CN107727637A - 一种农产品农药残留检测方法 - Google Patents

一种农产品农药残留检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种农产品农药残留检测方法，包括如下步骤：取模板分子、壳聚糖、丙烯酸羟乙酯、聚乙烯亚胺、去离子水，合成带模板分子的印迹水凝胶；完成待检测蔬菜的预处理，配制待检测试样液；去除得的印迹水凝胶的模板分子；制作模板分子的标准拉曼光谱图；将去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测后，将所得的拉曼光谱图与标准拉曼光谱图进行比对，从而判断样品中是否含有模板分子，并初步判定模板分子的含量范围。本发明通过分子印迹技术制备具有特异性识别作用的水凝胶，待测样品经水凝胶吸附富集后，利用便携式拉曼光谱仪进行光谱采集，通过与标准拉曼光谱相对比，判断样品中是否含有此药物。

Description

一种农产品农药残留检测方法
技术领域
本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种农产品农药残留检测方法。
背景技术
农药在促进林牧业的发展方面作用显著，但同时使用农药所带来的污染环境以及人类健康问题越来越严重。农药残留危害问题也越来越受到重视，许多国家都制定了食品中农药残存限量。目前，农药种类繁多，化学组分复杂，而市场上的蔬菜种类数量繁多，因此必须提供一种能够快速、简便的对蔬菜中农药残存情况进行检测的方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种农产品农药残留检测方法，通过分子印迹技术制备对久效磷/甲拌磷/氧化乐果具有特异性识别作用的水凝胶，待测样品经水凝胶吸附富集后，利用便携式拉曼光谱仪进行光谱采集，通过与标准拉曼光谱相对比，判断样品中是否含有此药物。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种农产品农药残留检测方法，包括如下步骤：
S1、分别取0.17-0.21份模板分子、1.4份壳聚糖、3.0份丙烯酸羟乙酯、1.5份聚乙烯亚胺、4.0份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，在-78℃条件下,用60Co-γ射线对丙烯酸羟乙酯和聚乙烯亚胺进行辐射，合成带模板分子的薄膜状的印迹水凝胶；
S2、将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；将吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配制成待检测试样液；
S3、将由步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子；
S4、用丙酮将久效磷、甲拌磷、氧化乐果分别稀释到10ug/mL后，分别配制久效磷、甲拌磷、氧化乐果的标准储备液，然后将所得的去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在所述标准储备液中3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得久效磷、甲拌磷、氧化乐果的标准拉曼光谱图；
S5、将去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得拉曼光谱图；
S6、将所述步骤S5所得的拉曼光谱图与步骤S4中所得的标准拉曼光谱图进行比对，从而判断样品中是否含有久效磷、甲拌磷、氧化乐果，并初步判定久效磷、甲拌磷、氧化乐果的含量范围。
优选地，所述步骤S2中还原型谷胱甘肽按照加入后萃取液含有3～6×10-5mol/L的量进行添加、谷胱甘肽转移酶按照加入后萃取液含有0.3～0.6U/ml的量进行添加，所述的螯合剂采用乙二胺四乙酸。
优选地，所述步骤S2中所用的萃取剂为丙酮。
优选地，所述步骤S2中超声萃取时间为6～10min，蔬菜与萃取剂的固液比为0.2～0.5g/ml，所用的吸附剂为无水硫酸钠。
优选地，所述标准储备液中久效磷/甲拌磷/氧化乐果的含量分别为0mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg。
优选地，所述步骤S4和S5中浸泡前需将标准储备液和待检测试样液先调节pH至5.5。
优选地，所述模板分子为久效磷、甲拌磷、氧化乐果中的一种，去除模板分子后的印迹水凝胶使用时需一一对应使用，即所采用的模板分子与待检测的标准储备液的种类是一致的。
本发明具有以下有益效果：
通过选择合适的功能单体与模板分子在介质中预组装形成特异性识别位点，再通过交联聚合反应形成聚合物凝胶而将这种特异性识别位点固定下来，然后利用合适的溶剂将模板分子从凝胶中移除，这样便在凝胶中留下了在三维空间上与模板分子相匹配的具有“记忆”功能的空穴，即实现对模板分子的特异性识别，从而可以在一定的基质中将模板分子富集；可在5min之内完成对被测样品中久效磷、甲拌磷、氧化乐果的吸附富集作用，再经便携式拉曼光谱仪采集光谱信息，整个过程快速便捷，且水凝胶可多次循环重复使用，在降低检测成本的同时还具有环境友好的优点，并可满足现场、高通量检测的需求。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下实施例中，所述步骤S2中还原型谷胱甘肽按照加入后萃取液含有3～6×10- 5mol/L的量进行添加、谷胱甘肽转移酶按照加入后萃取液含有0.3～0.6U/ml的量进行添加，所述的螯合剂采用乙二胺四乙酸。所述步骤S2中所用的萃取剂为丙酮。所述步骤S2中超声萃取时间为6～10min，蔬菜与萃取剂的固液比为0.2～0.5g/ml，所用的吸附剂为无水硫酸钠。所述步骤S4和S5中浸泡前需将标准储备液和待检测试样液先调节pH至5.5。
实施例1
一种农产品农药残留检测方法，包括如下步骤：
S1、分别取0.17份久效磷、1.4份壳聚糖、3.0份丙烯酸羟乙酯、1.5份聚乙烯亚胺、4.0份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，在-78℃条件下,用60Co-γ射线对丙烯酸羟乙酯和聚乙烯亚胺进行辐射，合成带模板分子的薄膜状的印迹水凝胶；
S2、将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；将吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配制成待检测试样液；
S3、将由步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子久效磷；
S4、用丙酮将久效磷稀释到10ug/mL后，分别配制久效磷的含量分别为0mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的标准储备液，然后将所得的去除模板分子久效磷后的印迹水凝胶浸泡在所述标准储备液中3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得久效磷的标准拉曼光谱图；
