一种网脉橐吾提取物及其在预防和治疗胃病中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种网脉橐吾提取物及其在胃溃疡、胃炎预防和治疗中的应用。
背景技术
胃溃疡、胃炎是临床常见病、多发病,幽门螺杆菌感染、非甾体抗炎药、胃蛋白酶、胃酸分泌异常是其常见病因;应激刺激、激素、心理因素及吸烟、喝酒等不良生活习惯也可诱发。多数学者认为胃溃疡、胃炎的发生是由于胃黏膜损伤因子和保护因子失衡所致,即与胃酸、胃蛋白酶、幽门螺旋杆菌、药物损害及氧自由基等损伤作用增强,胃黏膜屏障、细胞膜完整性、细胞再生能力、血液供应等保护作用减弱有关。当黏膜损害因素大于防御因素时,易导致疾病发生。
网脉橐吾Ligularia dictyoneura(Franch.)Hand.-Mazz.为菊科橐吾属多年生草本植物,生长于海拔1900~3600米的水边、灌丛及山坡草地,分布在云南西北部和四川西南部。其根、根茎在民间常作为中药紫菀使用,有宣肺利气、镇咳祛痰、利尿的功效,主治感冒和咳嗽等症。橐吾属植物含有三萜类、倍半萜类、苯丙酯类、挥发油、丙烯酸类、生物碱类等化学成分,在抗肿瘤、消炎、镇咳等方面发挥着重要的作用。
本发明将网脉橐吾的干燥根经化学方法进行提取,得到网脉橐吾提取物。主要药效学实验结果表明网脉橐吾提取物能明显降低无水乙醇、幽门结扎和吲哚美辛引发的大鼠胃溃疡指数,能明显降低幽门结扎大鼠胃液分泌量,具有明显的胃溃疡保护作用;能显著降低醋酸引发的大鼠胃溃疡指数,具有明显的胃溃疡治疗作用;能显著降低大鼠胃黏膜炎症评分,对大鼠慢性萎缩性胃炎具有明显的治疗作用;在体外网脉橐吾提取物能明显抑制幽门螺杆菌ATCC700392和ATCC43504的生长,其MIC值均为10mg/mL。以上药效学结果表明网脉橐吾提取物对胃溃疡和胃炎具备明显的预防和治疗作用。
发明内容
本发明针对现有技术和治疗方法的不足,提供一种网脉橐吾提取物在制备预防和治疗胃溃疡和胃炎的药物中的应用,其特点是疗效明显,安全可靠,能有效预防和治疗胃溃疡和胃炎。为了实现本发明的目的,拟采用如下技术方案:
一种网脉橐吾提取物及其在预防和治疗胃病中的应用,其特征在于,所述的提取物以网脉橐吾为原料通过提取制备而成。
所述的网脉橐吾提取物,其特征在于,该提取物在预防和治疗胃病药物中的应用。
所述的网脉橐吾提取物在胃病中的应用,其特征在于,所述胃病为与胃黏膜损伤和幽门螺杆菌感染有关的疾病。
所述的网脉橐吾提取物,其特征在于所述的提取物通过如下步骤制备而成:
(a)取网脉橐吾根为原料,自然干燥根,粉碎,过10-50目筛;
(b)取过筛后粗粉,按药材量分别加入8-15倍的60%-70%乙醇,加热回流提取3-4次,每次1-5小时,100-200目滤布过滤,合并滤液;
(c)滤液置于大孔吸附树脂柱层析,依次用3倍柱体积水和5倍柱体积85%乙醇洗脱,取85%乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩,浓缩按温度50-70℃、压力0.08MPa的条件进行减压浓缩至无醇,80℃水浴蒸至流浸膏状,放入真空干燥箱在温度70℃、压力0.08MPa的条件下干燥,即得网脉橐吾提取物;
所述网脉橐吾在预防和治疗胃病中的应用,其特征在于所述胃病包括胃溃疡、胃炎。
所述网脉橐吾在预防和治疗胃病药物中的应用,所述的药物剂型为片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂或糖浆剂。
本发明所述的网脉橐吾提取物在制备预防和治疗胃溃疡和胃炎的药物中的应用,其特征在于,所述药物能明显降低无水乙醇、幽门结扎和吲哚美辛引发的大鼠胃溃疡指数,能明显降低幽门结扎大鼠胃液分泌量,具有明显的胃溃疡保护作用;能显著降低醋酸引发的大鼠胃溃疡指数,具有明显的胃溃疡治疗作用;能显著降低大鼠胃黏膜炎症评分,对大鼠慢性萎缩性胃炎具有明显的治疗作用;在体外网脉橐吾提取物能明显抑制幽门螺杆菌ATCC700392和ATCC43504的生长,其MIC值均为10mg/mL。以上药效学结果表明网脉橐吾提取物对胃溃疡和胃炎具备明显的预防和治疗作用。
