CN103288909B - 一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法 - Google Patents

一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法。具体为，将未经干燥和粉碎，水分含量在40-70％的虫草培养后废弃的鲜培养基或经过干燥粉碎的虫草培养后废弃的鲜培养基采用阳离子交换柱提取，即得到重结晶得虫草素。本发明直接应用虫草培养基提取，省去了通常的烘干和粉碎步骤，不使用强碱性溶液，减少了对产品的破坏，使产品达到合格，有机溶剂用量少，使生产工艺更简单，有利于工业化生产。

Description

一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法。
背景技术
蛹虫草为我国名贵中药材，虫草素是虫草中最主要的有效成分，已证明其具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌等作用，还有细胞毒性以及免疫调节作用，具有较高的药用价值和广泛的药理作用。人工培育蛹虫草子实体是近几年发展的新技术，但子实体采收后，产生大量的固体培养基，没有得到充分的利用。研究表明，蛹虫草培养基及固体发酵产物中虫草素含量较高，其它核苷类成分很少，因此，蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。鉴于此，为了更好地开发利用蛹虫草资源，同时为其培养基找到一种较好的利用途径，为虫草素的开发利用奠定了基础。
发明内容
本发明目的在于提供一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法将未经干燥和粉碎，水分含量在40-70％的虫草培养后废弃的鲜培养基或经过干燥粉碎的虫草培养后废弃的鲜培养基采用阳离子交换柱提取，得到重结晶的虫草素。
具体为：
1)将鲜虫草培养基2-8倍质量的0-90％乙醇加入未经干燥和粉碎，水分含量在40-70％的虫草培养后废弃的鲜培养基或经过干燥粉碎的虫草培养后废弃的鲜培养基中混匀后，在室温至70℃下浸提3-5次，每次浸提2-5小时，收集浸提液过滤，滤液回收并按每100g原料虫草培养基浓缩至100-300ml，而后调节所得浓缩液PH至3.5-4.5，过滤，得上柱液，待用；
2)采用上述所得滤液按上柱液体积的1/5-1/15添装阳离子交换柱，再将滤液以2-4ml/min的流速进行阳离子树脂柱分离，而后用10-15倍柱体积的去离子水冲洗柱子，至流出液pH值至中性，在采用0.10-0.30mol/L浓度的氨水洗脱，流速2-4ml/min，收集洗脱液至上柱液体积的50％-200％；
3)上述所得氨洗脱液按每100g鲜虫草培养基，得到5-15ml比例浓缩，洗脱液浓缩后在4℃下放置结晶，而后在用95％乙醇和水，重结晶4-6次得虫草素。所述阳离子交换树脂为732型，734型或735型。
本发明所具有的优点：
本发明制备过程的关键技术环节不涉及有毒溶剂的使用，也不涉及传统方法使用的强酸强碱类物质，是一个低污染的生产过程；目前产品虫草素价格为2000元/克，2.2吨鲜原料或1吨干燥后的原料，可获得虫草素产品600克以上，获得产值120万元。消耗95％原料酒精1500L，约合1.4吨，每公斤产品价格按5200元计算，费用大约为7400元，培养基原料0.3元/kg，原料费用为300元，其它费用主要为人工和水电，按3000元计算，总计为11700元。如按生产1kg产品计算，可获利税196万元。可见该发明实施效益相当可观。
本发明直接应用鲜虫草培养基提取，省去了通常的烘干和粉碎两个步骤，大大减少了生产成本和生产周期。采用鲜培养基提取的方式，获得的产品收率较高，折算成同样干燥程度的原料收率提高了25％
具体实施方式
实施例1
将1000g虫草鲜培养基，用70％乙醇室温浸提三次，每次浸提采用2000ml乙醇，提取5小时，过滤，合并滤液浓缩至2000ml，并将滤液浓缩液pH值调节至4.0，过滤得上柱液，待用；
再将上述滤液以3ml/min的流速通过装有140g的735阳离子树脂的树脂柱，而后用2000ml去离子水冲洗柱子洗脱除杂，至流出液pH值至中性，采用浓度0.20mol/L的氨水洗脱，流速3ml/min，收集洗脱液2500ml，浓缩至60ml，在4℃下放置结晶得虫草素成品(1.0g)，而后在用95％乙醇和水，重结晶4-6次得虫草素0.3g，含量92.5％，收率0.03％，折算成干品收率为0.075％。
所述虫草鲜培养基为未经干燥和粉碎，水分含量在60％的虫草培养后废弃的鲜培养基，虫草素含量1120mg/kg。所采用的鲜培养基为小麦或大米与水按一定混合(混合比例：小麦(大米)∶水＝1∶1.1-1∶1.7)，接虫草菌培养后废弃的残渣，其主要成份为小麦或大米。主要化学成分有：淀粉、蛋白质、虫草素、多糖等。
实施例2
将1000g虫草鲜培养基，用去离子水70℃浸提四次，每次浸提采用2000ml乙醇，提取3小时，过滤，滤液浓缩至2000ml，并将滤液浓缩液pH值调节至4.0，过滤得上柱液，待用；
再将上述滤液以3ml/min的流速通过装有140g的734阳离子树脂的树脂柱，而后用2000ml去离子水冲洗柱子洗脱除杂，至流出液pH值至中性，再采用浓度0.15mol/L的氨水洗脱，流速2ml/min，收集洗脱液1800ml，浓缩至50ml，在4℃下放置结晶得虫草素成品(0.8g)，而后在用95％乙醇和水，重结晶4-6次得虫草素0.2g，含量90.0％，收率0.02％，折算成干品原料收率为0.05％。
该技术实施例中直接采用水提取的方式，减少了溶剂的原料和回收的成本，产品的收率和含量能够满足需求。获得的虫草素经过高效液相色谱制备技术分离，可达到了98.0％以上的纯度。

Claims (1)

1.一种虫草鲜培养基中虫草素的提取方法，其特征在于：将未经干燥和粉碎，水分含量在40-70％的虫草培养后废弃的鲜培养基采用阳离子交换柱提取，得虫草素；
具体操作为：
1)将鲜虫草培养基2-8倍质量的0-90％乙醇加入未经干燥和粉碎，水分含量在40-70％的虫草培养后废弃的鲜培养基中混匀后，在室温至70℃下浸提3-5次，每次浸提2-5小时，收集浸提液过滤，滤液回收并按每100g原料虫草培养基浓缩至100-300ml，而后调节所得浓缩液pH至3.5-4.5，过滤，得上柱液，待用；
2)按上柱液体积的1/5-1/15添装阳离子交换柱，再将滤液以2-4ml/min的流速通过阳离子树脂柱，而后用10-15倍柱体积的去离子水冲洗柱子，至流出液pH值至中性，再采用0.10-0.30mol/L浓度的氨水洗脱，流速2-4ml/min，收集洗脱液至上柱液体积的50％-200％；
3)上述所得氨水洗脱液按每100g鲜虫草培养基得到5-15ml浓缩液的比例进行浓缩，洗脱液浓缩后在4℃下放置结晶，而后再用95％乙醇和水，重结晶4-6次得虫草素；
所述阳离子交换树脂为732型，734型或735型。
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