CN106243169A - Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用 - Google Patents

Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用 Download PDF

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Abstract

本发明以Corylifol A为底物，利用糖基转移酶(YjiC)，将UDP‑glucose作为供体，通过体外酶法糖基化法制备出新型的Corylifol A糖基化衍生物，其结构通式如式(I)所示，其中R是氢或6‑羟甲基‑2,3,4,5四羟基‑四氢吡喃，并研究其理化性质，证明本发明的两种Corylifol A糖基化衍生物的水溶性分别比Corylifol A的水溶性增加26.91和15.13倍，并且对pH和温度具有较好的稳定性；而且两种CorylifolA糖基化衍生物在体内还具有良好的药代动力学参数，且毒性低，与目前临床所用的抗肿瘤药药物相比，具有很好的临床抗肿瘤药的应用前景。

Description

Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的 应用
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，具体是Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用。
背景技术
近年来，各种恶性肿瘤发病率在世界范围内呈上升趁势。在中国，恶性肿瘤发病率也正快速上升，恶性肿瘤已成为居民“第一杀手”。不断设计、合成及筛选出疗效显著、副作用小的抗肿瘤新药是人类与恶性肿瘤的较量中对抗肿瘤的必要“武器”。
中药补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoralea corylifolia L.)的干燥成熟果实，性温、味辛，具有补肾壮阳、健脾胃等功效。研究表明，补骨脂中含有多种化学成分，主要包括补骨脂酚类、黄酮类、香豆素类等。其中，Corylifol A属于异黄酮类黄酮，是中药补骨脂中主要活性成分之一，Corylifol A的结构式如下：
现代药理研究表明，Corylifol A具有多种药理作用，如抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等。Corylifol A结构特征上属于异黄酮类，其C环上有1个香叶草基(geranyl)取代，同时还具有2个酚羟基。据文献报道，黄酮被异戊烯基、香叶草基等取代后，可增加脂溶性和对生物膜的亲和力，以及靶蛋白的相互作用，从而影响了很多生理活性。但是Corylifol A与大多数黄酮一样，具有水溶性差的缺陷，使得其在开发应用上受到很大限制。
天然产物(来源于植物、微生物、动物)是新药研发中先导化合物的主要来源。天然产物的糖基化不仅增加化合物的结构多样性，而且在功能上这些糖分子参与了目标细胞的识别，提高水溶性，影响生物活性。如7β-xylosyl-10-deacetyl taxol(CAS：90332-63-1)及其衍生物在保留抗肿瘤活性的同时，显著地提高了其水溶性以及对肿瘤细胞的特异选择性。天然产物的糖基化可以影响药物的吸收、分布、代谢、排泄，而且降低药物的毒性。目前常用的糖基化途径有化学合成法、生物合成途径工程技术、生物转化技术和体外酶法糖基化反应(in vitro enzymatic glycosylation)等。虽然体外酶法糖基化反应具有令人满意的产率与选择性，但寻找一种具有底物特异选择性的糖基转移酶是关键。糖基转移酶是糖基化的天然产物生合成途径上重要的一种酶，其主要功能是催化供体上的糖转移到非糖体(aglycon)。
发明内容
本发明的目的在于提供一类Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用，利用糖基转移酶(YjiC)，将UDP-glucose作为供体，通过体外酶法糖基化法制备出新型的Corylifol A糖基化衍生物，并研究其理化性质，证明本发明的Corylifol A糖基化衍生物不仅具有较好的水溶性和稳定性，还具有显著的抗肿瘤作用，Corylifol A糖基化衍生物及其盐在制备治疗癌症药物中具有广阔的应用前景。
为实现上述目的，本发明提供了一类Corylifol A糖基化衍生物，具有如式(I)所示的结构通式：
其中R是氢(—H)或6-羟甲基-2,3,4,5四羟基-四氢吡喃
本发明的Corylifol A糖基化衍生物的制备方法，包括以下步骤：
(1)糖基转移酶(YjiC)的表达及精制：
通过聚合酶链反应得到Bacillus来源的YjiC基因，并定向克隆到pET28/-his载体上构建重组质粒pET302-YjiC，将重组质粒pET302-YjiC热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主上，并利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷优化重组质粒pET302-YjiC的表达条件。随后，采用Ni2+NTA树脂纯化，获得高纯度His-tag-YjiC；
(2)Corylifol A糖基化衍生物的制备：
