CN103305589A - 一种蔬菜中农药残留的检测的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蔬菜中农药残留的检测的方法，包括将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取制成萃取液和将萃取液配置成待检测试样液；然后再向待检测试样液中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置，加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量。通过上述方法可快速的检测出蔬菜中是否含有有机磷和氨基甲酸酯类农药，且其操作快速方便，另外，通过还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶对氨基甲酸酯进行催化，提高氨基甲酸酯对面粉酯酶的抑制作用，提高检测的灵敏度。所指的对照试样液是指不含有蔬菜中萃取成分，其他成分与待检测试样液成分相一致的溶液。
Description
技术领域
本发明涉及检测领域，具体涉及一种蔬菜中农药残留的检测的方法。
背景技术
农药在促进林牧业的发展方面作用显著，但同时使用农药所带来的污染环境以及人类健康问题越来越严重。农药残留危害问题也越来越受到重视，许多国家都制定了食品中农药残存限量。目前，农药种类繁多，化学组分复杂，而市场上的蔬菜种类数量繁多，因此必须提供一种能够快速、简便的对蔬菜中农药残存量进行检测的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种蔬菜中农药残留的检测的方法，其可快速、简便的对蔬菜中农药残存量进行检测，检测的灵敏度高。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种蔬菜中农药残留的检测的方法，其操作为：
S1：将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；
S2：将S1中吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配置成待检测试样液；
S3：取相同体积的待检测试样液和对照试样液分别向其中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置，然后向待检测试样液和对照试样液中分别加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，并对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量；测量得到吸光度变化值将其输入至控制单元进行分析、处理；控制单元分析、处理后输出信号至显示单元显示该蔬菜中
有机磷和氨基甲酸酯类农药含量检测结果。
通过上述方法可快速的检测出蔬菜中是否含有有机磷和氨基甲酸酯类农药，且其操作快速方便，另外，通过还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶对氨基甲酸酯进行催化，提高氨基甲酸酯对面粉酯酶的抑制作用，提高检测的灵敏度。所指的对照试样液是指不含有蔬菜中萃取成分，其他成分与待检测试样液成分相一致的溶液。
具体的方案为：步骤S2中还原型谷胱甘肽按照加入后萃取液含有1～5×10-5mol/L的量进行添加、谷胱甘肽转移酶按照加入后萃取液含有0.5～0.75U/ml的量进行添加，所述的螯合剂由乙二胺四乙酸、亚氨基二乙酸与酒石酸按照摩尔比1∶0.2～0.5∶0.8～1.2配制而成。
步骤S2中加入的缓冲液为PH＝0.8的磷酸缓冲液，缓冲液调节待检测试样的PH至7.4～7.5，底物溶液为溶有乙酸-1-萘酯的65～68％丙酮溶液构成，底物溶液按照加入后待检测试样液含有0.35～0.4mmol/L乙酸-1-萘酯的量添加；面粉酯酶按照加入后待检测试样液含有0.5～0.75U/ml的量进行添加，显色剂为氯化四氮邻二甲氧基苯胺，显色剂按照加入后待检测试样液含有0.35～0.45mmol/L的量添加。
步骤S1中所用的萃取剂为丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种构成，超声萃取时间为4～5min，蔬菜与萃取剂的固液比为0.2～0.5g/ml，所用的吸附剂为活性炭和无水硫酸钠构成。
通过对大量试验的结果进行分析处理可得到，按照上述限定的条件对本发明进行具体实施，可有效提高对有机磷和氨基甲酸酯类农药检测的灵敏度。
具体实施方式
以下通过具体实施方式来对本发明作进一步说明，但其不应理解为对本发明保护范围的限制。其中，实施例1～3中所用的螯合剂由乙二胺四乙酸、亚氨基二乙酸与酒石酸按照摩尔比1∶0.2～0.5∶0.8～1.2配制而成。
实施例1
分别取四份喷有不同浓度的大白菜10g切成碎丝状、并标号D1、D2、D3、D4，将D1、D2、D3、D4大白菜置于由丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种配置的萃取剂，蔬菜与萃取剂的按固液比为0.2g/ml进行混合，超声萃取时间为4min，超声萃取结束后加入活性炭进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；
S2：将上述得到的四份吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，混合液中还原型谷胱甘肽含量为5×10-5mol/L、谷胱甘肽转移酶含量为0.75U/ml，反应完全后加入PH＝0.8的磷酸缓冲液分别调节成PH为7.5的待检测试样；
S3：将上述制得的D1、D2、D3、D4待检测试样液和对照试样液分别向其中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置10min，然后向待检测试样液和对照试样液中分别加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，并对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量；测量得到吸光度变化值将其输入至控制单元进行分析、处理；控制单元分析、处理后输出信号至显示单元显示该蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯农药含量检测结果。底物溶液为溶有乙酸-1-萘酯的68％丙酮溶液构成，底物溶液按照加入后待检测试样液含有0.4mmol/L乙酸-1-萘酯的量添加；面粉酯酶按照加入后待检测试样液含有0.75U/ml的量进行添加，显色剂为氯化四氮邻二甲氧基苯胺，显色剂按照加入后待检测试样液含有0.45mmol/L的量添加。
结果：测得D1待检测试样液中酶活性抑制率为12％；测得D2待检测试样液中酶活性抑制率为21％；测得D3待检测试样液中酶活性抑制率为37％；测得D1待检测试样液中酶活性抑制率为51％；D1、D2、D3组蔬菜含有较低计量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，D4组蔬菜含有较高计量的有机磷和氨基甲酸酯类农药。
