CN202614761U

CN202614761U - 一种可快速检测苯乙醇胺a的试剂盒

Info

Publication number: CN202614761U
Application number: CN 201220117737
Authority: CN
Inventors: 吴小平; 何丹婷; 徐飞; 赵宁; 王世恩; 潘净如
Original assignee: BEIJING WDWK BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING WDWK BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-03-27
Filing date: 2012-03-27
Publication date: 2012-12-19
Anticipated expiration: 2022-03-27

Abstract

本实用新型涉及一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒。该试剂盒包括上、下两层，上层装有包被苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原的酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质检报告；下层有6瓶不同梯度浓度的苯乙醇胺A标准品、1瓶高浓度苯乙醇胺A标准品、苯乙醇胺A抗体工作液、样品稀释液、浓缩肉样提取液、浓缩洗涤液、底物A液、B液和终止液。采用直接竞争法，待测样品中苯乙醇胺A残留与酶标板上固定抗原竞争抗体，再加入酶标结合物，通过酶催化显色，利用样本吸光度值计算出样本中苯乙醇胺A的含量。本试剂盒具有检测简便，快速，灵敏度高，检测费用低廉等优点，可满足多种检需求。

Description

一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体而言，本发明涉及一种检测动物源性食品中苯乙醇胺A残留量的试剂盒。

背景技术

β-受体激动剂在现代养殖业中被用于作为饲料添加剂，如之前为人们所熟知的克伦特罗等，这一类药物可以减少脂肪，增加瘦肉，提高猪的单位经济价值，但是它们都有危险的副作用，轻则导致心律不整，严重一点就会导致心脏病。

苯乙醇胺A，又称“克伦巴胺”，化学式：2-[4-(4-硝基苯基)丁基-2-基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，分子式：C19H24N2O4，分子量：344，是新一代的瘦肉精。四川省广安市广安区枣山镇畜牧兽医站对某养猪场例行违禁药物监测中，用莱克多巴胺测试卡分别检测母猪、仔猪和育肥猪尿液，发现该场育肥猪尿检呈阳性，之后确认是新型添加物苯乙醇胺A。这种瘦肉精新品种惊现市场，再次敲响中国食品安全警钟。因此被农业部发布的第1519号公告列为“禁止在和动物饮水中使用的物质”。公告称，根据《饲料和饲料添加剂管理条例》有关规定，禁止在饲料和动物饮水中使用苯乙醇胺A等物质。各级畜牧饲料管理部门要加强日常监管和监督检测，严肃查处在饲料生产、经营、使用和动物饮水中违禁添加苯乙醇胺A等物质的违法行为。

目前，检测苯乙醇胺A的方法主要为仪器方法——高效液相色谱质谱法，这类方法需要专业的仪器设备和专业的人员进行操作，前处理繁杂，费时，不适合大量样本的筛查和基层人员操作。因此能够快速、准确检测苯乙醇胺A在动物性食品中的残留是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种成本低、快速、操作简便、灵敏度高的苯乙醇胺A检测试剂盒。

本发明的技术方案是：包括一个双层试剂盒盒体，盒体内上层装有，包被苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原的96孔酶标板、一张盖板膜、一个自封袋、一份说明书、一份质检报告、下层有：固定泡沫模具形成的放置试剂的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，其特征在于：酶标板上装有12条可拆卸的酶标条，每个酶标条有8个反应孔，每个酶标孔预包被了苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原，放入铝箔袋，装入干燥剂后真空；所述试剂瓶包括有6瓶2mL从0～24.3μg/L梯度浓度的苯乙醇胺A标准品、1瓶2mL 1mg/L的高浓度苯乙醇胺A标准品、7mL苯乙醇胺A抗体工作液、30mL样品稀释液、12mL浓缩肉样提取液、40mL浓缩洗涤液、7mL底物A液、7mL底物B液、7mL终止液；试剂瓶的大小、瓶盖的颜色各不相同，固定在具有下凹瓶位的泡沫塑料模具中盖板膜、自封袋、说明书和质检报告一同装在一个自封袋中置于酶标板的下方。试剂盒可以一次连续测定多份样品，也可将板孔拆开多次检测。

本试剂盒检测的原理是：待测样品中苯乙醇胺A残留与酶标板上固定抗原竞争抗体，再加入酶标结合物，通过酶催化显色，如果苯乙醇胺A含量少，显色深，反之，显色浅。

本试剂盒具有很高的灵敏度和很高的特异性，可检测的样本包括猪肉、牛肉、羊肉、猪尿、牛尿、羊尿。对猪肉、牛肉、羊肉的的最低检测限为0.5μg/kg，对猪尿、牛尿、羊尿的最低检测限为0.3μg/L，样本的回收率为90％±30％。与苯乙醇胺A的的交叉反应率为100％，不与β-受体激动剂的其他药物产生交叉反应。

本试剂盒检测简便，所需仪器较少，只需要酶标仪、均质器、离心机等简单的实验室仪器，所需检测成本低。可满足食品生产企业的自我质量控制、也可作为食品安全监督和检测机构的常规筛查手段，也能用于科研中动物药理和毒理学研究的辅助手段。

