CN103110180B - 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法 - Google Patents

利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103110180B
CN103110180B CN201210565069.XA CN201210565069A CN103110180B CN 103110180 B CN103110180 B CN 103110180B CN 201210565069 A CN201210565069 A CN 201210565069A CN 103110180 B CN103110180 B CN 103110180B
Authority
CN
China
Prior art keywords
conidium
tobacco
tobacco leaf
flue
early
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201210565069.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN103110180A (zh
Inventor
邹晓
瞿娇娇
施鸣
刘仁祥
张晓敏
杨辉
石志发
曾池
白兴
刘爱英
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guizhou University
China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd
Original Assignee
Guizhou University
China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guizhou University, China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd filed Critical Guizhou University
Priority to CN201210565069.XA priority Critical patent/CN103110180B/zh
Publication of CN103110180A publication Critical patent/CN103110180A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103110180B publication Critical patent/CN103110180B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法，其包含以下步骤：（1）冠突散囊菌菌株的活化培养；（2）产分生孢子菌落的培养：制作分生孢子培养基，并将分生孢子培养基制平板，将步骤（1）中菌株斜面的菌落点种于平板上，倒置培养5-7天；待闭菌落长满平板；（3）孢子悬液的制备及接种按步骤（2）的制备的分生孢子，用无菌水洗下并制成孢子悬液；将孢子悬液作为接种体，均匀喷施于初烤烟叶。当处理条件为培养温度为30℃，孢子浓度为106，107时，初烤烟叶的香气质变好,杂气和刺激性减轻,烟气甜感增大、细腻且醇和,余味变得纯净舒适，烟碱有所下降，烟叶总体质量得到提高。