所述的网脉橐吾提取物在制备预防和治疗胃溃疡和胃炎的药物中的应用,其特征在于所述的药物为网脉橐吾提取物为主要组分制备的具有预防和治疗胃溃疡、胃炎作用的药品或保健品。
本发明所述的网脉橐吾提取物在制备预防和治疗胃溃疡、胃炎的药物中的应用,其特征在于所述的药物由以下方法制备而成:将得到的网脉橐吾提取物添加防腐剂、香味剂、着色剂、填充剂、润滑剂、粘合剂、调味剂、抑菌剂中的一种或多种辅料制备成片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂或糖浆剂的药品。
具体实施方式
下面通过各种具体实施例来进一步证实网脉橐吾提取物具有预防和治疗胃溃疡、胃炎的作用。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。
实施例1
取网脉橐吾药材粗粉,过10目筛,加入8倍的60%乙醇,加热回流提取4次,每次1小时,100目滤布过滤,合并滤液;滤液置于HPD-100大孔吸附树脂柱层析,依次用3倍柱体积水和5倍柱体积85%乙醇洗脱,取85%乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩,浓缩按温度50℃、压力0.08MPa的条件进行减压浓缩至无醇,80℃水浴蒸至流浸膏状,放入真空干燥箱在温度70℃、压力0.08MPa的条件下干燥,即得网脉橐吾提取物;
实施例2
取网脉橐吾药材粗粉,过30目筛,加入10倍的60%乙醇,加热回流提取4次,每次3小时,100目滤布过滤,合并滤液;滤液置于HPD-100大孔吸附树脂柱层析,依次用3倍柱体积水和5倍柱体积85%乙醇洗脱,取85%乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩,浓缩按温度60℃、压力0.08MPa的条件进行减压浓缩至无醇,80℃水浴蒸至流浸膏状,放入真空干燥箱在温度70℃、压力0.08MPa的条件下干燥,即得网脉橐吾提取物;
实施例3
取网脉橐吾药材粗粉,过50目筛,加入15倍的70%乙醇,加热回流提取3次,每次5小时,200目滤布过滤,合并滤液;滤液置于HPD-100大孔吸附树脂柱层析,依次用3倍柱体积水和5倍柱体积85%乙醇洗脱,取85%乙醇洗脱液回收乙醇后浓缩,浓缩按温度70℃、压力0.08MPa的条件进行减压浓缩至无醇,80℃水浴蒸至流浸膏状,放入真空干燥箱在温度70℃、压力0.08MPa的条件下干燥,即得网脉橐吾提取物;
实施例4网脉橐吾提取物对乙醇所致大鼠胃溃疡的保护作用
1.实验方法
取SPF级SD大鼠50只,全雄性,随机分为模型组、法莫替丁组0.01g/kg和网脉橐吾提取物0.25、0.5、1.0g/kg剂量组,每组10只。各组均以10mL/kg体重灌胃给药,每日1次,连续10d,模型组给予等体积纯水。第9d给药后,动物禁食不禁水24h。第10d给药后3h,各组大鼠均灌胃给予无水乙醇,1h后处死动物,打开腹腔,清洗胃内容物,分别结扎贲门和幽门,胃内注入1%甲醛溶液6mL,并将全胃浸泡于1%甲醛溶液中。10min后取出胃,沿胃大弯剖开胃,轻轻冲洗胃壁,在体式显微镜下计算溃疡指数。
2.实验结果
试验结果显示:与模型组比较,网脉橐吾提取物0.25g/kg剂量组大鼠溃疡指数明显下降(P<0.05)、0.5g/kg和1.0g/kg剂量组动物溃疡指数明显下降(P<0.01),结果见表1。
表1网脉橐吾提取物对无水乙醇所致大鼠胃溃疡的保护作用
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
实施例5网脉橐吾提取物对幽门结扎所致大鼠胃溃疡的保护作用
1.实验方法
