KR20140005964A - Ｉｌ-17ａ 및 ｉｌ-17ｆ에 결합하는 항체 분자 - Google Patents

Abstract

본 발명은 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두의 항원성 결정기에 대해 특이성을 지니는 항체 분자, 상기 항체 분자의 치료적 용도 및 상기 항체 분자를 생성하는 방법에 관한 것이다.

Description

ＩＬ-17Ａ 및 ＩＬ-17Ｆ에 결합하는 항체 분자{ANTIBODY MOLECULES WHICH BIND IL-17A AND IL-17F}

본 발명은 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두의 항원성 결정기에 대해 특이성을 지니는 항체 분자에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항체 분자의 치료적 용도 및 상기 항체 분자를 생성하는 방법에 관한 것이다.

IL-17A (원래 명칭이 CTLA-8이고 IL-17로도 공지됨)는 전염증성(proinflammatory) 사이토카인이고 IL-17 패밀리의 시조 구성원이다 (Rouvier et al . 1993, J. Immunol . 150: 5445-5456). 후속하여 IL-17A와 약 55%의 아미노산 서열 상동성을 공유하는, 가장 밀접하게 관련된 IL-17F(ML-1)를 포함하는 5개의 추가의 패밀리 구성원이 동정되었다 (IL-17B―IL-17F)(Moseley et al ., 2003, Cytokine Growth Factor Rev . 14: 155-174). IL-17A 및 IL-17F는 IL-21 및 IL-22 서명 사이토카인도 발현시키는, 최근에 규정된 T 헬퍼 세포의 자가면역 관련 서브셋인 Th17에 의해 발현된다 (Korn et al ., 2009, Annu . Rev . Immunol . 27:485-517.: 485-517). IL-17A 및 IL-17F는 동종이합체(homodimer)로서 발현되지만, IL-17A/F 이종이합체(heterodimer)로도 발현될 수 있다 (Wright et al . 2008, J. Immunol . 181: 2799-2805). IL-17A 및 F는 수용체 IL-17R, IL-17RC 또는 IL-17RA/RC 수용체 복합체를 통해 신호를 보낸다 Gaffen 2008, Cytokine . 43: 402-407). IL-17A 및 IL-17F 둘 모두는 다수의 자가면역 질병과 관련되어 왔다.

따라서, IL-17A 및 IL-17F의 이중 길항제가 IL-17 매개 질병의 치료에서 단일 길항제보다 더욱 효과적일 수 있다. IL-17A 및 IL-17F에 결합하는 항체는 WO2007/106769호, WO2008/047134호, WO2009/136286호 및 WO2010/025400호에 기재되어 있다.

본 발명은 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두에 높은 친화성으로 결합할 수 있는 개선된 중화 항체를 제공한다. 특히, 본 발명의 항체는 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두에 특이적으로 결합할 수 있으며, 즉 상기 항체는 IL-17의 다른 아이소형에는 결합하지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 또한 IL-17A/IL-17F 이종이합체에 결합한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두의 활성을 중화시킨다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 또한 IL-17A/IL-17F 이종이합체의 활성을 중화시킨다. 따라서, 본 발명의 항체는 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두의 생물학적 활성을 억제할 수 있는 이로운 특성을 지닌다. 따라서, 본 발명은 또한 IL-17A 또는 IL-17F 중 하나 또는 둘 모두에 의해 매개되는 질병, 예를 들어 자가면역 질환 또는 염증성 질환 또는 암의 치료 및/또는 예방에 있어서 상기 항체의 용도를 제공한다.

본원에서 사용되는 용어 '중화 항체'는, 예를 들어 IL-17A 및 IL17F가 이들의 수용체 중 1개 이상에 결합하는 것을 차단하고, IL-17A/IL-17F 이종이합체가 이의 수용체 중 1개 이상에 결합하는 것을 차단함으로써, IL-17A 및 IL-17F 둘 모두의 생물학적 신호전달 활성을 중화시킬 수 있는 항체를 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 '중화'는 부분적이거나 완전할 수 있는 생물학적 신호전달 활성에서의 감소를 의미하는 것이 인지될 것이다. 또한, 항체에 의한 IL-17A 및 IL-17F 활성의 중화 정도가 동일하거나 상이할 수 있음이 인지될 것이다. 일 구체예에서, IL-17A/IL-17F 이종이합체의 활성의 중화 정도는 IL-17A 또는 IL-17F 활성의 중화 정도와 동일하거나 상이할 수 있다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 IL-17A 및 IL-17F에 특이적으로 결합한다. 특이적 결합은 상기 항체가 다른 폴리펩티드에 비해 IL-17A 및 IL-17F 폴리펩티드(IL-17A/IL-17F 이종이합체를 포함함)에 보다 큰 친화성을 지니는 것을 의미한다. 바람직하게는, IL-17A 및 IL-17F 폴리펩티드는 인간 폴리펩티드이다. 일 구체예에서, 항체는 또한 시노몰구스(cynomolgus) IL-17A 및 IL-17F에 결합한다.

IL-17A 또는 IL-17F 폴리펩티드 또는 상기 둘의 혼합물, 또는 상기 폴리펩티드 중 하나 또는 둘 모두를 발현하는 세포가 상기 둘 모두의 폴리펩티드를 특이적으로 인지하는 항체를 생성하는데 사용될 수 있다. IL-17 폴리펩티드(IL-17A 및 IL-17F)는 '성숙' 폴리펩티드 또는 바람직하게는 수용체 결합 부위를 포함하는 상기 폴리펩티드의 생물학적 활성 단편 또는 유도체일 수 있다. 바람직하게는, IL-17 폴리펩티드는 성숙 폴리펩티드이다. IL-17 폴리펩티드는 당 분야에 널리 공지된 방법에 의해 발현 시스템을 포함하는 유전 공학처리된 숙주 세포로부터 제조될 수 있거나, 이는 천연 생물학적 공급원으로부터 회수될 수 있다. 본 출원에서, 용어 "폴리펩티드"는 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질을 포함한다. 이들은 달리 특정되지 않는 경우 상호교환적으로 사용된다. IL-17 폴리펩티드는 몇몇 예에서 큰 단백질의 일부, 예를 들어 친화성 태그(tag)에 융합된 융합 단백질일 수 있다. 이러한 폴리펩티드에 대해 생성된 항체는 동물의 면역화가 필요한 경우 널리 공지되고 통상적인 프로토콜을 이용하여 동물, 바람직하게는 비-인간 동물에 폴리펩티드를 투여함으로써 수득될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir (ed.), Vol 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, England, 1986] 참조. 다수의 온혈 동물, 예를 들어 토끼, 마우스, 래트, 양, 소 또는 돼지가 면역화될 수 있다. 그러나, 마우스, 토끼, 돼지 및 래트가 일반적으로 바람직하다.

본 발명에 사용되는 항체는 전체 항체 및 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체를 포함하고, 이는 모노클로날 항체, 다가 항체, 다중 특이적 항체, 이중 특이적 항체, 인간화된 항체 또는 키메라 항체, 도메인 항체, 예를 들어 VH, VL, VHH, 단일 사슬 항체, Fv, Fab 단편, Fab' 및 F(ab')₂ 단편 및 상기 중 임의의 항체의 에피토프-결합 단편일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 다른 항체 단편은 국제 특허 출원 WO2005003169호, WO2005003170호 및 WO2005003171호에 기재된 것을 포함한다. 그 밖의 항체 단편은 WO2009040562호 및 WO2010035012호에 각각 기재된 Fab-Fv 및 Fab-dsFv 단편을 포함한다. 항체 단편 및 이들을 생성하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌[Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181; Adair and Lawson, 2005. Therapeutic antibodies. Drug Design Reviews - Online 2(3): 209-217]을 참조하라.

본 발명에 사용되는 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 분자를 포함한다. 본 발명의 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 부류(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA) 또는 서브클래스일 수 있다.

모노클로날 항체는 당 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 하이브리도마 기술(Kohler & Milstein, 1975, Nature, 256:495-497), 트리오마(trioma) 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술(Kozbor et al., 1983, Immunology Today, 4:72) 및 EBV-하이브리도마 기술(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp77-96, Alan R Liss, Inc., 1985)에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에 사용되는 항체는 또한, 예를 들어 문헌[Babcook, J. et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-78481]; WO92/02551호; WO2004/051268호 및 국제 특허 공보 WO2004/106377호에 기재된 방법에 의해 특정 항체의 생성을 위해 선택된 단일한 림프구로부터 발생된 면역글로불린 가변 영역 cDNA를 클로닝하고 발현시킴으로써 단일한 림프구 항체 방법을 이용하여 생성될 수 있다.

인간화된 항체는 비-인간 종으로부터의 1개 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 지니는 비-인간 종으로부터의 항체 분자이다(예를 들어, US 5,585,089호; WO91/09967호 참조).

키메라 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 상이한 종에 속하는 면역글로불린 유전자 세그먼트로 구성되도록 유전공학 처리된 면역글로불린 유전자에 의해 엔코딩된 항체이다. 이러한 키메라 항체는 덜 항원성일 것이다.

이가(bivalent) 항체는 당 분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다(Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539; WO 93/08829, Traunecker et al., 1991, EMBO J. 10:3655-3659). 다가 항체는 다수의 특이성을 포함할 수 있거나, 단일 특이성일 수 있다(예를 들어, WO92/22853호 및 WO05/113605호 참조).

본 발명에 사용되는 항체는 또한 당 분야에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 생성될 수 있고, 이는 문헌[Brinkman et al. (in J. Immunol. Methods, 1995, 182: 41-50), Ames et al. (J. Immunol. Methods, 1995, 184:177-186), Kettleborough et al. (Eur. J. Immunol. 1994, 24:952-958), Persic et al. (Gene, 1997 187 9-18), Burton et al. (Advances in Immunology, 1994, 57:191-280)] 및 WO 90/02809호; WO 91/10737호; WO 92/01047호; WO 92/18619호; WO 93/11236호; WO 95/15982호; WO 95/20401호; 및 US 5,698,426호; 5,223,409호; 5,403,484호; 5,580,717호; 5,427,908호; 5,750,753호; 5,821,047호; 5,571,698호; 5,427,908호; 5,516,637호; 5,780,225호; 5,658,727호; 5,733,743호 및 5,969,108호에 기재된 것을 포함한다. US 4,946,778호에 기재된 것과 같은 단일 사슬 항체를 생성하기 위한 기술은 또한 IL-17A 및 IL-17F에 결합하는 단일 사슬 항체를 생성하기 위해 적합화될 수 있다. 또한, 유전자이식 마우스, 또는 다른 포유동물을 포함하는 다른 생물이 인간화된 항체를 발현시키기 위해 사용될 수 있다.

항체용 스크리닝은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대한 결합을 측정하는 검정, 예를 들어 본원 실시예에 기재된 BIAcore™ 검정을 이용하여 수행될 수 있다. 적합한 중화 검정이 당 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 WO2008/047134호 및 본원 실시예를 참조하라.