Description

利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法
技术领域
本发明涉及微生物促进烤烟烟叶微生物醇化（发酵）方法。 
背景技术
烟叶醇化（发酵）是烟草加工中改善烟叶品质的重要环节，其实质上是在一定的温度和湿度条件下,促使烟叶理化特性发生变化，烟叶香气和品质明显改善的加工过程。烟叶醇化（发酵）主要有3 个方面的作用：氧化作用，微生物作用，烟叶本身所具有的酶的作用。然而3种作用对烟叶发酵贡献如何、主次原因还没有统一的定论。但研究发现微生物是推动烟叶醇化发酵、提高烟叶品质香气不可忽视的重要原因之一。 
我国学者用从烤烟烟叶上分离鉴定的4 个优势菌种处理烟叶,不仅大大缩短了发酵时间,而且使烟叶品质及色香味均有一定的提高。用芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌混合配制成生物制剂(TFA) 用于烟叶发酵,可加速烤烟发酵,提高烟叶品质,并且具有抑制烟叶霉变的作用。也有学者利用4 种由优势增香菌种和高生物活性的α- 淀粉酶、蛋白酶等配制而成的烟草发酵增质剂,对人工发酵和自然陈化过程中的烤烟烟叶的增质、增香效果进行了对比研究。发现烟草发酵增质剂具有促进烟叶内部有机物质的分解与转化,加速烟叶发酵过程、缩短发酵周期。枯草芽孢杆菌对烟叶的还原糖和蛋白氨基酸含量的变化影响显著，并使得烟叶发酵后,杂气减少,刺激性有所降低,香味略有增加,余味舒适。另外食用菌中的一些菌株对初烤烟叶品质的改善也值得关注。微生物发酵不仅能够显著地缩短烟叶醇化时间,而且在一定程度上可以提高烟叶的内在质量。目前，对烟叶人为添加各种优势微生物及酶制剂来加快烟叶醇化进程、降低有害物质、改善烟叶品质、提高烟叶吸食安全性、降低生产成本是生物技术在烟叶醇化上应用的热点。 
冠突散囊菌（Eurotium cristatum）属灰绿曲霉，是茯砖茶发花过程中的优势菌种，对茯砖茶独特品质的形成具有重要的作用。在茶叶发花过程中冠突散囊菌从茶叶中获取营养物质，进行自身代谢转化，同时产生各种胞外酶催化茶叶中各种相关物质发生氧化、聚合、降解、转化，基本完成茯砖茶特有的色、香、味品质的物质转化。该菌好气耐干燥高渗透能力强，生长的pH范围在3-6，最适生长pH为5，最适生长温度为28-30℃，最高生长温度为38℃。冠突散囊菌最主要的特征是具冠状突起及表面明显粗糙具小疣的子囊孢子和具小刺的分生孢子，是产生有性型（子囊孢子）和无性型（分生孢子）的全型真菌。温琼英将冠突散囊菌接种在以淀粉、单宁、葡萄糖为碳源的琼脂培养基培养，结果表明该菌能分解老茶中的淀粉和单宁物质，减低茶叶苦涩味，使茶叶滋味醇和。冠突散囊菌在发酵茶叶过程中对部分真菌、细菌和酵母的生长具有不同程度的抑制作用。肖文军等研究了速溶茯砖茶对小鼠与大鼠的毒理特性，结果表明，茯砖茶属无毒物。王志刚等研究表明，冠突散囊菌的培养液对卤虫无毒性。1994年，王志刚等又用卤虫生物法研究了冠突散囊菌的毒性，发现10株冠突散囊菌菌体提取物在蔗糖酵母浸汁培养基上培养后均未发现明显产毒，进一步证实冠突散囊菌确实是无毒的。 
在烟叶发酵与陈化过程中伴随大量微生物参与活动，通过烟叶的微生物发酵作用，使烟叶中的一些化学成分发生变化，微生物消耗或转化了烟叶中的有关成分，同时又产生一些代谢产物或生物量，从而能增强烟叶的抗感染能力，消除烟叶本身的不利因素，提高烟叶的香味质量。但在微生物发酵过程中，还存在微生物诱香安全性的问题，利用微生物改善烟叶内在品质，烟叶安全性评价是不容忽视的问题。将食品微生物应用于烟叶发酵，减少有害物质的来源，提高烟叶吸食安全性对于烟草行业发展有重要作用。 
发明内容
本发明要解决的技术问题是：将食品微生物应用于烟叶发酵，减少有害物质的来源，提高烟叶吸食安全性对于烟草行业发展有重要作用。 
本发明的技术方案是：利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法，包含以下步骤： 
（1）冠突散囊菌菌株的活化培养  
将冰箱保存的斜面菌株置于30℃的培养箱中48小时，用接种针将其接种于新配制的PDA斜面培养基上，30℃培养待其菌落长满斜面后备用； 
（2）产分生孢子菌落的培养
制作分生孢子培养基，并将分生孢子培养基制平板，将步骤（1）中菌株斜面的菌落点种于平板上，倒置培养；待菌落长满平板；
（3）孢子悬液的制备及接种  
将步骤（2）的制备的分生孢子，用无菌水洗下并制成孢子悬液；将孢子悬液作为接种体，均匀喷施于初烤烟叶。
所述的分生孢子培养基：蔗糖400g，麦芽20g，酵母膏5 g ，琼脂20g，水1000mL，121℃灭菌30min。 
所述的步骤（3）中发酵的最优条件为：温度30℃、湿度70%±2%的条件下接种孢子浓度为106个/mL或107个/mL并发酵50天。 
