CN103384682A

CN103384682A - 结合il-17a和il-17f的抗体分子

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Publication number: CN103384682A
Application number: CN2012800095814A
Authority: CN
Inventors: R·亚当斯; T·S·贝克; A·D·G·劳森
Original assignee: UCB Pharma SA
Current assignee: UCB biopharmaceutical Co., Ltd
Priority date: 2011-01-14
Filing date: 2012-01-11
Publication date: 2013-11-06
Anticipated expiration: 2032-01-11
Also published as: RS56298B1; CA2823812C; KR101950306B1; CL2013002044A1; US20180346561A1; NL301159I2; AU2012206431B2; US20120183558A1; JP6028737B2; SG191906A1; US9034600B2; EP2663577A1; FIC20220002I1; ES2632583T3; KR20140005964A; SI2663577T1; BR112013017951A2; IL227347B; US20150218271A1; FR22C1000I2

Abstract

本发明涉及对IL-17A和IL-17F的抗原决定簇具有特异性的抗体分子，所述抗体分子的治疗用途及用来生产所述抗体分子的方法。

Description

结合IL-17A和IL-17F的抗体分子

本发明涉及对IL-17A和IL-17F的抗原决定簇具有特异性的抗体分子。本发明也涉及所述抗体分子的治疗用途以及用来生产所述抗体分子的方法。

IL-17A（最初命名为CTLA-8也就是已知的IL-17）是促进炎症的细胞因子而且是IL-17家族的创始成员（Rouvier等人,1993,J.Immunol.150:5445-5456）。随后，鉴定出另外5个家族成员(IL-17B–IL-17F)，包括与IL-17A共享约55%的氨基酸序列同源性(Moseley等人,2003,Cytokine Growth Factor Rev.14:155-174)的最相关的IL-17F（ML-1）。最近定义的自身免疫相关的辅助型T细胞亚群Th17表达IL-17A和IL-17F，也表达IL-21和IL-22特征细胞因子(Korn等人,2009,Annu.Rev.Immunol.27:485-517)。IL-17A和IL-17F表达为同源二聚体，但也能表达为IL-17A/F异源二聚体(Wright et al.2008,J.Immunol.181:2799-2805)。IL-17A和F信号通过受体IL-17R、IL-17RC或IL-17RA/RC受体复合物(Gaffen2008,Cytokine.43:402-407)。IL-17A和IL-17F都与多种自身免疫疾病相关。

因此，对于治疗IL-17调节的疾病，IL-17A和IL-17F的双价拮抗剂会比单一拮抗剂更有效。WO2007/106769、WO2008/047134、WO2009/136286和WO2010/025400已描述了结合IL-17A和IL-17F的抗体。

本发明提供能同时以高亲和力结合IL-17A和IL-17F的改进的中和抗体。特别是，本发明所述抗体能特异性地结合IL-17A和IL-17F两者，即所述抗体不结合其他亚型的IL-17。优选地，本发明所述抗体也结合IL-17A/IL-17F异源二聚体。优选地，本发明所述抗体中和IL-17A和IL-17F的活性。在一个实施方案中，本发明所述抗体也中和IL-17A/IL-17F异源二聚体的活性。本发明所述抗体因此具有可以抑制IL-17A和IL-17F两者的生物活性的有利特性。因此，本发明也提供了将所述抗体应用于治疗和/或防治通过IL-17A或IL-17F的任一个或两者同时介导的疾病，如自身免疫或炎症疾病或癌症。

此处所用术语“中和抗体”描述了能够中和IL-17A和IL-17F两者的生物信号传导活性的抗体，例如通过阻断IL-17A和IL-17F与其一个或多个受体的结合以及通过阻断IL-17A/IL-17F异源二聚体与其一个或多个受体结合。应认识到，此处所用术语“中和”是指生物信号传导活性的减少，其可以是部分的或完全的。进一步，应认识到，抗体对IL-17A和IL-17F的活性的中和程度可以是相同的或者不同的。在一个实施方案中，IL-17A/IL-17F活性的中和程度与IL-17A或IL-17F活性的中和程度可以是相同的或不同的。

在一个实施方案中，本发明所述抗体特异性地结合IL-17A和IL-17F。特异性地结合意为抗体对IL-17A和IL-17F多肽（包括IL-17A/IL-17F异源二聚体）比其他多肽具有更大的亲和力。优选地，IL-17A和IL-17F多肽是人源的。在一个实施方案中，所述抗体也结合猕猴的IL-17A和IL-17F。

IL-17A和IL-17F多肽或其两者的混合物或者表达一个或两个所述多肽的细胞可用来生产特异性识别两个多肽的抗体。IL-17多肽（IL-17A和IL-17F）可以是“成熟的”多肽或者其生物活性片段或衍生物，其中优选地包括受体结合位点。优选地，IL-17多肽是成熟的多肽。IL-17多肽可通过本领域技术人员熟知的处理过程从包含表达系统的基因工程改造过得宿主细胞中生产，或可从天然生物来源回收。在本申请中，术语“多肽”包括肽、多肽以及蛋白质。上述这些可以互换使用除非另有说明。IL-17多肽在一些情况下可以是更大的蛋白质的一部分，比方说例如融合到一个亲和标签的融合蛋白质。针对这些多肽生成的抗体可以通过使用熟知的常规方案将多肽施用于动物而获得，其中动物免疫是必须的，特别是非人的动物，参见例如实验免疫学手册（Handbook of Experimental Immunology,D.M.Weir(ed.),Vol4,Blackwell Scientific Publishers,Oxford,England,1986）。许多温血动物，比如兔、小鼠、大鼠、羊、牛或猪可被免疫。但是通常优选小鼠、兔、猪和大鼠。

用于本发明的抗体包括完整的抗体和其功能活性片段或衍生物并且可以是但不限于单克隆、多价、多特异性、双特异性、人源化或嵌合抗体，域抗体例如VH、VL、VHH、单链抗体、Fv、Fab片段、Fab’和F(ab’)₂片段以及上述任一种的表位结合片段。其他抗体片段包括在国际专利申请WO2005003169、WO2005003170和WO2005003171中描述的那些。其他抗体片段包括在WO2009040562和WO2010035012中分别描述的Fab-Fv和Fab-dsFv片段。抗体片段及其生产方法是本领域技术人员所熟知的，参见例如Verma等人,1998,Journal ofImmunological Methods,216,165-181;Adair和Lawson,2005.Therapeutic antibodies.Drug Design Reviews-Online2(3):209-217.

用于本发明的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，例如包含特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本发明所述的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任一类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚型。

可通过本领域已知的任何方法来制备单克隆抗体，例如杂交瘤技术（Kohler&Milstein,1975,Nature,256:495-497)，三源杂交瘤技术，人B细胞杂交瘤技术（Kozbor等人,1983,Immunology Today,4:72）以及EBV-杂交瘤技术（Cole等人,Monoclonal Antibodies andCancer Therapy,pp77-96,Alan R Liss,Inc.,1985）

用于本发明的抗体也可以用单个淋巴细胞抗体的方法产生，通过克隆和表达从为生产特定抗体筛选出来的单个淋巴细胞产生的免疫球蛋白可变区cDNAs，其通过例如Babcook,J.等人,1996,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(15):7843-7848l;WO92/02551;WO2004/051268以及国际专利申请号WO2004/106377所描述的方法筛选。

人源化抗体是来自非人物种的抗体分子，其具有来自非人物种的一个或多个互补决定区（CDRs）以及来自人免疫球蛋白分子的框架区（参见，例如US5,585,089;WO91/09967）

嵌合抗体是通过免疫球蛋白基因编码的那些抗体，其已被基因工程改造从而其轻链和重链基因由属于不同物种的免疫球蛋白基因片段构成。这些嵌合抗体有可能抗原性较低。

双价抗体可通过本领域已知的方法制备（Milstein等人,1983,Nature305:537-539;WO93/08829,Traunecker et al.,1991,EMBO J.10:3655-3659）。多价抗体可包含多种特异性或可以是单特异性的（参见例如WO92/22853和WO05/113605）。

