CN1686404A - 一种调节免疫的参芪组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物，其含有党参黄芪提取物，其中提取物每1克中含总固体物不少于0.325克，该总固体物每1克中含总糖(以无水葡萄糖计)0.08－0.15克，总皂苷(以黄芪甲苷计)7－10毫克，黄酮苷5－8毫克。本发明还涉及这种药物组合物的制备方法，它包括下列步骤：a)将党参、黄芪除杂质，加工成饮片；b)按一定重量比称取党参和黄芪，用去离子水将其冲洗干净；c)根据称取的党参和黄芪的重量分次加入一定量的去离子水，加热提取1－3次，得到药物提取物；d)将药物提取物浓缩，得浓缩液，每毫升浓缩液中含1.0－1.5克生药；e)加入适量乙醇，常规沉淀，过滤，回收滤液中的乙醇并浓缩至干，即得党参、黄芪提取组合物。

Description

一种调节免疫的参芪组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有免疫作用，能够抗肿瘤的党参黄芪组合物及其制备方法。

背景技术

消化道恶性肿瘤为我国的高发肿瘤。由于难于及时发现，故早诊率较低，这不仅使该人群失去了宝贵的手术机会，而且由于机体邪盛正衰，气虚血瘀而致使机体免疫功能低下，不能耐受有效的化学药物治疗，近年来已成为临床上非常棘手的问题。

目前，恶性肿瘤的治疗方法有许多种，由于肿瘤的发生与发展与人体的免疫功能有十分密切的关系，尤其是与细胞免疫功能有着明显的关系，因此，在临床医学上一直希望寻找一种理想的免疫调节剂，用于提高全身的应激能力，维护化疗过程中机体的免疫活性，减少毒副作用，延长患者的生存期。众所周知，由于西药的治疗如环磷酰胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、顺铂或阿霉素等主要通过抑制肿瘤细胞的核酸或蛋白质的合成而抑制肿瘤细胞的生长，因此对正常机体细胞也有明显的毒副作用，从而导致机体出现一些症状如恶心、呕吐、骨髓抑制等等，使很多病人不能耐受化疗而中断治疗，严重者甚至会危及生命。所以目前越来越多的人把注意力放到了中国的传统中药上，采用中医药结合的方法。

发明人为解决上述问题，在中药领域进行了长期的艰辛研究。首先是选择药材，祖国传统中药中可以提高免疫力的扶正培本类中药很多，但药效参差不齐。并且不是所有的药物均可以制成见效快的注射剂，研究表明，药物配伍后输液中的微粒数会增加，尤其是加入中草药的注射剂和粉针剂。许多中药注射剂与大输液配伍后不溶性微粒明显增多，其原因是中草药成分复杂，各厂家制备工艺不同，使有效成分的提取和杂质除尽有较大差异。一些成分如色素、鞣质、淀粉、蛋白质等以胶态的形式存在于药液中，药物与输液配伍后发生氧化、聚合反应，也可能有些生物碱、皂苷在配伍后pH改变而析出产生大量微粒。(钟洪兰，“输液反应的原因分析和处理”，广东药学2002年第12卷第4期)。例如人参用于人的注射，药效过于剧烈、副作用大，而且人参中所含的Rb3不适合制成注射剂，其易造成大分子超标，产生输液反应；红参的药物毒性大且不稳定，制成注射剂后，部分产品室温避光放置6-9个月后即发生沉淀，临床应用危险性较大，所以最终慎重选择选择党参(党参是桔梗科植物，不同于人参))和黄芪的组合物。

当然党参和黄芪的组合使用并不是发明人的首创，在传统中医中以存在一些以党参和黄芪为原料制成的组合物。但是中药传统的入药方式是水煎煮后以汤入药，这种方法存在着服用不便，不易保存，有效成分提取不完全，人体吸收利用率低等不足。后来出现了片剂、胶囊剂等中药新剂型，可是这些中药产品的制备方法仍然比较原始，它们将中药材按一定比例切片，投料，进行水提取或醇提取等方法，制备成净膏状或粉状产物，然后将其制备成丸剂、散剂、注射剂等。并且，不同产地的药材成份含量差异极大(举例)，甚至同一产地的药材，不同季节差异性都很大。而且药材在一代代地繁殖过程中，往往会发生变种，其内在化学成分也会发生相应的变化；也有一些药材外表相似，但属于不同的科属，功效也不一样。比如黄芪，内蒙黄芪春季和夏季的有效成分含量就存在很大差异。

                表1不同产地/季节的黄芪中主要有效物含量的区别

黄芪种类	有效部位(折成每g)	总皂苷(毫克)	黄芪甲苷(毫克)	黄酮苷(毫克)
					膜荚黄芪(三月生)	1	7.0-10.0	0.8-2.0	8.0-10.0
蒙古黄芪(三月生)	1	＞5.0	＜1.3	4.0-8.0
					膜荚黄芪(四月生)	1	＞8.1	0.8-1.9	6.0-15.0
蒙古黄芪(四月生)	1	5.0-7.0	＜0.7	＜6.0
					膜荚黄芪(夏)	1	＞12.0	0.99-2.2	＞15.0
蒙古黄芪(夏)	1	10.0-14.0	＞1.98	＞10.0