实施例2
分别取四份喷有不同浓度的黄瓜10g切成碎片、并标号H1、H2、H3、H4，将H1、H2、H3、H4组黄瓜置于由丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种配置的萃取剂，蔬菜与萃取剂的按固液比为0.5g/ml进行混合，超声萃取时间为4min，超声萃取结束后加入活性炭进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；
S2：将上述得到的四份吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，混合液中还原型谷胱甘肽含量为1×10-5mol/L、谷胱甘肽转移酶含量为0.5U/ml，反应完全后加入PH＝0.8的磷酸缓冲液分别调节成PH为7.4的待检测试样；
S3：将上述制得的H1、H2、H3、H4待检测试样液和对照试样液分别向其中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置10min，然后向待检测试样液和对照试样液中分别加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，并对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量；测量得到吸光度变化值将其输入至控制单元进行分析、处理；控制单元分析、处理后输出信号至显示单元显示该蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯农药含量检测结果。底物溶液为溶有乙酸-1-萘酯的65％丙酮溶液构成，底物溶液按照加入后待检测试样液含有0.35mmol/L乙酸-1-萘酯的量添加；面粉酯酶按照加入后待检测试样液含有0.5U/ml的量进行添加，显色剂为氯化四氮邻二甲氧基苯胺，显色剂按照加入后待检测试样液含有0.35mmol/L的量添加。
结果：测得H1待检测试样液中酶活性抑制率为55％；测得H2待检测试样液中酶活性抑制率为61％；测得H3待检测试样液中酶活性抑制率为16％；测得H1待检测试样液中酶活性抑制率为41％；H3、H4组黄瓜含有较低计量的有机磷和氨基甲酸酯类农药，H1、H2组蔬菜含有较高计量的有机磷和氨基甲酸酯类农药。
实施例3
分别取四份喷有不同浓度的空心菜10g切成碎颗粒状、并标号K1、K2、K3、K4，将K1、K2、K3、K4组黄瓜置于由丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种配置的萃取剂，蔬菜与萃取剂的按固液比为0.4g/ml进行混合，超声萃取时间为4min，超声萃取结束后加入活性炭进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；
S2：将上述得到的四份吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，混合液中还原型谷胱甘肽含量为3×10-5mol/L、谷胱甘肽转移酶含量为0.65U/ml，反应完全后加入PK＝0.8的磷酸缓冲液分别调节成PK为7.4的待检测试样；
S3：将上述制得的K1、KK2、K3、K4待检测试样液和对照试样液分别向其中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置10min，然后向待检测试样液和对照试样液中分别加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，并对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量；测量得到吸光度变化值将其输入至控制单元进行分析、处理；控制单元分析、处理后输出信号至显示单元显示该蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯农药含量检测结果。底物溶液为溶有乙酸-1-萘酯的67％丙酮溶液构成，底物溶液按照加入后待检测试样液含有0.35mmol/L乙酸-1-萘酯的量添加；面粉酯酶按照加入后待检测试样液含有0.65U/ml的量进行添加，显色剂为氯化四氮邻二甲氧基苯胺，显色剂按照加入后待检测试样液含有0.35mmol/L的量添加。
结果：测得K1待检测试样液中酶活性抑制率为9％；测得K2待检测试样液中酶活性抑制率为11％；测得K3待检测试样液中酶活性抑制率为28％；测得K1待检测试样液中酶活性抑制率为15％；K1、K2、K3、K4组蔬菜均含有较低计量的有机磷和氨基甲酸酯类农药。利用高效液相色谱仪对上述实施例1～3中制得的待检测试样液进行分析，其分析结果与本发明方案测得的结果相一致。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (4)
1.一种蔬菜中农药残留的检测的方法，其操作为：
S1：将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；
S2：将S1中吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配置成待检测试样液；
S3：取相同体积的待检测试样液和对照试样液分别向其中加入面粉酯酶和显色剂，摇匀后静置，然后向待检测试样液和对照试样液中分别加入底物溶液后置于仪器比色池中进行显色反应，并对待检测试样液和对照试样液在该显色反应时间段内的吸光度变化值进行测量；测量得到吸光度变化值将其输入至控制单元进行分析、处理；控制单元分析、处理后输出信号至显示单元显示该蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯农药含量检测结果。
2.如权利要求1中所述的蔬菜中农药残留的检测的方法，其特征在于：步骤S2中还原型谷胱甘肽按照加入后萃取液含有1～5×10-5mol/L的量进行添加、谷胱甘肽转移酶按照加入后萃取液含有0.5～0.75U/ml的量进行添加，所述的螯合剂由乙二胺四乙酸、亚氨基二乙酸与酒石酸按照摩尔比1∶0.2～0.5∶0.8～1.2配制而成。
3.如权利要求1中所述的蔬菜中农药残留的检测的方法，其特征在于：步骤S2中加入的缓冲液为PH＝0.8的磷酸缓冲液，缓冲液调节待检测试样的PH至7.4～7.5，底物溶液为溶有乙酸-1-萘酯的65～68％丙酮溶液构成，底物溶液按照加入后待检测试样液含有0.35～0.4mmol/L乙酸-1-萘酯的量添加；面粉酯酶按照加入后待检测试样液含有0.5～0.75U/ml的量进行添加，显色剂为氯化四氮邻二甲氧基苯胺，显色剂按照加入后待检测试样液含有0.35～0.45mmol/L的量添加。
4.如权利要求1中所述的蔬菜中农药残留的检测的方法，其特征在于：步骤S1中所用的萃取剂为丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯中的一种或几种构成，超声萃取时间为4～5min，蔬菜与萃取剂的固液比为0.2～0.5g/ml，所用的吸附剂为活性炭和无水硫酸钠构成。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130918 |