本发明的有益效果：理化指标：发酵的样品还原糖、水溶性多糖变化幅度较大，蛋白质含量有所下降，糖/碱、氮/碱比例变得更为协调，在一定程度上降低烟碱含量。说明冠突散囊菌对烟叶的助醇、降害方面效果显著。人工评吸指标：冠突散囊菌处理后的样品在香气质、香气量、吃味上有很大改善，甜感增加，更加柔和，杂气、刺激性明显降低。总体效果：利用冠突散囊菌发酵处理后的烟叶质量的改观很明显，可使香气前体物质、还原性糖含量增加，烟碱和石油醚提取物有不同程度的降低，使化学成分趋于协调平衡，杂气和刺激性减轻，香气外露，对烟叶品质的改善具较明显的促进作用，并形成独特的烟质特点。 
具体实施方式
冠突散囊菌的活化培养  
将冰箱保存的斜面菌株置于30℃的培养箱中48小时，用接种针将其接种于新配制的PDA斜面培养基上，30℃培养待其菌落长满斜面后备用。
产分生孢子的培养
1.M40y培养基（分生孢子培养基）：蔗糖400g，麦芽20g，酵母膏5 g ，琼脂20g，水1000mL，pH自然，121℃灭菌30min；
2. 将M40y培养基制平板，用接种针挑取适量闭囊壳点种于平板中央，于30℃下倒置培养，待菌落长满平板；
3. 平板产生表面黄色、颜色较浅，较密集，有灰绿色分生孢子子的菌落。
孢子悬液的制备及接种  
挑取活化后的冠突散囊菌采用点接法接种到M40y培养基上，于30℃下培养7天，待产生足够的分生孢子后，用无菌水洗平板上的菌落，分别制成108，107，106个/mL三种浓度的孢子悬液，将三种孢子悬液均匀喷施于烟叶。
冠突散囊菌DNA提取与扩增
总DNA的提取按照真菌DNA提取的方法进行，采用真菌5.8S rDNA的通用引物ITS4和ITS5：
ITS4 (5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)
ITS5 (5’-GGT GAGAGATTTCTGTGC-3’) 
以冠突散囊菌DNA为模板，利用PCR反应扩增其5.8rDNA片段。
M40y培养基上菌落为黄色, 菌株形成的菌落较密集，颜色较浅，镜检发现，菌落基本由菌丝组成，并有灰绿色分生抱子头产生。 
冠突散囊菌是产生有性型(子囊孢子阶段)和无性型(分生孢子阶段)的全型真菌。闭囊壳球形或近球形，黄色，直径90-310μm；子囊球形至近球形，壁薄易破，10.0-17.5μm；子囊孢子双凸镜形，具有两个明显的冠状突起，大小为4.0-6.0×3.0-5.8μm，凸面明显粗糙，具小疣。分生孢子头辐射状到柱头，灰绿色，直径一般为25-160μm，壁光滑；顶囊近球形或烧瓶形，直径一般为10-45μm，瓶梗3.8-9.06×4.0μm；分生孢子椭圆形，少数近球形，壁粗糙具小刺，大小为3.0-6.0×2.5-5.8μm。
冠突散囊菌ITS4-5.8S-ITS5的碱基序列
ATAGAGCTACTGATCGAGGTCACCTGGTTAAAAAGATTGGTTGCGAGGCTAGCTGCCAGCTGGACCTACGGGAGCGGGTGACAAAGCCCCATACGCTCGAGGACCAGACATGGTGCCGCCACTGCCTTTTGGGCCCGTCCCCGTTGCCAGGGACGGAAGCCCAACACACAAGCCGTGCTTGAGGGCAGCAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTAATTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACGATTGTTTAACTAAAAACTCAGACTGCAAACTTCAGACAGCGTTCAAATGTTAGTCTCCGGCGGGCCGTGGCCACGCCGAAGCAACAGGGTACAGATAGACACGGATGGGAGGTTGGACCCAGAGGGCCCGCACTCGGTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTACGCTTTTTTACCTTCCAGGTTACCAACTGAAATTAAGCAAAAAATTTGCACGTTAAAAAAACCACCCAAGGGTCTC
在3个温度和3个孢子浓度的冠突散囊菌孢子对烟叶进行发酵，实施结果如下：
冠突散囊菌106个/mL孢子浓度处理，烟叶在25℃、30℃两个温度下，冠突散囊菌对还原糖，水溶性总糖含量提高显著，有效降低烟碱和蛋白含量，见表1，原因在于在此温度下该菌分泌的降解酶类将烟叶中的碳水化合物和含氮化合物进行了降解。该菌处理后烟叶经评吸测试后，能够提高香气质和香气量，改进吃味，减少刺激性和杂气，增加烟叶甜感和细腻度。但在35℃的发酵条件下，化学指标检测结果不如25℃和30℃，原因在于，35℃接近该菌的最高耐受温度，导致对烟叶处理效果不够理想，见表1和表2。其中在孢子浓度106个/mL，发酵温度30℃，处理效果最好。
表1 浓度为106个/mL的孢子悬液对烟叶发酵后化学分析检测结果（%） 
                                                    