并且由于缺乏对药材组成的分析，缺乏定性定量的分析，目前参芪丸剂、散剂、注射剂厂家制备成的参芪丸剂、散剂、注射剂(含冻干粉)都无法控制其有效物含量，不能说明其主要成份总皂苷、多糖、黄酮的实际含量，只是简单定义为党参水提取物为多少，醇提取物为多少。造成生产上一批产品与下一批产品之间的差异很大，(从下文的表7中可见)。部分产品中有效成分的含量达不到标准，对病情达不到治疗效果；若含量过高的产品，则会危害患者的健康。特别是传统方法制备的注射剂，如中国发明专利申请200310120040.1号中公开的参芪扶正冻干粉针剂，其还存在很多问题，如制成注射剂后不澄清，配制成输液后，因不溶性微粒数量较多，注射剂常出现浑浊，直接注入人体，多次造成静脉炎和输液反应。造成这类问题的主要原因是因为其工艺中使用的冻干赋形剂较多，且缺乏对提取物杂质的处理。冻干粉针剂在临床上是要加入NaCL注射液混合使用的。在混合配制后，冻干粉中的不溶性物质以微粒的形式存在，造成配制的注射液浑浊，无法使用。因为其是直接注入血管的，如果发生静脉炎等不良反应对患者身体的危害极大。国家对注射剂的不溶性微粒、糅质含量等质量要求很高。而且原有200310120040.1号申请物中，缺乏对质量标准和稳定性的控制，产品批与批之间的差异很大且总皂苷、总糖等有效物含量较低。上述按原始的粗旷的组方、生产工艺制备出来的产品已经不能适应现在的病患要求。所以，从有效物含量的方面限定参芪产品迫在眉睫。

发明人于2002年研发出党参黄芪组合物注射剂的第一代产品“参芪扶正注射液”(参见《新编国家中成药》，709页，2002年7月第1版)作为我国第一个澄明中药大输液，填补了国内澄明中药输液的空白。随后进一步改进生产工艺，得到中国发明专利申请03123045.8号中公开了的改进产品，它可以较好的补脾益肾，维护造血功能，减轻放疗及化疗药物的毒副作用，减少放、化疗过程中白细胞下降，改善肿瘤的临床症状，延长患者生存期。

但是在上述阶段，对于党参黄芪有效成份的研究，只进行到“分析出党参黄芪中，大致含有哪些成份”，而对于将党参黄芪制备成药品，新的药品含有何种成份，何种成份可制备成注射液，并保证其含量稳定、质量安全有效，则没有研究报道。在临床使用过程中，原有的输液由于生产中质量缺乏有效控制，导致成品质量不稳定。经常出现，一批质量较好不良反应少，而另一批不良反应多。甚至同一个批号的产品前后有效成份含量也不同，给厂家和病人带来极大痛苦。中药成分复杂，由于临床上大量不良反应引起了发明人的重视，丽珠的中药研究机构进行了二次开发，

经过发明人的不断努力，研究取代参芪扶正注射液的第二代产品，它有效物含量高，各批次之间有效物含量极其稳定，杂质极少，且经长期贮存，有效物含量仍很稳定。

发明内容

为了解决上述现有技术中迫切需要解决的问题，本发明人进过反复研究，并通过动物和临床实验的反复验证，终于研究出一种有效成分含量高、质量稳定、杂质含量极少的参芪组合物。

本发明还涉及该药物组合物的制备方法。

根据本发明的药物组合物，主要是由党参和黄芪为原料制成。

所述的党参和黄芪的重量比范围优选为0.5∶1至1∶0.5，更优选为1∶1。

根据本发明的药物组合物的原料药中还可以含有5wt.％--15wt.％补气、补血类中药，如当归、熟地、何首乌、白术、山药等。

本发明的药物组合物的制备方法包括下列步骤：

a)将党参、黄芪除杂质，加工成饮片；

b)按一定重量比称取党参和黄芪，用去离子水将其冲洗干净；

c)根据称取的党参和黄芪的重量分次加入一定量的去离子水，加热提取1-3次，得到药物提取物；

d)将药物提取物浓缩，得浓缩液，每毫升浓缩液中含1.0-1.5克生药；

e)加入适量乙醇，常规沉淀，过滤，回收滤液中的乙醇并浓缩至干，即得党参、黄芪提取组合物。

在步骤c)中将药物加水提取时，优选第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮0.5小时。更进一步优选第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮1小时，第三次加水6倍量，煎煮0.5小时。

在步骤d)中将药物提取物浓缩时，浓缩到每毫升浓缩液中优选含1.3-1.4克生药。

在步骤e)中将药物加乙醇沉淀时，优选第一次乙醇含量占总重量的65％-80％，第二次乙醇含量不少于总重量的80％。

在步骤c)中得到药物提取液后优选进行过滤，得到滤液。进一步优选将滤液在5℃以下冷藏48-96小时。

在制备注射剂产品的时候，采取了一些特殊的工艺。

微粒超标是导致中药输液反应的主要原因，新参芪扶正注射液采用三级膜膜微滤技术(3μm+0.45μm+0.22μm)，此技术的关键在于膜的厚度，太粗则杂质太多，太细则会滤掉有效成份。控制了微粒数量，使药液不会阻塞积聚于毛细血管(最小4-7μm)；另一方面，车间采用二级反渗透法制备纯化水，电导率低于欧洲标准4.3μs/cm，从而避免了输液反应；而且使本品从未发生过中药注射液最常见的积累性药源发热和延迟性药疹。

本发明所述的中药党参优选为桔梗科植物Codonopsis Pilosula(Franch.)Nannf的干燥根；中药黄芪优选为膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。

本发明提供的药物组合物中，提取物每1克中含总固体物不少于0.325克，其主要成分为糖类物质(包括多糖、单糖)、有机酸、皂苷、香豆精(少量)、黄酮苷、生物碱、甾醇类、烷烃类物质等。其中主要活性成分为皂苷类、香豆精类以及黄酮类物质。总皂苷主要是来自黄芪的一大类三萜皂甙，如黄芪苷(Astragaloside)I、II、IV、VI、大豆皂苷I(Soyasaponin I)胡萝卜苷(Daucosterol)等。香豆精类以及黄酮类物质主要有来自黄芪的黄酮类成分及来自党参的苯丙素类成分。黄芪中的黄酮类成分有：芒柄花素(Formononetin，7-羟基-4’-甲氧基异黄酮)及其葡萄糖苷、毛蕊异黄酮(Calycosin，7，3’-二羟基-4’-甲基氧基异黄酮)及其葡萄糖苷、9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-葡萄糖苷等；党参中的苯丙素类有党参甙II等。

本发明提供的药物组合物中，每1克中含总糖(以无水葡萄糖计)0.08-0.15克，总糖中优选分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的3％-10％；每1克中含总皂苷(以黄芪甲苷计)7-10毫克，黄芪甲苷为0.22-0.60毫克，其中优选黄芪甲苷为0.22-0.40毫克。在具体实验中，业内人士普遍采用以下方法。先测定黄芪甲苷的含量，再测定黄芪甲苷在总皂苷中所占百分比，然后以此推出总皂苷含量，所以说总皂苷含量是以黄芪甲苷计的。

本发明的药物组合物优选以注射剂形式出现。主要原因是因为，注射剂(含大容量注射剂、小容量注射剂、冻干粉针剂)能直接注射入病人的血管。相对于口服给药，避开了胃肠道中消化酶的干扰，大大提高临床使用效果。

本发明的参芪注射液与现有技术中常见的同类抗癌中成药的抗癌效果相比，效果明显。发明人于1997年6月至2001年6月在北京中日友好医院、中国中医研究院广安门医院、广东省人民医院、上海中医药大学附属龙华医院等八家医院中对病理组织学或/和病理细胞学确诊为磷癌、腺癌、腺磷癌、大细胞癌和小细胞癌，住院接受化疗的病人用本发明的注射剂(参芪注射液)及常见的同类抗癌中成药进行疗效对比实验，发现本发明的注射剂在缩瘤效果、症状改善、生存质量改善和化疗顺利通过方面优势明显，具体实验数据见实验1-几种常用抗癌制剂疗效对比，和实验2-单独与参麦注射液的比较。即本发明的注射剂产生了预料不到的技术效果。

实验1：几种常用抗癌制剂疗效的研究

(1)参加临床研究的主要单位

北京中日友好医院      中国中医研究院广安门医院

广东省人民医院        上海中医药大学附属龙华医院

广东省中医院          浙江省中医药研究院附院

广州中医药大学附院    湖南省中医研究院附属医院

(2)试验对象：1997年6月至2001年6月住院接受化疗的肺癌病人。诊断标准：病理组织学或/和病理细胞学确诊，包括磷癌，腺癌，腺磷癌、大细胞癌和小细胞癌。纳入标准：①年龄：70；②ECOG记分为0，1或2；③外周血白细胞：3.5×109/L，血小板：9.0×109/L，血红蛋白：9.0g/L；④血清胆红素、AST、ALT：正常值高限；⑤无严重感染及其它影响化疗实施的医学问题；⑥进入试验前未接受过化疗；⑦能自行阅读、理解和填答生命质量问卷表；⑧知情同意，依从性好，能连续完成2个同样方案的化疗周期。

将恶性肿瘤患者1200例分为对照组(其他产品放、化疗组)和治疗组(放、化疗合并参芪注射液组)，比较肿瘤患者的免疫功能及放、化疗副反应。

        表2-几种常用扶正培本制剂疗效对比表

药品	缩瘤情况％CR+PR+NC	症状改善率％	生存质量改善率％	化疗顺利通过率％
					本发明的参芪注射液	82.9	82.8	92.8	96.5
参麦注射液	67.6		54.7	82.35
					康莱特注射液	12.1	78.97		96.12
贞芪扶正注射液	63.6	51.3	43.3	89.1
					扶正冲剂	43.3	76.5	73.3	87.0
参芪片	33.9	83.9		90.5
					灵芝孢子粉	43.0		68.0	89.0

结果：两组患者，治疗组治疗前后免疫功能均在正常范围内，治疗组骨髓抑制情况和消化道反应及全身反应的发生率较对照组低(P＜0.01)。新的参芪注射液可以提高放、化疗后机体免疫力，减轻放、化疗反应，改善患者的一般情况。

实验2.单独与参麦注射液的比较

(1)以参麦注射液为例做对照组：共460例

(2)治疗方法：除化疗根据不同癌肿而制定方案外，加用本发明的参芪注射液250ml，每日一次，静脉滴注，在化疗开始时给予21天为一个疗程。对照组单用化疗，以同期21天的观察情况作对照。观察指标及疗效评定标准：(1)肿瘤病灶客观疗效评定按卫生部《中国常见恶性肿瘤诊治规范》的疗效评定标准。(2)中医气虚证标准参照1986年，全国中西医结合虚证研讨会指定的标准。中医证候改善情况：采用评分法，按证状轻重分组，分别计3分(+++)，2分(++)，1分(+)，无证状为0分(-)。临床症候积分值下降≥2/3为显著改善。(3)生活质量状况的变化；以卡氏评分标准为指标，凡治后较治前评分增加大于10分者为提高，减少大于10分者为降低，增加或减少小于10分者为稳定。其他产品均依其处方配合化疗使用使用。

(3).结果：

a.肿瘤病灶变化情况：参芪组完全缓解(CR)，部分缓解(PR)100例，稳定(SD)50例，恶化(PD)20例，缓解率47.82％，化疗顺利通过率％96.5％；对照组PR10例，SD8例，PD5例，缓解率43.47％。

b.证候变化：参芪组显著变化290例，部分改善160例，无改善10例，改善率95.65％，参麦组显著变化95例，部分改善125例，无改善240例，改善率47.83％。

c.生活质量改善情况：参芪组生活质量提高和稳定426例，占92.8％，参麦组251例，占54.70％。

d.毒副作用比较：详见下表：

                            表3.毒副作用比较表

毒副作用	参芪组I    II    III   IV	发生率(％)	参麦对照组I     II    III  IV	发生率(％)
					白细胞减少血小板减少恶心、呕吐脱    发肝功能异常肾功能异常	40    20   10    010    0    0     020    20   20    030    20   10    020    0    0     010    0    0     0	30.434.3532.1726.098.74.3	60    40    20    1010    10    0     0110   30    20    040    20    10    010    10    0     00     10    0     0	56.528.6969.5630.438.74.3

e.对血糖影响：460例中其中80例II型糖尿病患者参芪组05例，对照组30例，所有患者治疗期间仍继续口服降糖药，品种及剂量不变，参芪组治疗前后空腹血糖分别为10.84±3.03mmol/l、5.84±1.72mmol/l。(X±S，下同)，参麦组治疗前后分别为10.83±3.05mmol/l、9.12±1.63mmol/l。

f.对心功能影响：460例中其中50例为冠心病，心电图ST段，T波改变，其中30例为参芪组，治疗后，心电图ST段，T波均有不同程度好转，参麦组20例，治疗后1例心电图无变化，1例ST段较前下降加重。

本制备方法制得的产品不仅有效物含量稳定，而且杂质很少，。与现有技术中已有党参黄芪组合物产品的区别见下：

            表4.参芪浓液与参芪丸散类制品的对比表(均以1克计)

品名	本发明的参芪浓液	参芪丸	参芪糖浆	中国申请200310120040.1号中的产品	中国申请03 123045.8号中的产品
						总固体物(g)	0.32-0.45	0.9-1.0	0.8-0.9	0.7-1.0	＞0.32
总糖(g)	0.08-0.15		0.015-0.07	0.04-0.11	0.05-0.12
						总皂苷(毫克)	7-10	3-4	1.5-3.2	3-6.5	3.5---4.1
黄芪甲苷(毫克)	0.4-0.45	0.18-0.25	0.06-0.13	0.12-0.22	0.3--0.4
						黄酮苷(毫克)	4-7	＜3	＜3	＜4.7	3--5
毛蕊异黄酮葡萄糖苷(毫克)	1--3	0.4-1.5	0.1-1.0	1-1.5	＜2.1
						蛋白质(毫克)	无	＞3	＞2	1--3	05-1.5
鞣质(毫克)	无	＞10	＞8.5	无	无
						树脂(毫克)	无	＞5.8	＞4.6	0.2-3.7	＜0.51
草酸盐(毫克)	＜0.007	＞1.5	＞1.5	＜0.64
						重金属(毫克)	＜0.0001	0.051-0.080	0.033-0.055	0.5-3.4	＜0.11