用于本发明的抗体也可以使用本领域已知的各种噬菌体展示的方法来产生，并且包括被Brinkman等人(在J.Immunol.Methods,1995,182:41-50),Ames et al.(J.Immunol.Methods,1995,184:177-186)，Kettleborough等人(Eur.J.Immunol.1994,24:952-958)，Persic等人(Gene,19971879-18)，Burton等人(Advances in Immunology,1994,57:191-280)以及WO90/02809;WO91/10737;WO92/01047;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;WO95/20401;and US5,698,426;5,223,409;5,403,484;5,580,717;5,427,908;5,750,753;5,821,047;5,571,698;5,427,908;5,516,637;5,780,225;5,658,727;5,733,743和5,969,108公开的那些方法。用于生产单链抗体的技术，例如US4,946,778所描述的，也可以适用于生产结合IL-17A和IL-17F的单链抗体。同样，转基因小鼠或其他生物体，包括其他哺乳动物，可用于表达人源化抗体。

抗体筛选可以使用测量与人IL-17A和人IL-17F的结合的测定分析来完成，例如本文实施例中描述的BIAcore^TM检验分析。适合的中和测定法是本领域已知的，参见例如WO2008/047134和本文所述实施例。

抗体可变区的残基是根据Kabat等人设计的系统按惯例编码的。所述系统由Kabat等人,1987,在Sequences of Proteins ofImmunological Interest,US Department of Health and HumanServices,NIH,USA（从此以后“Kabat等人（上述）”）提出。此编码系统用于本说明书，除非另外说明。

Kabat残基命名并不总是直接对应氨基酸氨基的线性编码。实际的线性氨基酸序列可包含与对应于结构性组分的缩短或插入的严格Kabat编码中相比更少的或额外的氨基酸，所述结构性组分无论是可变区结构的框架或互补决定区（CDR）。可通过抗体序列中的同源残基与“标准”Kabat编码序列的对齐来为指定的抗体确定残基的正确的Kabat编码。

重链可变区的CDRs位于根据Kabat编码系统的残基31-35（CDR-H1）、残基50-65（CDR-H2）和残基95-102（CDR-H3）。然而，根据Chothia（Chothia,C.and Lesk,A.M.J.Mol.Biol.,196,901-917(1987)），相当于CDR-H1的环从残基26延伸到残基32。因此此处所用“CDR-H1”包含残基26-35，其通过Kabat编码系统和Chothia的拓扑环定义的结合来描述。

轻链可变区的CDRs位于根据Kabat编码系统的残基24-34（CDR-L1）、残基50-56（CDR-L2）和残基89-97（CDR-L3）。

本发明的一个实施方案提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其包括轻链，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:4中所示的序列作为CDR-L1，SEQ ID NO:5中所示的序列作为CDR-L2，以及SEQ ID NO:6中所示的序列作为CDR-L3（见图1c）。

本发明的所述抗体分子优选地包括互补重链。

因此，本发明的一个实施方案提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其进一步包括重链，其中重链可变区包括具有SEQ ID NO:1中所示的序列作为CDR-H1的CDR，具有SEQ ID NO:2中所示的序列作为CDR-H2的CDR，以及具有SEQ ID NO:3中所示的序列作为CDR-H3的CDR中的至少一个（见图1c）。

本发明的另一个实施方案提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其包括重链，其中重链可变区的CDR-H1、CDR-H12和CDR-H3中的至少两个选自如下：SEQ ID NO:1中所示的序列作为CDR-H1，SEQ ID NO:2中所示的序列作为CDR-H2，以及SEQ IDNO:3中所示的序列作为CDR-H3。例如，抗体可包括重链，其中CDR-H1具有SEQ ID NO:1中所示的序列，而CDR-H2具有SEQ IDNO:2中所示的序列。可选地，抗体可包括重链，其中CDR-H1具有SEQ ID NO:1中所示的序列而CDR-H3具有SEQ ID NO:3中所示的序列，或者抗体可包括重链，其中CDR-H2具有SEQ ID NO:2中所示的序列而CDR-H3具有SEQ ID NO:3中所示的序列。为了避免疑问，应该理解全部的排列组合都包括进来。

本发明的另一个实施方案提供了对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其包括重链，其中重链可变区包括SEQ ID NO:1中所示的序列作为CDR-H1，SEQ ID NO:2中所示的序列作为CDR-H2，以及SEQ ID NO:3中所示的序列作为CDR-H3。

在一个实施方案中，根据本发明所述的抗体包括重链和轻链，其中重链可变区包括SEQ ID NO:1中所示的序列作为CDR-H1，SEQ IDNO:2中所示的序列作为CDR-H2，以及SEQ ID NO:3中所示的序列作为CDR-H3，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:4中所示的序列作为CDR-L1，SEQ ID NO:5中所示的序列作为CDR-L2，以及SEQ IDNO:6中所示的序列作为CDR-L3。

在一个实施方案中，本发明所提供的抗体是单克隆抗体。

在一个实施方案中，本发明所提供的抗体是CDR嫁接抗体分子，其包括SEQ ID NOS:1-6中提供的每一个CDRs。此处所用术语“CDR嫁接抗体分子”是指抗体分子，其中重链和/或轻链包含来自供体抗体（例如鼠单克隆抗体）的一个或多个CDRs（包括，如需要，一个或多个修饰的CDRs），所述CDRs嫁接到来自受体抗体（例如人单克隆抗体）的重链和/或轻链的可变区框架。参见Vaughan等人,NatureBiotechnology,16,535-539,1998作为综述。在一个实施方案中，仅将此处上述的任一CDRs的一个或多个特异性决定残基转移到人抗体框架中，而不是整个的CDR（参见例如，Kashmiri等人,2005,Methods,36,25-34）。在一个实施方案中，仅将此处上述的一个或多个CDRs的特异性决定残基转移到人抗体框架中。在另一个实施方案中，仅将此处上述的每一个CDRs的特异性决定残基转移到人抗体框架中。

当CDRs或特异性决定残基被嫁接时，可使用任何合适的受体可变区框架序列，考虑到衍生CDRs的供体抗体的类/型，包括鼠、灵长类和人的框架区。优选地，根据本发明的CDR-嫁接的抗体具有可变区，其包括人受体框架区以及一个或多个CDRs区或上述特异性决定残基。因此，在一个实施方案中提供的是中和性CDR-嫁接抗体，其中可变区包括人受体框架区和非人供体的CDRs。

可用于本发明的人框架的实例为KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和POM(Kabat等人，上述)。例如，KOL和NEWM可用于重链，REI可用于轻链以及EU、LAY和POM可同时用于重链和轻链。可选地，可使用人的种系序列；这些在http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/上可供使用。

本发明所述CDR-嫁接抗体中，受体的重链和轻链不必衍生自同一个抗体而且如果需要可以包括具有来自不同链的框架序列的复合链。

本发明所述CDR-嫁接抗体的重链的优选框架衍生自之前在WO2008/047134描述的人亚型VH3序列1-33-07连同JH4。相应地，所提供的是中和性CDR-嫁接抗体，其包括至少一个非人的供体CDR，其中重链框架区是衍生自人亚型序列1-33-07连同JH4。人JH4的序列如下：(YFDY)WGQGTLVTVSS。YFDY基序是CDR-H3的部分并不是框架4的部分（Ravetch,JV.等人,1981,Cell,27,583-591）

本发明所述CDR-嫁接抗体的轻链的优选框架衍生自之前在WO2008/047134描述的人种系亚型VK1序列2-1-(1)L4连同JK1。因此，所提供的是中和性CDR-嫁接抗体，其包括至少一个非人的供体CDR，其中轻链框架区是衍生自人亚型序列VK12-1-(1)L4连同JK1。人JK1的序列如下：(WT)FGQGTKVEIK。WT基序是CDR-L3的部分并不是框架4的部分（Hieter,PA.,等人,1982,J.Biol.Chem.,257,1516-1522）