表2 接种浓度为106个/mL的孢子悬液发酵后烟叶评吸分情况
冠突散囊菌107个/mL孢子浓度处理：烟叶在25℃下，冠突散囊菌对还原糖，水溶性总糖含量提高显著，有效降低烟碱和蛋白含量，该处理烟叶经评吸测试后，能够提高香气质和香气量，改进吃味，减少刺激性和杂气，增加烟叶甜感。表3和表4中效果最好的处理是107个/mL，发酵温度30℃。
表3 浓度为107个/mL的孢子悬液对烟叶发酵后化学分析检测结果（%） 
表4 接种浓度为107个/mL的孢子悬液发酵后烟叶评吸分情况
冠突散囊菌108个/mL孢子浓度处理：该处理下数据不成明显的规律性波动性较大。化学分析结果较好的是浓度为108个/mL，发酵温度30℃。评吸效果最好的是在25℃的条件下。
表5 浓度为108个/mL的孢子悬液对烟叶发酵后化学分析检测结果（%） 
表6 接种浓度为108个/mL的孢子悬液发酵后烟叶评吸分情况

Claims (1)

1.利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）冠突散囊菌菌株的活化培养  
将冰箱保存的斜面菌株置于30℃的培养箱中48小时，用接种针将其接种于新配制的PDA斜面培养基上，30℃培养待其菌落长满斜面后备用； 
（2）产分生孢子菌落的培养
制作分生孢子培养基，并将分生孢子培养基制平板，将步骤（1）中菌株斜面的菌落点种于平板上，倒置培养；待菌落长满平板；分生孢子培养基：蔗糖400g，麦芽20g，酵母膏5 g ，琼脂20g，水1000mL，pH自然，121℃灭菌30min；将分生孢子培养基制平板，用接种针挑取适量闭囊壳点种于平板中央，于30℃下倒置培养，待菌落长满平板；
（3）孢子悬液的制备及接种  
将步骤（2）的制备的分生孢子，用无菌水洗下并制成孢子悬液；将孢子悬液作为接种体，均匀喷施于初烤烟叶；发酵的最优条件为：温度30℃、湿度70%±2%的条件下接种孢子浓度为106个/mL或107个/mL并发酵50天。
CN201210565069.XA 2012-12-24 2012-12-24 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法 Active CN103110180B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210565069.XA CN103110180B (zh) 2012-12-24 2012-12-24 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210565069.XA CN103110180B (zh) 2012-12-24 2012-12-24 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103110180A CN103110180A (zh) 2013-05-22
CN103110180B true CN103110180B (zh) 2015-03-11

Family

ID=48408576

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210565069.XA Active CN103110180B (zh) 2012-12-24 2012-12-24 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103110180B (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104450191A (zh) * 2014-12-04 2015-03-25 湖北中烟工业有限责任公司 一种乳酸菌发酵型烟用茶叶浸膏的制备方法
CN104403800A (zh) * 2014-12-04 2015-03-11 湖北中烟工业有限责任公司 一种金花菌发酵型烟用茶叶浸膏的制备方法
CN105768199B (zh) * 2016-03-25 2017-08-08 河南中烟工业有限责任公司 一种用于加速烟叶醇化的复合制剂
CN106358765B (zh) * 2016-11-16 2021-01-12 陕西北极宫茶叶有限公司 一种在固态介质上培养冠突散囊菌的方法
CN106676013B (zh) * 2016-11-24 2020-09-11 广西中烟工业有限责任公司 一种利用金花菌茶叶发酵提高复烤烟叶质量的方法
CN106834131B (zh) * 2016-11-24 2020-09-08 广西中烟工业有限责任公司 一种降解烟草梗丝果胶和木聚糖的真菌及其应用
CN106755119B (zh) * 2016-12-08 2020-05-08 湖北中烟工业有限责任公司 一种复合微生物发酵提升烟草薄片品质的方法
CN107653295A (zh) * 2017-11-16 2018-02-02 贵州大学 采用冠突曲霉和酿酒酵母发酵茶叶末生产烟用香料的方法
CN108142984B (zh) * 2017-12-12 2021-02-19 湖北中烟工业有限责任公司 一种利用茶源金花菌发酵制备烟叶余料香料的方法
CN109090698A (zh) * 2018-07-19 2018-12-28 贵州大学 一种利用毕赤氏酵母发酵烟草的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2230130A (en) * 1936-08-12 1941-01-28 Bucherer Herbert Method of obtaining microbian enzymes
CN101525579A (zh) * 2009-04-09 2009-09-09 浙江中烟工业有限责任公司 用于烟叶烟碱降解的假单胞菌zcj菌株及其筛选方法和应用
CN102108376A (zh) * 2010-12-21 2011-06-29 湖南城市学院 茯砖茶中金花菌菌种鉴定方法
CN102120963A (zh) * 2010-12-21 2011-07-13 湖南城市学院 冠突散囊菌快速分离方法
CN102120964A (zh) * 2010-12-21 2011-07-13 湖南城市学院 冠突散囊菌孢子悬液制备方法
CN102676436A (zh) * 2012-05-28 2012-09-19 红云红河烟草(集团)有限责任公司 一种烤烟烟叶中微生物的富集与纯化方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0903346D0 (en) * 2009-02-27 2009-04-08 Cambridge Advanced Tech Transgenic Plants