항체 가변 도메인의 잔기는 카바트(Kabat) 등에 의해 고안된 체계에 따라 통상적으로 넘버링된다. 상기 체계는 문헌[Kabat et al., 1987, in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA (hereafter "Kabat et al. (supra)"]에 개시되어 있다. 상기 넘버링 체계가 달리 지시되지 않는 한 본 명세서에 이용된다.

카바트 잔기 명명이 아미노산 잔기의 선형 넘버링에 직접적으로 항상 일치하는 것은 아니다. 실제의 선형 아미노산 서열은 엄격한 카바트 넘버링 보다 아미노산을 덜 함유하거나 더 함유할 수 있으며, 이것은 프레임워크이든지 상보성 결정 영역(CDR)이든지 기본적인 가변 도메인 구조의 단축 또는 구조적 성분으로의 삽입에 해당된다. 잔기의 정확한 카바트 넘버링은 항체의 서열에서 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 동일한 잔기의 정렬에 의해 제공된 항체에 대해 결정될 수 있다.

중쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 체계에 따라 잔기 31-35 (CDR-H1), 잔기 50-65 (CDR-H2) 및 잔기 95-102 (CDR-H3)에 위치한다. 그러나, 코티아(Chothia)(Chothia, C. and Lesk, A.M. J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1987))에 따르면, CDR-H1에 상당하는 루프(loop)가 잔기 26으로부터 잔기 32까지 연장된다. 따라서, 본원에 사용된 'CDR-H1'은 카바트 넘버링 체계 및 코티아의 위상적 루프 정의의 조합에 의해 기재된 대로 잔기 26 내지 35를 포함한다.

경쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 체계에 따라 잔기 24-34 (CDR-L1), 잔기 50-56 (CDR-L2) 및 잔기 89-97 (CDR-L3)에 위치한다.

일 구체예에서, 본 발명은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니며 경쇄를 포함하는 중화 항체로서, 상기 경쇄의 가변 도메인이 CDR-L1에 관하여 서열번호 4에 제공된 서열, CDR-L2에 관하여 서열번호 5에 제공된 서열 및 CDR-L3에 관하여 서열번호 6에 제공된 서열을 포함하는 중화 항체를 제공한다 (도 1c 참조).

본 발명의 항체 분자는 바람직하게는 상보적 중쇄를 포함한다.

따라서, 일 구체예에서, 본 발명은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니며 중쇄를 추가로 포함하는 중화 항체로서, 상기 중쇄의 가변 도메인이 CDR-H1에 관하여 서열번호 1에 제공된 서열을 지니는 CDR, CDR-H2에 관하여 서열번호 2에 제공된 서열을 지니는 CDR 및 CDR-H3에 관하여 서열번호 3에 제공된 서열을 지니는 CDR 중 하나 이상을 포함하는 중화 항체를 제공한다 (도 1c 참조).

또 다른 구체예에서, 본 발명은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니며 중쇄를 포함하는 중화 항체로서, 상기 중쇄의 가변 도메인의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 둘 이상이 CDR-H1에 관하여 서열번호 1에 제공된 서열, CDR-H2에 관하여 서열번호 2에 제공된 서열 및 CDR-H3에 관하여 서열번호 3에 제공된 서열로부터 선택되는 중화 항체를 제공한다. 예를 들어, 항체는 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 CDR-H1은 서열번호 1에 제공된 서열을 지니고 CDR-H2는 서열번호 2에 제공된 서열을 지닌다. 대안적으로, 항체는 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 CDR-H1은 서열번호 1에 제공된 서열을 지니고 CDR-H3은 서열번호 3에 제공된 서열을 지니거나, 항체는 중쇄를 포함할 수 있고, 여기서 CDR-H2는 서열번호 2에 제공된 서열을 지니고 CDR-H3은 서열번호 3에 제공된 서열을 지닌다. 불확실성을 배제하기 위해, 모든 순열(permutation)이 포함됨을 이해하여야 한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니며 중쇄를 포함하는 중화 항체로서, 상기 중쇄의 가변 도메인이 CDR-H1에 관하여 서열번호 1에 제공된 서열, CDR-H2에 관하여 서열번호 2에 제공된 서열 및 CDR-H3에 관하여 서열번호 3에 제공된 서열을 포함하는 중화 항체를 제공한다.

일 구체예에서, 본 발명에 따른 항체는 중쇄의 가변 도메인이 CDR-H1에 관하여 서열번호 1에 제공된 서열, CDR-H2에 관하여 서열번호 2에 제공된 서열 및 CDR-H3에 관하여 서열번호 3에 제공된 서열을 포함하는 중쇄, 및 경쇄의 가변 도메인이 CDR-L1에 관하여 서열번호 4에 제공된 서열, CDR-L2에 관하여 서열번호 5에 제공된 서열 및 CDR-L3에 관하여 서열번호 6에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일 구체예에서, 본 발명에 의해 제공되는 항체는 모노클로날 항체이다.

일 구체예에서, 본 발명에 의해 제공되는 항체는 서열번호 1 내지 6에 제공된 CDR 각각을 포함하는 CDR-이식된 항체 분자이다. 본원에서 사용된 용어 'CDR-이식된 항체 분자'는 중쇄 및/또는 경쇄가 수용체 항체(예를 들어, 인간 항체)의 중쇄 및/경쇄 가변 영역 프레임워크로 이식된 공여체 항체(예를 들어, 뮤린 모노클로날 항체)로부터의 하나 이상의 CDR(요망되는 경우, 하나 이상의 변형된 CDR을 포함함)을 함유하는 항체 분자를 의미한다. 개관을 위해 문헌[Vaughan et al., Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998]을 참조하라. 일 구체예에서, 전체 CDR이 옮겨진다기 보다, 상기 본원에 기재된 CDR 중 임의의 하나로부터의 특이성 결정 잔기의 1종 이상만이 인간 항체 프레임워크로 옮겨진다(참조, 예를 들어 문헌[Kashmiri et al., 2005, Methods, 36, 25-34]). 일 구체예에서, 상기 본원에 기재된 CDR 중 1종 이상으로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 옮겨진다. 또 다른 구체예에서, 상기 본원에 기재된 CDR 각각으로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 옮겨진다.

CDR 또는 특이성 결정 잔기가 이식되는 경우, 임의의 적합한 수용체 가변 영역 프레임워크 서열이 CDR이 유래되는 공여체 항체의 부류/유형을 고려하여 이용될 수 있고, 이는 마우스, 영장류 및 인간 프레임워크 영역을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 CDR-이식된 항체가 인간 수용체 프레임워크 영역 뿐만 아니라 상기 기재된 CDR 또는 특이성 결정 잔기 중 하나 이상을 포함하는 가변 도메인을 지닌다. 따라서, 가변 도메인이 인간 수용체 프레임워크 영역 및 비-인간 공여체 CDR을 포함하는 중화 CDR-이식된 항체가 제공된다.

본 발명에 이용될 수 있는 인간 프레임워크의 예는 KOL, NEWM, REI, EU, TUR, TEI, LAY 및 POM이다(Kabat et al., 상술함). 예를 들어, KOL 및 NEWM은 중쇄에 이용될 수 있고, REI는 경쇄에 이용될 수 있으며, EU, LAY 및 POM은 중쇄 및 경쇄 둘 모두에 이용될 수 있다. 대안적으로, 인간 점라인(germline) 서열을 이용할 수 있으며; 이러한 서열은 http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/에서 이용가능하다.

본 발명의 CDR-이식된 항체에서, 수용체 중쇄 및 경쇄가 반드시 동일한 항체로부터 유래될 필요는 없으며, 요망되는 경우 상이한 사슬로부터 유래된 프레임워크 영역을 지니는 혼성(composite) 사슬을 포함할 수 있다.

본 발명의 CDR-이식된 항체의 중쇄에 대해 바람직한 프레임워크 영역은 WO2008/047134호에 종래에 기재된 대로, JH4와 함께 인간 서브-그룹 VH3 서열 1-3 3-07로부터 유래된다. 따라서, 하나 이상의 비-인간 공여체 CDR을 포함하는 중화 CDR-이식된 항체가 제공되며, 여기서 중쇄 프레임워크 영역은 JH4와 함께 인간 서브그룹 서열 1-3 3-07로부터 유래된다. 인간 JH4의 서열은 다음과 같다: (YFDY)WGQGTLVTVSS. YFDY 모티프는 CDR-H3의 일부이며 프레임워크 4의 일부는 아니다(Ravetch, JV. et al., 1981, Cell, 27, 583-591).

본 발명의 CDR-이식된 항체의 경쇄에 대해 바람직한 프레임워크 영역은 WO2008/047134호에 종래에 기재된 대로, JK1과 함께 인간 점라인 서브-그룹 VK1 서열 2-1-(1) L4로부터 유래된다. 따라서, 하나 이상의 비-인간 공여체 CDR을 포함하는 중화 CDR-이식된 항체가 제공되며, 여기서 경쇄 프레임워크 영역은 JK1과 함께 인간 서브그룹 서열 VK1 2-1-(1) L4로부터 유래된다. JK1의 서열은 다음과 같다: (WT)FGQGTKVEIK. WT 모티프는 CDR-L3의 일부이며 프레임워크 4의 일부는 아니다(Hieter, PA., et al., 1982, J. Biol. Chem., 257, 1516-1522).

또한, 본 발명의 CDR-이식된 항체에서, 프레임워크 영역이 수용체 항체의 프레임워크 영역과 정확히 동일한 서열일 필요는 없다. 예를 들어, 통상적이지 않은 잔기는 그 수용체 사슬 부류 또는 유형에 대해 보다 빈번하게-발생하는 잔기로 변경될 수 있다. 대안적으로, 수용체 프레임워크 영역에서 선택된 잔기를 변경하여 이것이 공여체 항체의 동일한 위치에서 발견되는 잔기와 일치하도록 할 수 있다(참조, Reichmann et al., 1998, Nature, 332, 323-324). 이러한 변경은 공여체 항체의 친화성을 회복하는데 필요한 최소 한도를 유지하여야 한다. 변경될 필요가 있는 수용체 프레임워크 영역의 잔기를 선택하는 프로토콜은 WO 91/09967호에 개시되어 있다.

바람직하게는, 본 발명의 CDR-이식된 항체 분자에서, 수용체 중쇄가 JH4와 함께 인간 VH3 서열 1-3 3-07을 지니는 경우, 중쇄의 수용체 프레임워크 영역은 하나 이상의 공여체 CDR 이외에 적어도 94번 위치(카바트 등에 준함(상술함))에 공여체 잔기를 포함한다. 따라서, 중쇄의 가변 도메인의 94번 위치에 있는 잔기가 적어도 공여체 잔기인 CDR-이식된 항체가 제공된다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 CDR-이식된 항체 분자에서, 수용체 경쇄가 JK1과 함께 인간 서브-그룹 VK1 서열 2-1-(1) L4를 지니는 경우, 공여체 잔기는 옮겨지지 않고, 즉 CDR만이 옮겨진다. 따라서, CDR만이 공여체 프레임워크에 옮겨진 CDR-이식된 항체가 제공된다.

공여체 잔기는 공여체 항체, 즉 CDR이 최초로 유래된 항체로부터의 잔기이다.

