。由于化学药品的毒副作用逐渐被人们所认识，而且合成一个新药又需巨大的投资，同时西药对威胁人类健康的常见病、疑难病的治疗还远远不能满足临床的需要，因此为本发明提供很好的机遇。

葡萄糖耐量因子(Glucose Tolerance Factor，简称GTF)与传统中医药的有机结合在防治糖尿病方面具有独特的优势：二十世纪五十年代，MertZW和Schwarz通过实验证明，铬缺乏大鼠出现糖耐量极度受损，流行病学研究结果也显示，在以精制食品为主的人群中，铬是唯一随着年龄增长而逐渐减少的微量元素，从而形成机体的铬缺乏状态。实验研究证明，GTF是一种以铬为活性中心的多种氨基酸的络合物。是机体糖、脂代谢的一个十分重要的调节因子，对于维持机体正常的糖耐量水平发挥重要作用。本研究结合国内外防治糖尿病和高血脂症研究的成果和临证实际应用经验，在合成目前已公认的用于糖尿病有效的葡萄糖耐量因子(GTF)的基础上，与治疗糖尿病的传统中药葛根的有效成分提取物葛根素形成一种新的物质——复方葛根胶囊，在迄今完成的基础和临床研究表明，该物质已取得良好的降糖和恢复胰岛功能以及降血脂等作用。虽然目前有GTF治疗糖尿病的有效报道，三价铬的不稳定性成为单纯合成酵母铬(GTF)不稳定的难题，使其很难单独形成产品满足患者的需求。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种新的治疗糖尿病的药物组合物；本发明的另一个目的在于公开制备一种新的治疗糖尿病的药物组合物的方法。本发明药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

葛根6-30 10⁶重量份葡萄糖耐量因子30-200 重量份。

优选：

葛根10-20 10⁶重量份葡萄糖耐量因子40-100 重量份。

本发明药物组合物的原料药组成及配比还可以是：

葛根素60-216 10³重量份葡萄糖耐量因子20-240重量份。

优选：

葛根素80-150 10³重量份葡萄糖耐量因子40-160重量份。

按药剂学方法，可以将上述本发明药物组合物制备成多种临床药物剂型，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂当中的一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。

本发明药物还可加入常规的药物赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂等。

本发明制成胶囊剂的制备方法为：醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根胶囊。

本发明组合物制剂具有降低血糖，改善胰岛细胞的功能，增强胰岛素受体的敏感性，改善人体葡萄糖耐量，对醛糖还原酶有明显抑制作用；还能扩张血管，改善微循环，降低血粘度，临床观察及动物实验已证明该药达到良好的降血糖作用，亦能降血脂、改善血液高凝状态，治疗微血管病变，预防治疗心脑、血管、肾、神经等慢性并发症的发生和发展。本发明组合物制剂药味简单，成分明确，安全可靠并有较好的降血糖和降血脂效果，除可预防糖尿病及其他相关的并发症外，也可以作为某些肿瘤、肥胖以及高血压人群的一级预防药物来使用。

本发明直接以葛根的提取物葛根素作为原料药，制剂精当，药力集中；最为重要的是，本发明制剂，使不稳定的GTF活性加强，使其趋于稳定，克服了国外单纯合成酵母铬(GTF)不稳定的难题。

以下实验例进一步说明本发明。

实验例1 本发明组合物制剂(复方葛根胶囊)对实验性糖尿病小鼠血糖的影响材料与方法

1 材料

1.1药物：复方葛根胶囊由葛根素和GTF(葡萄糖耐量因子)组成。山西省中医药研究院制剂中心提供，批号：021015。制为1.7％，0.85％混悬液；优降糖片2.5mg/片，天津太平洋制药有限公司生产，批号：020902。

1.2试剂：四氧嘧啶，由SIGMA公司提供，血糖试剂盒(氧化酶法)由科华公司提供。

1.3动物：昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，清洁级，动物合格证号：晋(动)证字第A00-001号，山西省中医药研究院实验动物中心提供。

