CN103316101B - 一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法。本发明公开了一种治疗糖尿病肾病的中药，它由下述重量配比的中药材制备而成：胡芦巴6~15份、黄芪6~15份、淫羊藿3~8份、补骨脂3~8份、山茱萸3~8份、大黄1~5份、肉桂3~8份、黄连2~6份。本发明还公开了该中药的制备方法。本发明通过降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白，剂量依赖性地抑制肾小管间质纤维化发挥一定的治疗1型糖尿病肾病作用，该作用与盐酸贝那普利片相当，但强于金匮肾气丸。本发明还可通过保护肾脏结构、减少尿蛋白含量、改善体内脂代谢紊乱等途径对2型糖尿病肾病大鼠起到一定的治疗作用。

Description

一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药，具体涉及一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法。

背景技术

糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病常见和严重的慢性并发症之一，也是糖尿病患者主要死亡原因。糖尿病持续10~20年，DN的发生率为30%~50%。1型糖尿病与2型糖尿病均具有高血糖症状，从而产生包括酮酸中毒、肾脏衰竭、心脏病、中风、失明等严重威胁健康的并发症。2型糖尿病往往与肥胖及年龄有关，主要由于机体内产生胰岛素抵抗，在正常胰岛素水平下肌肉或者脂肪细胞无法产生正常生理反应，是胰岛素的相对不足。1型糖尿病往往在青少年中产生，也被称为青少年糖尿病。由感染(尤其是病毒感染)、毒物等因素诱发机体产生异常自身体液和细胞免疫应答，导致胰岛β细胞损伤，从而导致胰岛素绝对不足，临床上必须使用胰岛素治疗。

从中医角度讲，糖尿病肾病规范化的中医病名为消渴肾病，其病机特点是“本虚标实，虚实夹杂”。阴虚、阳虚、肾虚、气虚等为本，血瘀、痰浊、水湿为标。中华中医药学会分会制定的《糖尿病肾病诊断、辨证分型及疗效评定标准》( 2007 年试行方案) 将糖尿病本证分为阴虚燥热证、气阴两虚证、脾肾气虚证、阴阳两虚证; 将标证分为湿证、瘀证、瘀痰证。中医上主要是采用辨证施治来治疗消渴肾病，根据辨证分型来遣方用药。中药治疗消渴肾病主要是以养肾滋阴、活血补气为主。如金匮肾气丸可温补肾阳，化气行水；具有提高S0D、改善垂体--肾上腺皮质功能；改善脂代谢、增强神经--体液调解、抗白内障， 降低血糖等功效。

从西医角度讲，糖尿病肾病的基本病理特征是系膜细胞增生、细胞外质增多、肾小球硬化与基底膜增厚等。其确切发病机制尚未阐明，现普遍认为长期的高血糖导致的体内三大物质代谢紊乱、肾血流动力学改变是DN 病变基础，细胞因子被激活是导致DN 的直接因素，氧化应激是DN 发生的共同机制。临床表现主要为肾小球滤过率增高，蛋白尿，高血压，肾功能不全（蛋白尿出现、血清BUN、Scr含量明显升高）等。目前临床主要诊断依据主要是尿蛋白的检测。

糖尿病肾病尚无特效疗法。治疗原则为：①严格控制高血糖、高血压、纠正脂代谢紊乱、逆转胰岛素抵抗，尽可能使血糖接近正常水平，防止和延缓发生糖尿病肾病；②保护肾功能，延缓肾功能减退的速率，减少蛋白尿；③透析治疗和肾移植；④积极治疗并发症。如本实验中阳性对照药物盐酸贝那普利片可抑制血紧张素转化酶,减低血管紧张素Ⅱ介导的各种作用。使外周血管阻力降低，从而起到降血压的作用，同时可改善糖尿病糖耐量。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗糖尿病肾病的中药及其制备方法。

一种治疗糖尿病肾病的中药，它由下述重量配比的中药材制备而成：胡芦巴6~15份、黄芪6~15份、淫羊藿3~8份、补骨脂3~8份、山茱萸3~8份、大黄1~5份、肉桂3~8份、黄连2~6份。

作为优选方案：所述中药材的重量配比是：胡芦巴8~12份、黄芪8~12份、淫羊藿4~6份、补骨脂4~6份、山茱萸3~5份、大黄1~3份、肉桂3~5份、黄连2~4份。

作为最佳方案：所述中药材的重量配比是：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、大黄2份、肉桂4份、黄连3份。

