CN103315075A - 接种法富金花茶梗茶发花制备工艺 - Google Patents

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赵运林
龙立平
胡治远
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一种接种法富金花茶梗茶发花制备工艺，其步骤如下：①冠突散囊菌的纯化分离；②一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；③茶梗茶样品的处理；④添加冠突散囊菌孢子悬液；⑤烘茶；⑥发花；⑦干燥和保存。本发明研制成功了接种法富金花茶梗茶发花率制备工艺条件，使之能在3-7天短期内实现发花，而且金花普遍茂盛，色泽鲜艳金黄，颗粒肥大，发花率均能达到100%。

Description

接种法富金花茶梗茶发花制备工艺
技术领域
本发明涉及农产品加工技术领域，具体涉及一种接种法富金花茶梗茶发花制备工艺，其发花所述的花即冠突散囊菌（Eurotium cristarum (Raper & Fennell) Malloch & Cain），俗称金花。
背景技术
茯茶是边疆少数民族不可缺少的重要饮料。金花普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大历来是优质茯茶的最重要品质特征。金花是在茯茶加工过程中在黑毛茶中发花阶段形成的。过去，对茯茶发花技术研究主要在黑毛茶发花工艺上，没有人对质优价廉的茶梗茶进行发花研究，为开发茯茶新品种而亟待研制一种富金花茶梗茶发花制备工艺。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题是：解决茶梗发花技术存在的问题，提供一种接种法富金花茶梗茶发花的制备工艺，能在3-7天短期内实现发花，而且金花普遍茂盛，色泽鲜艳金黄，颗粒肥大，其发花率均能达到100%。
本发明采用的技术方案是：
一种接种法富金花茶梗茶发花制备工艺，其步骤如下：
①冠突散囊菌的纯化分离；
②一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；
③茶梗茶样品的处理；
④添加冠突散囊菌孢子悬液；
⑤烘茶；
⑥发花；
⑦干燥和保存。
上述技术方案中，所述的冠突散囊菌的纯化分离为：用添加10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基平板梯度稀释分离；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定为：挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养，28℃静置培养2天，然后升高温度至30-32℃培养12-28天，震荡分散孢子，无菌水稀释孢子悬液浓度控制在107-108个/mL；所述的茶梗茶样品的处理为：将茶梗茶分筛、拼配、90℃干净水浸泡8分钟后，维持含水量28%、37℃渥堆24小时；所述的冠突散囊菌孢子悬液：添加量为0.25 mL/100g；所述的烘茶条件为密闭65-68℃、1小时；所述的发花：控制湿度和温度发花条件为前两天湿度80%、温度26℃，然后湿度70%、温度28℃直至金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大、菌花香浓郁为止；所述的干燥和保存：富金花茶梗茶40-50℃干燥1天后常温室内保存。
上述技术方案中，所述的PDA指Potato Dextrose Agar的简称。
所述的PDA琼脂固体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加入15g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20g，混匀，用量筒定容至1000mL，趁热分装在三角瓶中，在1.1kg/cm2（121℃）中保持20分钟灭菌。
所述的PDA液体培养基指按上述培养基配制过程操作，但不添加琼脂。
所述的PDA琼脂固体培养基平板指上述培养基灭菌结束后冷却至50℃左右，在超净工作台上将培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中，待冷却即为制得的PDA琼脂固体培养基平板。
所述的10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加100mL制备好的茯砖茶茶汁，然后加入15g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20g混匀，用量筒定容至1000mL，趁热分装在三角瓶中，在1.1kg/cm2(121℃)中保持20分钟灭菌。灭菌结束后冷却至50℃左右，在超净工作台上将10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中，待冷却即为制得的添加10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基平板。
10%茯砖茶茶汁的PDA液体培养基与上述操作过程相同，但不添加琼脂。
平板梯度稀释法为：
将成品茯砖样本用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，即配成1×10－1g/mL的茯砖样本溶液，从上述溶液中取1 mL定容10 mL配成1×10－1g/mL的茯砖样本溶液，依次配制成浓度1×10－3、1×10－4、1×10－5g/mL的茯砖茶样本溶液各10 mL备用。取1×10－3、1×10－4、1×10－5g/mL的茯砖样本溶液各0.5 mL，用涂布器涂布到冠状散囊菌快速分离培养基平板上，超净台上吹干15分钟左右，倒置平皿，28℃培养，3－4天后挑取优势菌——金花同样条件培养直至纯化。
画线接种指用灭菌的接种针在超净台上将已经生长好的菌落挑取，在新的固体培养基平皿画线分离相应微生物。
金花菌落指金花菌在10%PDA固体培养基平板上生长到一定时候形成的一个菌落集合体，菌落是指聚集在一起的微生物团。
茯砖茶茶汁的具体制备方法：按照1g茯砖茶样本比30mL蒸馏水的比例称取20g茯砖茶，加入600mL蒸馏水，100℃水浴2小时，待稍冷却后用量筒定容至600mL即为制备好的茯砖茶茶汁。
配成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5是指浓度，单位为g/mL。孢子悬液浓度107-108个/ml中的“个”是指单个的金花菌的子囊孢子。计数方法为用梯度稀释法涂布在添加10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基平板上生长计数或用722型分光光度计测量其OD值，控制在0.6左右，使金花孢子悬液浓度控制在每毫升107-108个金花孢子。
本发明提供了一种能在3-7天的短期内实现茶梗茶发花，而且金花普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大，丰富了茯茶的品种和口味，极大地提高茯茶的品质。
附图说明
图1为本发明培养7天分离纯化的冠突散囊菌落照片；
图2为本发明冠突散囊菌的孢子悬液15天培养结果照片；
图3为永泰福茶厂和安化黄沙坪农户茶梗富金花茶梗茶发花结果照片；图中，左边为安化黄沙坪农户茶梗发花，右边为永泰福茶厂茶梗发花。
具体实施方式
1. 金花的分离、纯化：
冠突散囊菌即金花从益阳茶厂成品湘益牌茯砖样本中分离。具体分离和纯化过程为：将成品湘益牌茯砖样本粉碎，用平板梯度稀释法在添加10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基平板上 28℃培养直至纯化。
2. 一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定：
挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养，28℃静置培养2天，然后升高温度至30-32℃培养12-28天，震荡分散孢子，无菌水稀释孢子悬液浓度控制在107-108个/mL。
3. 茶梗茶样品的处理：
将茶梗茶分筛、拼配、90℃干净水浸泡8分钟后，维持含水量28%、37℃渥堆24小时。
4. 添加金花孢子悬液：
茶梗100℃2小时灭菌冷却后，按照每100g茶梗添加0.25mL金花孢子悬液的比例，以喷雾的形式添加，混匀。
5. 烘茶：
烘茶条件为密闭65-68℃、1小时。
6. 控制湿度和温度发花：
控制湿度和温度发花条件为前两天湿度80%、温度26℃，然后湿度70%、温度28℃直至金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大、菌花香浓郁为止。
7. 干燥和保存：
茶梗茶40-50℃干燥1天后常温室内保存。
实施例1：金花的分离、纯化：
将成品湘益牌茯砖样本用植物微型粉碎机粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，配成10-1、10-2、10-3、10-4、 10-5各10mL，取10-3、 10-4、 10-5三个梯度各0.5mL涂布添加10%茶汁的PDA琼脂固体培养基平板，超净台上吹干，28℃培养3天，挑取金黄色优势菌落，画线至添加10%茶汁的PDA平板上，同样条件继续培养，继代直至纯化。
分离纯化的金花菌落见附图1。
实施例2：金花的孢子悬液制备：
挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养，28℃静置培养2天，然后升高温度至30-32℃培养12-28天，震荡分散分生孢子，用双层无菌纱布过滤，再后280rpm振荡培养分散分生孢子，无菌水稀释孢子悬液至OD值为0.6，孢子悬液浓度控制在107-108个/mL，即为可用的金花孢子悬液。
上述升高温度至30—32℃培养12—28天实例：升高温度至30℃，培养28天；或升高温度至32℃，培养12天；或升高温度至31℃，培养20天。
金花的孢子悬液培养结果见附图2。
实施例3：富金花茶梗茶发花验证
分别取湖南永泰福茶厂和安化黄沙坪农户茶梗各2Kg，以不接种作为对照，按照具体实施方式中1-7步在湖南省黑茶品质与发酵关键技术控制产学研示范基地进行发花实验，其发花率均能达到100%，生长普遍茂盛，色泽鲜艳金黄，颗粒肥大，菌花香浓郁。
泰福茶厂和安化黄沙坪农户茶梗的富金花茶梗茶发花结果见附图3。