1.4仪器：Alimypus Au6400全自动生化分析仪(日本产)。

2 方法

2.1对四氧嘧啶性糖尿病小鼠血糖的影响。

取小鼠70只，适应性喂养2d，随机抽取10只(雌雄各半)作为正常对照组，其余60只全部复制糖尿病模型。其造模参照方法^[1]：造模前动物禁食不禁水12小时，按200mg/kg腹腔注射新鲜配制的5％的四氧嘧啶生理盐水溶液。注射5d后，各鼠均出现糖尿病症状(多食，多饮，多尿，竖毛等)。从各鼠眼眶静脉丛取血测空腹血糖，选择16.7mmol/L＜BG＜26mmol的小鼠40只，随机分为四组，模型组，模型加复方葛根胶囊试验大、小剂量组，模型加优降糖阳性药对照组。试验大、小剂量组分别按成人临床剂量的20、10倍，ig予以复方葛根胶囊0.34，0.17g/kg；阳性药组ig优降糖5mg/kg；正常对照组和模型对照组ig予以等体积(0.2ml/10g)蒸馏水，每日1次，连续10天。各组动物末次给药后，禁食不禁水12h，眶后静脉丛取血在全自动生化分析仪上测定空腹血糖(FBG)。

2.2对四氧嘧啶性糖尿病小鼠糖耐量的影响。

按上2.1法复制四氧嘧啶糖尿病小鼠，共120只，分组、给药方法剂量同上，每组40只，连续给药5天后禁食3h，各组取10只立即测试血糖，以此血糖值为零时血糖，其余小鼠于禁食后4h ig葡萄糖2g/kg，给药后分别于30min，60min及120min时各组再分别取10只小鼠测血糖，参文献^[2]方法计算其血糖水平。

2.3统计学处理：采用t检验，数据以X±SD表示。

3 结果

3.1对血糖的影响见表1。表1结果表明，复方葛根胶囊能降低四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖含量，与模型组比较其差异有显著性意义(P＜0.01或P＜0.001)。实验发现复方葛根胶囊的大、小剂量组对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠空腹高血糖含量均有明显的降低作用。表1 复方葛根胶囊对糖尿病小鼠空腹高血糖含量的影响( X±SD，mmol/L)

组别	n	血糖值
		血糖值		0日	11日
		正常对照组模型组阳性药组葛根胶囊小剂量组葛根胶囊大剂量组	1010101010	0日	11日	4.83±0.7521.89±3.40^*21.79±3.20^21.12±3.51^21.59±3.71^*	4.72±0.7318.62±3.43^***9.82±3.0^△△△14.88±2.30^△△11.62±2.98^△△

注：与正常对照组比较：***P＜0.001；与模型组比较：^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001。

3.2对糖尿病小鼠糖耐量的影响见表2，复方葛根胶囊能显著提高糖尿病小鼠的糖耐量水平，与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.001)。

由此可见，复方葛根胶囊对葡萄糖引起的血糖升高有明显的降低作用。

表2 复方葛根胶囊对糖尿病小鼠糖耐量影响( X±SD，mmol)

组别	n	血糖值
		血糖值				0min	30min	60min	120min
		正常对照组模型组葛根胶囊小剂量组葛根胶囊大剂量组	10101010	5.16±0.9716.76±2.88^***12.90±2.50^△△11.60±2.03^△△△	5.74±0.9220.03±3.25^***15.12±3.09^△△14.36±1.85^△△△	0min	30min	60min	120min	5.27±0.8217.37±2.55^***13.21±3.15^△△12.04±2.61^△△△	5.29±0.6214.58±2.92^***11.09±2.29^△△11.36±1.96^△△

结论：实验结果表明，复方葛根胶囊能显著降低四氧嘧啶所致的小鼠高血糖水平和具有显著改善四氧嘧啶性糖尿病小鼠的糖耐量的作用。由于四氧嘧啶是选择性地破坏胰岛β细胞，由此可推测复方葛根胶囊能有一定的对抗四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤或修复被损伤的胰岛β细胞而发挥作用。

实验例2 复方葛根胶囊降血脂作用

1 材料

1.1药物：复方葛根胶囊由葛根素和GTF组成。山西中医药研究院制剂中心提供，批号：020817，血脂康胶囊0.3g/粒，北京北大维信生物科技有限公司生产。批号：021015，国药准字Z10950029。