将含25mmol pH值为9.6的Tris-HCl、1mmol MgCl2、25mg His-tag-YjiC、3mmolUDP-glucose和60mg Corylifol A的反应液50mL在30℃反应3小时；反应结束后，在100℃水浴加热5min，清除His-tag-YjiC的活性，再用乙酸乙酯对反应液进行萃取，获得乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物经半制备高效液相精制，获得Corylifol A糖基化衍生物。
本发明利用糖基转移酶(YjiC)对Corylifol A的特异选择性，将UDP-glucose作为供体，通过体外酶反应制备出新型的Corylifol A糖基化衍生物，且制备的Corylifol A糖基化衍生物不仅具有良好的水溶性和稳定性，还具有显著的抗肿瘤作用。
本发明还提供了Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤细胞为造血系统、内分泌系统、肺系统、肠胃系统、骨骼肌系统、生殖系统、中枢神经系统或泌尿系统部位的肿瘤细胞，特别是肝癌细胞、结肠癌细胞和乳腺癌细胞。
本发明的Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的水溶性分别比Corylifol A(底物)的水溶性增加26.91和15.13倍，并且对pH和温度具有较好的稳定性；而且两种Corylifol A糖基化衍生物在体内还具有良好的药代动力学参数，且毒性低，与目前临床所用的抗肿瘤药物大相比，具有很好的临床抗肿瘤药的应用前景。
所述的Corylifol A糖基化衍生物被配制为用于口服或注射给药，剂型可以为液体制剂、片剂、颗粒剂、冲剂、胶丸剂、胶囊、缓释剂、滴丸剂或口崩制剂。
附图说明
图1是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析重组蛋白YjiC的表达与精制。
图2是Corylifol A体外酶法糖基化反应的反应条件优化。
图3是Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的稳定性柱状图。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明发明。
实施例1.Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2，结构式如下：
实施例2.Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的制备方法：
1、Corylifol A的提取分离，结构鉴定：
(1)实验材料：
试剂：硅胶(Kieselegel 60，230～400目，美国Merk公司)，薄层色谱板(硅胶60F254，美国Meck公司)，所有试剂均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂)。
仪器：Bruker ARX核磁共振仪(德国Bruker公司)，JMS-HX/HX110A型质谱仪(日本JEOL公司)，旋转蒸发仪(日本Eyele公司)。
(2)提取与分离：
中药补骨脂5.1kg用20L甲醇在室温条件下，用冷浸法提取两次，利用旋转蒸发仪将甲醇提取液进行浓缩，得甲醇浸膏770.5g；将甲醇浸膏溶于水中，依次用同等体积的正己烷、氯仿、乙酸乙酯与水萃取，其中获得氯仿部位浸膏217.8g；氯仿部位浸膏117.3g经硅胶柱色谱(70～230目)，以氯仿-甲醇为流动相进行梯度洗脱，薄层色谱分析(TLC)检查后合并得8个组分A1～A8，其中组分A4(8.4g)经过反复使用300～400目硅胶柱色谱分离得到Corylifol A(247mg)。
(3)结构鉴定：
Corylifol A：ESI-MS m/z 391.2[M+H]+；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)：δ9.48(1H,s),8.25(1H,s),7.97(1H,d,J＝8.8Hz),7.25(1H,d,J＝2.0Hz),7.20(1H,dd,J＝8.2,2.2Hz),6.94(1H,dd,J＝8.8,2.2Hz),6.86(1H,d,J＝2.2Hz),6.84(1H,d,J＝8.2Hz),5.33(1H,t,J＝7.0Hz),5.08(1H,t,J＝6.8Hz),3.27(2H,d,J＝7.2Hz),2.07(2H,dd,J＝14.2,6.8Hz),2.04–1.97(2H,m),1.69(3H,s),1.58(3H,s),1.54(3H,s)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ174.85,162.73,157.57,154.94,152.77,135.10,130.81,130.12,127.43,127.20,124.22,123.96,122.71,116.73,115.27,114.62,102.19,28.04,26.26,25.51,17.66,16.02。
2、糖基转移酶(YjiC)的表达与精制：
(1)实验材料：
仪器：PCR仪(日本TaKaRa公司)。
试剂：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(美国Sigma公司)，聚合酶链反应相关酶(日本TaKaRa公司)。
(2)YjiC的表达与精制：
通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)得到Bacillus来源的糖基转移酶(YjiC)基因，并定向克隆到pET28/-his载体上构建重组质粒pET302-YjiC。将重组质粒pET302-YjiC热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主，并利用诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)优化重组质粒pET302-YjiC的表达条件，并采用Ni2+NTA树脂纯化，如十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析图所示，获得了高纯度His-tag糖基转移酶(YjiC)(见图1)。
3、体外酶法糖基化反应及其反应条件的优化：
(1)实验材料：
仪器：高效液相色谱仪(美国Dionex公司,P580泵，PDA-100检测器)，液质联用色谱仪(美国Finnigan公司)。
试剂：乙腈、甲醇(美国Fisher公司)，UDP-glucose(美国Sigma公司)。
(2)体外酶法糖基化反应：
体外酶法糖基化反应中，糖基转移酶YjiC对底物(Corylifol A)的选择特异性是整个反应的关键。本发明中，利用LC-MS对体外酶反应液进行分析，确定了YjiC对CorylifolA具有催化供体上的糖转移到底物上的功能。
具体反应条件为：将含25mmol pH值为9.6的Tris-HCl、1mmol MgCl2、0.5mg His-tag糖基转移酶、3mmol UDP-glucose和1mg Corylifol A的反应液1mL在30℃反应3小时，溶于一定体积的甲醇并将上清液利用HPLC进行分析：流动相(溶剂B:乙腈；溶剂A:水)、梯度洗脱(0～20分钟，20％～100％溶剂B；20～30分钟，100％溶剂B)流速(1mL/min)、检测波长为240nm；色谱柱为SunFireTM prep C18,4.6×150mm；以及LC-MS进行分析，同时检测出2个不同保留时间的峰，并且分子量分别增加，两分子葡萄糖分子量的715.4[M+H]+和一分子葡萄糖分子量的553.5[M+H]+离子峰。
(3)体外酶法糖基化反应条件的优化：
体外酶法糖基化反应中，除了酶对底物的选择特异性之外，其它反应条件也影响产物的产率，因此，本发明为了最大的提高反应产率，以糖基化产物转化率为指标，对反应条 件进行优化，如反应液的pH值、反应时间、UDP-glucose的浓度对转化率的影响，如图2所示。以糖基化产物转化率为指标，通过对各反应条件进行优化，最终寻找出了最佳的条件为：Tris-HCl的pH值为9.6、反应为3小时、UDP-glucose的浓度为3mmol，此时Corylifol A糖基化产物转化能力分别为：Corylifol A糖基化衍生物1为173.8mg/L，Corylifol A糖基化衍生物2为624.3mg/L。
4、Corylifol A糖基化衍生物的制备：
(1)实验材料：
仪器：半制备高效液相色谱仪(美国Waters公司)，Bruker ARX核磁共振仪(德国Bruker公司)，JMS-HX/HX110A型质谱仪(日本JEOL公司)。
试剂：乙腈、甲醇(美国Fisher公司)。
(2)方法：将含25mmol pH值为9.6的Tris-HCl、1mmol MgCl2、25mg His-tag糖基转移酶、3mmol UDP-glucose和60mg Corylifol A的反应液50mL在30℃反应3小时，待反应结束后，在100℃水浴加热5min，清除糖基转移酶的活性，再将反应液转移到分液漏斗中，加入同等体积的乙酸乙酯进行萃取，并获得乙酸乙酯提取物49mg。乙酸乙酯提取物经半制备高效液相精制(Waters 2535Q system；色谱柱为SunfireTM prep C18,10×250mm；流动相为40％乙腈；流速为4mL/min)，获得5.2mg Corylifol A糖基化衍生物1和17.7mg CorylifolA糖基化衍生物2。
(3)结构鉴定：
Corylifol A糖基化衍生物1为白色固体；HRESI-MS m/z[M+H]+＝715.2975，分子式为C37H47O14；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)：δ8.38(1H,s,H-2),8.03(1H,d,J＝8.9Hz,H-5),7.52(2H,m,H-2',H-5'),7.23(1H,d,J＝2.3Hz,H-8),7.15(2H,m,H-6,H-5'),5.34(1H,dd,J＝7.4,6.3Hz,H-2”),5.10(1H,d,J＝7.4Hz,H-1”'),5.07(1H,dd,J＝8.7,3.4Hz,H-6”),4.83(1H,d,J＝7.5Hz,H-1””),3.76(2H,m,H-6”',H-6””),3.54-3.37overlap,3.41(2H,dd,J＝15.6,7.7Hz,H-1”),3.25(2H,m,H-5”',H-5””),2.05(2H,m,H-4”),1.99(2H,m,H-5”),1.68(3H,s,H-8”),1.55(3H,s,H-10”),1.52(3H,s,H-9”)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ174.62(C-4),161.43(C-7),157.03(C-9),155.04(C-4'),153.64(C-2),135.35(C-3”),130.64(C-7”),129.93(C-2'),129.68(C-3'),127.43(C-6'),126.94(C-5),125.20(C-1'),124.11(C-6”),123.69(C-3),122.37(C-2”),118.45(C-10),115.59(C-5'),114.67(C-6),103.38(C-8),101.14(C-1””),99.96(C-1”'),77.19(C-5”'),77.07(C-5””),76.75(C-3”'),76.46(C-3””),73.42(C-2”'),73.12(C-2””),69.80(C-4”'),69.61(C-4””),60.78(C-6”'),60.61(C-6””),40.55(C-4”),27.74(C-1”),26.10(C-5”),23.37(C-8”),17.54(C-9”),15.89(C-10”)。根据波谱数据、文献综合解析，corylifol A 糖基化衍生物1的结构式为：