S5、将去除模板分子久效磷后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得拉曼光谱图；
S6、将所述步骤S5所得的拉曼光谱图与步骤S4中所得的标准拉曼光谱图进行比对，从而判断样品中是否含有久效磷，并初步判定久效磷的含量范围。
实施例2
一种农产品农药残留检测方法，包括如下步骤：
S1、分别取0.21份氧化乐果、1.4份壳聚糖、3.0份丙烯酸羟乙酯、1.5份聚乙烯亚胺、4.0份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，在-78℃条件下,用60Co-γ射线对丙烯酸羟乙酯和聚乙烯亚胺进行辐射，合成带模板分子的薄膜状的印迹水凝胶；
S2、将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；将吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配制成待检测试样液；
S3、将由步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子氧化乐果；
S4、用丙酮将氧化乐果分别稀释到10ug/mL后，分别配制氧化乐果的含量分别为0mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的标准储备液，然后将所得的去除模板分子氧化乐果后的印迹水凝胶浸泡在所述标准储备液中3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得氧化乐果的标准拉曼光谱图；
S5、将去除模板分子氧化乐果后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得拉曼光谱图；
S6、将所述步骤S5所得的拉曼光谱图与步骤S4中所得的标准拉曼光谱图进行比对，从而判断样品中是否含有氧化乐果，并初步判定氧化乐果的含量范围。
实施例3
一种农产品农药残留检测方法，包括如下步骤：
S1、分别取0.19份甲拌磷、1.4份壳聚糖、3.0份丙烯酸羟乙酯、1.5份聚乙烯亚胺、4.0份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，在-78℃条件下,用60Co-γ射线对丙烯酸羟乙酯和聚乙烯亚胺进行辐射，合成带模板分子的薄膜状的印迹水凝胶；
S2、将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；将吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配制成待检测试样液；
S3、将由步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子甲拌磷；
S4、用丙酮将甲拌磷分别稀释到10ug/mL后，分别配制甲拌磷含量分别为0mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的标准储备液，然后将所得的去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在所述标准储备液中3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得甲拌磷的标准拉曼光谱图；
S5、将去除模板分子甲拌磷后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得拉曼光谱图；
S6、将所述步骤S5所得的拉曼光谱图与步骤S4中所得的标准拉曼光谱图。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、分别取0.17-0.21份模板分子、1.4份壳聚糖、3.0份丙烯酸羟乙酯、1.5份聚乙烯亚胺、4.0份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，在-78℃条件下,用60Co-γ射线对丙烯酸羟乙酯和聚乙烯亚胺进行辐射，合成带模板分子的薄膜状的印迹水凝胶；
S2、将待检测的蔬菜切碎；加入萃取剂进行超声萃取，然后加入吸附剂进行离心净化处置，净化后回收上层萃取液，吹除洗脱液中的萃取剂；将吹除溶剂后的萃取液中加入螯合剂进行混合，然后加入还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶进行催化混合反应，反应完全后加入缓冲液配制成待检测试样液；
S3、将由步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子；
S4、用丙酮将久效磷、甲拌磷、氧化乐果分别稀释到10ug/mL后，分别配制久效磷、甲拌磷、氧化乐果的标准储备液，然后将所得的去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在所述标准储备液中3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得久效磷、甲拌磷、氧化乐果的标准拉曼光谱图；
S5、将去除模板分子后的印迹水凝胶浸泡在待检测试样液内3-5min，捞出，进行共聚焦显微拉曼光谱检测，得拉曼光谱图；
S6、将所述步骤S5所得的拉曼光谱图与步骤S4中所得的标准拉曼光谱图进行比对，从而判断样品中是否含有久效磷、甲拌磷、氧化乐果，并初步判定久效磷、甲拌磷、氧化乐果的含量范围。
2.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述步骤S2中还原型谷胱甘肽按照加入后萃取液含有3～6×10-5mol/L的量进行添加、谷胱甘肽转移酶按照加入后萃取液含有0.3～0.6U/ml的量进行添加，所述的螯合剂采用乙二胺四乙酸。
3.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述步骤S2中所用的萃取剂为丙酮。
4.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述步骤S2中超声萃取时间为6～10min，蔬菜与萃取剂的固液比为0.2～0.5g/ml，所用的吸附剂为无水硫酸钠。
5.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述标准储备液中久效磷/甲拌磷/氧化乐果的含量分别为0mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、50mg/kg和100mg/kg。
6.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述步骤S4和S5中浸泡前需将标准储备液和待检测试样液先调节pH至5.5。
7.如权利要求1所述的一种农产品农药残留检测方法，其特征在于，所述模板分子为久效磷、甲拌磷、氧化乐果中的一种，去除模板分子后的印迹水凝胶使用时需一一对应使用。
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