本方胡芦巴辛温味咸，温补肾阳除脏寒，黄芪甘温补中，健脾益气，尚兼利水消肿，两药合用，温补之力大增，可补先后天之不足，共为君药；淫羊藿辛温味甘，甘温补肾阳，辛温助行散，补骨脂味苦辛温，补肾阳而纳肺肾之气，山茱萸酸涩而温，滋补肝肾之阴而固涩肾精，三药合用温肾阳、纳肾气、敛肾精共为臣药。大黄泄浊解毒，为佐药；大黄尚有活血化瘀之功，兼为使药。肉桂辛甘性热芳香，温肾阳而引火归源，导浮游之火入肾，增强下焦气化之功，黄连解毒燥湿，黄连之苦寒还可制约肉桂之辛热，交通心肾，调和阴阳，共为佐药。全方合用共奏补肾健脾，扶阳解毒之功。

组方配伍体现了传统理论与现代研究的有机结合：胡芦巴与补骨脂相配合，温肾助阳、祛寒固肾之功效愈为显著，名为补骨脂丸，出自《简要济众方》；临床观察及实验研究均表明胡芦巴具降糖调脂，改善蛋白尿之功，而补骨脂具有调节免疫的功能，能强骨平喘，改善蛋白尿。肉桂与黄连配合，一温一寒，调和阴阳，交通心肾，名为交泰丸，出自《韩氏医通》，临床观察与现代研究表明肉桂与黄连均有良好的改善血糖血脂的作用，且两药合用治疗效果益增，而且调和了各自的寒热偏性，减少了不良反应。山茱萸与淫羊藿配合，一阴一阳，有收有散，滋补肝肾，强肾敛精，现代医学研究表明具有泌尿生殖系统的良好保护作用。大黄能显著改善蛋白尿，与黄连与合用，泄浊解毒之力增强，而且缓解了黄连久服容易导致便秘的不良反应。黄芪保护肾脏，益气解毒，减轻蛋白尿，在中医肾病临床已经成为经典认识。全方补中有行，补中有泄，以补为主；温阳敛阴，温寒并用，温阳为主；该方组方特色鲜明、重点突出、统筹兼顾，切中糖尿病肾病之病机。

制备所述中药除了上述原料外，还可以有辅料，所述辅料可以是蔗糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁、山梨醇、甘露醇、乳糖、微晶纤维素、微粉硅胶、羧甲基纤维素、水、矫味剂等这些药物制剂中常规辅料的一种或多种的组合，具体选择哪一种或哪几种辅料应根据所需要制成的剂型来确定。由于根据剂型需要来选择适当的辅料是本领域技术人员都能掌握的常规手段，因此没有将制备本发明药物所需要的辅料纳入到专利要求保护的范围内。

所述中药可以是适合于临床使用的任何一种剂型，例如：汤剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、膏剂、合剂、糖浆剂等。例如，可以将所述原料粉碎成细粉，灭菌后制成散剂直接服用，也可以按照最传统的方式，将所述原料用水煎熬，制成汤剂服用，还可以将所述原料经提取、精制、浓缩后再加入辅料制成适当的剂型。

本发明优选的剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液体制剂。当然，要制成这几种剂型，最好是先对原料进行充分、有效地提取精制，提取精制的目的主要有以下几点：1）富集有效成分，除去无效成分，从而提高药物的疗效，降低药物的副作用；2）尽可能地减少服用剂量，从而提高患者的服药顺应性；3）便于制剂成型。

然而，由于中药的作用机理和成分非常复杂，它采用的是辨证施治，与西药有本质区别，有效和无效成分之间并没有明显的界限，本领域技术人员也不可能通过常规的技术手段分析出中药中究竟哪些是有效成分，哪些是无效成分，也就是说，本领域技术人员不可能在现有技术的教导下，推测出某一中药该采用何种方法进行提取和精制，而是要通过大量创造性试验，用药效或临床进行验证才能得出。否则，提取精制方法选取不当，将会直接影响药物的疗效。

本发明通过大量试验，最终采取分步提取的方法对原料进行提取，其中，黄芪采用水提；黄连、大黄采用醇提；胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂采用水提醇沉。具体的制备方法如下：

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4~10倍水提取1~4次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入4~10倍的50~70%乙醇回流提取1~3次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4~12倍水提取1~4次，每次0.5~2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1~1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40~70%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08~1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35~1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

优选的制备方法是：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加入6倍的60%乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