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2230130A (en) * 1936-08-12 1941-01-28 Bucherer Herbert Method of obtaining microbian enzymes
CN101525579A (zh) * 2009-04-09 2009-09-09 浙江中烟工业有限责任公司 用于烟叶烟碱降解的假单胞菌zcj菌株及其筛选方法和应用
CN102108376A (zh) * 2010-12-21 2011-06-29 湖南城市学院 茯砖茶中金花菌菌种鉴定方法
CN102120963A (zh) * 2010-12-21 2011-07-13 湖南城市学院 冠突散囊菌快速分离方法
CN102120964A (zh) * 2010-12-21 2011-07-13 湖南城市学院 冠突散囊菌孢子悬液制备方法
CN102676436A (zh) * 2012-05-28 2012-09-19 红云红河烟草(集团)有限责任公司 一种烤烟烟叶中微生物的富集与纯化方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
冠突散囊菌胞外多糖提取工艺研究;龚淑俐等;《现代食品科技》;20070630(第02期);第48-50页 *
茯砖茶发花过程中优势菌的研究进展;杨抚林等;《茶叶科学技术》;20050125(第01期);第4-7页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103110180A (zh) 2013-05-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103110180B (zh) 利用冠突散囊菌改善初烤烟叶质量的方法
CN102505002B (zh) 一种用于烤烟快速增香的微生物菌株及烟叶发酵的应用
CN111621444B (zh) 一株提高酿造酱油风味品质的克氏库克菌及其应用
CN106755119A (zh) 一种复合微生物发酵提升烟草薄片品质的方法
CN109370958A (zh) 一株增加酱油中3-羟基-2-丁酮含量的植物乳杆菌及其应用
CN111248409A (zh) 一种低盐豆瓣酱发酵方法
CN106883992A (zh) 一株高产4-乙烯基愈创木酚和乙酸乙酯的异常毕氏酵母菌及其应用
CN102676417B (zh) 一种高地芽胞杆菌及其在烤烟上部烟叶人工陈化中的应用
CN107267401A (zh) 一株毛霉菌菌株及在发酵青砖茶上的应用
CN107034239A (zh) 一种利用微生物发酵虫屎茶制备的烟用香料及其应用
CN113999741B (zh) 一种酿造古斯酸啤酒的制备方法
CN109090697B (zh) 一种混菌发酵烟草的方法
CN113322193B (zh) 一株提升酱油中Sotolone含量的耐盐酵母菌及其应用
CN103224894B (zh) 桑肠杆菌及其生物转化发酵型烟用麸皮浸膏的方法和应用
CN114606152B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用
CN107495462B (zh) 一种提升烟草品质、降低有害物质的方法
CN103215158B (zh) 一种用于酿酒的黑曲霉麸曲的制备方法
CN107354109A (zh) 一种用于烟叶快速发酵的赋香复合微生物制剂及其应用
CN106434399A (zh) 一种糯米酒的混合酒曲及混合酒曲的制备方法
KR0151732B1 (ko) 감식초의 제조방법
CN111304102A (zh) 一种酯化红曲的制作及应用方法
KR20080082945A (ko) 흑마늘 발효물의 제조방법 및 그 조성물
CN102199545B (zh) 一株辛格粒毛盘菌及其液态发酵制备胞内黑色素的方法
CN109136100A (zh) 一株塔宾曲霉菌株及在发酵青砖茶上的应用
CN108949595A (zh) 一种产香酵母菌及其在红曲黄酒酿造中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant