CN102120963B - 冠突散囊菌快速分离方法 - Google Patents

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Abstract

一种冠突散囊菌快速分离方法，其特征在于：其具体步骤为：1)成品茯砖茶的处理；2)冠突散囊菌发酵液的制备；3)冠突散囊菌快速分离培养基的制备；4)冠突散囊菌的培养、纯化；5)冠突散囊菌的保存。本发明实现了在短期内从成品茯砖茶中快速分离冠突散囊菌即金花菌，而且无杂菌，满足不同品牌茯砖茶中金花菌的分离需要，而且可操作性强。

Description

冠突散囊菌快速分离方法
技术领域
本发明涉及农产品加工技术领域，具体涉及茯砖茶优势菌冠突散囊菌快速分离方法，冠突散囊菌俗称金花。
背景技术
一直以来，茯砖茶是作为边疆少数名族日常生活中不可或缺的必备品，在边疆享有“宁可三日无粮，不可一日无茶”的美誉，其奥妙与茯砖茶的品质风味是不可分割的。发花是形成茯砖茶独特品质风味的关键工艺，其目的是通过对外界条件（如温、湿度等）的控制促使茯砖茶中的优势菌种 ——冠突散囊菌生长繁殖，从而使茯砖茶具备独特的品质风味。该菌俗称金花，历来边疆少数民族通过判断金花质量和数量来衡量茯砖茶的品质优劣。
茯砖茶因具有独特的金花菌以及品质风味而闻名，边疆少数名族更是将金花视为衡量茯砖茶品质的标志，金花菌慢慢便成为人们研究的焦点，快速分离成品茯砖茶中金花菌是研究的基础。因此，目前亟待研制一种能在短期内从成品茯砖茶中快速分离金花菌的方法，基本无杂菌，满足不同品牌茯砖茶金花菌分离需要、操作性强。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：解决上述现有技术存在的问题，而提供一种用于茯砖茶优势菌冠突散囊菌快速分离方法，实现在短期内从成品茯砖茶中快速分离冠突散囊菌即金花菌，而且无杂菌，满足不同品牌茯砖茶中金花菌的分离需要，而且可操作性强。
本发明采用的技术方案是：这种冠突散囊菌快速分离方法，其具体步骤为：
1）成品茯砖茶的处理；
2）冠突散囊菌发酵液的制备；
3）冠突散囊菌快速分离培养基的制备；
4）冠突散囊菌的培养、纯化；
5）冠突散囊菌的保存。
上述技术方案中，所述的成品茯砖茶的处理是用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，配成浓度为10-1、10-2、10-3、10-4、 10-5各10mL，取10-3、 10-4、 10-5三个梯度准备涂布改良PDA平板；
上述技术方案中，所述的冠突散囊菌发酵液的制备方法为：接种实验室已经分离纯化的冠突散囊菌于PDA液体培养基中，28℃培养至OD值0.6-0.8,用0.2μm过滤膜进行过滤灭菌，即为制备好的发酵液；
上述技术方案中，所述的冠突散囊菌快速分离培养基的制备是：为改良PDA固体培养基，改良方法为按照常规方法配制PDA固体培养基，灭菌结束后冷却至50℃左右，按照培养基量和冠突散囊菌发酵液体积比10:1添加制备好的发酵液，趁热到平板；
上述技术方案中，所述的冠突散囊菌的培养、纯化为：取浓度10-3、10-4、10-5三个梯度各0.5mL涂布于改良PDA平板超净台上吹干，28℃培养2-3天，挑取金黄色优势菌落，画线接种至同样的改良PDA平板上，同样条件继续培养直至纯化。结果判定：当冠突散囊菌落呈现金黄色，菌落形态相同、大小一致，无其它杂菌生长即表示冠突散囊菌已经纯化分离。
上述技术方案中，所述的冠突散囊菌的保存为：用改良PDA斜面管保存于4℃冰箱中或用改良PDA液体培养基制成孢子悬液加50%灭菌甘油于-70℃冰箱保存。
上述技术方案中，所述的PDA 指Potato Dextrose Agar的简称，中文含义为：马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
PDA液体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，最后加入蔗糖20 g，混匀，用量筒定容至1000mL，趁热分装在三角瓶中，在1.1kg/ cm２(121℃)中保持20分钟灭菌。
PDA平板指培养基灭菌结束后冷却至50℃左右，在超净工作台上将培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中，待冷却即为制得的PDA培养基平板。
本发明的冠突散囊菌快速分离培养基的制备分为两步：
第一步，制备改良PDA固体培养基，改良PDA固体培养基指将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加100mL制备好的茶汁，然后加入15 g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20 g，混匀，用量筒定容至1000mL，趁热分装在三角瓶中，在1.1 kg/ cm２(121℃)中保持20分钟灭菌。灭菌结束后冷却至50℃左右，在超净工作台上将10%茶汁的PDA琼脂固体培养基倒入事先已经灭菌并干燥的培养皿中，待冷却即为制得的10%茶汁的PDA琼脂固体培养基平板。
改良PDA固体培养基在冠状散囊菌快速分离技术中指10%茶汁的PDA培养基按照上述第一步方法制备，灭菌结束后冷却至50℃左右；第二步：按照培养基量和冠状散囊菌发酵液体积比10:1添加制备好的冠状散囊菌发酵液，趁热到平板，即为冠状散囊菌快速分离培养基平板。
画线接种指用灭菌的接种针在超净台中将已经生长好的菌落挑取，在新的固体培养基平皿画线分离相应微生物。
金花菌落指金花菌在10%PDA培养基平板上生长到一定时候形成的一个菌落集合体，菌落是指聚集在一起的微生物团。
茶汁的制备方法制按照1g茯砖茶样本比30mL蒸馏水的比例称取20g茯砖茶，加入600mL蒸馏水，100℃水浴2小时，待稍冷却后用量筒定容至600mL即为制备好的茶汁。
冠状散囊菌的发酵液的制备：接种实验室已经分离纯化的冠状散囊菌于添加10%茶汁的PDA液体培养基中，28℃培养至OD值0.6-0.8，用0.2μm过滤膜进行过滤灭菌，即为制备好的冠状散囊菌发酵液，OD值即吸光值。
本发明能在短期4－5天内从成品茯砖茶中快速分离冠突散囊菌，而且基本无其他杂菌生长，满足从不同品牌茯砖茶中金花菌的分离需要，可操作性强，为金花菌的研究奠定了基础。
附图说明
图1为PDA培养基3天分离、纯化成品湘益牌茯砖茶样本中冠突散囊菌验证结果照片。
图2为改良PDA培养基3天分离、纯化成品湘益牌茯砖茶样本中冠突散囊菌验证结果察照片。
图3为改良PDA培养基分离、纯化成品湖南益阳茶厂茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
图4为改良PDA培养基分离、纯化成品湖南安化利源隆茶厂茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
图5为改良PDA培养基分离、纯化成品永泰福茶厂茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
图6为改良PDA培养基分离、纯化成品湖南安化华茗茶厂茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
图7为改良PDA培养基分离、纯化成品湖南久杨茶叶有限公司茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
图8为改良PDA培养基分离、纯化成品白沙溪茶叶有限公司茯砖茶样本中冠突散囊菌的验证结果照片，图中只显示了浓度为10-4梯度照片。
具体实施方式
1、成品茯砖茶的处理：
用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，配成浓度为10-1、10-2、10-3、10-4、 10-5各10mL，取10-3、 10-4、 10-5三个梯度准备涂布改良PDA平板。
2、冠突散囊菌发酵液的制备：
用接种环挑取实验室已经分离纯化的冠突散囊菌接种于PDA液体培养基中，28℃培养至OD值0.6-0.8,用0.2μm过滤膜进行过滤灭菌，即为制备好的发酵液。
3、冠突散囊菌快速分离培养基的制备：
冠突散囊菌快速分离培养基为改良PDA固体培养基，改良方法为按照常规方法配制PDA固体培养基，灭菌结束后冷却至50℃左右，按照培养基量和冠突散囊菌发酵液体积比10:1添加制备好的发酵液，趁热到平板。
4、冠突散囊菌的培养、纯化：
取10-3、 10-4、 10-5三个梯度各0.5mL涂布改良PDA平板超净台上吹干，28℃培养2-3天，挑取金黄色优势菌落，画线接种至同样的改良PDA平板上，同样条件继续培养直至纯化。
5、冠突散囊菌的保存：
用改良PDA斜面管保存于4℃冰箱中或用改良PDA液体培养基制成孢子悬液加50%灭菌甘油于-70℃冰箱保存。
实施例1：PDA培养基与改良PDA培养基分离、纯化成品湘益牌茯砖样本中冠突散囊菌的验证
将成品湘益牌茯砖样本按照具体实施方式1-4步实验，结果证明能有效分离冠突散囊菌。
分离纯化的金花菌落见附图1和附图2。
实施例2：改良PDA培养基分离、纯化成品湖南益阳茶厂、湖南安化利源隆茶厂、湖南安化华茗茶厂、永泰福茶厂、湖南久杨茶叶有限公司、白沙溪茶叶有限公司生产的茯砖样本中冠突散囊菌的验证
将湖南益阳茶厂、湖南安化利源隆茶厂、湖南安化华茗茶厂、永泰福茶厂、湖南久杨茶叶有限公司、白沙溪茶叶有限公司生产的茯砖样本按照具体实施方式1-4步实验，结果证明能有效分离冠突散囊菌。
分离纯化的金花菌落见附图2和附图3、4、5、6、7、8。

Claims (1)