1.2动物：Wistar雄性大鼠，体重100±15g，清洁级，合格证号：晋动(证)字第A00-002号，山西省中医药研究院实验动物室提供。

1.3造型高脂饲料：1％胆固醇、0.5％胆盐、0.2％甲基硫氧嘧啶、2％猪油、5％黄豆、2％蛋黄粉、1％鱼粉、基础饲料88.3％。将上述原料混匀加适量水于制料机上压成块状，烘干灭菌即得高脂饲料。

1.4仪器：Alinypus Au6400全自动生化分析仪(日本产)。

2.方法

取大鼠50只，随机分为5组，A组：正常对照组，饲以正常基础饲料；B组：高脂模型组，饲以高脂饲料；C组：阳性药对照组，高脂饲料喂养15天后，第16天开始每天ig给予血脂康胶囊0.2g/kg(相当人用量10倍)；D组和E组：复方葛根胶囊试验大、小剂量组，饲养高脂饲料15天后，两组分别ig给予复方葛根胶囊0.34g/kg(相当人用量的20倍)，0.17g/kg(相当人用量的10倍)；A、B组也均于第16日ig予以等体积蒸馏水10ml/kg.d。高脂饲料连续喂养4周，连续2周ig给药，于末次给药后禁食12h，次日上午，乙醚麻醉下开胸心脏取血，采用酶法测定TG、TC、HDL-C、LDL-C、HDL-C/TC。

3.数据统计处理

以SPSS软件进行均值比较分析，采用ANOVA方法以LSD方式进行多重比较。

4.结果见表3。

表3显示，复方葛根胶囊具有明显的降脂作用，并有明显提高HDL-C水平的作用。

表3复方葛根胶囊对血脂含量的影响( X±SD，mmol/L)

组别	n	TG	TC	HDL-C	LDL-C	HDL/TC
组别	n	TG	TC	HDL-C	LDL-C	HDL/TC	正常对照组模型组阳性药组葛根胶囊小剂量葛根胶囊大剂量	1010101010	1.25±0.512.40±0.27^***1.37±0.54^△△△1.73±0.77^△1.50±0.75^△△	3.44±0.776.61±1.28^***3.29±0.97^△△△374±0.61^△△△3.38±0.66^△△△	1.37±0.140.90±0.22^***1.39±0.42^△△1.15±0.26^△1.21±0.56	2.37±0.822.34±0.932.09±0.742.49±0.582.29±0.73	0.39±0.140.21±0.06^**0.45±0.17^△△△0.31±0.07^△△△0.36±0.13^△△△

注：与正常对照组比较，**P＜0.01，***P＜0.001，与模型组比较：^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001。

5.结论

已有学者认为，在糖尿病与高脂血症的关系中，由于长期明显增高的TG与葡萄糖竞争进入细胞内，造成了机体的胰岛素抵抗，高TG血症通过游离脂肪酸(FFA)干扰了胰岛素在周围组织中与受体的结合。复方葛根胶囊能显著降低(甘油三脂)TG、(总胆固醇)TC、(低密度脂蛋白)LDL-C，并且明显提高HDL-C和HDL/TC，因此具有良好的降脂效果，

实验例3 复方葛根胶囊对小鼠肝脏胰岛素受体基因表达的影响

复制成功的糖尿病动物模型，糖尿病动物的胰岛素受体基因水平明显降低。为观察实验性糖尿病模型动物胰岛素受体基因表达变化。将随机分为空白对照组、模型加优降糖对照组(优降糖5mg/kg)、模型加复方葛根胶囊组(0.34g/kg)和正常对照共四组的实验动物肝组织快速取出，采用分子生物学技术处理后肝组织的mRNA进行定量和RT-PCR扩增实验。首先选择了生物共有的高表达基因β₂-微球蛋白作为一个内标准和靶序列一起逆转录和扩增，通过RT-PCR后的凝胶电泳图进行分析。结果显示，经RT-PCR，GDS-8000光密度扫描后与对照组比较，复方葛根胶囊和优降糖有明显提高糖尿病动物受损的胰岛素受体基因mRNA水平，而且复方葛根胶囊优于优降糖。