同样地，本发明所述CDR-嫁接抗体中，框架区不需要和受体抗体的框架区具有完全相同序列。比如，少见的残基可以变成对于受体链的分类或分型来说更常出现的残基。可选地，受体框架区的所选残基可以改变从而他们符合在供体抗体相同位置上发现的残基（参见Reichmann等人,1998,Nature,332,323-324）。这种改变应该保持到最小必需以恢复供体抗体的亲和力。用来选择受体框架区中可能需要改变的残基的方案在WO91/09967中被提出。

优选地，本发明所述CDR-嫁接抗体分子中，如果受体重链具有人VH3序列1-33-07连同JH4，那么重链的受体框架区包括，除了一个或多个供体CDRs之外，还有在至少94位（根据Kabat等人，（上述））上的供体残基。因此，所提供的是CDR-嫁接抗体，其中重链可变区的至少94位上的残基是供体残基。

优选地，本发明所述CDR-嫁接抗体分子中，如果受体轻链具有人亚型VK1序列2-1-(1)L4连同JK1，那么不转移供体残基，即仅仅转移CDRs。因此，所提供的是CDR-嫁接抗体，其中仅CDRs转移到供体框架。

供体残基是来自供体抗体的残基，即最初衍生出所述CDRs的抗体。

本发明中通过改变轻链上的5个残基对已知为CA028_0496（之前如WO2008/047134所述）的抗体进行改造。3个残基在CDRs上并且2个在框架上。因此，在一个实施方案中轻链可变区包括在30位上的精氨酸残基，在54位上的丝氨酸残基，在56位上的异亮氨酸残基,在60位上的天冬氨酸残基和在72位上的精氨酸残基。

因此，在一个实施方案中，本发明的抗体包括轻链，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:7中所示的序列（gL7）。

在另一个实施方案中，本发明的抗体包括轻链，其中轻链可变区包括与SEQ ID NO:7中所示的序列具有至少96%一致性的序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包括轻链，其中轻链可变区包括与SEQ ID NO:7中所示的序列具有至少97、98或99%一致性的序列。

在一个实施方案中，本发明的抗体包括重链，其中重链可变区包括SEQ ID NO:9中所示的序列（gH9）。

在另一个实施方案中，本发明的抗体包括重链，其中重链可变区包括与SEQ ID NO:9中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列。在一个实施方案中，本发明的抗体包括重链，其中重链可变区包括与SEQ ID NO:9中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%、96、97、98或99%一致性或相似性的序列。

在一个实施方案中，本发明的抗体包括重链和轻链，其中重链可变区包括SEQ ID NO:9中所示的序列，其中轻链可变区包括SEQ IDNO:7中所示的序列。

在另一个实施方案中，本发明的抗体包括重链和轻链，其中重链可变区包括与SEQ ID NO:9中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列并且其中轻链可变区包括与SEQ ID NO:7中所示的序列具有至少96%一致性的序列。优选地，上述抗体包括重链和轻链，其中重链可变区包括与SEQ ID NO:9中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%、96%、97%、98或99%一致性或相似性的序列，其中轻链可变区包括与SEQ ID NO:7中所示的序列具有至少96、97、98或99%一致性的序列。

此处所用“一致性”是指对齐序列中的任何特定位点上，序列之间氨基酸残基是一致的。此处所用“相似性”是指对齐序列中的任何特定位点上，序列之间氨基酸残基是相似的。例如，亮氨酸可被替换为异亮氨酸或缬氨酸。其他的常可以被另一个氨基酸替换的氨基酸包括但不限于：

-苯基丙氨酸、酪氨酸和色氨酸（有芳香侧链的氨基酸）；

-赖氨酸、精氨酸和组氨酸(有碱性侧链的氨基酸）；

-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸）；

-天冬酰胺和谷氨酰胺(有酰胺侧链的氨基酸）；和

-半胱氨酸和蛋氨酸(侧链含硫的氨基酸）。一致性和相似性的程度可易于计算出来（Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988;Biocomputing.Informaticsand Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993;Computer Analysis of Sequence Data,Part1,Griffin,A.M.,andGriffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994;SequenceAnalysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987;和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,MStockton Press,New York,1991）。

本发明所述抗体分子可包含具有全长的重链和轻链的完整抗体分子或其片段，比如域抗体例如VH、VL、VHH、Fab、修饰的Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv或scFv片段。其他抗体片段包括WO2009040562和WO2010035012分别描述的Fab-Fv和Fab-dsFv片段。在一个实施方案中，本发明所述抗体片段选自Fab、Fab’、F(ab’)₂、scFv或Fv片段。

应认识到，本发明所述抗体，特别是上述抗体片段，可并入到其他抗体形式，特别是，多特异性抗体，如双重或三重特异性抗体，其中一种特异性是由本发明所述抗体提供的，即针对IL-17A和IL-17F（包括IL-17A/F异源二聚体）的特异性。因此，在本发明的一个实施方案中提供了包含此处如上所述的一种或多种抗体片段的多特异性抗体。

多特异性抗体的实例包括双价、三价或四价抗体、双-scFv、双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体、双倍体、三倍体（参见例如Holliger和Hudson,2005,Nature Biotech23(9):1126-1136;Schoonjans等人2001,Biomolecular Engineering,17(6),193-202）。其他多特异性抗体包括在WO2009040562、WO2010035012、WO2011/08609、WO2011/030107和WO2011/061492中分别描述的Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-Fv-Fv、Fab-Fv-Fc和Fab-dsFv-PEG片段。

本发明所述抗体分子的恒定区，如果存在，可根据抗体分子的拟具有的功能来筛选，并且特别是根据可能需要的效应子功能。例如，恒定区的域可以是人的IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的域。特别是，当抗体分子预期是用于治疗用途并且需要抗体效应子功能时，可以用人IgG的恒定区的域，特别是IgG1和IgG3同型异体。可选地，当抗体分子预期是用于治疗用途并且不需要抗体效应子功能时，例如用来简单阻断IL-17活性，可以用IgG2和IgG4同型异体。应认识到，也可以使用所述恒定区的域的序列变体。例如可使用IgG4分子，其中如Angal等人,Molecular Immunology,1993,30(1),105-108中所述在241位的丝氨酸已被变为脯氨酸。特别优选的是IgG1恒定域。本领域技术人员也应理解，抗体可能经历各种翻译后修饰。修饰的类型和程度经常依赖于用于表达抗体的宿主细胞系以及培养条件。这些修饰可包括糖基化、蛋氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺去酰胺化的变化。常见的修饰是由于羧肽酶的作用引起的羧基端碱性残基（如赖氨酸或精氨酸）的缺失（如Harris,RJ.Journal ofChromatography705:129-134,1995所述）。因此，例如图2（a）中所示的SEQ ID NO:15抗体重链的C-末端赖氨酸可能缺少。

在一个实施方案中抗体重链包括CH1域并且抗体轻链包括CL域，即κ或λ。

在一个优选的实施方案中，本发明所提供的抗体是对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体，其中重链恒定区包括人IgG1恒定区。因此，本发明提供了抗体，其中重链包括SEQ ID NO:15中所示的序列或由其构成（参见图2a）。

本发明的一个实施方案，抗体包括重链，其中重链包括与SEQ IDNO:15中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列。优选地，抗体包括重链，其中重链包括与SEQ ID NO:15中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性或相似性的序列。

在一个实施方案中，根据本发明的抗体分子包括轻链，其包括SEQ ID NO:11中所示的序列(参见图1d)。

本发明的一个实施方案，抗体包括轻链，其中轻链包括与SEQ IDNO:11中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列。优选地，抗体包括轻链，其中轻链包括与SEQ ID NO:11中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%一致性或相似性的序列。

本发明的一个实施方案提供了抗体，其中重链包括SEQ ID NO:15中所示的序列或由其构成并且其中轻链包括SEQ ID NO:11给出的序列或由其构成。

本发明的一个实施方案，抗体包括重链和轻链，其中重链包括与SEQ ID NO:15中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列并且轻链包括与SEQ ID NO:11中所示的序列具有至少60%一致性或相似性的序列。优选地，抗体包括重链和轻链，其中重链包括与SEQ IDNO:15中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%一致性或相似性的序列，其中轻链包括与SEQ ID NO:11中所示的序列具有至少70%、80%、90%、95%或98%一致性或相似性的序列。