试验证明：按照上述方法制备的中药药效最好，副作用最低，服用剂量最少，患者的服药顺应性最佳，制备成型最容易。

药效试验表明：本发明通过降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白，剂量依赖性地抑制肾小管间质纤维化发挥一定的治疗1型糖尿病肾病作用，该作用与盐酸贝那普利片相当，但强于金匮肾气丸。本发明还可通过保护肾脏结构、减少尿蛋白含量、改善体内脂代谢紊乱等途径对2型糖尿病肾病大鼠起到一定的治疗作用。

附图说明

图1：本发明对1型糖尿病肾病大鼠血糖的影响（与正常组比较**P<0.05）。

图2：本发明对1型糖尿病肾病大鼠肾脏脏器指数对比（与正常组比较*P<0.01，与模型组比较^△△P<0.05）。

图3：各组对1型糖尿病大鼠模型肾脏病理结构及脏器指数影响。

图4：本发明对2型糖尿病肾病大鼠血糖的影响（与正常组比较**P<0.05）。

图5：本发明对2型糖尿病肾病大鼠肾脏脏器指数对比（与正常组比较**P<0.05）。

图6：各组对2型糖尿病大鼠模型肾脏病理结构及脏器指数影响。

图中：K—空白对照组；M—模型对照组；Y—盐酸贝那普利片阳性对照组；J—金匮肾气丸阳性对照组；G—本发明高剂量组；Z：本发明中剂量组；D—本发明低剂量组。

具体实施方式

实施例1

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材制成：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、肉桂4份、黄连3份、大黄2份。

制备方法是：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加入6倍的60%乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达60%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入适量甘露醇、糊精制粒，干燥，制成颗粒剂。

按上述制备方法提取后得到的稠膏中，经检测，黄芪甲苷的含量达25.6mg/g，大黄素含量达8.9mg/g，淫羊藿苷的含量达12.7mg/g，转移率（稠膏中的待测成分总量占药材中待测成分总量的比例）分别为56.4%、32.8%和42.3%。提取效果明显优于常规方法。

性状：本品为棕色颗粒，味苦、微甜。

规格：每袋装12g

用法用量：每次一袋，一日3次。

实施例2  本发明对1型糖尿病肾病大鼠的治疗作用研究

1、供试品、对照品、试剂

1.1供试品：实施例1药物，规格：12g/袋；性状：本品为棕色颗粒状。用适量双蒸水配制成实验所需浓度，现配现用。

1.2对照品1：盐酸贝那普利片。来源：北京诺华制药有限公司。规格：10mg*14片/盒。

对照品2：金匮肾气丸。来源：北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂。规格：360粒/瓶。

取盐酸贝那普利片、金匮肾气丸用适量双蒸水配制成实验所需浓度，现配现用。

1.3试剂：STZ（链脲佐菌素），由sigma公司提供；尿素氮试剂盒、肌酐试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供；甘油三酯试剂盒、总胆固醇试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，由北京北化康泰临床试剂有限公司提供。

2、实验系统

实验动物：Wistar大鼠，SPF级，由湖北省实验动物研究中心提供。

动物数：雄性130只

仪器：JPS-6型怡成超越血糖测试仪，购于北京怡成生物电子技术有限公司；FA1004型电子天平，购于上海舜宇恒平科学仪器有限公司；754N型紫外分光光度仪，购于上海奥谱勒仪器有限公司提供；TGL-16A高速离心机，购于长沙平凡仪器仪表有限公司。

3、实验设计

表1实验设计表

4、STZ及供试品用法

4.1  STZ用法：STZ通过尾静脉注射方式给予。

STZ注射剂制备：使用前用0.1mol/L枸橼酸钠缓冲液配制至所需浓度，避光保存，30min内使用。

4.2供试品用法

给药方式：供试品通过灌胃（ig）方式给予，给药前混匀。

给药方式依据：本发明临床给药途径为口服。本实验采用与临床人用药的给药方式进行。

给药频率和周期：每日一次，共8周。

给药剂量：

①空白组对照组（蒸馏水）：0

②模型组（蒸馏水）：0

③阳性对照组1（盐酸贝那普利片）：剂量为1*10^-3 g/kg

④阳性对照组2（金匮肾气丸）：剂量为1g/kg

⑤本发明高剂量组：剂量为7.2g/kg；

⑥本发明中剂量组：剂量为3.6g/kg；

⑦本发明低剂量组：剂量为1.8g/kg。

4.3给药体积

①空白组对照组（蒸馏水）：体积为5ml/kg;

②模型组（蒸馏水）：体积为5ml/kg;

③阳性对照组1（盐酸贝那普利片）：体积为5ml/kg;

④阳性对照组2（金匮肾气丸）：体积为5ml/kg;

⑤本发明高剂量组：体积为5ml/kg;

⑥本发明中剂量组：体积为5ml/kg;

⑦本发明低剂量组：体积为5ml/kg。

给药剂量依据：按照本发明临床给药说明书“口服给药每日三次，每次一袋”，临床剂量以36g/60kg人/日计，则人公斤体重剂量为0.6g/kg；同时，依据《药理学实验方法》第四版（人民卫生出版社）动物剂量换算表设定，大鼠等效剂量为人用剂量的6倍，即3.6g/kg。此等效剂量为实验中剂量，低、中剂量分别为等效剂量的1/2、2倍。

5、检测指标

5.1造模期间观察

笼边观察：所有动物每天至少进行一次笼边观察，观察内容包括实验过程中所有动物，观察包括但不仅限于：皮肤，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸腔，腹部，外生殖器，四肢和脚，呼吸道及循环系统，自主效应（如流涎），神经系统（如震颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。同时，观察大鼠发病、死亡率、损害和供食、供水、排尿、排便等情况。健康状况较差的动物要标出，并进一步观察，根据SOP如有必要须实施安乐死。

详细临床观察：给予STZ一周后，每隔三天测定大鼠空腹血糖，并计算连续两次空腹血糖测定平均值，当大鼠空腹血糖平均值>16.65mmol/L时可视为1型糖尿病大鼠。出现糖尿病3周后，每5天放代谢笼收集24h尿液，试剂盒检测尿微量白蛋白，连续两次尿检出尿白蛋白可视为糖尿病肾病大鼠。

5.2给药后观察

每周测定动物体重和大鼠空腹血糖值（测血糖前禁食12h）。每两周收集24h尿液，测定尿白蛋白量。实验结束后，眼球取血，测定血清尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）含量；心脏取血清测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）4 个指标(采血前一天动物禁食不禁水12h)，取动物肾脏称重后，保存于10%中性甲醛溶液中，纤维素染色和HE染色后进行形态学观察。

6、实验结果

6.1本发明对1型糖尿病大鼠模型一般状态的影响

模型组大鼠精神萎靡、毛发干枯、活动较为迟缓，饮水、饮食增加，尿量增多，后期出现视网膜病变等各种并发症，本发明治疗组大鼠以上状况均有不同程度改善。

6.2本发明对1型糖尿病大鼠模型体重的影响

尾静脉注射STZ后模型组体重显著降低，致第9周模型组体重显著性低于空白对照组。本发明治疗组大鼠体重从给药第2周（实验第10周）开始升高，给药第9周本发明给药组体重比模型组有所升高，其中低剂量大鼠体重升高较为明显。盐酸贝那普利和金匮肾气丸阳性对照组体重与模型组比较有所增加，但无显著性差异。结果显示，本发明可以缓解1型糖尿病肾病引起的体重降低，详见表2。

表2本发明对1型糖尿病大鼠模型体重的影响

注：与正常组比较**P<0.05，与模型组比较^△△P<0.05，单位g）

英文字母代表的具体组别：

K：空白对照组；M：模型对照组；Y：盐酸贝那普利片阳性对照组

J：金匮肾气丸阳性对照组；G：本发明高剂量组；Z：本发明中剂量组

D：本发明低剂量组。

6.3本发明对1型糖尿病大鼠模型血糖影响

注射STZ三天后，模型组血糖显著高于空白对照组，至实验结束模型组血糖基本保持不变；给药治疗八周后，本发明治疗组大鼠血糖与给药前基本保持不变，与模型组比较无显著性差异。盐酸贝那普利阳性对照组和金匮肾气丸阳性对照组血糖与给药前亦基本保持不变。结果显示，本发明与两阳性药物对1型糖尿病肾病的高血糖无明显作用。详见图1。此结果与2型糖尿病大鼠模型结果相似。

