CN105891200A - 一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品安全检测技术领域，公开了一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤包括：提取；富集净化；空白样品测试；标准曲线的制作；待测蔬菜样品的测定。本发明利用在一定条件下、有机磷农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药浓度呈正相关的原理，快速检测出蔬菜中的有机磷农药的残留量，满足市场对蔬菜中有机磷农药快速检测的需求，有利于食品健康。
Description
技术领域
本发明涉及食品安全检测技术领域，具体是一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法。
背景技术
蔬菜与人们的生活息息相关，蔬菜的营养物质主要包含矿物质、维生素、纤维等，这些物质的含量越高，蔬菜的营养价值也越高。此外，蔬菜中的水分和膳食纤维的含量也是重要的营养品质指标。蔬菜的营养素不可低估，1990年国际粮农组织统计人体必需的维生素C的90％、维生素A的60％均来自蔬菜，可见蔬菜对人类健康的贡献之巨大。此外，蔬菜中还有多种植物化学物质是被公认的对人体健康有益的成分，如类胡萝卜素、二丙烯化合物、甲基硫化合物等，许多蔬菜还含有独特的微量元素，对人体具有特殊的保健功效，如西红柿中的番茄红素、洋葱中的前列腺素等。
蔬菜在种植过程中，为了防治病虫害，均需要喷洒农药，其中有机磷农药因品种多、药效高、用途广等原因得到了广泛的使用。有机磷农药的大量使用不但造成了严重的环境污染，而且也危及到人类的健康。目前检测有机磷农药的分析方法主要有波谱法、色谱法和酶抑制法。波谱法灵敏度不高，一般只能作为定性的鉴别方法用于粗选；色谱法是目前检测有机磷农药的最主要检测方法，根据检测过程中的物理化学特性又可分为薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法三类。其中气相色谱法是进入20世纪50年代以后，在柱层析的基础上发展起来的一种新型的仪器分析方法，已成为目前典型的、应用最广的仪器分析方法。薄层色谱法受分析的灵敏度、定量困难的制约。液相色谱法与气相色谱法相比，虽说不受样品的挥发度和热稳定性的限制，非常适合于大分子、不稳定的化合物的分析，但在实际应用中，凡是能用气相色谱法分析的样品一般不用液相色谱法，因为气相色谱更快，更灵敏，更方便，并且耗费更低。所以气相色谱法在分析有机磷农药时，无论在分析速度、灵敏度还是分离效率上，都呈现出明显的优越性。该方法是利用经提取、纯化、浓缩后的有机磷农药注入气相色谱柱，程序升温气化后，不同的有机磷农药在固定相中分离，经不同的检测器检测扫描绘出气相色谱图，通过保留时间来定性，通过峰高或峰面积与标准曲线对照来定量。但气相色谱仪使用条件要求高，对使用环境和操作条件要求严格，使用人员要经过专门的培训，操作繁琐，时间较长。因此，在一般实验室不能实现快速定量检测有机磷农药。
随着人们生活水平的提高，人们对食品安全问题越来越重视，蔬菜作为一种与人们生活息息相关的食品，检测其有机磷农药残留意义重大，另外，由于蔬菜不易长时间储藏，因此若检测周期过长，则检测意义大大降低，发展蔬菜中有机磷农药快速检测方法是市场的迫切需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在80-100kHz下超声提取lO-20min，并在转速为3000-3500rpm条件下离心15-20min，取上层萃取液；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在60-70℃条件下水浴30-35min，然后在转速为3000-3500rpm离心15-20min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
作为本发明进一步的方案：步骤1)中所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为1g:(28-35)mL；步骤1)中所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单叔辛基苯基醚的体积浓度为1.5-2％。
作为本发明再进一步的方案：步骤2)中所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：(8-10)mL；步骤2)中所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：(4-6)mL；所述的上层溶液与甲醇的体积比为1:(1-1.5)。
作为本发明再进一步的方案：步骤2)中所述已活化的吸附剂为活化活性炭或活化硅藻土。
作为本发明再进一步的方案：所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
作为本发明再进一步的方案：所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
作为本发明再进一步的方案：所述抑制率(％)＝[(△A-△A0)/△A0]×100％，其中：公式中△A0表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明利用在一定条件下、有机磷农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药浓度呈正相关的原理，快速检测出蔬菜中的有机磷农药的残留量，满足市场对蔬菜中有机磷农药快速检测的需求，有利于食品健康。本发明操作简便，灵敏度高，检测成本低。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在80kHz下超声提取lOmin，并在转速为3000rpm条件下离心15min，取上层萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为1g:28mL，所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单叔辛基苯基醚的体积浓度为1.5％；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在60℃条件下水浴30min，然后在转速为3000rpm离心15min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液，其中，所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：8mL，所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：4mL；所述的上层溶液与甲醇的体积比为1:1，所述已活化的吸附剂为活化活性炭；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35℃下水浴20min，在转速5000rpm下离心8min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35℃下水浴20min，在转速5000rpm下离心8min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35℃下水浴20min，在转速5000rpm下离心8min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
所述抑制率(％)＝[(△A-△A0)/△A0]×100％，其中：公式中△A0表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
实施例2