Corylifol A糖基化衍生物2为白色固体；HRESI-MS m/z[M+H]+＝553.2443，分子式C31H36O9；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)：δ8.26(1H,s,H-2),7.93(1H,d,J＝8.7Hz,H-5),7.29(2H,m,H-2',H-6'),7.12(1H,m,H-6),6.90(1H,m,H-5'),6.82(1H,s,H-8),5.34(1H,t,J＝6.9Hz,H-2”),5.06(1H,m,H-6”),4.82(1H,d,J＝7.5Hz,H-1”'),3.71(1H,m,H-6”'),3.57-3.37overlap,3.40(2H,dd,J＝15.6,7.8Hz,-H-1”),2.06(2H,dd,J＝14.7,7.0Hz,H-5”),1.98(2H,m,H-4”),1.67(3H,s,H-10”),1.55(3H,s,H-9”),1.52(3H,s,H-8”)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ174.52(C-4),163.56(C-7),157.51(C-9),154.95(C-4'),152.93(C-2),135.33(C-3”),130.64(C-7”),129.89(C-2'),129.66(C-3'),127.41(C-6'),127.19(C-5),125.51(C-1'),124.11(C-6”),123.43(C-3),122.39(C-2”),116.33(C-10),115.38(C-5'),114.67(C-6),102.06(C-8),101.20(C-1”'),77.06(C-5”'),76.76(C-3”'),73.43(C-2”'),69.81(C-4”'),60.79(C-6”'),39.52(C-4”),27.73(C-1”),26.11(C-5”),25.36(C-9”),17.54(C-8”),15.88(C-10”)。根据波谱数据、文献综合解析，corylifol A糖基化衍生物2的结构式为：
实施例3.检测Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的水溶性：
仪器：KQ 5200B超声仪(中国昆山超声仪器有限公司)，离心机(意大利ALC公司)，HPLC (美国Dionex公司)。
试剂：乙腈和甲醇(美国Fisher公司)。
方法：分别取足够量的Corylifol A糖基化衍生物1、Corylifol A糖基化衍生物2及Corylifol A，分别溶于装有400μL蒸馏水的1.5mL离心管中，并在室温条件下利用超声波辅助溶解，使其呈过饱和状态。超声波溶解30分钟后，再10000r/min离心20分钟，取上清液稀释至适当浓度，注入HPLC进行分析，并求算水溶液中化合物的浓度。
实验结果如表1所示：Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的水溶性和其底物化合物(CorylifolA)相比有显著提高，分别是底物化合物的26.91倍和15.13倍。
表1 Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的水溶性检测：
化合物 水中的溶解度(μmol/L) 相对溶解度
Corylifol A糖基化衍生物1 228.38±13.07 26.91
Corylifol A糖基化衍生物2 128.45±1.68 15.13
Corylifol A 8.49±0.58 1
实施例4.检测Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2对pH和温度的稳定性：
仪器：Mini Dry Bath(杭州米欧仪器有限公司)。
试剂：乙腈、甲醇(美国Fisher公司)。
方法：pH稳定性的测定：将Corylifol A糖基化衍生物1、Corylifol A糖基化衍生物2和底物(CorylifolA)分别溶于200μL不同pH(6.0、7.0、8.0、8.8、9.6、10.2)的Tris-HCl缓冲液中，在室温下反应0.5小时，并用HPLC直接检测。
温度稳定性的测定：将Corylifol A糖基化衍生物1、Corylifol A糖基化衍生物2和底物(CorylifolA)分别溶于200μL的Tris-HCl(取pH稳定性检测的最稳定的pH值)在不同温度下(40、60、80、100℃)置于Mini Dry Bath反应30分钟后，注入HPLC进行检测，并且与在室温条件下进行比较。
实验结果如图3所示，用降解率表示稳定性，Corylifol A经糖基化的修饰，在一定的pH和高温的条件下Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2比底物(Corylifol A)更加稳定，且Corylifol A糖基化衍生物1的稳定性更好。