附图说明

图1是本使用新型的上层示意图

图2是本实用新型下层示意图；

图3是本实用新型打开上层后的俯视图

具体实施方式

参见附图1-3，展现了本实施例所述的一种可快速检测苯乙醇胺A试剂盒的结构，所述盒体1上层装有所述的96孔酶标板2，所述盖板膜、自封袋、说明书、质检报告共同装在一个自封袋中放置于所述酶标板2下面；所述试剂盒下层内具有固定泡沫模具3形成的下凹瓶位，共有14个下凹瓶位：2mL 1mg/L的高浓度苯乙醇胺A标准品瓶位4，7mL苯乙醇胺A抗体工作液瓶位5，40mL浓缩洗涤液瓶位6，12mL浓缩肉样提取液瓶位7，7mL底物A液瓶位8，7mL底物B液瓶位9，7mL终止液瓶位10，2mL 0μg/L浓度苯乙醇胺A标准品11，2mL 0.3μg/L浓度苯乙醇胺A标准品12，2mL0.9μg/L浓度苯乙醇胺A标准品13，2mL 2.7μg/L浓度苯乙醇胺A标准品14，2mL 8.1μg/L浓度苯乙醇胺A标准品15，2mL 24.3μg/L浓度苯乙醇胺A标准品16，30mL样品稀释液瓶位17。所述下凹瓶位用于放置装有相应溶液的试剂瓶(14瓶)。

本实用新型的实施例

一、工作液的准备

洗涤工作液：用去离子水按1∶20(1份浓缩液+19份去离子水)稀释。

样品稀释液：用去离子水按1∶10(1份浓缩样品稀释液+9份去离子水)稀释。

肉样提取液：用去离子水按1∶50(1份浓缩液+49份去离子水)稀释。

二、样品前处理

尿样：取20μL待检尿样直接进行检测。注：若混浊，可过滤或4000g离心5min；

肉样：精确称取2g均质后的样品于50mL离心管中，加入6mL肉样提取液充分涡动2min；注：涡动步骤须至组织完全分散；4000g以上离心10min；立即取20μL上清进行检测。样本稀释倍数为4。

三、操作步骤

1.将所需的酶标板条插入酶标板架上，并记录下各标准品和样品的位置，建议均做平行实验，未使用的酶标板条用自封袋密封后，立即保存于2-8℃环境中；

2.将20μL各标准品工作液/样品溶液分别加入对应的标准品/样品孔中；

3.在每个板孔中加入50μL酶结合物工作液；

4.再在每个板孔中加入50μL的抗体工作液(注意：严格按标准品/样品、酶结合物工作液、抗体加样)；

5.盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温(25±2℃)，避光反应30min；

6.6揭开盖板膜；倒掉板孔中液体，每孔加入260μL洗涤工作液，浸泡15～30s；再重复上一步骤3次；

7.倒掉板孔中液体，将酶标板倒置于吸水纸上，拍干；立即在每孔中加入100L底物A、B混合液注：底物A液、底物B液按体积1∶1混合，现用现配)；

8.盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温(25±2℃)，避光反应10～15min；

9.揭开盖板膜，板孔中加入50μL终止液，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀；

10.用酶标仪在双波长450nm、630nm下检测吸光度，在5min内读取检测数据。

四、计算

用每个浓度的标准品溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100％，得到百分吸光度值。运用Originpro 7.0软件对数据结果进行分析，以标准品浓度(μg/L)的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴拟合出标准曲线。

用每个待测样本溶液的吸光度平均值(B)除以第一个标准品溶液(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100％，得到百分吸光度值。相对应每一个待测样本溶液的百分吸光度值，则可从标准曲线上读出苯乙醇胺A的浓度值，再乘以相应样品的稀释倍数，换算出待测样本溶液中苯乙醇胺A的含量。

五、测定注意事项

1.请勿使用过期产品，不同批号产品的试剂不得混用。

2.试剂盒使用前，将盒内各组份置于实验台上，待其恢复至室温(25±2℃)方可使用(提示：约2h)。使用完毕后请立即将试剂放回2～8℃保存。

3.样品处理前先恢复至室温，处理完毕后，请立即分析，否则放置时间过长，将影响检测结果的准确性。

4.应避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。

5.试剂或工作液在使用前请小心摇匀，防止出现气泡。

6.不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响检测结果。

7.检测时，应尽量减少板孔上方空气流动。

8.若底物A液、底物B液在使用前已变成蓝色，或混合后立即变蓝，说明试剂已变质。

9.终止液中含有硫酸成分，若不小心溅在皮肤或衣物上，请立即用水冲洗。

六、试剂盒的性能参数

灵敏度：0.3ppb；

标准曲线范围：0.3～24.3ppb；

样品最低检测限：

尿样0.3ppb；肉样：0.5ppb；

样品添加回收率：90％±30％；

七、交叉反应率

与苯乙醇胺A为100％；莱克多巴胺约为11.2％；与多巴盼丁胺约4.7％；与马布特罗、克伦丙罗、西马特罗、与塞布特罗、克伦潘特、马喷特罗、特普他林、溴代克伦特罗、沙丁胺醇、克伦特罗、溴布特罗、卡布特罗＜0.1％。

Claims

1.一种可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒，其特征在于：一个双层试剂盒盒体，盒体内上层装有，包被苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原的96孔酶标板、一张盖板膜、一个自封袋、一份说明书、一份质检报告、下层有：固定泡沫模具形成的下凹瓶位、位于下凹瓶位上的试剂瓶，所述试剂瓶包括有6瓶2mL从0～24.3μg/L梯度浓度的苯乙醇胺A标准品、1瓶2mL 1mg/L的高浓度苯乙醇胺A标准品、7mL苯乙醇胺A抗体工作液、30mL样品稀释液、12mL浓缩肉样提取液、40mL浓缩洗涤液、7mL底物A液、7mL底物B液、7mL终止液。

2.根据权利要求1所述的可快速检测苯乙醇胺A的试剂盒，其特征在于所述的包被苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原的96孔酶标板：酶标板上装有12条可拆卸的酶标条，每个酶标条有8个反应孔，每个酶标孔预包被了苯乙醇胺A-卵清蛋白抗原，放入铝箔袋，装入干燥剂后真空。