一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在100kHz下超声提取20min，并在转速为3500rpm条件下离心20min，取上层萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为1g:35mL，所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单叔辛基苯基醚的体积浓度为2％；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在70℃条件下水浴35min，然后在转速为3500rpm离心20min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液，其中，所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：10mL，所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：6mL；所述的上层溶液与甲醇的体积比为1:1.5，所述已活化的吸附剂为活化硅藻土；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在40℃下水浴30min，在转速6000rpm下离心10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在40℃下水浴30min，在转速6000rpm下离心10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在40℃下水浴30min，在转速6000rpm下离心10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
所述抑制率(％)＝[(△A-△A0)/△A0]×100％，其中：公式中△A0表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
实施例3
一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在90kHz下超声提取15min，并在转速为3300rpm条件下离心18min，取上层萃取液，其中，所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为1g:35mL，所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单叔辛基苯基醚的体积浓度为1.8％；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在65℃条件下水浴32min，然后在转速为3200rpm离心18min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液，其中，所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：9mL，所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：5mL；所述的上层溶液与甲醇的体积比为1:1.2，所述已活化的吸附剂为活化活性炭；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在38℃下水浴25min，在转速5500rpm下离心9min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在38℃下水浴25min，在转速5500rpm下离心9min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在38℃下水浴25min，在转速5500rpm下离心9min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
所述抑制率(％)＝[(△A-△A0)/△A0]×100％，其中：公式中△A0表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (7)
1.一种检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤如下：
1)提取：将蔬菜烘干，粉碎，获得蔬菜粉末，将蔬菜粉末加入到离心管中，再加入聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液，在80-100kHz下超声提取lO-20min，并在转速为3000-3500rpm条件下离心15-20min，取上层萃取液；
2)富集净化：向上层萃取液中加入无机盐，搅拌混合均匀，再加入已活化的吸附剂，在60-70℃条件下水浴30-35min，然后在转速为3000-3500rpm离心15-20min，取上层溶液，向上层溶液中加入甲醇，过滤后获得富集净化液；
3)空白样品测试：取不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，向空白富集净化液中加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；
4)标准曲线的制作：另取5份不含农药的蔬菜，按照步骤1)和步骤2)，获取空白富集净化液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤4)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；
5)待测蔬菜样品的测定：取待测蔬菜样品，按照步骤1)和步骤2)，获取待测富集净化液，向待测富集净化液加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后，在35-40℃下水浴20-30min，在转速5000-6000rpm下离心8-10min，取上层清液，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，再加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液，摇匀，然后检测并记录反应后的吸光度值，计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤5)中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出待测蔬菜中有机磷农药的残留量。
2.根据权利要求1所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤1)中所述的蔬菜粉末的质量与聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液的体积比为1g:(28-35)mL；步骤1)中所述的聚氧乙烯单叔辛基苯基醚水溶液中聚氧乙烯单叔辛基苯基醚的体积浓度为1.5-2％。
3.根据权利要求1所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤2)中所述无机盐的质量与上层萃取液的体积比为1g：(8-10)mL；步骤2)中所述已活化的吸附剂的质量与上层萃取液的体积比为1g：(4-6)mL；所述的上层溶液与甲醇的体积比为1:(1-1.5)。
4.根据权利要求1或2或3所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，步骤2)中所述已活化的吸附剂为活化活性炭或活化硅藻土。
5.根据权利要求4所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，所述显色剂的制备方法为：称取80mg二硫化二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氢钠，用缓冲溶液溶解，并定容至10ml后保存。
6.根据权利要求5所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，所述底物碘化硫代丁酸胆碱溶液的制备方法为：称取24mg碘化硫代丁酸胆碱，加入3.0ml蒸馏水，充分摇匀溶解后保存。
7.根据权利要求6所述的检测蔬菜中有机磷农药残留的方法，其特征在于，所述抑制率(％)＝[(△A-△A0)/△A0]×100％，其中：公式中△A0表示对照溶液反应前后的吸光度的变化量；△A表示样品溶液反应前后的吸光度的变化量。
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