实施例5.MTT法检测Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2对三种肿瘤细胞增殖的影响：
该实施例通过对人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC7721细胞、人结肠癌SW480细胞的杀伤作用进行效果评价。
(1)实验材料：
细胞株：人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC7721细胞、人结肠癌SW480细胞来源于美国American Type Culture Collection(ATCC)公司。
仪器：二氧化碳培养箱(美国SHELL LAB公司)，多功能酶标仪(美国BioTek)，倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)。
试剂：噻唑蓝(MTT)购自美国Sigma公司；培养液、二甲基亚砜(DMSO)、0.25％胰蛋白酶、青霉素和链霉素购自Hyclone；96孔培养板购自Coming公司；胎牛血清购自美国Millipore公司。
(2)方法：
细胞培养：将人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC7721细胞、人结肠癌SW480细胞细胞接种于DMEM(含10％灭活胎牛血清，100IU/1青霉素，100μg/mL链霉素)，置5％CO2，37℃，饱和湿度环境下培养并传代。
MTT法：取对数生长期的细胞，用0.25％胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μL培养液中含有5000个细胞，于5％CO2饱和湿度37℃培养箱中培养。培养14小时后，按不同浓度处理化合物(同时设阳性对照组：格尔德霉素20μtmol/L)，每个处理3个复孔，继续培养48小时后每孔加入10μL浓度为5g/L的MTT溶液继续孵育4小时，弃去培养液，每孔加入DMSO 150μL，37℃孵育30分钟，微量振荡器振荡10分钟使结晶物充分溶解，用酶标仪在570nm波长下检测每孔的吸光度(A)值，计算细胞存活率：细胞存活率/％＝实验组A570nm/对照组A570nm×100％，绘制剂量效应曲线。以上实验重复3次。
(3)实验结果见表2，Corylifol A糖基化衍生物2在体外对多种肿瘤细胞具有一定的抑制其增殖的作用，IC50在114.5到146.3μmol/L之间。
表2Corylifol A糖基化衍生物1和Corylifol A糖基化衍生物2的细胞毒性(IC50，μmol/L，Mean±SD，n＝3)：
化合物 MCF-7 SMMC7721 SW480
Corvlifol A 58.2±4.20 64.6±0.74 51.2±4.17
Corylifol A糖基化衍生物1 ＞200 ＞200 ＞200
Corylifol A糖基化衍生物2 146.3±1.05 125.7±1.58 114.5±2.28

Claims (7)

1.Corylifol A糖基化衍生物，其特征在于，具有如式(I)所示的结构通式：
其中R是氢或6-羟甲基-2,3,4,5四羟基-四氢吡喃。
2.如权利要求1所述的Corylifol A糖基化衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)糖基转移酶的表达及精制：
通过聚合酶链反应得到Bacillus来源的糖基转移酶基因，并定向克隆到pET28/-his载体上构建重组质粒pET302-糖基转移酶，将重组质粒pET302-糖基转移酶热激转化至大肠杆菌BL21宿主上，并利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷优化重组质粒pET302-糖基转移酶的表达条件，随后，采用Ni2+NTA树脂纯化，获得高纯度His-tag糖基转移酶；
(2)Corylifol A糖基化衍生物的制备：
将含25mmol pH值为9.6的Tris-HCl、1mmol MgCl2、25mg His-tag糖基转移酶、3mmolUDP-glucose和60mg Corylifol A的反应液50mL在30℃反应3小时；反应结束后，在100℃水浴加热5min，清除糖基转移酶的活性，再用乙酸乙酯对反应液进行萃取，获得乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物经半制备高效液相精制，获得Corylifol A糖基化衍生物。
3.权利要求1所述的Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的Corylifol A糖基化衍生物被配制为用于口服或注射给药。
5.根据权利要求3所述的Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的肿瘤细胞是造血系统、内分泌系统、肺系统、肠胃系统、骨骼肌系统、生殖系统、中枢神经系统或泌尿系统部位的肿瘤细胞。
6.根据权利要求5所述的Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的肿瘤细胞为肝癌细胞、结肠癌细胞和乳腺癌细胞。
7.权利要求4所述的Corylifol A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述的Corylifol A糖基化衍生物及其盐被配制为液体制剂、片剂、颗粒剂、冲剂、胶丸剂、胶囊、缓释剂、滴丸剂或口崩制剂。
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