本发明的任何方面的抗体分子优选地具有高亲和力，优选地为皮摩尔。应认识到，根据本发明的抗体对人IL-17A的结合亲和力可能不同于同一个抗体对人IL-17F和/或IL-17A/F异源二聚体的结合亲和力。在一个实例中，本发明所述抗体分子对IL-17A的亲和力大于其对IL-17F的亲合力。在一个实例中，本发明所述抗体分子对IL-17A的亲和力比其对IL-17F的亲合力至少大于5倍。在一个实例中，本发明所述抗体分子对IL-17A的亲和力与其对IL-17F的亲合力相同。在一个实例中，本发明所述抗体分子对IL-17A和IL-17F具有皮摩尔的亲合力。

可使用本领域已知的任何合适的方法测量亲和力，包括此处实施例所述的BIAcore^TM，使用分离到的天然或重组的以同源二聚体存在的IL-17A和IL-17F。

优选地，本发明所述抗体分子对IL-17A具有50pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17A具有20pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17A具有10pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17A具有5pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17A具有3.2pM的结合亲和力。

优选地，在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17F具有100pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17F具有50pM或更少的结合亲和力。在一个实施方案中，本发明所述抗体分子对IL-17F具有23pM的结合亲和力。

应认识到，本发明所提供的抗体的亲和力可以使用本领域已知的合适的方法来改变。本发明因此也涉及本发明所述抗体分子的变体，其具有对IL-17A和~/或IL-17F的改进的亲和力。可通过多种亲和力成熟的方案获得这些变体，其包括突变CDRs（Yang等人,J.Mol.Biol.,254,392-403,1995),链重排（chain shuffling）（Marks等人,Bio/Technology,10,779-783,1992），使用大肠杆菌的致突变菌株（Low等人,J.Mol.Biol.,250,359-368,1996），DNA重排（Patten等人,Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997），噬菌体展示（Thompson等人,J.Mol.Biol.,256,77-88,1996）以及有性PCR（Crameri等人,Nature,391,288-291,1998）。Vaughan等人（上述）讨论了亲和力成熟的这些方法。

如果需要，本发明所用的抗体可以偶联到一个或多个效应分子。应认识到，效应分子可包括一个单一的效应分子或者两个或更多个这类分子从而连接成一个单一的部分，其可附加到本发明所述抗体上。当需要获得一个连接到效应分子的抗体片段，可以通过标准的化学流程或重组DNA流程来制备，其中抗体片段被直接地或经偶联剂连接到效应分子。偶联这种效应分子到抗体上的技术是本领域技术人员所熟知的（参见，Hellstrom等人,Controlled Drug Delivery,2nd Ed.,Robinson et al.,eds.,1987,pp.623-53;Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.,62:119-58以及Dubowchik等人,1999,Pharmacology andTherapeutics,83,67-123）。特定的化学流程包括，例如WO93/06231、WO92/22583、WO89/00195、WO89/01476和WO03031581中所描述的那些。可选地，当效应分子是蛋白质或多肽，连接可使用重组DNA的流程来实现，例如WO86/01533和EP0392745所描述的。

此处所用术语效应分子包括，例如，抗肿瘤试剂、药物、毒素、生物活性蛋白质如酶、其他抗体或抗体片段、合成的或天然发生的聚合物、核酸及其片段等例如DNA、RNA及其片段、放射性核素特别是放射性碘化物、放射性同位素、螯合金属、纳米粒子以及报告基团例如荧光化合物或能被NMR或ESR光谱检测到的化合物。

效应分子的实例包括细胞毒素或细胞毒性试剂，其包括不利于（或杀死）细胞的任何试剂。实例包括combrestatins，海兔毒素、埃坡霉素生物，星形孢菌素、美登木素生物碱、spongistatins、根霉素、软海绵素（halichondrins）、漆斑菌素（roridins）、hemiasterlins、紫杉醇、细胞松驰素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、吐根碱、丝裂霉素、足叶乙甙、替尼泊苷（tenoposide）、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽毒素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾丸素、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、心得安和嘌呤霉素及其类似物或其同系物。

效应分子也包括但不限于，抗代谢物（如氨甲喋呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶达卡巴嗪），烷化剂（如二氯甲基二乙胺、三胺硫磷苯丁酸氮芥（thioepa chlorambucil）、马法兰（melphalan）、卡氮芥（BSNU）和洛莫司汀（CCNU）、环磷酰胺（cyclothosphamide）、白消安、二溴甘露醇（dibromomannitol）、链脲佐菌素、丝裂霉素C、以及顺铂（II）（DDP）顺式铂化物），蒽环类（如柔红霉素（原为道诺霉素）和阿霉素），抗生素（如放线霉素D（原为放线菌素）、博莱霉素、光辉霉素、氨茴霉素（AMC）、卡利奇霉素或duocarmycins）以及抗有丝分裂试剂（如长春新碱和长春花碱）。

其他效应分子可包括螯合放射性核素如¹¹¹铟和⁹⁰钇、镥¹⁷⁷、铋²¹³、锎²⁵²、铱¹⁹²和钨¹⁸⁸/铼¹⁸⁸；或药物，例如但不限于，alkylphosphocholines、拓扑异构酶I抑制剂、紫杉烷和苏拉明。

其他效应分子包括蛋白质、肽和酶。感兴趣的酶，包括但不限于，蛋白水解酶、水解酶、裂解酶、异构酶、转移酶。感兴趣的蛋白质、多肽和肽，包括但不限于，免疫球蛋白、毒素（如相思子毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素、或白喉毒素），蛋白质（如胰岛素、肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板源性生长因子或组织型纤溶酶原激活物、血栓形成剂或抗血管生成剂（如血管抑素内皮抑素）），或者，生物反应修饰物（如淋巴因子、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、神经生长因子（NGF）或其他生长因子和免疫球蛋白）。

其他效应分子可能包括例如在诊断中有用的可检测物质。可检测物质的实例包括各种酶、辅基基团、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性核素、正电子发射金属（用于正电子发射断层扫描）和非放射性的顺磁性金属离子。对于与抗体偶联用于诊断的金属离子，一般参见美国专利号4,741,900。合适的酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖甘酶、或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基基团包括链霉亲和素、亲和素和生物素；合适的荧光材料包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、dichlorotriazinylamine荧光素、丹磺酰氯和藻红蛋白；合适的发光材料包括鲁米诺；合适的生物发光材料包括荧光素酶、荧光素和水母素；和合适的放射性核素包括¹²⁵碘、¹³¹碘、¹¹¹铟和⁹⁹鍀。

效应分子的另一个实例可增加抗体在体内的半衰期，和/或减少抗体的免疫原性和/或增强抗体通过上皮屏障到达免疫系统的递送。合适的这种效应分子的实例包括如WO05/117984所描述的那些聚合物、白蛋白、白蛋白结合蛋白或白蛋白结合化合物。

当效应分子是聚合物，其通常可以是合成的或天然发生的聚合物，例如任选被替代的直链或支链的聚亚烷基、polyalkenylene、聚氧化烯基聚合物，或着分支或不分支的多聚糖，如同-或异-多聚糖。

特定的可选的取代基，可能呈现于上述合成的聚合物，包括一个或多个羟基、甲酯或甲氧基团。

合成聚合物的特定实例包括任选被替代的直链或支链的聚（乙二醇）、聚（丙二醇）、聚（乙烯醇）或其衍生物，特别是尤其任选被替代的聚（乙二醇）如甲氧基聚（乙二醇）或其衍生物。

特定的天然发生的聚合物包括乳糖、淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。

此处所用"衍生物"意在包括活性衍生物，例如巯基-选择性活性基团如马来酰亚胺及诸如此类。所述活性基团可直接或通过连接片段与聚合物连接。应认识到，这种基团的残基在某些情况下将作为抗体片段与聚合物的连接基团而成为产物的一部分。

聚合物的大小如需要可以变化，但一般会在平均分子量500Da到50000Da的范围，优选地5000到40000Da和更优选地20000到40000Da。聚合物大小可以特别根据产品的预期用途进行选择，例如定位到特定组织如肿瘤或延长循环半衰期的能力（综述参见Chapman,2002,Advanced Drug Delivery Reviews,54,531-545）。因此，例如，当产品预期会离开循环系统并穿透组织，例如用于肿瘤治疗，使用小分子量的聚合物可能有利，例如分子量在5000Da左右。当产品停留在循环系统，使用高分子量聚合物可能有利，例如有的分子量在20000Da到40000Da的范围。

特定的优选的聚合物包括聚亚烷基，例如聚（乙二醇）或，特别是，甲氧基聚（乙二醇）或其衍生物，并且特别是具有分子量在约15000Da到约40000Da的范围。

在一个实例中，本发明所用抗体附加到聚（乙二醇）（PEG）部分。在一个特定实例中，抗体是抗体片段并且PEG分子可通过位于抗体片段上的任何可用的氨基酸侧链或末端氨基酸功能基团被附加上，例如任何自由氨基、亚氨基、巯基、羟基或羧基基团。这些氨基酸可以是抗体片段上自然发生的，或可使用重组DNA的方法工程设计到片段中（参加例如US5,219,996;US5,667,425;WO98/25971）。在一个实例中，本发明所述抗体分子是被修饰的Fab片段，其中修饰是在其重链的C-末端添加一个或多个氨基酸来允许附加效应分子。优选地，附加的氨基酸形成被修饰铰链区，其包含可附加上效应分子的一个或多个半胱氨酸残基。多个位点可用来附加上两个或更多的PEG分子。

优选地，PEG分子是通过巯基基团共价连接的，其中至少一个半胱氨酸残基是位于抗体片段上。附加到抗体片段的每个多聚物分子可共价连接到位于所述片段的半胱氨酸残基的硫原子上。共价连接通常会是二硫键或，特别是，硫-碳键。当巯基用作附加位点，可使用适当活化的效应分子，例如巯基选择性的衍生物如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物。在制备上述多聚物修饰的抗体片段中，活化的多聚物可用作起始材料。活化的多聚物可以是任何多聚物，其包括巯基活性基团如α-halocarboxylic acid或酯如碘乙酰胺、亚胺如马来酰亚胺、乙烯基砜或二硫化物。这些起始材料可通过商业途径获得（例如从Nektar,原为Shearwater Polymers Inc.,Huntsville,AL,USA）或通过常规化学流程由商业可获得的起始材料制备。特定PEG分子包括20K甲氧基-PEG-胺（可获得自Nektar,原为Shearwater；Rapp Polymere；和SunBio）以及M-PEG-SPA（可获得自Nektar,原为Shearwater）。

在一个实施方案中，抗体是经修饰的Fab片段，其是PEG化的，即具有PEG（聚（乙二醇））共价附加在其上，例如根据在EP0948544中公开的方法[也参见"Poly(ethyleneglycol)Chemistry,Biotechnicaland Biomedical Applications",1992,J.Milton Harris(ed),PlenumPress,New York,"Poly(ethyleneglycol)Chemistry and BiologicalApplications",1997,J.Milton Harris and S.Zalipsky(eds),AmericanChemical Society,Washington DC和"Bioconjugation ProteinCoupling Techniques for the Biomedical Sciences",1998,M.Aslamand A.Dent,Grove Publishers,New York;Chapman,A.2002,Advanced Drug Delivery Reviews2002,54:531-545]。在一个实例中，PEG附加到铰链区的半胱氨酸上。在一个实例中，经PEG修饰的Fab片段具有马来酰亚胺基团，其共价连接到经修饰的铰链区中的单个巯基基团上。赖氨酸残基可共价连接到马来酰亚胺基团并且赖氨酸残基的每个氨基可附加上分子量约为20000Da的甲氧基聚（乙二醇）聚合物。附加到Fab片段的PEG的总分子量因此可以是大约40000Da。

在一个实施方案中，本发明提供对人IL-17A和人IL-17F具有特异性的中和抗体分子，其为经修饰的Fab片段具有包括SEQ ID NO:9所示的序列的重链以及包括包括SEQ ID NO:7所示的序列的轻链并且在其重链的C-末端具有经修饰的铰链区，该铰链区包含至少一个可以附加上效应分子的半胱氨酸。优选地，效应分子是PEG并且其被附加是使用WO98/25971和WO2004072116所述的方法，据此赖氨酰-马来酰亚胺基团附加到重链C-末端的半胱氨酸残基，而且赖氨酰残基的每个氨基基团已共价连接上具有分子量约20000Da的甲氧基聚（乙二醇）。附加到抗体上的PEG的总分子量因此是大约40000Da。

在另一个实例中，效应分子可用国际专利申请WO2005/003169、WO2005/003170和WO2005/003171所描述的方法附加到抗体片段上。

本发明也提供编码本发明所述抗体分子的重链和/或轻链的分离的DNA序列。优选地，DNA序列编码本发明所述抗体分子的重链或轻链。本发明的DNA序列可包括合成的DNA例如通过化学过程产生的，cDNA，基因组DNA或其任一组合。

编码本发明的抗体分子的DNA序列可通过本领域技术人员所熟知的方面获得。例如，编码部分或全部抗体重链和轻链的DNA序列可按由确定的DNA序列所需或根据对应的氨基酸序列被合成。

编码受体框架序列的DNA对于本领域技术人员是广泛可用的，并能根据其已知的氨基酸序列很容易的合成。

分子生物学标准技术可用于制备编码本发明所述抗体分子的DNA序列。所需的DNA序列可完全被合成或部分使用寡核苷酸合成技术。定向位点突变以及聚合酶链式反应（PCR）技术可酌情使用。

SEQ ID NO:8;SEQ ID NO:10;SEQ ID NO:13;SEQ ID NO:14;SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18和SEQ ID NO:19提供了合适序列的实例。

本发明也涉及包括一个或多个本发明所述DNA序列的克隆载体或表达载体。因此，提供了包括编码本发明抗体的一个或多个DNA序列的克隆载体或表达载体。优选地，克隆载体或表达载体包括两个DNA序列，其编码本发明所述抗体分子的轻链和重链并分别带有合适的信号序列。优选地，根据本发明的载体包括SEQ ID NO:14和SEQID NO:18给出的序列。在一个实施方案中，根据本发明的载体包括SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:17给出的序列。

构建载体的常见方法、转染方法以及培养方法是本领域技术人员所熟知的。在这方面，可参照“Current Protocols in Molecular Biology”,1999,F.M.Ausubel(ed),Wiley Interscience,New York and theManiatis Manual produced by Cold Spring Harbor Publishing。

也提供了包括含有编码本发明所述抗体的一个或多个DNA序列的一个或多个克隆载体或表达载体的宿主细胞。任何合适的宿主细胞/载体系统可用于表达编码本发明抗体分子的DNA序列。细菌，例如大肠杆菌，及其它微生物系统可使用或者真核的，例如哺乳动物，宿主细胞表达系统也可使用。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO、骨髓瘤或杂交瘤细胞。

本发明也提供了生产根据本发明所述抗体分子的方法，其包括在适合于致使编码本发明所述抗体分子的DNA表达出蛋白质的条件下培养包含本发明所述载体的宿主细胞，以及分离抗体分子。

抗体分子可仅包括重链或轻链多肽，在所述情况下仅重链或轻链多肽编码序列需要用来转染宿主细胞。对于生产包括重链和轻链两者的产物，细胞系可转染两个载体，第一个载体编码轻链多肽而第二个载体编码重链多肽。可选地，可使用单一载体，所述载体包括编码轻链和重链的序列。

由于本发明所述抗体在治疗和/或防止病理状况中有用，本发明也提供了药学或诊断组合物，其包括与一种或多种药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体相组合的本发明所述抗体分子。因此，提供了根据本发明所述抗体用于制备药物中的用途。所述组合物经常会作为通常会包括药学可接受的载体的无菌药学组合物的一部分供应。本发明的药学组合物可另外包括药学可接受的佐剂。

本发明也提供了制备药学或诊断组合物的方法，其包括添加和混合与一种和多种药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体一起的本发明所述抗体分子。

抗体分子可以是药学或诊断组合物中的单独的活性成分或者可以是与包括其他抗体成分在内的其他活性成分相伴，例如抗-TNF、抗-IL-1β、抗T细胞、抗IFNγ或抗LPS，或者非抗体成分如黄嘌呤或小分子抑制剂。

药学组合物优选地包括治疗有效量的本发明所述抗体。此处所用术语“治疗有效量”是指治疗、改善或预防目标疾病或状况，或者显示可检测的治疗或预防效果的治疗试剂的量。对于任何抗体，治疗有效量可在细胞培养测定或在动物模型进行最初的评估，通常在啮齿类、兔、狗、猪或灵长类。动物模型也可用于确定合适的浓度范围和施用的途径。那么这些信息可用于确定在人上施用的有用的剂量和途径。

对于人受试者的精确的治疗有效量将取决于疾病状态的严重性、受试者的一般健康状况、年龄、体重以及受试者的性别、饮食、施用时间和频率、药物的组合、反应敏感性以及对治疗的耐受/响应。所述的量可通过例行实验确定并且在临床医生的判断能力内。一般来说，治疗有效量是从0.01mg/kg到50mg/kg，优选地0.1mg/kg到20mg/kg。药学组合物可以每一剂中包含预先确定量的本发明所述活性试剂的单位剂量方便的存在。

组合物可单独适用于患者或者可以与其他试剂、药物或激素组合施用（例如同时地、顺序地或分别地）。

本发明所述抗体分子施用的剂量取决于要治疗的状况的本质，存在的炎症的程度以及抗体分子是防治性的使用或用于治疗已经存在的状况。

剂量的频率将取决于抗体分子的半衰期及其作用的持续时间。如果抗体分子具有短的半衰期（例如2-10小时）就可能需要每天给予一个或更多个剂量。可选地，如果抗体分子具有长的半衰期（例如2-15天）就可能仅需要每天给予一次的剂量，每周一次或甚至每1个或2个月一次。

药学可接受的载体不应该其本身诱导产生对接受组合物的个体有害的抗体并且不应该是毒性的。合适的载体可能是大的缓慢代谢的大分子如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物以及灭活病毒颗粒。

可使用药学可接受的盐，如矿物酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，或有机酸，如醋酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐。

治疗组合物中的药学可接受的载体可另外包含液体如水、生理盐水、甘油、乙醇。此外，在这些组合物中可存在辅助物质，如润湿或乳化剂或者pH缓冲物质。这种载体使药学组合物配制成为患者摄取的片、丸、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆和悬液。

对于施用的优选形式包括适于非肠道施用，如通过注射或灌注，例如通过快速注射或持续注射。当产品是用于注射或灌注，其可采用在油性的或水性的介质中的悬液、溶液或乳液的形式并且其可包含配方性试剂，如悬浮、防腐、稳定和/或分散试剂。可选地，抗体分子可以是干燥形式，用来在使用前用合适的无菌液体来重构。

一旦被配制，本发明所述组合物可直接施用于受试者。待治疗的受试者可以是动物。然而，优选地组合物适宜于施用于人受试者。

本发明的药学组合物可以通过任何多种途径施用，包括但不限于口服、静脉、肌内、动脉内，髓内，鞘内、心室内、透皮、经皮(例如，参见WO98/20734)、皮下、腹腔内、鼻内、肠内、外用、舌下、阴道内或直肠途径。无痛皮下注射器也可以用来施用本发明药学组合物。典型地，治疗组合物可制备成可注射的液体溶液或悬液。也可制备成固体形式，其适合于在注射前在液体介质中用作溶液和悬液。

所述组合物的直接递送将一般通过皮下、腹腔内、静脉内或肌肉内的注射完成，或被递送到组织间隙。组合物也可施用到病灶。剂量治疗可能是单剂量方案或多剂量方案。

应认识到，组合物的活性成分会是抗体分子。就此而论，会易于在肠胃道降解。因此，如果组合物通过使用肠胃道的途径施用，组合物需要包含这样的试剂，其保护抗体免受降解但是其一旦经过肠胃道吸收会释放出抗体。

对药学可接受的载体的详尽讨论可在Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company,N.J.1991)中找到。

在一个实施方案中，制剂作为一种包括吸入剂的外部施用的制剂来提供。

合适的可吸入制备物包括可吸入粉末、包含推进剂气体或不含推进剂气体的可吸入溶液的可计量气溶胶。根据本公开所述的包含活性物质的可吸入粉末可单独地由上述活性物质构成或由上述活性物质与生理可接受的赋形剂的混合物构造。

这些可吸入粉末可包括单糖（例如葡萄糖或阿拉伯糖），二糖（例如乳糖、蔗糖、麦芽糖），寡-和多糖（例如葡聚糖），多元醇（例如山梨醇、甘露醇、木糖醇），盐（例如氯化钠、碳酸钙）或所述这些彼此之间的混合。单或二糖，乳糖或葡萄糖的应用，适于特别是但不排他的以其水化物的形式使用，

在肺中沉积的颗粒需要颗粒的尺寸小于10微米，如1-9微米例如0.1-5μm，特别是1-5μm。活性组分（如抗体或片段）的颗粒尺寸是头等重要的。

可用于制备可吸入气溶胶的推进剂气体是本领域已知的。合适的推进剂气体选自烃类如n-丙烷、n-丁烷或异丁烷和卤代烃如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、环丙烷或环丁烷的氯或氟衍生物。上述推进剂气体可独自使用或以其混合物使用。

特别合适的推进剂气体卤代烷衍生物，其选自TG11、TG12、TG134a和TG227。在上述卤代烃类中，TG134a(1,1,1,2-四氟乙烷)和TG227(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷）及其混合物特别适合。

包含推进剂气体的可吸入气溶胶也可以包含其他成分，例如助溶剂、稳定剂、表面活性试剂（表面活性剂）、抗氧化剂、润滑剂和调节pH的方法。所有这些成分是本领域已知的。

根据本发明的包含推进剂气体的可吸入气溶胶可包括按活性物质重量计高达5%。根据本发明的气溶胶包含，例如，以重量计的0.002-5%，以重量计的0.01-3%，以重量计的0.015-2%，以重量计的0.1-2%，以重量计的0.5-2%或以重量计的0.5-1%的活性成分。

对肺的可选的外部施用也可通过施用液体溶液或悬液配方，例如采用一种设备如喷雾器，例如连接到压缩机的喷雾器（如，连接到PariMaster(R)压缩机的Pari LC-Jet Plus(R)喷雾器，由Pari RespiratoryEquipment,Inc.,Richmond,Va.制造）

本发明所述抗体可递送分散到溶剂中，例如以溶液或悬液的形式。可悬浮于合适的生理溶液，如生理盐水或其他药物学可接受的溶剂或缓冲液。本领域已知的缓冲液可包含每1ml水中0.05至0.15mg钠乙二胺四乙酸二钠、8.0到9.0mg NaCl，0.15至0.25mg聚山梨酯，0.25至0.30mg无水柠檬酸，以及0.45至0.55mg柠檬酸钠以实现pH值约为4.0到5.0。悬液可以采用，例如，冻干抗体。

治疗性的悬液或溶液的制剂也可以包含一个或多个的赋形剂。赋形剂是本领域熟知的并且包括缓冲液（例如，柠檬酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液和碳酸氢盐缓冲液）、氨基酸、尿素、醇、抗坏血酸、磷脂、蛋白质(如血清白蛋白）、EDTA、氯化钠、脂质体、甘露醇、山梨醇和甘油。可以在脂质体或可生物降解微球来封装溶液或悬液。制剂通常采用无菌制造过程以基本无菌的形式提供。

可包括生产和通过过滤用于制剂的缓冲溶剂/溶液来灭菌，将抗体在无菌的缓冲溶剂溶液中无菌悬浮，以及通过本领域技术人员熟悉的方法将制剂分散到无菌容器中。

根据本公开的喷雾式制剂作为例如包装在贴箔信封中的单一计量单位（如密封的塑料容器或小瓶）提供。每个小瓶包含以溶剂/溶液缓冲液的体积计（如2ml）的一个单位剂量。

此处公开的抗体可适用于通过喷雾来递送。

也可设想，本发明所述抗体可通过使用基因疗法来施用。为了实现这一点，在合适的DNA组件的控制下编码所述抗体分子的重链和轻链的DNA序列被引入患者从而抗体的链可由DNA序列表达并在原位组装。