上表中所有产品的组方(折成每克)均为党参∶黄芪＝1∶1。

其中，以参芪丸为例进行比较：

[检查]按照参芪丸1g加水溶解至10ml制成溶液待用。

1.蛋白质取上述溶液1ml，加鞣酸试液1-3滴，出现混浊。(造成输液反应的重要原因之一)

2.鞣质取上述溶液1ml，加稀醋酸1滴，再加氯化钠明胶试液4-5滴，出现混浊或沉淀。(造成输液反应的重要原因之一)

3.草酸盐取上述溶液2ml，加3％氯化钙试液2-3滴，放置十分钟，出现混浊或沉淀。

4.树脂取上述溶液5ml，加盐酸1滴，放置30分钟，絮状物大量析出。(造成输液反应的重要原因之一)

5.炽灼残渣精密量取上述溶液10ml，蒸干，依法检查，本发明的参芪浓液残渣不超过0.5％(g/ml)；参芪丸残渣超过4.8％(g/ml)  。

6.重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查。

7.砷盐取上述溶液2ml，置坩锅钟，加硝酸0.5ml，高氯酸0.25ml，先用小火加热至无烟，再继续稍大火烧灼几分钟，放冷，加水约1ml，滴加盐酸5-10滴，置水浴上蒸干，加水23ml，温热使溶解，加盐酸5ml，另取标准砷溶液2ml同法处理后，依法检查(中国药典2000年版一部附录IX F第一法)，不得过百万分之一。

以上实验主要说明了，新的参芪注射液对比“中国申请200310120040.1号中的产品”和“中国申请03123045.8号中的产品”，在杂质含量上更低，完全除去了危害注射液使用安全的蛋白质、糅质等杂质，在总皂苷、多糖等有效物含量上更高，改善了患者临床用药的有效性

表5：与中国申请200310120040.1号中的产品冻干粉针在小鼠腹腔巨噬细胞吞噬的影响(x±s，n＝12)

组别	剂量(毫克/kg)	吞噬指数	吞噬百分率(％)
				对照组	--	1.91±0.19	41.15±4.65
新参芪扶正注射液	100	2.88±0.32**	80.55±4.78
				冻干粉针	100	2.35±0.41	59.15±4.53

实验共使用117只小白鼠，使用冻干粉针治疗的48只中，5只小白鼠非正常死亡，死亡前注射部位出现红肿等注射反应。

结论：新的参芪扶正注射液因其在原有提取工艺的基础上进行了改进，提高了能增强人体免疫的总糖成份，从而在药效学方面也表现出更好的效果。提高了吞噬细胞的吞噬能力，改善了临床上对肿瘤的治疗。

新工艺的参芪注射液相对于老工艺制备的产品更稳定，原有产品中国申请200310120040.1号中的产品(配制成等剂量注射液)、中国申请03123045.8号中的产品贮存一段时间后因为其杂质部分发生氧化还原反应，往往出现PH值改变，引起色泽变深。由于产品含量不可控制，有些含量高，有些含量低，产品出现不同程度的变色。200310120040.1号申请中的的部分产品在制备成Nacl注射液时就出现不溶性微粒，贮存一定时间后甚至出现沉淀。研究者在研究中发现，蛋白质、糅质含量越低，就减少氧化还原反应发生的可能性，越不容易引起色泽变深。

 表6.新参芪注射液与现有冻干粉针剂、03123045.8号中的产品的对比表(均以1克计)

品名	本发明的参芪注射液		冻干粉针剂		中国申请03123045.8号中的产品
							2003.6	2004.12	2003.6	2004.12	2003.6	2004.12
	总固体物(g)	0.39	0.41	0.94	＞1.95	0.62							0.82
总糖(g)							0.15	0.13	0.08	0.07	0.10	0.10
	总皂苷(毫克)	10	9	3.5	3.13	4.1							4.0
黄酮苷(毫克)							8	8	＜4.7	＜4.5	4.15	4.15
	蛋白质(毫克)	无	无	＞2.83	＞5.1	1.2							2.6
鞣质(毫克)							无	无	2.1	＞3.3	无	无
	重金属(毫克)	＜0.0001	＜0.0001	2.4	＞4.4	＜0.11							＞0.15

本发明的参芪组合物与本发明人2003年的申请03123045.8中要求保护的产品的具体的区别可见下表：

020711为中国专利申请03 123045.8号中的党参黄芪提取组合物，050112为质量标准提高后，本发明产的党参和黄芪提取组合物，取等量提取物，按(1g党参∶1g黄芪)做对比实验。结果如下：

                                            表7

品名	黄芪甲苷(毫克)	蛋白质(毫克)	鞣质(毫克)	树脂(毫克)	草酸盐(毫克)	重金属(毫克)
							050112	0.4-0.45	无	无	无	＜0.007	＜0.0001
050112	0.4-0.45	无	无	无	＜0.0005	＜0.0001

050112	0.4-0.45	无	无	无	＜0.007	＜0.0001
							020711	0.25-0.33	0.51-0.97	无	＜0.45	＜0.01	＞0.15
020711	0.3--0.4	0.5-1.5	无	＜0.51	0.1-0.31	＞0.11
							020711	0.25-0.4	＜0.03	＜0.001	＜0.42	0.09-0.25	0.1-0.33