1.1分组、给药及溃疡指数测定
取SPF级SD大鼠50只,全雄性,随机分为模型组、法莫替丁组0.01g/kg和网脉橐吾提取物0.25、0.5、1.0g/kg剂量组,每组10只。各组均以10mL/kg体重灌胃给药,每日1次,连续10d,模型组给予等体积纯水。末次给药后所有动物禁食不禁水24h,3.5%水合氯醛麻醉动物,剪开腹壁,结扎幽门,同时经十二指肠再次给药1次。缝合切口,并停止供水及饮食。24h后处死动物,开腹结扎贲门,取出全胃。收集胃液以3000r/min离心15min,取上清备用。洗净全胃,向胃内注入1%甲醛溶液6mL,并将全胃浸入1%甲醛溶液中浸泡10min。然后沿胃大弯剪开胃,在体式显微镜下计算溃疡指数。
1.2胃液量、PH值及总酸度测定
取胃液上清用量筒测量胃液总量;PH计测定胃液PH值;取胃液1.0mL滴酚红指示剂1~2滴,用0.01mol/L的NaOH溶液滴定胃酸,以胃液变为粉红色为滴定终点,按下列公式计算胃液总酸度。采用改良Mett法测定胃液胃蛋白酶活性。
总酸度(mmol/L)=消耗NaOH溶液量(mL)×10
2.实验结果
试验结果显示:与模型组比较,网脉橐吾提取物0.25和0.5g/kg剂量组大鼠胃溃疡指数明显下降(P<0.05),网脉橐吾提取物1.0g/kg剂量组大鼠胃溃疡指数明显下降(P<0.01);与模型组比较,网脉橐吾提取物各剂量组胃液分泌量明显下降(P<0.05);与模型组比较,网脉橐吾提取物各剂量组大鼠胃液PH值、总酸度和胃蛋白酶活性均无明显变化(P>0.05),结果见表2。
表2网脉橐吾提取物对幽门结扎所致大鼠胃溃疡的保护作用
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
实施例6网脉橐吾提取物对吲哚美辛所致大鼠胃溃疡的保护作用
1.实验方法
取SPF级SD大鼠50只,全雄性,随机分为模型组、法莫替丁组0.01g/kg和网脉橐吾提取物0.25、0.5、1.0g/kg剂量组,每组10只。各组均以10mL/kg体重灌胃给药,每日1次,连续10d,模型组给予等体积纯水。末次给药后所有动物禁食、不禁水24h,皮下注射160mg/kg吲哚美辛溶液造模。7h后处死动物,结扎贲门和幽门,向胃内注射1%甲醛溶液6ml,并将全胃浸入1%甲醛溶液中浸泡10min。然后沿胃大弯剪开胃,将其平铺在平板上,在体式显微镜下计算溃疡指数。
2.实验结果
试验结果显示:与模型组比较,网脉橐吾提取物0.25和0.5g/kg剂量组大鼠胃溃疡指数明显减少(P<0.05),1.00g/kg剂量组大鼠胃溃疡指数明显减少(P<0.01),结果见表3。
表3网脉橐吾提取物对吲哚美辛所致大鼠胃溃疡的保护作用
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
实施例7网脉橐吾提取物对醋酸所致大鼠胃溃疡的治疗作用
1.实验方法
取SPF级SD大鼠50只,全雄性,随机分为模型组、法莫替丁组0.01g/kg和网脉橐吾提取物0.25、0.5、1.0g/kg剂量组,每组10只。于试验前禁食、不禁水24h,禁食后麻醉动物,沿腹中线剪开腹腔。将10%醋酸溶液0.05mL注射至腺胃部前壁的浆膜下造模。术后第2d开始给药,各组均以10mL/kg体重给药体积灌胃给药,1次/d,连续10d,模型组给予等体积纯水。末次给药后处死动物,剖腹结扎幽门和贲门,取胃并向胃内注入1%甲醛溶液6mL,然后将胃浸泡于1%甲醛溶液中固定15min。沿胃大弯剪开胃,在体视显微镜下测量溃疡面的横径、纵径,按下列公式计算溃疡面积作为溃疡指数。
溃疡面积S=π×(d1/2)×(d2/2)
其中π取3.14,d1为通过溃疡中心量取的最大纵径,d2为通过溃疡中心量取的最大横径。
2.实验结果
试验结果显示:与模型组比较,网脉橐吾醇提物各剂量组大鼠胃溃疡指数均无明显变化(P>0.05),结果见表4。
表4网脉橐吾提取物对醋酸所致大鼠胃溃疡的治疗作用
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
实施例8网脉橐吾提取物对大鼠慢性萎缩性胃炎的影响
1.实验方法
取SPF级大鼠100只,每周2和周5空腹灌胃60%乙醇1次,2mL/次;每日灌胃20mmol/L脱氧胆酸钠1次,2mL/次;饮水:第1~6周自由饮用0.05%氨水、第7~12周自由饮用0.1%氨水;饲料:2d足量喂食,1d禁食,造模时间为12周。造模后,将模型成功大鼠随机分为5组,即模型组、葵花胃康灵组1g/kg、网脉橐吾提取物0.25、0.5和1.0g/kg剂量组。各组动物均以10mL/kg体重给药体积灌胃给药,每天1次,连续45d。另设正常对照组,灌胃给予等体积纯水。末次给药后,禁食18h,剖取全胃用10%的中性甲醛溶液固定24h,常规石蜡切片,HE染色,显微镜下观察黏膜炎症情况。用半定量法,按如下评级方法进行测定,并对结果进行统计学分析。用测微器在距幽门环(250±50)μm处测量胃窦黏膜腺体厚度L1和黏膜肌层厚度L2,计算L1与L2之比,并对结果进行统计学分析。
0级,无炎症
1级,在胃黏膜上皮内(胃小凹区)或固有腺底部可见多个慢性炎症细胞
2级,在胃黏膜小凹区至黏膜肌层均有较多的炎症细胞浸润
3级,在胃黏膜内可见成堆炎症细胞聚集灶
2.实验结果
试验结果显示:(a)一般情况观察:模型组大鼠精神不振、毛色枯黄、无光泽、体重增速慢、活动减少。灌胃给予网脉橐吾提取物后,大鼠精神状态较好、体重增速加快、活动度好、毛色及光泽度有所改善。(b)与模型组比较,胃康灵1.0g/kg、网脉橐吾提取物0.5和1.0g/kg剂量组大鼠胃黏膜炎症评分显著降低(P<0.05),L1/L2值无显著性差异(P>0.05),结果见表5。
表5网脉橐吾提取物对大鼠体重、胃粘膜炎症评分和L1/L2值的影响
与空白组比较:#P<0.05,##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01
实施例9网脉橐吾提取物对幽门螺杆菌ATCC700392、ATCC43504生长的抑制作用
1.实验方法
分别从菌落平板上挑选幽门螺杆菌ATCC700392、ATCC43504单克隆接种于幽门螺杆菌液体培养基中,37℃、150rpm振荡培养18h;各菌活化后,制成菌悬液,采用紫外分光光度法测定细菌OD600值。配制网脉橐吾提取物母液浓度为1.0g/mL,配制后用0.22μm微孔滤膜过滤受试物。采用连续二倍微孔稀释法测定网脉橐吾提取物对ATCC700392、ATCC43504MIC值。具体如下:将各菌浓度调整为1×105CFU/mL,96孔培养板每排第一孔内加入198μl菌液,第二至第十二孔内均加入100μL菌液。分别将受试样品2μL加入第一孔中,混匀后吸取100μL菌液加入第二孔中,继续混匀后再吸取100μL菌液加入第三孔。依次操作,最后,第十二孔内溶液混匀后吸取100μL弃去。则网脉橐吾提取物的孔内终浓度分别为10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、625μg/mL、313μg/mL、156μg/mL、0.078μg/mL、0.039μg/mL、0.020μg/mL、0.010μg/mL、0.005μg/mL。培养板置于37℃厌氧培养箱中培养厌氧培养48-72h,溶液清亮表示阴性(-),溶液混浊表示阳性(+);读出抑制细菌生长的最低样品浓度,即为最小抑菌浓度(MIC)。
2.实验结果
网脉橐吾提取物对幽门螺杆菌ATCC700392、ATCC43504的MIC值均为10mg/mL,表明在此浓度下,网脉橐吾提取物可明显抑制上述两株幽门螺杆菌的生长。
综上所诉,网脉橐吾提取物对多种影响因素(化学刺激、非甾体抗炎药、胃酸过多、幽门螺杆菌等)引发的大鼠胃溃疡具有明显的预防和治疗作用;对大鼠慢性萎缩性胃炎具有明显的治疗作用。