6.4本发明对1型糖尿病大鼠模型尿蛋白的影响

注射STZ八周后模型组24h尿蛋白显著性高于空白对照组（P<0.05），随着时间延长，模型组24h尿蛋白逐渐升高；给予本发明四周后，大鼠24h尿蛋白较模型组有所降低，给予本发明八周后，本发明高、中、低剂量组大鼠24h尿蛋白均显著性低于模型组。给药八周后，盐酸贝那普利和金匮肾气丸两阳性对照组亦可显著性降低大鼠24h尿蛋白。结果显示，本发明可显著性降低1型糖尿病肾病模型大鼠24小时尿蛋白含量，对肾脏有一定的保护作用。结果见表3。此结果与2型糖尿病肾病大鼠模型结果相似。

表3本发明对1型糖尿病大鼠模型尿蛋白的影响

组别	8W	14w	18w
				K	12.66±0.01	10.86±3.41	10.46±1.42
M	19.61±5.99**	32.28±32.28**	27.63±1.58**
				Y	19.61±5.99**	13.63±8.59△△	13.26±1.63△△
J	19.61±5.99**	18.67±9.87△△	22.76±4.46△△
				G	19.61±5.99**	27.03±4.63	14.99±4.34△△
Z	19.61±5.99**	25.19±4.94△△	14.21±7.25△△
				D	19.61±5.99**	28.13±12.28	17.50±7.46△△

注：与正常组比较**P<0.05，与模型组比较^△△P<0.05。

英文字母代表的具体组别与表2相同。

6.5本发明对1型糖尿病大鼠模型血清各生化指标影响

实验结束后，测定大鼠血清BUN、Scr和TG、LDL-C、HDL-C含量。结果显示，模型组Scr与空白组比较无显著性差异，给予本发明和阳性药物对于大鼠亦无显著性影响；模型组BUN显著性高于空白对照组（P<0.05），给予本发明八周后，本发明高、中、低剂量组大鼠BUN显著性高于模型组，盐酸贝那普利和金匮肾气丸阳性对照组BUN与模型组比较无显著性差异。

与空白对照组相比，模型组大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C含量均无显著性变化，此结果显示，在1型糖尿病肾病大鼠模型中动物体内脂代谢未发生异常，此结果与2型糖尿病肾病结果有所区别。实验结果见表4。

表4本发明对1型糖尿病大鼠模型血清各生化指标影响

注：与正常组比较*P<0.01，与模型组比较^△P<0.01。

英文字母代表的具体组别与表2相同。

6.6本发明对1型DN大鼠模型肾脏病理结构及脏器指数影响

实验结束，对各组大鼠肾脏进行HE和Masson染色。结果显示，模型组肾小管上皮细胞胞浆透亮，糖原大量聚集，呈现广泛的糖原变性，同时出现轻度纤维化。与模型组比较，盐酸贝那普利和金匮肾气丸阳性对照组肾脏糖原沉积有所改善；本发明高、中、低剂量组HE染色结果显示肾脏结构无明显改善，均呈现糖原变性。Masson染色显示本发明高剂量组未见明显纤维化，中、低剂量组均出现轻度纤维化，阳性药物对照组中，盐酸贝那普利组未见明显纤维化，金匮肾气丸组出现轻度纤维化。（见图3）

模型组肾脏脏器指数显著高于空白对照组，本发明高、中剂量组与阳性药物对照组肾脏指数无明显改善，与模型组比较本发明低剂量组显著性降低。（见图2）

结果显示，本发明对1型糖尿病肾病模型大鼠肾脏糖原变性无明显保护作用；本发明高剂量可以减缓肾脏的纤维化。

8. 实验结论

本实验模型采取一次性大剂量注射STZ（链脲佐菌素）诱导大鼠1型糖尿病模型，最终引起肾脏病变，产生糖尿病肾病模型。

与2型糖尿病肾病类似，1型糖尿病肾病由长期高血糖引起，导致肾血流动力学改变，细胞因子被激活，从而导致肾脏系膜细胞增生、细胞外基质增多、肾小球硬化与基底膜增厚、产生严重糖原沉积引起肾脏糖原变性等。临床表现主要为肾小球滤过率增高，蛋白尿，高血压，肾功能不全（蛋白尿出现）等。目前临床主要诊断依据主要是尿蛋白的检测。

实验结果显示，①本发明可以显著性改善1型糖尿病肾病引起的大鼠精神萎靡、毛发干枯、活动迟缓等症状；②本发明可以一定程度内抵抗1型糖尿病肾病引起的大鼠体重降低；③本发明与阳性对照药物均可以显著性降低1型糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白含量；④本发明高、中、低剂量对1型糖尿病肾病大鼠血清BUN、Scr增高均无改善；⑤HE染色显示，本发明对型糖尿病肾病中的肾脏糖原变性无明显改善，不能改善1型糖尿病肾病中肾脏的结构的损害；⑥实验结果显示，1型糖尿病肾病大鼠脂代谢未发生紊乱，TG、TC等相关指标未发生显著变化；⑦实验结果同时显示本发明与两阳性药物对1型糖尿病肾病大鼠模型血糖无明显降低作用。

综上，本发明通过降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白，剂量依赖性地抑制肾小管间质纤维化发挥一定的治疗1型糖尿病肾病作用，该作用与盐酸贝那普利片相当，但强于金匮肾气丸。

实施例3 本发明对2型糖尿病肾病大鼠的治疗作用研究1、供试品、对照品、溶剂、试剂

1.1供试品：实施例1药物，规格：12g/袋；性状：本品为棕色颗粒状。用适量双蒸水配制成实验所需浓度，现配现用。

1.2对照品1：盐酸贝那普利片。来源：北京诺华制药有限公司。规格：10mg*14片/盒。

对照品2：金匮肾气丸。来源：北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂。规格：360粒/瓶。

取盐酸贝那普利片、金匮肾气丸用适量双蒸水配制成实验所需浓度，现配现用。

1.3试剂：STZ（链脲佐菌素），由Sigma公司提供；尿素氮试剂盒、肌酐试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供；甘油三酯试剂盒、总胆固醇试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，由北京北化康泰临床试剂有限公司提供。

2、实验系统

与实施例2相同。

3、实验设计

表5实验设计表

4、STZ及供试品用法

与实施例2相同。

5、检测指标

5.1造模期间观察

笼边观察：与实施例2相同。

详细临床观察：给予STZ一周后，每隔三天测定大鼠空腹血糖，并计算连续两次空腹血糖测定平均值，当大鼠空腹血糖平均值>11.1mmol/L时可视为2型糖尿病大鼠。出现糖尿病3周后，每5天放代谢笼收集24h尿液，试剂盒检测尿微量白蛋白，连续两次尿检出尿白蛋白可视为糖尿病肾病大鼠。

5.2给药后观察

与实施例2相同。

6、实验结果

6.1本发明对2型糖尿病大鼠模型一般状态的影响

模型组大鼠精神萎靡、毛发干枯、活动较为迟缓，饮水、饮食增加，尿量增多，后期出现视网膜病变等各种并发症，本发明治疗组大鼠以上状况均有不同程度改善。

6.2本发明对2型糖尿病大鼠模型体重的影响

高糖高脂喂养四周后，模型组大鼠体重显著高于空白对照组（P<0.05），注射STZ后模型组体重显著降低。本发明治疗组大鼠体重从给药第2周（实验第12周）开始升高，给药第8周本发明高剂量组显著高于模型组体重。盐酸贝那普利阳性对照组体重与模型组比较有所增加，金匮肾气丸阳性组体重与给药前基本保持不变。结果显示，本发明可以缓解2型糖尿病肾病引起的体重降低，详见表6。

表6  本发明对2型糖尿病肾病大鼠体重的影响

注：与正常组比较**P<0.05，与模型组比较^△△P<0.05，单位g

英文字母代表的具体组别与表2相同。

6.3本发明对2型糖尿病大鼠模型血糖影响

注射STZ三天后，模型组血糖显著高于空白对照组，至实验结束模型组血糖基本保持不变；给药治疗八周后，本发明治疗组大鼠血糖与给药前基本保持不变，与模型组比较无显著性差异。盐酸贝那普利阳性对照组和金匮肾气丸阳性对照组血糖与给药前亦基本保持不变。结果显示，本发明与两阳性药物对2型糖尿病肾病的高血糖无明显作用。详见图4。

6.4本发明对2型糖尿病大鼠模型尿蛋白的影响

注射STZ四周后模型组24h尿蛋白显著性高于空白对照组（P<0.05），随着时间延长，模型组24h尿蛋白逐渐升高；给予本发明两周后，大鼠24h尿蛋白较模型组有所降低，给予本发明八周后，高、中、低剂量组大鼠24h尿蛋白均显著性低于模型组。给药八周后，盐酸贝那普利和金匮肾气丸两阳性对照组亦可显著性降低大鼠24h尿蛋白。结果显示，本发明可显著性降低2型糖尿病肾病模型大鼠24小时尿蛋白含量，对肾脏有一定的保护作用。结果见表7。

表7  本发明对2型糖尿病大鼠模型尿蛋白的影响

组别	8W	9W	11W	16W	18W
						K	6.84±0.58	7.30±1.04	11.38±2.67	10.20±1.32	12.85±5.66
M	10.28±2.95**	19.26±3.10**	27.95±11.73**	28.12±5.83**	31.61±10.35**
						Y	10.28±2.95**	19.26±3.10**	26.25±7.61	24.37±0.26	20.26±3.03△△
J	10.28±2.95**	19.26±3.10**	22.30±8.63△△	20.65±5.61	20.75±5.78△△
						G	10.28±2.95**	19.26±3.10**	24.03±4.79	22.21±2.91	19.28±5.23△△
Z	10.28±2.95**	19.26±3.10**	24.22±5.68△△	20.22±2.8	18.19±4.75△△
						D	10.28±2.95**	19.26±3.10**	23.74±12.52	24.63±7.46	21.13±10.39△△

注：与正常组比较**P<0.05，与模型组比较^△△P<0.05

英文字母代表的具体组别同表2。

6.5本发明对2型糖尿病大鼠模型血清各生化指标影响

实验结束后，测定大鼠血清BUN、Scr和TG、LDL-C、HDL-C含量。结果显示，模型组BUN与空白组比较无显著性差异，给予本发明和阳性药物对于大鼠亦无显著性影响；模型组Scr显著性高于空白对照组（P<0.05），给予本发明八周后，给药组大鼠Scr均低于模型组，其中高剂量组显著性低于模型组，盐酸贝那普利和金匮肾气丸阳性对照组Scr亦低于模型组，但无显著性差异；因此提示，本发明可以显著性降低2型糖尿病肾病大鼠Scr，且有一定的剂量依赖性。本发明可通过增加肾小球肌酐滤过率的方式保护2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能。

与空白对照组相比，模型组大鼠血清TG含量显著性升高，血清TC、HDL-C含量与空白组比较均无显著性变化。给予本发明八周后，高、中剂量组大鼠TG低于模型组，盐酸贝那普利组大鼠TG略低于模型组，金匮肾气丸组大鼠TG高于模型组；模型组血清LDL-C含量显著性高于空白对照组，本发明给药组均低于模型组，其中中剂量组最为明显，而盐酸贝那普利和金匮肾气丸两阳性对照组与模型组比较无明显差异。因此，本发明可以降低2型糖尿病肾病大鼠血清TG、LDL-C含量，且有一定量效关系。由此显示，本发明可以一定程度改善2型糖尿病肾病大鼠体内脂代谢紊乱。实验结果见表8。

表8本发明对2型糖尿病大鼠模型血清各生化指标影响

注：与正常组比较**P<0.05，与模型组比较^△△P<0.05。

英文字母代表的具体组别同表2。

7.6．本发明对2型DN大鼠模型肾脏病理结构及脏器指数影响

实验结束，对各组大鼠肾脏进行HE和Masson染色。结果显示，模型组可见肾小球呈分叶状，系膜基质增多（黑色箭头）；肾小球重度纤维化，毛细血管堵塞，结构欠清（绿色箭头）；肾小管上皮细胞胞浆透亮，为聚居的糖原（红色箭头）；Masson染色显示肾小球呈分叶状，胶原纤维增多。本发明治疗组以上情况均有改善：其中高剂量组HE和Masson染色均证实肾小球结构基本正常，未见明显异常；中剂量组HE显示肾小球毛细血管管腔较通畅，有轻度的纤维化，Masson染色示肾小球呈分叶状，胶原纤维轻度增多；低剂量组HE和Masson染色均证实肾小球有轻度纤维化。金匮肾气和盐酸贝那普利两阳性对照组HE及Masson染色均显示肾小球毛细血管通畅，系膜细胞及系膜基质未见增多。结果提示，本发明可以阻止2型糖尿病肾病中大鼠肾小球硬化、纤维化、系膜基质增多等肾脏组织结构的病理性损坏。见图6。

模型组肾脏脏器指数显著高于空白对照组，而给予本发明与阳性药物对肾脏指数无明显改善。（见图5）

7、实验结论

实验结果显示，①本发明可以显著性改善2型糖尿病肾病引起的大鼠精神萎靡、毛发干枯、活动迟缓等症状；②本发明抵抗2型糖尿病肾病引起的大鼠体重降低，效果优于阳性药物，且有一定量效关系；③本发明与阳性对照药物均可以显著性降低2型糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白含量，提示本发明可以保护肾小球结构不被破坏；④本发明可以显著性降低2型糖尿病肾病大鼠血清Scr的含量，效果优于阳性对照组，且有一定量效关系，提示：本发明可以一定程度保护2型糖尿病肾病大鼠肾脏功能，可以增加肾小球肌酐滤过率；⑤HE和Masson染色显示，本发明和两阳性药物均可改善甚至组织2型糖尿病肾病肾脏系膜基质增多、肾小球纤维化、肾小球叶状、胶原纤维增多等病理性结构改变，从而保护肾脏结构和功能的完整。⑥与两阳性药物比较，本发明可以降低2型糖尿病肾病大鼠血清TG、LDL-C含量，且存在一定量效关系，提示本发明可以一定程度改善2型糖尿病肾病大鼠体内脂代谢紊乱；⑦实验结果同时显示本发明与两阳性药物对2型糖尿病肾病大鼠模型血糖无明显降低作用。

综上，本发明可通过保护肾脏结构、减少尿蛋白含量、改善体内脂代谢紊乱等途径对2型糖尿病肾病大鼠起到一定的治疗作用。

实施例4

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴15份、黄芪15份、淫羊藿8份、补骨脂8份、山茱萸8份、大黄5份、肉桂8份、黄连6份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4倍水提取4次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08的清膏；将黄连、大黄按重量加入4倍的70%乙醇回流提取3次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4倍水提取4次，每次0.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例5

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：胡芦巴6份、黄芪6份、淫羊藿3份、补骨脂3份、山茱萸3份、大黄1份、肉桂3份、黄连2份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入10倍水提取1次， 2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入10倍的50%乙醇回流提取1次，2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入12倍水提取1次，2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达70%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例6

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：

胡芦巴8份、黄芪8份、淫羊藿6份、补骨脂4份、山茱萸3份、肉桂3份、黄连4份、大黄3份。

按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入6倍水提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.12的清膏；将黄连、大黄按重量加入8倍的55%乙醇回流提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.12的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入10倍水提取2次，每次1.5小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.15的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达50%，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.12的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

实施例7

一种治疗脾肾阳虚的中药，它由下述重量配比的中药材作为原料制成：

胡芦巴12份、黄芪12份、淫羊藿4份、补骨脂6份、山茱萸5份、肉桂5份、黄连2份、大黄1份。

按常规方法制备。

Claims (5)

1.一种治疗糖尿病肾病的中药的制备方法，其特征在于：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入4～10倍水提取1～4次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏；将黄连、大黄按重量加入4～10倍的50～70％乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入4～12倍水提取1～4次，每次0.5～2小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1～1.18的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达40～70％，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.08～1.15的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.35～1.40的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型，

所述中药材的重量配比是：胡芦巴6～15份、黄芪6～15份、淫羊藿3～8份、补骨脂3～8份、山茱萸3～8份、大黄1～5份、肉桂3～8份、黄连2～6份。

2.根据权利要求1所述的治疗糖尿病肾病的中药的制备方法，其特征在于：所述中药材的重量配比是：胡芦巴8～12份、黄芪8～12份、淫羊藿4～6份、补骨脂4～6份、山茱萸3～5份、大黄1～3份、肉桂3～5份、黄连2～4份。

3.根据权利要求1所述的治疗糖尿病肾病的中药的制备方法，其特征在于：所述中药材的重量配比是：胡芦巴9份、黄芪9份、淫羊藿5份、补骨脂5份、山茱萸4份、大黄2份、肉桂4份、黄连3份。

4.根据权利要求1-3任何一项所述治疗糖尿病肾病的中药的制备方法，其特征在于：按重量配比称取中药材，将黄芪按重量加入8倍水提取3次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将黄连、大黄按重量加入6倍的60％乙醇回流提取2次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.1的清膏；将胡芦巴、淫羊藿、补骨脂、山茱萸、肉桂先按重量加入8倍水提取三次，每次1小时，收集提取液并浓缩至相对密度为1.13的清膏，然后加入乙醇至乙醇的重量含量达60％，静置过夜，取上清液浓缩至相对密度为1.1的清膏，将以上三种清膏合并，继续浓缩至相对密度为1.38的稠膏，加入辅料制成适合临床使用的剂型。

5.根据权利要求1-3任何一项所述治疗糖尿病肾病的中药的制备方法，其特征在于：所述剂型为颗粒剂或片剂或胶囊剂或口服液体制剂。