1.一种冠突散囊菌快速分离方法，其特征在于：其具体步骤为：
1）成品茯砖茶的处理；
2）冠突散囊菌发酵液的制备；
3）冠突散囊菌快速分离培养基的制备；
4）冠突散囊菌的培养、纯化；
5）冠突散囊菌的保存；
所述的成品茯砖茶的处理是用植物微型粉碎机将样品粉碎，200目过筛、65℃干燥2小时后称取1g样品，定容10mL，配成浓度为10-1、10-2、10-3、10-4、 10-5各10mL，取10-3、 10-4、 10-5三个梯度准备涂布改良PDA平板；所述的冠突散囊菌发酵液的制备方法为：接种实验室已经分离纯化的冠突散囊菌于PDA液体培养基中，28℃培养至OD值0.6-0.8,用0.2μm过滤膜进行过滤灭菌，即为制备好的发酵液；所述的冠突散囊菌快速分离培养基的制备是：制备改良PDA平板，改良PDA固体培养基平板的制备方法是：将马铃薯洗净去皮，称取200g，切成小块放入烧杯中，加适量蒸馏水，煮沸1小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加100ml制备好的茶汁，然后加入15g琼脂，加热熔化，最后加入蔗糖20g，混匀，用量筒定容至1000ml，趁热分装在三角瓶中，在1.1kg/cm2，121℃中保持20分钟灭菌，灭菌结束后冷却至50℃左右，按照培养基量和冠状散囊菌发酵液体积比10:1添加制备好的冠状散囊菌发酵液，趁热倒平板，即为冠状散囊菌快速分离培养基平板，所述茶汁的制备方法按照1g茯砖茶样本比30ml蒸馏水的比例称取20g茯砖茶，加入600ml蒸馏水，100℃水浴2小时，待稍冷却后用量筒定容至600ml即为制备好的茶汁。
2、根据权利要求1所述的冠突散囊菌快速分离方法，其特征在于：所述的冠突散囊菌的培养、纯化为：取浓度10-3、 10-4、 10-5三个梯度各0.5mL涂布于改良PDA平板超净台上吹干，28℃培养2-3天，挑取金黄色优势菌落，画线接种至同样的改良PDA平板上，同样条件继续培养直至纯化；结果判定：当冠突散囊菌落呈现金黄色，菌落形态相同、大小一致，无其它杂菌生长即表示冠突散囊菌已经纯化分离。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103110180B (zh) * 2012-12-24 2015-03-11 贵州大学 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法
CN103168866A (zh) * 2013-04-02 2013-06-26 益阳茶厂有限公司 接种法提高茯砖茶发花率制备工艺
CN103275876B (zh) * 2013-05-23 2014-09-10 湖南农业大学 茶源冠突散囊菌菌株及其应用
CN103865811B (zh) * 2014-03-26 2016-06-01 湖南城市学院 一种茶渣添加营养液循环制备金花工艺
CN107484549B (zh) * 2017-08-24 2020-09-25 南京林业大学 一种冠突散囊菌固态发酵银杏叶的方法及其应用
CN107647011A (zh) * 2017-11-08 2018-02-02 西北农林科技大学 一种无杂菌污染茯茶的制作方法
CN108142984B (zh) * 2017-12-12 2021-02-19 湖北中烟工业有限责任公司 一种利用茶源金花菌发酵制备烟叶余料香料的方法
CN108402391B (zh) * 2018-02-27 2021-08-06 湖南农业大学 一种燕麦粉及其制备方法
CN109136098A (zh) * 2018-07-20 2019-01-04 石海滨 一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法
CN113999776A (zh) * 2021-11-24 2022-02-01 漳州海关综合技术服务中心 一种冠突散囊菌培养基及冠突散囊菌平板计数方法
CN117801967B (zh) * 2024-03-01 2024-04-30 烟台市供销社茶业有限公司 一种培养冠突散囊菌的方法及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101491281A (zh) * 2009-03-09 2009-07-29 谌小丰 一种金花散茶的加工方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0646941B2 (ja) * 1987-12-11 1994-06-22 サントール株式会社 微生物の培養法
JP3692219B2 (ja) * 1997-08-15 2005-09-07 三菱重工業株式会社 排煙処理方法及び排煙処理装置
JP2001002649A (ja) * 1999-06-24 2001-01-09 Mercian Corp 生理活性物質

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101491281A (zh) * 2009-03-09 2009-07-29 谌小丰 一种金花散茶的加工方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
不同原料及生长因子对冠突散囊菌固体培养特性的影响;曹聪等;《安徽农业科学》;20100610;第9178页第2.1-2.2节，第9179页第3.3节 *
冠突散囊菌的分离及其液态发酵特性;姚茂军等;《食品与发酵工业》;20070630;第28-29页 *
茯砖茶中冠突散囊菌的代谢产物研究I冠突散囊菌的液体培养;黄怀生等;《茶叶通讯》;20100630;第15页第2.1节-第16页第3.3节 *

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