본 발명에서, CA028_0496로서 공지되어 있는 항체 (WO2008/047134호에 종래에 기재됨)는 경쇄에 있는 5개 잔기를 변화시킴에 의해 개선되었다. 3개의 잔기는 CDR에 있었고, 2개는 프레임워크에 있었다. 이에 따라, 일 구체예에서, 경쇄 가변 도메인은 위치 30에 아르기닌 잔기, 위치 54에 세린 잔기, 위치 56에 이소류신 잔기, 위치 60에 아스파르트산 잔기 및 위치 72에 아르기닌 잔기를 포함한다.

따라서, 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열(gL7)을 포함하는 경쇄를 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열과 96% 이상의 동일성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열과 적어도 97, 98 또는 99%의 동일성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 중쇄를 포함하고, 상기 중쇄의 가변 도메인은 서열번호 9에 제공된 서열(gH9)을 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 중쇄의 가변 도메인이 서열번호 9에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 중쇄의 가변 도메인이 서열번호 9에 제공된 서열과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 중쇄의 가변 도메인이 서열번호 9에 제공된 서열을 포함하는 중쇄, 및 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 항체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 중쇄의 가변 도메인은 서열번호 9에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 서열번호 7에 제공된 서열과 96% 이상의 동일성을 지니는 서열을 포함한다. 바람직하게는, 항체는 중쇄의 가변 도메인이 서열번호 9에 제공된 서열과 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄, 및 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열과 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

본원에서 사용된 "동일성"은 정렬된 서열 중의 임의의 특정 위치에서, 아미노산 잔기가 서열간에 동일함을 나타낸다. 본원에서 사용된 "유사성"은 정렬된 서열 중의 임의의 특정 위치에서, 아미노산 잔기가 서열간에 유사한 유형임을 나타낸다. 예를 들어, 류신은 이소류신 또는 발린으로 치환될 수 있다. 종종 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있는 다른 아미노산은 하기와 같으나 이로 제한되지 않는다:

- 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판 (방향족 측쇄를 지니는 아미노산);

- 리신, 아르기닌 및 히스티딘 (염기성 측쇄를 지니는 아미노산);

- 아스파테이트 및 글루타메이트 (산성 측쇄를 지니는 아미노산);

- 아스파라긴 및 글루타민 (아미드 측쇄를 지니는 아미노산); 및

- 시스테인 및 메티오닌 (황-함유 측쇄를 지니는 아미노산). 동일성 및 유사성 정도는 용이하게 산출될 수 있다 (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing. Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991).

본 발명의 항체 분자는 전장의 중쇄 및 경쇄를 지니는 완전한 항체 분자 또는 이의 단편, 예를 들어 도메인 항체, 예를 들어 VH, VL, VHH, Fab, 변형된 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv 또는 scFv 단편을 포함할 수 있다. 그 밖의 항체 단편은 WO2009040562호 및 WO2010035012호에 각각 기재되어 있는 Fab-Fv 및 Fab-dsFv 단편을 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')₂, scFv 및 Fv 단편으로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명의 항체, 특히 상기 기재된 항체 단편은 그 밖의 항체 포맷, 특히 다중 특이적 항체, 예컨대 하나의 특이성, 즉 IL-17A 및 IL-17F (IL-17A/F 이종이합체 포함)에 대한 특이성이 본 발명의 항체에 의해 제공되는 것인, 이중 또는 삼중 특이적 항체로 혼입될 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 일 구체예에서, 본 발명은 상기 본원에 기재된 항체 단편들 중 하나 이상을 포함하는 다중 특이적 항체를 제공한다.

다중 특이적 항체의 예는 이가, 삼가 또는 사가 항체, Bis-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 바이바디 및 트리바디를 포함한다 (예를 들어, 문헌[Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech 23(9): 1126-1136; Schoonjans et al.2001, Biomolecular Engineering, 17 (6), 193-202] 참조). 그 밖의 다중 특이적 항체는 WO2009040562호, WO2010035012호, WO2011/08609호, WO2011/030107호 및 WO2011/061492호에 각각 기재된 Fab-Fv, Fab-dsFv, Fab-Fv-Fv. Fab-Fv-Fc 및 Fab-dsFv-PEG 단편을 포함한다.

본 발명의 항체 분자의 불변 영역 도메인은, 존재하는 경우, 항체 분자의 제안된 기능, 특히 필요할 수 있는 이펙터(effector) 기능을 고려하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 불변 영역 도메인은 인간 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 도메인일 수 있다. 특히, 항체 분자가 치료용이고 항체 이펙터 기능이 요구될 때, 특히 IgG1 및 IgG3 아이소형의 인간 IgG 불변 영역 도메인을 이용할 수 있다. 대안적으로, 항체 분자가 치료용이고 항체 이펙터 기능이 요구되지 않을 때, 예를 들어 단순히 IL-17 활성을 차단하고자 할 때, IgG2 및 IgG4 아이소형을 이용할 수 있다. 이러한 불변 영역 도메인의 서열 변이체도 이용될 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 문헌[Angal et al., Molecular Immunology, 1993, 30 (1), 105-108]에 기재된 대로 241번 위치의 세린이 프롤린으로 변경된 IgG4 분자를 이용할 수 있다. IgG1 불변 도메인이 특히 바람직하다. 또한 당업자는 항체가 다양한 번역후 변형을 겪을 수 있음을 이해할 것이다. 이러한 변형의 유형 및 정도는 종종 항체를 발현시키는데 이용된 숙주 세포주 및 배양 조건에 의해 좌우된다. 그러한 변형은 글리코실화, 메티오닌 산화, 디케토피페라진 형성, 아스파테이트 이성질체화 및 아스파라긴 탈아미드화에서의 변화를 포함할 수 있다. 빈번한 변형은 카르복시펩티다제의 작용으로 인한 카르복시-말단 염기성 잔기 (예컨대, 리신 또는 아르기닌)의 손실이다 (문헌[Harris, RJ. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995]에 개시됨). 따라서, 예를 들어 도 2(a)에 제공된 항체 중쇄인 서열번호 15의 C-말단 리신은 없을 수 있다.

일 구체예에서, 항체 중쇄는 CH1 도메인을 포함하고, 항체 경쇄는 카파 또는 람다인 CL 도메인을 포함한다.

바람직한 구체예에서, 본 발명에 의해 제공되는 항체는 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니는 중화 항체이고, 여기서 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 불변 영역을 포함한다. 따라서, 본 발명은 중쇄가 서열번호 15에 제공된 서열을 포함하거나 이로 구성된 항체를 제공한다 (도 2a 참조).

본 발명의 일 구체예에서, 항체는 서열번호 15에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 서열번호 15에 제공된 서열과 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.

일 구체예에서, 본 발명에 따른 항체 분자는 서열번호 11에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다 (도 1d 참조).

본 발명의 일 구체예에서, 항체는 서열번호 11에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 서열번호 11에 제공된 서열과 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일 구체예에서, 본 발명은 중쇄가 서열번호 15에 제공된 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄가 서열번호 11에 제공된 서열을 포함하거나 이로 구성된 항체를 제공한다.

본 발명의 일 구체예에서, 항체는 서열번호 15에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 11에 제공된 서열과 60% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 바람직하게는, 항체는 서열번호 15에 제공된 서열과 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호 11에 제공된 서열과 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상 또는 98% 이상의 동일성 또는 유사성을 지니는 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

본 발명의 임의의 양태의 항체 분자는 높은 결합 친화성, 바람직하게는 피코몰의 높은 결합 친화성을 지니는 것이 바람직하다. 인간 IL-17A에 대한 본 발명에 따른 항체의 결합 친화성이 인간 IL-17F 및/또는 IL-17A/F 이종이합체에 대한 동일 항체의 결합 친화성과 상이할 수 있음이 인지될 것이다. 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 IL-17F에 대한 친화성보다 큰 IL-17A에 대한 친화성을 지닌다. 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 IL-17F에 대한 결합 친화성보다 5배 이상 큰 IL-17A에 대한 친화성을 지닌다. 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 IL-17F에 대한 친화성과 동일한 IL-17A에 대한 친화성을 지닌다. 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두에 대해 피코몰의 친화성을 지닌다.

친화성은 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두가 동종이합체로서 존재하는 단리된 천연 또는 재조합 IL-17A 및 IL-17F를 이용하여, 본원 실시예에 기재된 BIAcore™을 포함하는 당 분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정될 수 있다.

바람직하게는, 본 발명의 항체 분자는 50 pM 또는 그 미만의 IL-17A에 대한 결합 친화성을 지닌다. 일 구체에서, 본 발명의 항체 분자는 20 pM 또는 그 미만의 IL-17A에 대한 결합 친화성을 지닌다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체 분자는 10 pM 또는 그 미만의 IL-17A에 대한 결합 친화성을 지닌다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체 분자는 5 pM 또는 그 미만의 IL-17A에 대한 결합 친화성을 지닌다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 3.2 pM의 IL-17A에 대한 친화성을 지닌다.

바람직하게는, 본 발명의 항체 분자는 100 pM 또는 그 미만의 IL-17F에 대한 결합 친화성을 지닌다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 50 pM 또는 그 미만의 IL-17F에 대한 친화성을 지닌다. 일 구체예에서, 본 발명의 항체는 23 pM의 IL-17F에 대한 친화성을 지닌다.

본 발명에 의해 제공되는 항체의 친화성이 당 분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 변경될 수 있음이 인지될 것이다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 항체 분자의 변이체에 관한 것이고, 이러한 변이체는 IL-17A 및/또는 IL-17F에 대해 개선된 친화성을 지닌다. 이러한 변이체는 CDR를 돌연변이시키는 것(Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), 사슬 셔플링(shuffling)(Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), 대장균(E. coli)의 돌연변이유발 균주의 이용(Low et al., J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), DNA 셔플링 (Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), 파지 디스플레이 (Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) 및 유성(sexual) PCR (Crameri et al., Nature, 391, 288-291, 1998)을 포함하는 다수의 친화성 성숙 프로토콜에 의해 수득될 수 있다. 문헌[Vaughan et al. (상술함)]에 이러한 친화성 성숙 방법이 논의되어 있다.

요망되는 경우, 본 발명에 사용되는 항체는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 컨주게이션될 수 있다. 이펙터 분자가 단일 이펙터 분자를 포함하거나, 결합되어 본 발명의 항체에 부착될 수 있는 단일 부분을 형성하는 둘 이상의 상기 분자를 포함할 수 있음이 인지될 것이다. 이펙터 분자에 결합된 항체 단편을 수득하는 것이 요망되는 경우, 이는 항체 단편을 직접 또는 커플링제에 의해 이펙터 분자에 결합시키는 표준 화학적 또는 재조합 DNA 공정에 의해 제조될 수 있다. 상기 이펙터 분자를 항체에 컨주게이션하는 기술은 당 분야에 널리 공지되어 있다(참조, Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., Robinson et al., eds., 1987, pp. 623-53; Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev., 62:119-58 and Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics, 83, 67-123). 특정 화학적 공정으로는, 예를 들어 WO 93/06231, WO 92/22583, WO 89/00195, WO 89/01476 및 WO03031581에 기재된 것들이 있다. 대안적으로, 이펙터 분자가 단백질 또는 폴리펩티드인 경우, 결합은, 예를 들어 WO 86/01533 및 EP0392745에 기재된 재조합 DNA 공정을 이용하여 달성될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 이펙터 분자는, 예를 들어 항신생물제, 약물, 독소, 생물학적 활성 단백질, 예를 들어 효소, 다른 항체 또는 항체 단편, 합성 또는 천연 발생 중합체, 핵산 및 이의 단편, 예를 들어 DNA, RNA 및 이의 단편, 방사성핵종, 특히 방사성 아이오다이드, 방사성 동위원소, 킬레이트 금속, 나노입자 및 리포터 그룹, 예를 들어 형광 화합물 또는 NMR 또는 ESR 분광학에 의해 검출될 수 있는 화합물을 포함한다.

이펙터 분자의 예는 세포에 유해한(예를 들어, 사멸시키는) 임의의 작용제를 포함하는 세포독소 또는 세포독성제가 있을 수 있다. 예로는 콤브레스타틴, 돌라스타틴, 에포틸론, 스타우로스포린, 메이탠시노이드, 스폰기스타틴, 리족신, 할리콘드린, 로리딘, 헤미아스텔린, 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜치신, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 미토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 푸로마이신 및 이들의 유사체 또는 동족체를 포함할 수 있다.

이펙터 분자는 항대사물질(예를 들어, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예를 들어, 메클로르에타민, 티오에파 클로르암부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 시클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 백금(II)(DDP) 시스플라틴), 안트라시클린(예를 들어, 다우노루비신(이전에는 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(이전에는 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 안트라마이신(AMC), 칼리케아미신 또는 두오카르마이신), 및 항-유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)도 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

다른 이펙터 분자는 ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y, Lu¹⁷⁷, 비스무트²¹³, 칼리포르늄²⁵², 이리듐¹⁹² 및 텅스텐¹⁸⁸/레늄¹⁸⁸과 같은 킬레이트 방사성핵종; 또는 이로 제한되지 않는 알킬포스포콜린, 토포이소머라제 I 억제제, 탁소이드 및 수라민과 같은 약물을 포함할 수 있다.

다른 이펙터 분자는 단백질, 펩티드 및 효소를 포함한다. 관심 효소로는 단백질분해 효소, 히드롤라제(hydrolase), 라이아제(lyase), 아이소머라제, 트랜스퍼라제가 있으나 이에 제한되지 않는다. 관심 단백질, 폴리펩티드 및 펩티드로는 면역글로불린, 아브린, 리신 A, 슈도모나스 엑소톡신 또는 디프테리아 독소와 같은 독소, 인슐린, 종양 괴사 인자, α-인터페론, β-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 또는 조직 플라스미노겐 활성화제와 같은 단백질, 혈전제 또는 항-혈관형성제, 예를 들어 안지오스타틴 또는 엔도스타틴, 또는 생물학적 반응 변형제, 예를 들어 림포카인, 인터루킨-1(IL-1), 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-6(IL-6), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 신경 성장 인자(NGF) 또는 다른 성장 인자 및 면역글로불린이 있으나 이에 제한되지 않는다.

다른 이펙터 분자는, 예를 들어 진단에서 유용한 검출가능한 물질을 포함할 수 있다. 검출가능한 물질의 예로는 다양한 효소, 보조 분자족(prosthetic groups), 형광 물질, 발광 물질, 생체발광 물질, 방사성 핵종, 양전자 방출 금속(양전자 방출 단층촬영법에 이용됨), 및 비방사성 상자성 금속 이온이 있다. 진단용 항체에 컨주게이션될 수 있는 금속 이온에 대해서는 미국 특허 제4,741,900호를 참조하라. 적합한 효소로는 호스라디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제가 있고; 적합한 보조 분자족에는 스트렙타비딘, 아비딘 및 바이오틴이 있으며; 적합한 형광 물질에는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 및 피코에리트린이 있고; 적합한 발광 물질로는 루미놀이 있으며; 적합한 생체발광물질에는 루시퍼라제, 루시페린 및 아에쿠오린이 있고; 적합한 방사성 핵종으로는 ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹¹¹In 및 ⁹⁹Tc가 있다.

또 다른 실시예에서, 이펙터 분자는 생체내에서 항체의 반감기를 증가시키고/거나, 항체의 면역원성을 감소시키고/거나, 상피 장벽을 지나 면역계로의 항체의 전달을 향상시킬 수 있다. 이러한 유형의 적합한 이펙터 분자의 예로는 WO05/117984호에 기재된 것들과 같은 중합체, 알부민, 알부민 결합 단백질 또는 알부민 결합 화합물이 있다.

이펙터 분자가 중합체일 때, 이는 일반적으로 합성 또는 천연 발생 중합체일 수 있으며, 예를 들어 치환되거나 치환되지 않은 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체 또는 분지되거나 분지되지 않은 다당류, 예를 들어 호모-다당류 또는 헤테로-다당류이다.

상기 언급된 합성 중합체에 제공될 수 있는 임의의 특정 치환기에는 하나 이상의 히드록시, 메틸 또는 메톡시기가 있다.

합성 중합체의 특정 예로는 치환되거나 치환되지 않은 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜) 폴리(비닐알코올) 또는 이들의 유도체, 특히 메톡시폴리(에틸렌글리콜)과 같은 치환되거나 치환되지 않은 폴리(에틸렌글리콜) 또는 이의 유도체가 있다.

특정한 천연 발생 중합체로는 락토오스, 아밀로오스, 덱스트란, 글리코겐 또는 이들의 유도체가 있다.

본원에서 사용되는 "유도체"는 반응성 유도체, 예를 들어 말레이미드 등과 같은 티올-선택적 반응성기를 포함하도록 의도된다. 반응성기는 중합체에 직접 결합되거나 링커 세그먼트를 통해 결합될 수 있다. 일부 경우에 상기 기의 잔기가 항체 단편과 중합체 사이의 결합기(linking group)로서 생성물의 일부를 형성할 것임이 인지될 것이다.

중합체의 크기는 요망에 따라 다양할 수 있으나, 일반적으로 평균 분자량이 500Da 내지 50000Da, 바람직하게는 5000 내지 40000Da, 더욱 바람직하게는 20000 내지 40000Da의 범위일 것이다. 중합체 크기는 특히 종양과 같은 특정 조직에 국소화시키는 능력 또는 순환되는 반감기를 연장시키는 능력과 같은 생성물의 의도된 용도에 기초하여 선택될 수 있다(개관을 위해, 문헌[Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews, 54, 531-545] 참조). 따라서, 예를 들어, 생성물이 종양의 치료에 사용되기 위해 순환을 중지하고 조직으로 침투할 때, 예를 들어 약 5000Da의 분자량을 지니는 저분자량의 중합체를 이용하는 것이 유리할 수 있다. 생성물이 여전히 순환중인 적용의 경우에, 예를 들어 20000Da 내지 40000Da 범위의 분자량을 지니는 고분자량의 중합체를 이용하는 것이 유리할 수 있다.

특히 바람직한 중합체는 폴리알킬렌 중합체, 예를 들어 폴리(에틸렌글리콜) 또는, 특히, 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 또는 이들의 유도체, 특히 분자량의 범위가 약 15000Da 내지 약 40000Da인 것을 포함한다.

일 예에서, 본 발명에 사용되는 항체는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 모이어티에 부착된다. 구체적인 일 예에서, 항체는 항체 단편이고, PEG 분자는 임의의 이용가능한 아미노산 측쇄 또는 항체 단편에 위치한 말단 아미노산 작용기, 예를 들어 임의의 유리 아미노기, 이미노기, 티올기, 히드록실기 또는 카르복실기를 통해 부착될 수 있다. 이러한 아미노산은 항체 단편에서 천연 발생할 수 있거나 재조합 DNA 방법을 이용하여 단편으로 공학처리될 수 있다(참조, 예를 들어 US 5,219,996호; US 5,667,425호; WO98/25971호). 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 변형된 Fab 단편이고, 여기서 변형은 이의 중쇄의 C-말단부에 이펙터 분자의 부착을 가능하게 하는 하나 이상의 아미노산의 첨가이다. 바람직하게는, 첨가된 아미노산은 이펙터 분자가 부착될 수 있는 하나 이상의 시스테인 잔기를 함유하는 변형된 힌지(hinge) 영역을 형성한다. 둘 이상의 PEG 분자를 부착시키기 위해 다수의 부위가 이용될 수 있다.

바람직하게는, PEG 분자가 항체 단편에 위치한 하나 이상의 시스테인 잔기의 티올기를 통해 공유적으로 결합된다. 변형된 항체 단편에 부착된 각 중합체 분자는 단편에 위치한 시스테인 잔기의 황 원자에 공유적으로 결합될 수 있다. 공유 결합은 일반적으로 이황화 결합, 또는 특히 황-탄소 결합일 것이다. 티올기가 부착점(point of attachment)으로서 이용되는 경우, 적합하게 활성화된 이펙터 분자, 예를 들어 말레이미드 및 시스테인 유도체와 같은 티올 선택적인 유도체가 이용될 수 있다. 활성화된 중합체는 상기 기재된 중합체-변형된 항체 단편의 제조에서 출발 물질로 이용될 수 있다. 활성화된 중합체는 아이오도아세트아미드, 이미드, 예를 들어 말레이미드, 비닐 설폰 또는 디설파이드와 같이 α-할로카르복실산 또는 에스테르와 같은 티올 반응성기를 함유하는 임의의 중합체일 수 있다. 이러한 출발 물질은 상업적으로 입수할 수 있거나(예를 들어, Nektar, 이전에는 Shearwater Polymers Inc., Huntsville, AL, USA), 시판되는 출발 물질로부터 통상의 화학적 공정을 이용하여 제조될 수 있다. 특정 PEG 분자는 2OK 메톡시-PEG-아민 (Nektar, 이전에는 Shearwater; Rapp Polymere; and SunBio로부터 수득할 수 있음) 및 M-PEG-SPA (Nektar, 이전에는 Shearwater로부터 수득할 수 있음)를 포함한다.

일 구체예에서, 항체는, 예를 들어 EP 0948544호에 기재된 방법에 따라 PEG화된, 즉 Fab 단편에 공유적으로 결합된 PEG(폴리(에틸렌글리콜))을 지니는 변형된 Fab 단편이다[참조 "Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications", 1992, J. Milton Harris (ed), Plenum Press, New York, "Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications", 1997, J. Milton Harris and S. Zalipsky (eds), American Chemical Society, Washington DC and "Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences", 1998, M. Aslam and A. Dent, Grove Publishers, New York; Chapman, A. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545]. 일 예에서, PEG는 힌지 영역 내의 시스테인에 부착된다. 일 예에서, PEG 변형된 Fab 단편은 변형된 힌지 영역 내의 단일 티올기에 공유적으로 결합된 말레이미드기를 지닌다. 리신 잔기는 말레이미드기에 공유적으로 결합될 수 있고, 리신 잔기 상에서 아민기의 각각에 분자량이 약 20,000Da인 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체가 부착될 수 있다. Fab 단편에 부착된 PEG의 총 분자량은 따라서 대략 40,000Da일 수 있다.

일 구체예에서, 본 발명은 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 대해 특이성을 지니는 중화 항체 분자를 제공하고, 이는 서열번호 9에 제공된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 지니고, 이펙터 분자가 부착되는 하나 이상의 시스테인 잔기를 함유하는 변형된 힌지 영역을 이의 중쇄의 C-말단부에 지니는 변형된 Fab 단편이다. 바람직하게는 이펙터 분자는 PEG이고, 이는 (WO98/25971호 및 WO2004072116호)에 기재된 방법을 이용하여 리실-말레이미드기를 중쇄의 C-말단부에서 시스테인 잔기에 부착시킴에 의해 부착되며, 리실 잔기의 각 아미노기는 분자량이 약 20,000Da인 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 잔기에 공유적으로 결합된다. 항체에 부착된 PEG의 총 분자량은 따라서 대략 40,000Da이다.

또 다른 예에서, 이펙터 분자는 국제 특허 출원 WO2005/003169호, WO2005/003170호 및 WO2005/003171호에 기재된 방법을 이용하여 항체 단편에 부착될 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 항체 분자의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)을 엔코딩하는 단리된 DNA 서열을 제공한다. 바람직하게는, DNA 서열은 본 발명의 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄를 엔코딩한다. 본 발명의 DNA 서열은, 예를 들어 화학적 프로세싱, cDNA, 유전체 DNA 또는 이들의 임의의 조합에 의해 생성된 합성 DNA를 포함할 수 있다.

본 발명의 항체 분자를 엔코딩하는 DNA 서열은 당업자에게 널리 공지된 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄의 일부 또는 전부를 코딩하는 DNA 서열은 요망에 따라 결정된 DNA 서열로부터 합성될 수 있거나 상응하는 아미노산 서열에 기초하여 합성될 수 있다.

수용체 프레임워크 서열을 코딩하는 DNA는 당업자에게 널리 이용될 수 있고 이들의 공지된 아미노산 서열에 기초하여 용이하게 합성될 수 있다.

분자생물학의 표준 기술을 이용하여 본 발명의 항체 분자를 코딩하는 DNA 서열을 제조할 수 있다. 요망되는 DNA 서열은 올리고누클레오티드 합성 기술을 이용하여 완전히 또는 부분적으로 합성될 수 있다. 부위-특이적 돌연변이유발 및 중합효소 연쇄 반응(PCR) 기술이 적합하게 이용될 수 있다.

적합한 서열의 예가 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 17, 서열번호 18 및 서열번호 19에 제공된다.

본 발명은 또한 본 발명의 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 클로닝 또는 발현 벡터에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 항체를 엔코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 클로닝 또는 발현 벡터가 제공된다. 바람직하게는, 클로닝 또는 발현 벡터는 적합한 신호 서열을 따라 본 발명의 항체 분자의 경쇄 및 중쇄를 각각 엔코딩하는 두 개의 DNA 서열을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 벡터는 서열번호 14 및 18에 제공된 서열을 포함한다. 일 구체예에서, 본 발명에 따른 벡터는 서열번호 13 및 서열번호 17에 제공된 서열을 포함한다.

벡터를 구성할 수 있는 일반적인 방법으로 트랜스펙션(transfection) 방법 및 배양 방법이 당업자에게 널리 공지되어 있다. 이와 관련하여, 문헌["Current Protocols in Molecular Biology", 1999, F. M. Ausubel (ed), Wiley Interscience, New York and the Maniatis Manual produced by Cold Spring Harbor Publishing]을 참조하라.

또한, 본 발명의 항체를 엔코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 하나 이상의 클로닝 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 임의의 적합한 숙주 세포/벡터 시스템을 본 발명의 항체 분자를 엔코딩하는 DNA 서열의 발현에 시용할 수 있다. 세균, 예를 들어 대장균(E. coli) 및 다른 미생물 시스템을 이용할 수 있거나, 진핵, 예를 들어 포유동물, 숙주 세포 발현 시스템을 이용할 수도 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포로는 CHO, 골수종 또는 하이브리도마 세포가 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 벡터를 함유하는 숙주 세포를 본 발명의 항체 분자를 엔코딩하는 DNA로부터 단백질을 발현시키기에 적합한 조건하에 배양하고, 항체 분자를 단리시키는 것을 포함하여, 본 발명에 따른 항체 분자를 제조하는 방법을 제공한다.

항체 분자는 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드만을 포함할 수 있고, 이 경우 숙주 세포를 트랜스펙션하는데 이용하기에 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드 코딩 서열만을 필요로 한다. 중쇄 및 경쇄 둘 모두를 포함하는 생성물을 제조하기 위해, 세포주를 두 개의 벡터로 트랜스펙션시킬 수 있는데, 첫 번째 벡터는 경쇄 폴리펩티드를 엔코딩하고 두 번째 벡터는 중쇄 폴리펩티드를 엔코딩한다. 대안적으로, 경쇄 및 중쇄 폴리펩티드를 엔코딩하는 서열을 포함하는 단일 벡터를 이용할 수 있다.

본 발명의 항체가 병리 상태의 치료 및/또는 예방에 유용하기 때문에, 본 발명은 또한 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물 또는 진단용 조성물을 제공한다. 따라서, 약제를 제조하기 위한 본 발명에 따른 항체의 용도가 제공된다. 조성물은 보통은 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살균된 약학적 조성물의 일부로서 일반적으로 적용될 것이다. 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 애쥬번트를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 본 발명의 항체 분자를 첨가하고 혼합시키는 것을 포함하여, 약학적 또는 진단용 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

항체 분자는 약학적 또는 진단용 조성물에서 유일한 활성 성분일 수 있거나 다른 항체 성분, 예를 들어 항-TNF, 항-IL-1β, 항-T 세포, 항-IFNγ 또는 항-LPS 항체, 또는 비-항체 성분, 예를 들어 크산틴 또는 소분자 억제제를 포함하는 다른 활성 성분을 동반할 수 있다.

약학적 조성물은 치료적 유효량의 본 발명의 항체를 포함하는 것이 바람직하다. 본원에서 사용되는 용어 "치료적 유효량"은 표적 질병 또는 질환을 치료, 경감 또는 예방하는데 필요한 치료제의 양, 또는 검출할 수 있는 치료 또는 예방 효과를 나타내는 양을 의미한다. 임의의 항체에 대하여, 치료적 유효량은 세포 배양 검정 또는 동물 모델에서, 일반적으로 설치류, 토끼, 개, 돼지 또는 영장류에서 초기에 산정될 수 있다. 동물 모델은 또한 적합한 농도 범위 및 투여 경로를 결정하는데에도 이용될 수 있다. 이러한 정보는 이후 인간에게 투여하기에 유용한 용량 및 경로를 결정하는데 이용될 수 있다.

인간 피검체에 대한 정확한 치료적 유효량은 질병 상태의 중증도, 피검체의 일반적인 건강 상태, 피검체의 연령, 체중 및 성별, 식이, 투여 시간 및 빈도, 약물 조합물(들), 반응 민감성 및 치료에 대한 내성/반응에 의존적일 것이다. 이러한 양은 관례적인 실험에 의해 결정될 수 있고, 이는 임상의의 판단하에 있다. 일반적으로, 치료적 유효량은 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg일 것이고, 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg이다. 약학적 조성물은 용량 당 소정량의 본 발명의 활성제를 함유하는 단위 용량 형태로 편리하게 제공될 수 있다.

조성물은 환자에게 개별적으로 투여될 수 있거나 다른 작용제, 약물 또는 호르몬과 함께 (예를 들어, 동시에, 차례로 또는 별도로) 투여될 수 있다.

투여되는 본 발명의 항체 분자의 용량은 치료하려는 질병의 특성, 존재하는 염증의 정도 및 항체 분자가 예방용인지 현재의 질병을 치료하기 위해 이용되는 것인지의 여부에 의존적이다.

투여 빈도는 항체 분자의 반감기 및 이의 효과의 지속기간에 의존적일 것이다. 항체 분자가 짧은 반감기를 지니는 경우(예를 들어, 2 내지 10시간), 매일 1회 이상 투여될 필요가 있다. 대안적으로, 항체 분자가 긴 반감기를 지니는 경우(예를 들어, 2 내지 15일), 매일 1회, 1주에 1회, 또는 심지어 매 1개월 또는 2개월에 1회 투여를 제공하는 것만이 필요할 수 있다.

약학적으로 허용되는 담체는 조성물을 투여받는 개체에게 해로운 항체의 생성을 자체적으로 유도하지 않고 유독하지 않아야 한다. 적합한 담체로는 단백질, 폴리펩티드, 리포좀, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 고분자 아미노산, 아미노산 공중합체 및 불활성 바이러스 입자와 같은 천천히 대사되는 큰 거대분자일 수 있다.

약학적으로 허용되는 염, 예를 들어 광산염, 예를 들어 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 포스페이트 및 설페이트, 또는 유기산의 염, 예를 들어 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트 및 벤조에이트가 사용될 수 있다.

치료용 조성물 중의 약학적으로 허용되는 담체는 물, 염수, 글리세롤 및 에탄올과 같은 액체를 추가로 함유할 수 있다. 추가로, 보조 물질, 예를 들어 습윤제 또는 에멀젼화제 또는 pH 완충 물질이 이러한 조성물에 존재할 수 있다. 이러한 담체들은 약학적 조성물이 환자에 의해 섭취되는 정제, 알약, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리 및 현탁액으로 제형화될 수 있게 한다.

바람직한 투여 형태는 주사 또는 주입, 예를 들어 볼루스(bolus) 주사 또는 연속 주입과 같이 비경구 투여에 적합한 형태를 포함한다. 생성물이 주사 또는 주입을 위한 것일 때, 이것은 오일 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 에멀젼의 형태를 취할 수 있고, 현탁제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체 분자는 사용 전에 적합한 살균 액체와 재구성되는 건조 형태일 수 있다.

일단 제형화되면, 본 발명의 조성물은 피검체에게 직접 투여될 수 있다. 치료하려는 피검체는 동물일 수 있다. 그러나, 조성물이 인간 피검체에게 투여되기 위해 적합화되는 것이 바람직하다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구, 정맥내, 근내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심실내, 경피(transdermal), 경피(transcutaneous)(예를 들어, WO98/20734호 참조), 피하, 복막내, 비내, 창자, 국소, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하나 이에 제한되지 않는 다수의 경로에 의해 투여될 수 있다. 하이포스프레이(hypospray)도 본 발명의 약학적 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 통상적으로, 치료용 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사가능하게 제조될 수 있다. 주사 전에 액체 비히클 중에 용해 또는 현탁되기에 적합한 고체 형태로도 제조될 수 있다.

조성물의 직접 전달은 일반적으로 주사, 피하, 복막내, 정맥내 또는 근내에 의해 달성되거나, 조직의 사이질 공간으로 전달될 것이다. 조성물은 병변으로 투여될 수도 있다. 투여 치료는 단일 투여 스케줄 또는 다수 투여 스케줄일 수 있다.

조성물 중의 활성 성분이 항체 분자임이 인지될 것이다. 이와 같이, 이것은 위장관에서의 분해에 민감할 것이다. 따라서, 조성물이 위장관을 이용한 경로에 의해 투여되어야 하는 경우, 조성물은 분해로부터 항체를 보호하나 일단 위장관으로부터 흡수되면 항체를 방출시키는 작용제를 함유할 필요가 있을 것이다.

약학적으로 허용되는 담체의 면밀한 논의는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, N.J. 1991)]을 이용할 수 있다.

일 구체예에서, 제형은 흡입을 포함하는 국소 투여용 제형으로서 제공된다.

적합한 흡입 제조물은 흡입성 분말, 추진제 가스를 함유하는 계량 에어로졸또는 추진제 가스가 없는 흡입성 용액을 포함한다. 본 발명에 따른 활성 물질을 함유하는 흡입성 분말은 오로지 상기 언급된 활성 물질로만 구성되거나 생리학적으로 허용되는 부형제와 함께 상기 언급된 활성 물질의 혼합물로 구성될 수 있다.

이러한 흡입성 분말은 단당류 (예컨대, 글루코스 또는 아라비노스), 이당류 (예컨대, 락토스, 사카로스, 말토스), 올리고- 및 다당류 (예컨대, 덱스트란), 다가알코올 (예컨대, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨), 염 (예컨대, 소듐 클로라이드, 칼슘 카르보네이트) 또는 이들과 또 다른 것의 혼합물을 포함할 수 있다. 단당류 또는 이당류가 적합하게 사용되고, 특히 락토스 또는 글루코스가 그 수화물의 형태로 이용되나 반드시 그런 것은 아니다.

폐에서의 침착을 위한 입자는 10 마이크론 미만, 예컨대 1-9 마이크론, 예를 들어 0.1 내지 5 ㎛, 특히 1 내지 5 ㎛의 입자 크기를 요구한다. 활성 성분 (예컨대, 항체 또는 단편)의 입자 크기가 가장 중요하다.

흡입성 에어로졸을 제조하는데 이용될 수 있는 추진제 가스는 당 분야에 알려져 있다. 적합한 추진제 가스는 n-프로판, n-부탄 또는 이소부탄과 같은 탄화수소 및 메탄, 에탄, 프로판, 부탄, 사이클로프로판 또는 사이클로부탄의 클로르화되고/거나 플루오르화된 유도체와 같은 할로탄화수소 중에서 선택된다. 상기 언급된 추진제 가스는 그 자체로 또는 이들의 혼합물로 이용될 수 있다.

특히 적합한 추진제 가스는 TG 11, TG 12, TG 134a 및 TG227 중에서 선택되는 할로겐화된 알칸 유도체이다. 상기 언급된 할로겐화된 탄화수소 중에서, TG134a (1,1,1,2-테트라플루오로에탄) 및 TG227 (1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판) 및 이들의 혼합물이 특히 적합하다.

추진제 가스-함유 흡입성 에어로졸은 또한 보조용매, 안정화제, 계면-활성 작용제 (계면활성제), 항산화제, 윤활제 및 pH를 조정하기 위한 수단과 같은 그 밖의 성분을 함유할 수 있다. 이러한 모든 성분은 당 분야에 공지되어 있다.

본 발명에 따른 추진제 가스-함유 흡입성 에어로졸은 5 중량% 이하의 활성 물질을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 에어로졸은, 예를 들어 0.002 내지 5 중량%, 0.01 내지 3 중량%, 0.015 내지 2 중량%, 0.1 내지 2 중량%, 0.5 내지 2 중량% 또는 0.5 내지 1 중량%의 활성 성분을 함유한다.

대안적으로 폐로의 국소 투여는 또한, 예를 들어 네뷸라이저, 예를 들어 컴프레서에 연결된 네뷸라이저 (예컨대, 버지니아주 리치몬드 소재의 Pari Respiratory Equipment, Inc.에 의해 제조된 Pari Master(R) 컴프레서에 연결된 Pari LC-Jet Plus(R) 네뷸라이저)와 같은 장치를 적용시켜 액체 용액 또는 현탁액 제형을 투여함에 의해서일 수 있다.

본 발명의 항체는 용매 중에 분산되어, 예컨대 용액 또는 현탁액의 형태로 전달될 수 있다. 이것은 염수 또는 그 밖의 약리학적으로 허용되는 용매 또는 완충된 용액과 같은 적절한 생리학적 용액에 현탁될 수 있다. 당 분야에 공지된 완충된 용액은 1 ml의 물에 대해 0.05 mg 내지 0.15 mg의 디소듐 에데테이트, 8.0 mg 내지 9.0 mg의 NaCl, 0.15 mg 내지 0.25 mg의 폴리소르베이트, 0.25 mg 내지 0.30 mg의 무수 시트르산, 및 0.45 mg 내지 0.55 mg의 소듐 시트레이트를 함유할 수 있어서 약 4.0 내지 5.0의 pH를 달성한다. 현탁액은, 예를 들어 냉동건조된 항체를 이용할 수 있다.

치료적 현탁액 또는 용액 제형은 또한 하나 이상의 부형제를 함유할 수 있다. 부형제는 당 분야에 널리 공지되어 있고 완충제 (예컨대, 시트레이트 완충제, 포스페이트 완충제, 아세테이트 완충제 및 바이카르보네이트 완충제), 아미노산, 우레아, 알코올, 아스코르브산, 인지질, 단백질 (예컨대, 혈청 알부민), EDTA, 소듐 클로라이드, 리포좀, 만니톨, 소르비톨, 및 글리세롤을 포함한다. 용액 또는 현탁액은 리포좀에 캡슐화되거나 생물분해될 수 있는 미소구체일 수 있다. 제형은 일반적으로 살균 제조 과정을 이용하여 실질적으로 살균된 형태로 제공될 것이다.

본 발명은 제형에 이용된 완충된 용매/용액의 여과에 의한 생산 및 살균, 살균 완충된 용매 용액에서 항체의 무균 현탁, 및 당업자에게 익숙한 방법에 의해 제형을 살균 용기내로 분배시키는 것을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 연무가능한 제형은, 예를 들어 포일 봉투에 포장된 단일 용량 단위 (예컨대, 밀봉된 플라스틱 컨테이너 또는 바이알)로서 제공될 수 있다. 각각의 바이알은 일정 부피, 예컨대 2 mL의 용매/용액완충제에 단위 용량을 함유한다.

본원에 기재된 항체는 분무를 통해 전달하기에 적합할 수 있다.

본 발명의 항체는 유전자 치료요법을 이용하여 투여될 수 있음이 또한 예견된다. 이를 달성하기 위하여, 적합한 DNA 성분의 조절 하에 항체 분자의 중쇄 및 경쇄를 엔코딩하는 DNA 서열을 환자에게 도입시켜 항체 사슬을 DNA 서열로부터 발현시키고 동일반응계내에서(in situ) 어셈블링시킨다.

본 발명은 염증 질병의 조절에 사용되는 항체 분자도 제공한다. 바람직하게는, 항체 분자는 염증 경과를 감소시키거나 염증 경과를 예방하는데 이용될 수 있다.

본 발명은 또한 IL-17A 및/또는 IL-17F에 의해 매개되거나 IL-17A 및/또는 IL-17F의 증가된 수준과 관련된 병리 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 항체 분자를 제공한다. 바람직하게는, 병리 질환은 감염(바이러스, 세균, 진균 및 기생충), 감염과 관련된 내독소 쇼크, 관절염(arthritis), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선 관절염(psoriatic arthritis), 전신성 소아 특발성 관절염(systemic onset juvenile idiopathic arthritis)(JIA), 전신홍반루푸스(systemic lupus erythematosus)(SLE), 천식(asthma), 만성 폐쇄 기도 질환(chronic obstructive airways disease)(COAD), 만성 폐쇄 폐병(chronic obstructive pulmonary disease)(COPD), 급성 폐손상(acute lung injury), 골반 염증성 질환(pelvic inflammatory disease), 알츠하이머병(Alzheimer's Disease), 크론병(Crohn's disease), 염증성 장질환(inflammatory bowel disease), 과민성 대장 증후군(irritable bwel syndrome), 궤양성 대장염(Ulcerative colitis), 캐슬만병(Castleman's disease), 강직척추염(ankylosing spondylitis)과 그 밖의 척추관절병증(spondyloarthropathies), 피부근육염(dermatomyositis), 심근염(myocarditis), 포도막염(uveitis), 눈돌출증(exophthalmos), 자가면역 갑상샘염(autoimmune thyroiditis), 페이로니(Peyronie)병, 복강 질병(coeliac disease), 담낭 질병(gallbladder disease), 털둥지 질병(Pilonidal disease), 복막염(peritonitis), 건선(psoriasis), 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 혈관염(vasculitis), 수술 유착(surgical adhesions), 뇌졸중(stroke), 자가면역 당뇨병(autoimmune diabetes), 타입 I 당뇨병(Type I Diabetes), 라임 관절염(lyme arthritis), 수막뇌염(meningoencephalitis), 중추 및 말초 신경계의 면역 매개된 염증 질병, 예를 들어 다발성 경화증(multiple sclerosis) 및 질레인-바(Guillain-Barr) 증후군, 다른 자가면역 질병, 췌장염(pancreatitis), 외상(수술), 이식편대 숙주 질병(graft-versus-host disease), 이식 거부(transplant rejection), 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 간섬유증(liver fibrosis), 신장섬유증(renal fibrosis), 공피증(scleroderma) 또는 전신 경화증(systemic sclerosis)을 포함하는 섬유화 질병, 암(고형암, 예를 들어 흑색종, 간모세포종, 육종, 편평세포 암종, 이행 세포 암, 난소암 및 혈액암, 특히 급성 골수백혈병, 만성 골수백혈병, 만성 림프성 백혈병, 위암 및 결장암 모두), 심근경색(myocardial infarction)과 같은 허혈 질병 뿐만 아니라 죽상경화증(atherosclerosis)을 포함하는 심장병, 혈관내 응고(intravascular coagulation), 뼈 재흡수(bone resorption), 골다공증(osteoporosis), 치주염(periodontitis) 및 저염산증(hypochlorhydia)으로 구성된 군으로부터 선택된다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 관절염, 류마티스 관절염, 건선, 건선 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염 (JIA), 전신홍반루푸스 (SLE), 천식, 만성 폐쇄 기도 질환, 만성 폐쇄 폐병, 아토피성 피부염, 공피증, 전신 경화증, 폐섬유증, 염증성 장질환, 강직척추염과 그 밖의 척추관절병증 및 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 병리 질환의 치료 또는 예방에 이용된다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 관절염, 류마티스 관절염, 건선, 건선 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염 (JIA), 전신홍반루푸스 (SLE), 천식, 만성 폐쇄 기도 질환, 만성 폐쇄 폐병, 아토피성 피부염, 공피증, 전신 경화증, 폐섬유증, 크론병, 궤양성 대장염, 강직척추염과 그 밖의 척추관절병증 및 암으로 구성된 군으로부터 선택되는 병리 질환의 치료 또는 예방에 이용된다.

일 구체예에서, 본 발명의 항체는 관절염, 류마티스 관절염, 건선, 건선 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염 (JIA), 전신홍반루푸스 (SLE), 천식, 만성 폐쇄 기도 질환, 만성 폐쇄 폐병, 아토피성 피부염, 공피증, 전신 경화증, 폐섬유증, 크론병, 궤양성 대장염, 강직척추염 및 그 밖의 척추관절병증으로 구성된 군으로부터 선택되는 병리 질환의 치료 또는 예방에 이용된다.

일 구체예에서, 병리 질환은 류마티스 관절염이다.

일 구체예에서, 병리 질환은 크론병이다.

일 구체예에서, 병리 질환은 궤양성 대장염이다.

일 예에서, 본 발명은 염증성 또는 면역 관련 질환의 치료에 이용된다. 일 예에서, 염증성 또는 면역 관련 질환은 류마티스 관절염, 크론병 및 궤양성 대장염으로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 동통, 특히 염증과 관련된 동통의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명에 따른 항체 분자를 제공한다.

본 발명은 IL-17A 및/또는 IL-17F에 의해 매개되거나 IL-17A 및/또는 IL-17F의 증가된 수준과 관련된 병리 질환을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서 본 발명에 따른 항체 분자의 용도를 추가로 제공한다. 바람직하게는, 병리 질환은 상기 본원에 기재된 의학적 징후들 중 하나이다. 본 발명은 동통, 특히 염증과 관련된 동통을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서 본 발명에 따른 항체 분자의 용도를 추가로 제공한다.

본 발명의 항체 분자는 인간 또는 동물 신체에서 IL-17A 및/또는 IL-17F의 영향을 감소시키는 것이 요망되는 임의의 치료에서 이용될 수 있다. IL-17A 및/또는 IL-17F는 체내에서 순환할 수 있거나 체내의 특정 부위, 예를 들어 염증 부위에 국한된 채로 바람직하지 않게 높은 수준으로 존재할 수 있다.

본 발명에 따른 항체 분자는 염증 질병, 자가면역 질병 또는 암의 조절을 위해 이용되는 것이 바람직하다.

본 발명은 또한 IL-17A 및/또는 IL-17F에 의해 매개된 질병에 걸렸거나 걸릴 위험이 있는 인간 또는 동물 피검체를 치료하는 방법, 본 발명의 유효량의 항체 분자를 피검체에게 투여하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 항체 분자는 또한 진단, 예를 들어 IL-17A 및/또는 IL-17F를 수반하는 질병 상태의 생체내 진단 및 영상화에 사용될 수 있다.

본 발명은 수반하는 도면을 참조로 하여, 하기 실시예에서 단지 예시의 방식으로 추가로 기재된다:

도면:

도 1

a) 항체 CA028_0496g3의 경쇄 V 영역(서열번호 7).

b) 항체 CA028_0496g3의 중쇄 V 영역(서열번호 9).

c) 항체 CA028_496g3의 CDRH1(서열번호 1), CDRH2(서열번호 2), CDRH3(서열번호 3), CDRL1(서열번호 4), CDRL2(서열번호 5), CDRL3(서열번호 6).

d) 항체 CA028_496g3의 경쇄(서열번호 11).

e) 신호서열을 포함하는 항체 CA028_496g3의 경쇄(서열번호 12).

도 2

a) 항체 CA028_0496g3의 중쇄(서열번호 15).

b) 신호서열을 포함하는 항체 CA028_496g3의 중쇄(서열번호 16).

c) 항체 CA028_496g3의 경쇄를 엔코딩하는 DNA(신호 서열 없음)(서열번호 13)

도 3

a) 신호 서열을 포함하는 항체 CA028_496g3의 경쇄를 엔코딩하는 DNA(서열번호 14).

b) 항체 CA028_496g3의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 DNA(서열번호 8).

c) 신호 서열을 포함하는 항체 CA028_496g3의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 DNA(서열번호 10).

도 4: 신호 서열이 없는 항체 CA028_496g3의의 중쇄를 엔코딩하는 DNA (엑손 포함)(서열번호 17).

도 5: 항체 CA028_496g3의 중쇄를 엔코딩하는 DNA (엑손 및 신호 서열 포함)(서열번호 18).

도 6: 신호 서열을 포함하는 항체 CA028_496g3의 중쇄를 엔코딩하는 cDNA(서열번호 19).

도 7: Hela 세포로부터의 인간 IL-17F에 의해 유도된 IL-6 생성에 대한 항체 CA028_0496 (레전드(legend)에서 496g1로 명명됨) 및 CA028_00496.g3 (레전드에서 496.g3으로 명명됨)의 효과.

실시예 1: IL -17A 및 IL -17F에 결합하는 개선된 중화 항체의 생성

항체 CA028_0496의 단리 및 인간화는 WO2008/047134호에 이미 개시되었다. CA028_0496는 IL-17A 및 IL-17F 둘 모두에 결합하고 이식된 가변 영역 gL7 및 gH9를 포함하는 인간화된 중화 항체이며, 이의 서열은 WO2008/047134호에서 제공된다. 중쇄 수용체 프레임워크는 이러한 인간 JH-영역 점라인 JH4의 부분에서 비롯된 프레임워크 4를 지니는 인간 점라인 서열 VH3 1-3 3-07이다. 경쇄 수용체 프레임워크는 이러한 인간 JK-영역 점라인 JK1의 부분에서 비롯된 프레임워크 4를 지니는 인간 점라인 서열 VK1 2-1-(1) L4이다.

항체 CA028_00496은 IL-17F에 대한 항체의 친화성을 개선시키면서 IL-17A에 대한 친화성을 유지시키기 위해 친화성 성숙되었다. 항체 CA028_00496과 대조적으로, CA028_00496.g3으로서 공지된 친화성 성숙된 항체는 IgG4보다는 IgG1로서 발현되었다. 유전자는 올리고누클레오티드 유도 돌연변이유발에 의해 친화성 성숙된 버젼을 발생시키도록 변형되었다. 친화성 성숙된 경쇄 가변 영역 (gL57) 유전자 서열은 UCB Celltech 인간 경쇄 발현 벡터 pKH10.1내로 서브클로닝되었고, 상기 벡터는 인간 C-카파 불변 영역을 엔코딩하는 DNA (Km3 동종이형)를 함유한다. 불변의 중쇄 가변 영역 (gH9) 서열은 UCB Celltech 발현 벡터 pVhg1 FL내로 서브클로닝되었고, 상기 벡터는 인간 중쇄 감마-1 불변 영역을 엔코딩하는 DNA를 함유한다. 리포펙타민™ 2000(Lipofectamine™ 2000) 절차를 이용하여 제조업체의 지시에 따라 플라스미드를 CHO 세포내로 공동트랜스펙션시켰다 (InVitrogen, catalogue No. 11668).

항체 CA028_00496.g3의 친화성 성숙된 가변 영역의 최종 서열은 도 1a 및 1b에서 제공된다. 항체 CA028_00496.g3에서 중쇄 가변 영역 서열은 부모 항체 CA028_00496의 서열과 동일하다. 대조적으로, 경쇄 가변 영역은 5개의 아미노산만큼 상이하다. 항체 CA028_00496과 항체 CA028_00496.g3의 경쇄간에 상이한 5개 잔기는 도 1a에서 밑줄로 표시된다.

실시예 2: BIACORE

하기 개시되는 대로, 검정 포맷은 고정된 항-인간 IgG Fc-특이적 항체에 의한 항체 CA028_00496.g3의 포획 이후에 포획된 표면 상에서 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F의 적정이었다.

비아코어 3000(Biacore 3000)(Biacore AB)을 이용하여 Biamolecular Interaction Analysis를 수행하였다. 검정은 25℃에서 수행되었다. Fc 특이적인 어피니퓨어(Affinipure) F(ab')₂ 단편 염소 항-인간 IgG(Jackson ImmunoResearch)를 아민 커플링 화학을 통해 CM5 센서 칩(Biacore AB)에 약 6000 반응 단위(response unit, RU)의 수준으로 고정시켰다. HBS-EP 완충제(10 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20, Biacore AB)를 10 ㎕/분의 유속을 지니는 런닝(running) 완충제로 사용하였다. 0.5 ㎍/mL의 CA028_00496.g3의 10 ㎕ 주입액을 고정된 항-인간 IgG-Fc에 의한 포획에 사용하였다. 인간 IL-17A (UCB에 의해 내부 생성됨)를 30 ㎕/분의 유속에서 5 nM로부터 3분간 포획된 CA028_0496.g3 상에서 적정한 다음 20분간 분리시켰다. 인간 IL-17F (R&D systems)를 30 ㎕/분의 유속에서 10 nM로부터 3분간 포획된 CA028_0496.g3 상에서 적정한 다음 5분간 분리시켰다. 40 mM HCl의 10 ㎕의 주입 후, 5 mM NaOH의 5 ㎕ 주입에 의해 10 ㎕/분의 유속에서 표면을 재생시켰다.

표 1 인간 IL -17F 및 IL -17A에 대한 CA028 _496. g3 의 친화성

이중 참조된 백그라운드 공제된 결합 곡선을 표준 방법에 이어 BIAevaluation 소프트웨어(version 4.1)를 이용하여 분석하였다. 적절한 알고리듬으로부터 동력학 파라미터를 결정하였다. 데이터는 표 1에 상세히 설명되며, 평균 값은 회색으로 강조된다.

본래 항체인 CA028_0496에 대해 측정된 IL-17A에 결합하는 친화성 값은 16 pM이었고 IL-17F에 대해서는 1750pM이었다. 대조적으로, 개선된 항체 CA028_0496.g3은 IL-17A에 대해 3.2pM 및 IL-17F에 대해 23pM의 친화성을 지닌다. IL-17F에 대한 항체 CA028_0496의 친화성은 IL-17A에 대한 항체의 친화성을 감소시키지 않으며 70배 넘게 향상되었다. 실제로, IL-17A에 대한 친화성은 5배 증가되었다.

CA028_0496.g3의 친화성은 IL-17A/F 이종이합체 (WO2008/047134호에 개시된 대로 제조됨)에 대해서도 향상되었고, 친화성은 26pM (데이터는 제시되지 않음)인 것으로 나타났다.

실시예 3

인간 IL-17F의 중화를 위한 CA028_00496.g1 (WO2008/047134호에 종래에 기재됨) 및 CA028_00496.g3의 효능을 HeLa 세포 바이오검정을 이용하여 측정하였다. Hela 세포를 ATCC (ATCC CCL-2)의 세포 뱅크로부터 입수하였다. 세포를 10% 우태아 혈청, 페니실린, 젠타마이신 및 글루타민이 보충된 둘베코의 변형된 이글 배지 (DMEM)에서 성장시켰다. 1x10⁴개 세포를 편평한 바닥의 96웰 조직 배양 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 밤새 인큐베이션하고 검정 완충제로 1회 세척하였다. HeLa 세포를 다양한 농도의 항체의 존재하에 재조합 인간 IL-17F (125 ng/ml) 및 종양 괴사 인자-알파 (TNF-α) (1 ng/ml)의 조합물로 48시간 동안 자극시켰다. HeLa 세포주에서, IL-17F는 TNF-알파와 상승작용하여 IL-6의 생성을 유도하였는데, 이러한 생산은 특수한 MSD 검정 키트를 이용하여 정량될 수 있다. 얻어진 분비된 IL-6의 양을 Meso Scale Discovery (MSD) 검정 기법을 이용하여 측정하였고 IC50 값을 산출하였다. CA028_00496.g1 및 CA028_00496.g3은 HeLa 세포 바이오검정으로 측정했을 때 IL-17F의 생물활성의 용량-의존적인 억제를 나타내었다 (도 7). HeLa 검정에서 CA028_00496.g1 및 CA028_00496.g3의 활성은 IL-17F의 활성을 50% 억제하는데 요구되는 용량으로서 표시되었다 (IC₅₀). CA028_00496.g1에 대한 IC₅₀은 92mg/mL이고 CA0 496.g3에 대해서는 4ng/mL이다.