实验例4 复方葛根胶囊治疗II型糖尿病临床观察

病例选择标准：西医诊断标准；按照1997年美国糖尿病协会(ADA)修改糖尿病诊断标准的建议和1999年10月我国糖尿病学会决定采纳新的诊断标准。中医辨证均参照国家卫生部1993年颁布《中药新药治疗糖尿病临床研究指导原则》中有关的内容制定。中医辨证主要是阴虚燥热兼有血瘀证。临床资料来源：山西中医学院第二中医院内分泌科门诊选择从2002年10月至2003年5月符合上述入选条件的II型糖尿病患者107例，按随机分为复方葛根胶囊试验组76例，消渴丸对照组31例。

观察指标：安全性观测有血、尿、便常规及心、肝、肾功能；疗效性观测有症状、体征及实验室生化指标FBG、PBG、HbAc、uALb、TC、TG、血粘度等。

5.3疗效判定标准：显效：治疗后症状基本消失，FBG＜7.2mol/L，餐后2h血糖＜8.3mol/L，24h尿糖定量＜10.0g；或血糖、24h尿糖定量值较治疗前下降30％以上；有效：治疗后症状明显改善，FBG＜8.3mol/L，餐后2h血糖＜10.0mol/L，24h尿糖定量＜25.0g；或血糖、24h尿糖定量值较治疗前下降10％以上；无效：治疗后症状无明显改善，血糖、尿糖下降未达上述标准者。

统计方法：计数资料用X2检验，计量资料用X检验。

结果。疗效性判断：复方葛根胶囊总有效率为96.1％，消渴丸治疗组总总有效率为80.6％，二组比较有显著性差异，P＜0.05；在主要症状改善和理化指标比较方面复方葛根胶囊均明显优于消渴丸对照组，P＜0.01；在安全性评价方面，复方葛根胶囊组治疗组血、尿、便三种常规检验及心、肝、肾功能无明显改变，结果表明复方葛根胶囊未见明显临床副作用及不良反应，安全性好。

实验例5 确定葡萄糖耐量因子

(1)材料：复方葛根胶囊(由山西省中医药研究院制剂中心提供)，Nicolet magna550型付氏红外光谱仪(美国)。

(2)测试条件和方法：ZYXY-1 KBr压片法，ZYXY-2涂膜法。光谱分辨率＝4CM^-1。扫描累加次数＝64 探测器＝DTGS。

结果见图1、图2。

实验例6 复方葛根胶囊的铬含量测定

材料和方法：氨基酸、醋酸铬购于北京宏大生物科技有限公司，复方葛根胶囊(由山西省中医药研究院制剂中心提供)，Atomscan16型电感等离子发射光谱仪(美国TJA公司)。结果见图3。

图1在1400-1616区域铬大量分布

图2在893-1616区域大量分布甘氨酸与尼克

图3复方葛根胶囊铬含量测定

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

实施例1 胶囊剂

葛根12,000g 葡萄糖耐量因子0.04g。

葛根经常制得葛根素100g，醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根胶囊1000粒。

实施例 2片剂

葛根20,000g 葡萄糖耐量因子0.06g。葛根经常制得葛根素120g，醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根片剂1000片。

实施例3 胶囊剂

葛根素80g 葡萄糖耐量因子0.04g。

醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根胶囊1000粒。

实施例4 片剂

葛根素160g 葡萄糖耐量因子0.150g。醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根片剂1000片。

实施例5 颗粒剂

葛根素80g 葡萄糖耐量因子0.04g。醋酸铬经处理的乙醇溶液(95％、70％)浸润及回流3h(搅拌)制出反应液1后，加入甘氨酸、谷氨酸、半胱氨酸等回流、搅拌后制出反应液2，再加入烟酸、葛根素后加热、回流、搅拌经抽滤形成沉淀物并过DOWEX柱，用3％NH₄OH洗脱，将洗脱液进行冷冻干燥后制成复方葛根颗粒剂。

Claims

1、一种治疗糖尿病的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

葛根素60-216 10³重量份葡萄糖耐量因子 20-240重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

葛根素80-150 10³重量份葡萄糖耐量因子 40-160重量份。

3、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由下述原料药制成的：

葛根素80 10³重量份葡萄糖耐量因子 40重量份。

4、如权利要求1、2或3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物加入常规的药物赋形剂制成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂或栓剂当中的一种。