原有产品(2002年公开的参芪扶正注射液和2003年申请专利的党参黄芪组合物)，虽然与现有技术中的已有参芪组合物的其他剂型的制剂相比已克服了不能用于人体注射的困难，但注射中仍然会出现不良反应，这主要是因为其中总皂苷含量不清晰，仍然含有一些杂质。

中药成分复杂，由于临床上大量不良反应引起了发明人的重视，丽珠的中药机构进行了二次开发，经发明人研究发现，将注射液和Nacl混合进行静脉滴注时，混合配制的药液中的总皂苷浓度大于10毫克/ml时是不能用于静脉滴注的，因为这时容易造成静脉炎，输液反应，严重的危急病人的生命安全，但是总皂苷含量低时，又无法有效提高患者免疫力，达到治疗肿瘤等的功效。也就是说，此免疫调节提取物中，每1克中含总糖(以无水葡萄糖计)应为0.08-0.15克，总糖中以小分子糖为多，分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的10％。每1克中含总皂苷(以黄芪甲苷计)应为7-10毫克，其中黄芪甲苷应为0.22-0.40毫克。每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷应为1-3毫克。黄酮苷5-8毫克。为安全有效的含量。

本发明提供的免疫调节剂，可以制成大容量注射液，制成的大容量注射液(250ml∶10g生药党参、10g生药黄芪及2.25g氯化钠)中，每1ml含总固体物(去除所含氯化钠)应为13-18毫克，含总糖(以无水葡萄糖计)应为3.5-6毫克，总糖中以小分子糖为多，分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的10％。每1ml含总皂苷(以黄芪甲苷计)应为0.12-0.20毫克，其中黄芪甲苷应为0.004-0.010毫克。每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷应为0.0 1-0.08毫克。黄酮苷0.08-0.15毫克。为安全有效的含量。

本发明提供的免疫调节剂，可以制成小容量注射液，制成的小容量注射液(10ml∶5g生药党参、5g生药黄芪)中，每1ml含总固体物(去除所含附加剂)应为0.16-0.25克，含总糖(以无水葡萄糖计)应为44-65毫克，总糖中以小分子糖为多，分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的10％。每1ml含总皂苷(以黄芪甲苷计)应为1.5-3.0毫克，其中黄芪甲苷应为0.05-0.13毫克。每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷应为0.1-1.0毫克。黄酮苷2.5-4毫克。为安全有效的含量。

本发明提供的免疫调节剂，可以制成注射用冻干粉，制成的注射用冻干粉(每支相当于含5g生药党参、5g生药黄芪)中，每支含总固体物应为1.6-2.5克，含总糖(以无水葡萄糖计)应为0.43-0.75克，总糖中以小分子糖为多，分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的10％。每支含总皂苷(以黄芪甲苷计)应为15-25毫克，其中黄芪甲苷应为0.5-1.25毫克。每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷应为125-375毫克。黄酮苷9-15毫克。为安全有效的含量。

而且这种新工艺制备的党参黄芪组合物注射剂(具有新的质量标准)在抗肿瘤方面比原有的参芪扶正注射液(原有质量标准)效果更好。

实验：本发明的党参黄芪提取组合物和中国申请03123045.8中的党参黄芪提取组合物抗肿瘤作用对比

实验动物：内蒙杂种小鼠，雌性，体重17-24g，由中研院动物房提供。

实验药物：本发明的党参黄芪提取组合物(A型)

对照组：中国申请03123045.8中的党参黄芪提取组合物(B型)

实验方法：

1)将小鼠随机分为大剂量组、小剂量组和对照组。瘤株选用小鼠肉瘤180，选取新鲜瘤组织在无菌条件下制成细胞匀浆，以1∶4稀释，每只小鼠右腋皮下接种0.15ml，于接种后24小时开始给药。大剂量组给党参黄芪组合物浓缩液(A型)5.5g/kg，对照组给党参黄芪组合物浓缩液(B型)5.5g/kg；小剂量组党参黄芪组合物浓缩液(A型)3.32g/kg，对照组给党参黄芪组合物浓缩液(B型)3.32g/kg，均为腹腔注射，每日一次，连续给药14天，第15天处死动物，称取瘤重，求瘤重抑制率，用t检验法进行统计学处理。

4实验结果：

1)党参黄芪组合物对小鼠肉瘤180的影响，结果见表8、表9。

                表8党参黄芪组合物(大剂量组)对小鼠肉瘤180的影响

实验次数	组别	药物剂量(g/kg)	动物数	瘤重g(X±SD)	抑瘤率(％)	P值
							1	对照组大剂量组	5.50	6554	4.75±1.082.50±1.59	27.25	0.01＜P＜0.05
45.30
	2	对照组大剂量组	5.50	3021	5.53±2.420.95±0.34	15.98						P＜0.01
66.29
						3	对照组大剂量组	5.50	2722	5.77±2.052.93±1.63	21.58		0.01＜P＜0.05
43.34

                表9党参黄芪组合物(小剂量组)对小鼠肉瘤180的影响

实验次数	组别	药物剂量(g/kg)	动物数	瘤重g(X±SD)	抑瘤率(％)	P值
							1	对照组小剂量组	3.32	3217	3.66±1.042.20±0.97	17.64	P＞0.05
19.99
	2	对照组小剂量组	3.32	3427	3.42±1.432.62±1.67	21.42						P＞0.05
24.90
						3	对照组小剂量组	3.32	2628	3.89±1.223.12±0.66	14.78		P＞0.05
19.89

本发明还涉及所述的党参黄芪组合物在制备调节免疫的药物中的用途。其中所述的党参黄芪组合物可以与化疗药、放射治疗或其他肿瘤抑制方法结合使用。

所述组合物可以以注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、溶液、悬浮剂、乳剂的形式使用。

在应用时，本发明的药物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，制备成需要的剂型。

本发明提供的药物，根据实际需要，可进一步加工制成口服液、片剂、胶囊剂、颗粒剂以及注射剂等多种剂型。上述剂型均可按照药学领域的常规方法制备。

附图说明

图1为本发明的党参黄芪组合物的提取工艺。

具体实施方式

通过以下实施例来进一步阐述本发明的免疫调节剂、其制备方法及其用途。

实施例1：党参、黄芪的提取与分离，以获得党参和黄芪的组合物注射液。

分别将党参、黄芪除杂质，加工成饮片。准确称定党参400克与黄芪400克用去离子水冲洗干净，加入6400ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4800ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4800ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭，过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪提取组合物。以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明免疫调节剂组合物的动物实验和临床疗效观察实验。

实施例2、党参、黄芪的提取与分离制备成大容量注射液

党参、黄芪除去杂质，加工成饮片。准确称取党参、黄芪各400克，用去离子水冲洗干净，加入6400ml去离子水，加热煮沸提取1小时，放出提取液；渣再加入3600ml去离子水，加热煮沸提取1小时，放出提取液；渣再加入3600ml去离子水，加热煮沸提取0.5小时，放出提取液；三次提取液合并过滤浓缩成520ml，在搅拌下加入85％以上浓度的乙醇使含乙醇量为75％，放置24小时以上，过滤回收乙醇至440ml，在搅拌下加入95％浓度的乙醇使含乙醇量为85％，放置24小时以上，过滤回收乙醇并浓缩至240ml。取上述浓缩液加入注射用水440ml，加热煮沸20分钟，搅拌下加入活性炭0.8g，继续煮沸10分钟，取出冷却，过滤除炭，加入注射用水至近400ml，用10％的NaOH溶液调pH值为6.5，粗滤，精滤(采用三级微滤技术)初级3um，二级0.45um，三级0.22um，灌封于20ml的安瓿中100℃，30分钟灭菌，检查合格后即得参芪扶正注射液。

实施例3：党参、黄芪的提取与分离，以获得党参和黄芪的组合物。

分别将党参、黄芪除杂质，加工成饮片。准确称定党参400克与黄芪400克用去离子水冲洗干净，加入6400ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4800ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4800ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭。过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪提取组合物。

实施例4：党参、黄芪的提取与分离，以获得党参和黄芪的组合物。分别将党参、黄芪除杂质，加工成饮片。准确称定党参400克与黄芪200克用去离子水冲洗干净，加入4800ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入3600ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入3600ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭。过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪提取组合物。

实施例5：党参、黄芪的提取与分离，以获得党参和黄芪的组合物。分别将党参、黄芪除杂质，加工成饮片。准确称定党参200克与黄芪400克用去离子水冲洗干净，加入4800ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入3600ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入3600ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭。过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪提取组合物。

实施例6：党参、黄芪、当归的提取与分离，以获得党参和黄芪、当归的组合物。

分别将党参、黄芪、当归除杂质，加工成饮片。准确称定党参200克与黄芪200克、当归200克用去离子水冲洗干净，加入5200ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4000ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4000ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭。过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪、当归提取组合物。

实施例7：党参、黄芪、熟地的提取与分离，以获得党参和黄芪、当归的组合物。

分别将党参、黄芪、熟地除杂质，加工成饮片。准确称定党参200克与黄芪200克、熟地200克用去离子水冲洗干净，加入5200ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4000ml去离子水，加热提取1小时后，放出提取液；再加入4000ml去离子水，加热提取0.5小时后，放出提取液。三次提取液过滤后合并，浓缩至600ml，再加入浓度为95％的乙醇使含醇量为60％，沉淀24小时，过滤；滤液回收至400ml，加入浓度为95％的乙醇使含醇量为80％，滤液在5℃以下冷藏48小时以上，相对原有工艺而言，最大限度的使热源、糅质成份凝结，沉淀，加入总生药量0.35(g/ml)的炭。过滤。回收乙醇并浓缩至400g，即得党参和黄芪、熟地提取组合物。

实施例8 250ml的参芪扶正注射液的制备

取党参和黄芪提取组合物10g，加注射用水适量使溶解，加入氯化钠2.25g，用注射用水调整体积至125ml，加入适量注射用炭，煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液加注射用水调整总量至250ml调节pH值，滤过，灌装，灭菌，包装，即得。

本发明对传统的中药党参、黄芪进行了全面的、系统的研究，明确了它们的有效部位，阐明了该药物的作用机制。并且有针对性地设计提取工艺，在保证药物有效性的同时，尽可能地去除杂质，以降低使用剂量，减小毒副作用。方法简单，实用性强，并且很有创造性和启发性，为中药现代化奠定了坚实的基础。

以上以实施例的方式对本发明进行了说明。但应该理解的是，上述实施例仅仅是为了阐明本发明，而非限制本发明，在本发明所附的权利要求范围内可以作多种修改和变动，而这些修改和变动也在本发明的范围之内。

Claims (23)

1.一种药物组合物，其特征在于其含有党参黄芪提取物，其中提取物每1克中含总固体物不少于0.325克，该总固体物每1克中以无水葡萄糖计总糖为0.08-0.15克，以黄芪甲苷计总皂苷为7-10毫克，黄酮苷5-8毫克。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的党参和黄芪的重量比范围为0.5∶1至1∶0.5。

3.根据权利要求1或2任一项所述的药物组合物，其特征在于所述的党参和黄芪的重量比为1∶1。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于总糖中分子量大于5000的多糖为总糖重量的3-10％。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述总固体物每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷1-3毫克。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述总固体物每1克中含黄芪甲苷0.22-0.40毫克。

7.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述总固体物中杂质含量低于2×10^-5/克。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述总固体物中蛋白质、鞣质和树脂的含量为0，草酸盐含量低于2×10^-5/克，重金属含量低于3×10^-7/克。

9.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的原料药还可以含有5wt.％--15wt.％补气、补血类中药。

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于所述的补气、补血类中药是当归、熟地、何首乌、白术、山药或其结合。

11.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物的剂型为为小容量注射剂、大容量注射剂和冻干粉针剂。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于所述的大容量注射液中，每1ml含总固体物不计氯化钠为13-18毫克，其中以无水葡萄糖计总糖为3.5-6毫克，总糖中分子量大于5000的多糖为总糖重量的3-10％；以黄芪甲苷计总皂苷为0.12-0.20毫克，其中黄芪甲苷为0.004-0.010毫克；含毛蕊异黄酮葡萄糖苷为0.01-0.08毫克；黄酮苷0.08-0.15毫克。

13.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于所述的小容量注射液中，每1ml含总固体物不计所含附加剂为0.16-0.25克，其中以无水葡萄糖计含总糖为44-65毫克，总糖中分子量大于5000的多糖为总糖重量的3-10％；以黄芪甲苷计含总皂苷1.5-3.0毫克，其中黄芪甲苷为0.05-0.13毫克；每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷应为0.1-1.0毫克；黄酮苷2.5-4毫克。

14.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于所述的冻干粉中，每支含总固体物应为1.6-2.5克，以无水葡萄糖计总糖为0.43-0.75克，总糖中，分子量大于5000的多糖不超过总糖重量的10％；以黄芪甲苷计每支含总皂苷为15-25毫克，其中黄芪甲苷为0.5-1.25毫克；每1克中含毛蕊异黄酮葡萄糖苷为125-375毫克；黄酮苷9-15毫克。

15.一种权利要求1-11中任一项所述的药物组合物的制备方法，它包括下列步骤：

a)将党参、黄芪除杂质，加工成饮片；

b)按一定重量比称取党参和黄芪，用去离子水将其冲洗干净；

c)根据称取的党参和黄芪的重量分次加入一定量的去离子水，加热提取1-3次，得到药物提取物；

d)将药物提取物浓缩，得浓缩液，每毫升浓缩液中含1.0-1.5克生药；

e)加入适量乙醇，常规沉淀，过滤，回收滤液中的乙醇并浓缩至干，即得党参、黄芪提取组合物。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于步骤c)中将药物加水提取时，第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮0.5小时。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于步骤c)中将药物加水提取时，第一次加水8倍量，煎煮1小时，第二次加水6倍量，煎煮1小时，第三次加水6倍量，煎煮0.5小时。

18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于步骤d)中将药物提取物浓缩时，浓缩到每毫升浓缩液中含1.3-1.4克生药。

19.根据权利要求15所述的方法，其特征在于步骤e)中将药物加乙醇沉淀时，第一次乙醇含量应占总重量的65％-80％，第二次乙醇含量不少于总重量的80％。

20.根据权利要求15所述的方法，其特征在于步骤c)中得到药物提取液后过滤，得到滤液。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于所述过滤中使用3μm/0.45μm/0.22μm三级膜膜微滤技术。

22.根据权利要求20所述的方法，其特征在于所述过滤中使电导率低于4.3μs/cm的水。

23.根据权利要求15所述的方法，其中得到的滤液在2-5℃以下冷藏48-96小时。

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