WO2008/047134호에서 CA028_00496.g1에 대해 이미 기재된 대로, IL-17A를 중화시키는 CA028_00496.g3의 능력은 IL-17F를 IL-17A로 대체시킨 동일한 검정을 이용하여 확인되었다 (데이터는 제시되지 않음).

SEQUENCE LISTING <110> UCB Pharma S.A. Adams, Ralph Baker, Terence Lawson, Alastair <120> Antibody molecules which bind IL-17A and IL-17F <130> G0141 <160> 19 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRH1 <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Asn Met Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRH2 <400> 2 Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRH3 <400> 3 Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe Ala His 1 5 10 15 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRL1 <400> 4 Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu Met His 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRL2 <400> 5 Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDRL3 <400> 6 Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain variable region <400> 7 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu 20 25 30 Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 321 <212> DNA <213> DNA encoding light chain variable region <220> <223> CDR <400> 8 gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 60 attacctgca gggctgacga aagcgtgaga acattgatgc actggtacca acagaagcct 120 ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatt cggagattgg agtccccgac 180 aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttcgcctga caatctcctc actccagccc 240 gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 300 ggcacaaaag tggagatcaa g 321 <210> 9 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain variable region <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe 100 105 110 Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 10 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> DNA encoding heavy chain variable region <400> 10 gaggttcagc tcgttgaatc cggaggcgga ctcgtgcagc ctgggggctc cttgcggctg 60 agctgcgctg ccagtggctt cactttcagc gattacaata tggcctgggt gcgccaggcc 120 ccaggcaagg gtctggagtg ggtggccaca attacctatg agggcagaaa cacttattac 180 cgggattcag tgaaagggcg atttaccatc agcagggata atgcaaagaa cagtctgtac 240 ctgcagatga actctctgag agctgaggac accgctgtct actattgtgc aagcccaccc 300 cagtactatg agggctcaat ctacagattg tggtttgccc attggggcca gggaacactg 360 gtgaccgtct cgagc 375 <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain of antibody CA028_496g3 <400> 11 Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser Val Arg Thr Leu 20 25 30 Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp Ser Asp Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 12 <211> 234 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Light chain of antibody CA028_496g3 including signal sequence <400> 12 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30 Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asp Glu Ser 35 40 45 Val Arg Thr Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro 50 55 60 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Ser Glu Ile Gly Val Pro Asp 65 70 75 80 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile Ser 85 90 95 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Trp 100 105 110 Ser Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 13 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> DNA encoding Light chain of antibody CA028_496g3 <400> 13 gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 60 attacctgca gggctgacga aagcgtgaga acattgatgc actggtacca acagaagcct 120 ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatt cggagattgg agtccccgac 180 aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttcgcctga caatctcctc actccagccc 240 gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 300 ggcacaaaag tggagatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 645 <210> 14 <211> 705 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> DNA encoding Light chain of antibody CA028_496g3 including signal sequence <400> 14 atgtcagttc ccacacaggt gctgggcctg cttctgttgt ggctcaccga tgctaggtgt 60 gccatccagc tgacccagag cccttcctct ctcagcgcca gtgtcggaga cagagtgact 120 attacctgca gggctgacga aagcgtgaga acattgatgc actggtacca acagaagcct 180 ggcaaagccc ccaagctcct gatctatctg gtttccaatt cggagattgg agtccccgac 240 aggttcagcg gcagtgggtc tggaactgac tttcgcctga caatctcctc actccagccc 300 gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag acttggagcg acccttggac atttggacag 360 ggcacaaaag tggagatcaa gcgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag 705 <210> 15 <211> 455 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain of antibody CA028_496g3 <400> 15 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Asn Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Thr Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Pro Pro Gln Tyr Tyr Glu Gly Ser Ile Tyr Arg Leu Trp Phe 100 105 110 Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 130 135 140 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 195 200 205 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 210 215 220 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 16 <211> 474 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy chain of antibody CA028_496g3 including signal sequence <400> 16 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asp Tyr Asn Met Ala 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Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 260 265 270 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 275 280 285 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 290 295 300 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 305 310 315 320 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 325 330 335 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 340 345 350 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 355 360 365 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 370 375 380 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 385 390 395 400 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 405 410 415 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 420 425 430 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 435 440 445 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 450 455 460 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 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ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 840 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020 gagaaaacca tctccaaagc caaagcgcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1080 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1365 <210> 18 <211> 1422 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> DNA (including exons) encoding heavy chain of antibody CA028_496g3 with signal sequence <400> 18 atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60 gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120 tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180 ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240 gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300 cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360 tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420 accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 480 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtcgacaag 720 aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 780 ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840 tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 900 aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 960 gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1020 ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1080 aaaaccatct ccaaagccaa agcgcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1140 tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1200 cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1260 acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1320 aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1380 aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1422 <210> 19 <211> 1422 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> CDNA encoding heavy chain of antibody CA028_496g3 including signal sequence <400> 19 atggaatggt cctgggtctt cctgtttttc ctttctgtca caaccggggt gcacagcgag 60 gttcagctcg ttgaatccgg aggcggactc gtgcagcctg ggggctcctt gcggctgagc 120 tgcgctgcca gtggcttcac tttcagcgat tacaatatgg cctgggtgcg ccaggcccca 180 ggcaagggtc tggagtgggt ggccacaatt acctatgagg gcagaaacac ttattaccgg 240 gattcagtga aagggcgatt taccatcagc agggataatg caaagaacag tctgtacctg 300 cagatgaact ctctgagagc tgaggacacc gctgtctact attgtgcaag cccaccccag 360 tactatgagg gctcaatcta cagattgtgg tttgcccatt ggggccaggg aacactggtg 420 accgtctcga gcgcttctac aaagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag 480 agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg 540 gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc 600 ctacagtcct caggactcta ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg 660 ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtcgacaag 720 aaagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 780 ctcctggggg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 840 tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 900 aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 960 gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1020 ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1080 aaaaccatct ccaaagccaa agcgcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1140 tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1200 cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1260 acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1320 aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1380 aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1422

Claims (19)

1. 경쇄의 가변 도메인이 서열번호 7에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 지니는, 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 결합하는 중화 항체.
2. 제 1항에 있어서, 중쇄의 가변 도메인이 CDR-H1에 관하여 서열번호 1에 제공된 서열, CDR-H2에 관하여 서열번호 2에 제공된 서열 및 CDR-H3에 관하여 서열번호 3에 제공된 서열을 포함하는 중쇄를 추가로 포함하는 중화 항체.
3. 제 2항에 있어서, 중쇄의 가변 도메인이 서열번호 9에 제공된 서열을 포함하는 중화 항체.
4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, IL-17A/IL-17F 이종이합체에도 결합하는 중화 항체.
5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 전체(whole) 항체 또는 이의 기능적 활성 단편인 중화 항체.
6. 제 5항에 있어서, 항체 단편이 Fab, Fab', F(ab')₂, scFv 및 Fv 단편으로 구성된 군으로부터 선택되는 중화 항체.
7. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 다중 특이적 항체인 중화 항체.
8. 서열번호 15에 제공된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 11에 제공된 서열을 포함하는 경쇄를 지니는, 인간 IL-17A 및 인간 IL-17F에 결합하는 중화 항체.
9. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체의 경쇄를 엔코딩하는, 단리된 DNA 서열.
10. 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체의 중쇄 및 경쇄를 엔코딩하는, 단리된 DNA 서열.
11. 제 9항 또는 제 10항에 따른 DNA 서열을 포함하는, 클로닝 벡터 또는 발현 벡터.
12. 제 11항에 있어서, 벡터가 서열번호 13 및 서열번호 17에 제공된 서열을 포함하는 벡터.
13. 제 11항 또는 제 12항에 따른 하나 이상의 클로닝 벡터 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
14. 제 13항의 숙주 세포를 배양하고 항체를 단리시키는 것을 포함하는, 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항의 항체를 생성하는 방법.
15. 약학적으로 허용되는 부형제, 희석제 또는 담체 중 하나 이상과 함께 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물.
16. 제 15항에 있어서, 그 밖의 활성 성분을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
17. 치료에 사용하기 위한 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제 15항 또는 제 16항에 따른 약학적 조성물.
18. 감염(바이러스, 세균, 진균 및 기생충), 감염과 관련된 내독소 쇼크, 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 전신성 소아 특발성 관절염(JIA), 전신홍반루푸스(SLE), 천식, 만성 폐쇄 기도 질환(COAD), 만성 폐쇄 폐병(COPD), 급성 폐손상, 골반 염증성 질환, 알츠하이머병, 크론병, 염증성 장질환, 과민성 대장 증후군, 궤양성 대장염, 캐슬만병, 강직척추염과 그 밖의 척추관절병증, 피부근육염, 심근염, 포도막염, 눈돌출증, 자가면역 갑상샘염, 페이로니병, 복강 질병, 담낭 질병, 털둥지 질병, 복막염, 건선, 아토피성 피부염, 혈관염, 수술 유착, 뇌졸중, 자가면역 당뇨병, 타입 I 당뇨병, 라임 관절염, 수막뇌염, 중추 및 말초 신경계의 면역 매개된 염증 질병, 예를 들어 다발성 경화증 및 질레인-바 증후군, 다른 자가면역 질병, 췌장염, 외상(수술), 이식편대 숙주 질병, 이식 거부, 폐섬유증, 간섬유증, 신장섬유증, 공피증 또는 전신 경화증을 포함하는 섬유화 질병, 암(고형암, 예를 들어 흑색종, 간모세포종, 육종, 편평세포 암종, 이행 세포 암, 난소암 및 혈액암, 특히 급성 골수백혈병, 만성 골수백혈병, 만성 림프성 백혈병, 위암 및 결장암 모두), 심근경색과 같은 허혈 질병 뿐만 아니라 죽상경화증을 포함하는 심장병, 혈관내 응고, 뼈 재흡수, 골다공증, 치주염 및 저염산증으로 구성된 군으로부터 선택되는 병리 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제 15항 또는 제 16항에 따른 약학적 조성물.
19. IL-17A 및/또는 IL-17F에 의해 매개되거나 IL-17A 및/또는 IL-17F의 증가된 수준과 관련된 병리 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제 15항 또는 제 16항에 따른 약학적 조성물의 용도.

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