本发明也提供了用于控制炎症疾病的抗体分子。优选地，抗体分子可用来减少炎症过程或预防炎症过程。

本发明也提供了用于治疗或防治IL-17A和/或IL-17F介导的或与水平增高的IL-17A和/或IL-17F相关的病理失调的本发明所述的抗体分子。优选地，病理状况是选自感染(病毒、细菌、真菌和寄生虫)，感染相关的内毒素休克，关节炎，类风湿性关节炎，银屑病关节炎，全身性幼年特发性关节炎(JIA），全身性红斑狼疮(SLE)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病(COAD)，慢性阻塞性肺病(COPD)，急性肺损伤，慢性盆腔炎，阿尔茨海默病，克罗恩病，炎症性肠病，肠道易激综合征，溃疡性结肠炎，卡斯尔曼病（Castleman’s disease），强直性脊柱炎和其他脊柱关节病，皮肌炎，心肌炎，葡萄膜炎，突眼症，自身免疫性甲状腺炎，硬结症，乳糜泄，胆囊疾病，藏毛病，腹膜炎，银屑病，特应性皮炎，血管炎，手术粘连，中风，自身免疫性糖尿病，I型糖尿病，莱姆关节炎，脑膜脑炎，免疫介导的中枢和外周神经系统的炎性失调如多发性硬化和格林-巴利综合征，其他自身免疫失调，胰腺炎，创伤（手术），移植物抗宿主病，移植排斥反应，纤维化失调（包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、硬皮病或系统性硬化症），癌症（实体肿瘤如恶性黑色素瘤、肝母细胞瘤、肉瘤、鳞状细胞癌、移行细胞癌、卵巢癌和恶性血液病以及特别是急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、胃癌和结肠癌)，心脏病包括局部缺血性疾病如心肌梗死以及动脉粥样硬化，血管内凝血、骨吸收，骨质疏松，牙周炎和hypochlorhydia。

在一个实施方案中，本发明所述抗体用于治疗和防治选自如下的病理失调，关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性幼年特发性关节炎(JIA），全身性红斑狼疮(SLE)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺疾病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，炎症性肠病，强直性脊柱炎及其他脊柱关节病和癌症。

在一个实施方案中，本发明所述抗体用于治疗和防治选自如下的病理失调：关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性幼年特发性关节炎(JIA），全身性红斑狼疮(SLE)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺疾病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，强直性脊柱炎和其他脊柱关节病和癌症。

在一个实施方案中，本发明所述抗体用于治疗和防治选自如下的病理失调：关节炎，类风湿性关节炎，银屑病，银屑病关节炎，全身性幼年特发性关节炎(JIA），全身性红斑狼疮(SLE)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病，慢性阻塞性肺疾病，特应性皮炎，硬皮病，系统性硬化症，肺纤维化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，强直性脊柱炎和其他脊柱关节病。

在一个实施方案中病理失调是类风湿性关节炎。

在一个实施方案中病理失调是克罗恩病。

在一个实施方案中病理失调是是溃疡性结肠炎。

在一个实例中，本发明所述抗体用于治疗炎症或免疫相关疾病。在一个实例中，炎症或免疫相关疾病选自类风湿性关节炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎。

本发明也提供了根据本发明的所述抗体分子，其用于治疗或防治疼痛，特别是炎症相关的疼痛。

本发明进一步提供了根据本发明的抗体分子用于制备药物，其用于治疗或防治IL-17A和/或IL-17F介导的或与水平增高的IL-17A和/或IL-17F相关的病理失调。优选地，病理失调是此处如上所述的医学适应症的其中之一。本发明进一步提供了根据本发明的抗体分子用于制备药物，所述药物用于治疗或防治疼痛，特别是炎症相关的疼痛。

本发明所述抗体分子可用于需要在人或动物体内减少IL-17A和/或IL-17F的作用的任何疗法。IL-17A和/或IL-17F可在体内循环或可在体内特定位点以不受欢迎的高水平定位存在，例如炎症位点。

根据本发明的抗体分子优选地用于控制炎性疾病、自身免疫性疾病或癌症。

本发明也提供了治疗正在经受IL-17A和/或IL-17F介导的失调或有此风险的人或动物受试者的方法，所述方法包括对受试者施用有效量的本发明所述抗体分子。

根据本发明所述抗体分子也可用于诊断，例如涉及IL-17A和/或IL-17F的疾病状态的体内诊断和成像。

仅在如下实例中以实例说明进一步描述本发明，所述实例参照附随的图，其中：

图1

a）抗体CA028_0496g3的轻链V区(SEQ ID NO:7)

b）抗体CA028_0496g3的重链V区(SEQ ID NO:9)

c）抗体CA028_496g3的CDRH1(SEQ ID NO:1),CDRH2(SEQID NO:2),CDRH3(SEQ ID NO:3),CDRL1(SEQ ID NO:4),CDRL2(SEQ ID NO:5),CDRL3(SEQ ID NO:6)。

d)抗体CA028_496g3的轻链(SEQ ID NO:11)。

e)包括信号序列的抗体CA028_496g3的轻链(SEQ ID NO:12)。

图2

a)抗体CA028_496g3的重链(SEQ ID NO:15)。

b)包括信号序列的抗体CA028_496g3的重链(SEQ ID NO:16)。

c)编码抗体CA028_496g3的轻链的DNA(无信号序列)(SEQ IDNO:13)。

图3

a)编码包括信号序列的抗体CA028_496g3的轻链的DNA(SEQID NO:14)

b)编码抗体CA028_496g3的轻链可变区的DNA(SEQ ID NO:8)

c)编码包括信号序列的抗体CA028_496g3的重链可变区的DNA(SEQ ID NO:10)

图4:编码抗体CA028_496g3的重链不带信号序列的DNA（包括外显子）(SEQ ID NO:17)

图5:编码抗体CA028_496g3的重链的DNA（包括外显子和信号序列）(SEQ ID NO:18)

图6:编码包括信号序列的抗体CA028_496g3的重链的cDNA(SEQ ID NO:19).

图7:抗体CA028_0496(在图注中指定为496g1)和CA028_00496.g3(在图注中指定为496.g3)对人IL-17F从Hela细胞中诱导IL-6产生的作用。

实施例1：结合IL-17A和IL-17F的改进的中和抗体的生产

之前WO2008/047134中已经描述了抗体CA028_0496的分离和人源化。CA028_0496是结合IL-17A和IL-17F人源化的中和抗体并且包括嫁接的可变区gL7和gH9，WO2008/047134提供了其序列。重链受体框架是人的种系序列VH31-33-07具有来自人JH区种系JH4的此部分的框架4。轻链受体框架是人的种系序列VK12-1-(1)L4，具有来自人JK区种系JK1的此部分的框架4。

抗体CA028_00496经过亲和力成熟来改进对IL-17F的抗体的亲和力同时保留对IL-17A的亲和力。对比于抗体CA028_00496，亲和力成熟后的抗体被称为CA028_00496.g3，表达为IgG1而不是IgG4。通过寡核苷酸定向突变对基因进行修饰来产生亲和力成熟后的版本。将亲和力成熟后的轻链可变区（gL57）基因序列亚克隆到UCBCelltech的人轻链表达载体pKH10.1，其包含编码人C-Kappa恒定区（Km3同种抗免疫球蛋白）的DNA。将未改变的重链可变区gH9（gH9）序列亚克隆到UCB Celltech表达载体pVhg1FL，其包含编码人重链gamma-1恒定区的DNA。使用根据厂家说明书（InVitrogen,catalogue No.11668）Lipofectamine^TM2000的流程将质粒共转染到CHO细胞中。

抗体CA028_00496.g3的亲和力成熟后的可变区的最终序列在图1a和1b中给出。在抗体CA028_00496.g3中，重链可变区序列与母本抗体CA028_00496中的序列一样。与此相反，轻链可变区有5个氨基酸的不同。抗体CA028_00496与抗体CA028_00496.g3的轻链之间不同的5个残基在图1a中下划线标出。

实施例2:BIACORE

如下所述，测定模式为通过固定化的抗-人IgG Fc特异性的抗体来捕捉抗体CA028_00496.g3，然后在捕获的表面上对人IL-17A和IL-17F进行滴定。

通过Biacore3000（Biacore AB）进行生物分子相互作用分析(Biamolecular Interaction Analysis)。在25℃下进行测定。山羊抗-人IgG Fc特异性的亲和纯化F(ab’)₂(Jackson Immuno Research)通过氨基偶联化学过程固定化到CM5传感芯片(Biacore AB)上达到大约6000反应单位（RU）的水平。HBS-EP缓冲液(10mM HEPES pH7.4,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005%表面活性剂P20,Biacore AB)以10μL/分钟(min)的流速用作运行缓冲液。注射10μL的0.5μg/mL的CA028_00496.g3用于通过被固定化的抗-人IgG Fc的捕获。人IL-17A（UCB内部产生）从5nM起始以流速为30μL/min在被捕获的CA028_00496.g3上进行滴定3min，然后进行20min解吸附。人IL-17F（R&D systems）从10nM起始以流速为30μL/min在被捕获的CA028_00496.g3上进行滴定3min，然后进行5min解吸附。通过注射10μL的40mM HCl接着注射5μL的5mM的NaOH以10μL/min的流速再生表面。

表1CA028_496.g3对人IL-17F和IL-17A的亲和力

减去双参照背景的结合曲线用BIAevaluation软件（version4.1）根据标准程序进行分析。由拟合算法确定动力学参数。表1中详细列出数据，平均值用灰色突出表示。

对于原始抗体CA028_0496结合IL-17A确定的亲和力数值为16pM以及对于IL-17F为1750pM。与此相反，改进的抗体CA028_0496g3对IL-17A的亲和力为3.2pM以及对IL-17F为23pM。抗体CA028_0496对IL-17F的亲和力改进了超过70倍而没有降低抗体对IL-17A的亲和力。实际上，对IL-17A的亲和力增加了5倍。

CA028_0496g3对IL-17A/F异源二聚体（如WO2008/047134中所述制备）的亲和力也改进了，其中发现亲和力为26pM（数据未显示）。

实施例3

CA028_00496.g1(之前在WO2008/047134中描述的)和CA028_00496.g3对于中和人IL-17F的效力使用HeLa细胞生物测定来确定。Hela细胞从ATCC细胞库获得（ATCC CCL-2）。细胞生长在辅以10%胎牛血清、青霉素、庆大霉素和谷氨酸盐的Dulbecco’smodified Eagle’s培养基（DMEM）中。1x10⁴个细胞铺板到96孔平底组织培养板上。细胞孵育过夜并在测定缓冲液中洗一次。用重组人IL-17F（125ng/ml）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）（1ng/ml）的组合在不同浓度的所述抗体存在下对HeLa细胞刺激48小时。在HeLa细胞系中，IL-17F与TNF-α协同诱导IL-6的产生，IL-6可使用特异性的MSD测定试剂盒进行定量。使用Meso Scale Discovery(MSD)测定技术和计算的IC₅₀值测量分泌出的IL-6的最终量。如在HeLa细胞的生物测定中所测量的，CA028_00496.g1和CA028_00496.g3显示了对IL-17F的生物活性的浓度依赖性的抑制作用（图7）。CA028_00496.g1和CA028_00496.g3在HeLa细胞测定中的活性表示为抑制IL-17F的50%活性所需的剂量（IC₅₀）。CA028_00496.g1的IC₅₀为92mg/mL而CA0496.g3的IC₅₀为4ng/mL。

CA028_00496.g3中和IL-17A的能力，如之前在WO2008/047134中对CA028_00496.g1所描述的，使用同样的测定进行确认，其中IL-17F替换为IL-17A（数据未显示）。

Claims

1.结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，其具有轻链，其中轻链可变区包括SEQ ID NO:7中所示的序列。

2.根据权利要求1所述的中和抗体，其另外包括重链，其中重链可变区包括SEQ ID NO:1中所示的序列作为CDR-H1，SEQ IDNO:2中所示的序列作为CDR-H2以及SEQ ID NO:3中所示的序列作为CDR-H3。

3.根据权利要求2所述的中和抗体，其中重链可变区包括SEQID NO:9中所示的序列。

4.根据权利要求1-3中任一项所述抗体，其也结合IL-17A/IL-17F异源二聚体。

5.根据权利要求1-4中任一项所述抗体，其中抗体为完整抗体或其功能活性片段。

6.根据权利要求5所述抗体，其中抗体片段选自Fab、Fab’、F(ab’)₂、scFv和Fv片段。

7.根据权利要求1-4中任一项所述抗体，其中抗体是多特异性的抗体。

8.结合人IL-17A和人IL-17F的中和抗体，其具有包括SEQ IDNO:15中所示的序列的重链和包括SEQ ID NO:11中所示的序列的轻链。

9.分离的DNA序列，其编码根据权利要求1-8中任一项所述抗体的轻链。

10.分离的DNA序列，其编码根据权利要求1-8中任一项所述抗体的重链和轻链。

11.包括根据权利要求9或权利要求10所述DNA序列的克隆载体或表达载体。

12.根据权利要求11所述载体，其中载体包括SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:17A中所示的序列。

13.包括一个或多个根据权利要求11或权利要求12所述克隆载体或表达载体的宿主细胞。

14.用于生产根据权利要求1-8中任一项所述抗体的方法，其包括培养权利要求13所述宿主细胞和分离所述抗体。

15.药学组合物，其包括与一种或多种药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体组合的根据权利要求1-8中任一项所述抗体。

16.根据权利要求15所述药学组合物，其另外包括其他活性成分。

17.根据权利要求1-8中任一项所述抗体或根据权利要求15或16所述药学组合物，用来在治疗中使用。

18.根据权利要求1-8中任一项所述抗体或根据权利要求15或16所述药学组合物，用于治疗或防治病理状况，其选自感染(病毒、细菌、真菌和寄生虫)，感染相关的内毒素休克，关节炎，类风湿性关节炎，银屑病关节炎，全身性幼年特发性关节炎(JIA），全身性红斑狼疮(SLE)，哮喘，慢性阻塞性气道疾病(COAD)，慢性阻塞性肺病(COPD)，急性肺损伤，慢性盆腔炎，阿尔茨海默病，克罗恩病，炎症性肠病，肠道易激综合征，溃疡性结肠炎，卡斯尔曼病（Castleman’sdisease），强直性脊柱炎和其他脊柱关节病，皮肌炎，心肌炎，葡萄膜炎，突眼症，自身免疫性甲状腺炎，硬结症，乳糜泄，胆囊疾病，藏毛病，腹膜炎，银屑病，特应性皮炎，血管炎，手术粘连，中风，自身免疫性糖尿病，I型糖尿病，莱姆关节炎，脑膜脑炎，免疫介导的中枢和外周神经系统的炎性失调如多发性硬化和格林-巴利综合征、其他自身免疫失调，胰腺炎，创伤（手术），移植物抗宿主病，移植排斥反应，纤维化失调包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、硬皮病或系统性硬化症，癌症（实体肿瘤如恶性黑色素瘤、肝母细胞瘤、肉瘤、鳞状细胞癌、移行细胞癌、卵巢癌和恶性血液病以及特别是急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、胃癌和结肠癌)，心脏病包括局部缺血性疾病如心肌梗死以及动脉粥样硬化，血管内凝血，骨吸收，骨质疏松，牙周炎和hypochlorhydia。

19.根据权利要求1-8中任一项所述抗体或根据权利要求15或16所述药学组合物在制备药物中用途，所述药物用于治疗或防治IL-17A和/或IL-17F介导的或与水平增高的IL-17A和/或IL-17F相关的病理失调。