Claims (2)

1.一种接种法富金花茶梗茶发花制备工艺，其特征在于：其步骤如下：
①冠突散囊菌的纯化分离；
②一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定；
③茶梗茶样品的处理；
④添加冠突散囊菌孢子悬液；
⑤烘茶；
⑥发花；
⑦干燥和保存。
2.根据权利要求1所述的接种法富金花茶梗茶发花制备工艺，其特征在于：所述的冠突散囊菌的纯化分离为：用添加10%茯砖茶茶汁的PDA琼脂固体培养基平板梯度稀释分离；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子悬液制备与浓度确定为：挑取纯化的金花菌落，接种至添加10%茯砖茶茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液体培养基培养，28℃静置培养2天，然后升高温度至30-32℃培养12-28天，震荡分散孢子，无菌水稀释孢子悬液浓度控制在107-108个/mL；所述的茶梗茶样品的处理为：将茶梗茶分筛、拼配、90℃干净水浸泡8分钟后，维持含水量28%、37℃渥堆24小时；所述的冠突散囊菌孢子悬液：添加量为0.25 mL/100g；所述的烘茶条件为密闭65-68℃、1小时；所述的发花：控制湿度和温度发花条件为前两天湿度80%、温度26℃，然后湿度70%、温度28℃直至金花生长普遍茂盛、色泽鲜艳金黄、颗粒肥大、菌花香浓郁为止；所述的干燥和保存：富金花茶梗茶40-50℃干燥1天后常温室内保存。
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